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UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE BIOANLISIS
ASIGNATURA DE FISIOLOGA
PRACTICA N 2
FISIOLOGA DE LA MEMBRANA CELULAR: SMOSIS
INTRODUCCIN
Entre las funciones especficas de la membrana celular est la de establecer,
mantener o variar en forma controlada el contenido de agua y de electrolitos en los
compartimentos extracelular e intracelular. Esta funcin se lleva a cabo a travs de
filtracin de solutos y solventes y de bombas de soluto.
Es importante estudiar y definir por separado cada uno de los mecanismos o
principios fsicos que hacen posible el mantenimiento de la composicin de los
compartimientos antes mencionados. Entre ellos podemos mencionar los procesos de
filtracin, smosis, y los conceptos de flujo, gradiente y presin osmtica.
La filtracin es definida como cualquier mecanismo o va, distinto a la bomba, por
el cual una molcula de soluto o solvente (agua) atraviesa la membrana en direccin de
un gradiente de concentracin.
El movimiento de la sustancia en solucin que tiende a distribuirse de manera
uniforme a lo largo de un gradiente de actividad qumica se define como difusin. La tasa
o flujo de difusin para una determinada partcula es directamente proporcional al
gradiente de actividad qumica, a la temperatura del sistema, al dimetro de los poros de
la membrana a travs de los cuales pasa la partcula y a la diferencia de potencial
elctrico. El flujo ser inversamente proporcional al peso molecular de la partcula y al
grosor de la membrana.
La difusin del agua a travs de una membrana semipermeable desde un rea de
mayor actividad qumica del agua (menor concentracin de soluto) hacia otra de menor
actividad qumica (mayor concentracin de soluto) se denomina smosis. La fuerza de
smosis o presin osmtica se define como la presin hidrosttica requerida para frenar
la smosis y es la resultante de la energa cintica de las molculas que no pueden
atravesar la membrana de la zona de mayor concentracin de soluto a la de menor
concentracin.
La smosis representa una clase especial de filtracin hdrica capaz de movilizar
grandes volmenes de agua con rapidez a travs de membranas celulares. El flujo hdrico

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osmtico representa el transporte pasivo impulsado por gradientes de concentracin de

soluto. De hecho, cuando es necesario un gran transporte de agua a travs de
membranas celulares (a nivel de la mucosa intestinal y los tbulos renales por ejemplo)
esto se lleva a cabo por el bombeo de iones de forma activa hacia el lado de la membrana
que se quiere movilizar agua. El bombeo inico crea un gradiente osmtico.
Gran parte del conocimiento de la membrana celular se ha derivado del estudio de
los glbulos rojos o eritrocitos, y las propiedades de las membranas en general se supone
que son, sino idnticas, muy similares a las de los eritrocitos.
Los eritrocitos normales suspendidos en una solucin de cloruro de sodio al 0,85%
(solucin isotnica con el plasma), no presentan cambios morfolgicos significativos por
algunas horas, mientras que suspendidos en agua destilada se hemolizan enseguida. El
eritrocito se comporta como osmmetro perfecto. Cuando se colocan los eritrocitos en una
solucin hipotnica o hipertnica, el grado de hinchamiento o de encogimiento que sufren,
respectivamente, est en proporcin directa a la diferencia de presiones osmticas entre
el glbulo y la solucin.
Si la concentracin de sal es disminuida progresivamente por debajo de 0,85%, se
llega a una concentracin en la cual los glbulos rojos comienzan a hemolizarse
(hemlisis inicial). Si la concentracin de la sal se sigue disminuyendo, se llega a una
concentracin en la cual todos los glbulos se hemolizan: hemlisis completa o total.
Los esferocitos, por ser ms esfricos que los eritrocitos normales tienen una
fragilidad osmtica aumentada, hemolizndose en soluciones salinas que no afectan al
glbulo rojo normal (hipotnicas). Por el contrario los eritrocitos muy delgados, como
aquellos que se producen en la talasemia o anemia microctica, presentan una fragilidad
osmtica disminuida, es decir, mayor resistencia a la hemlisis en soluciones hipotnicas.
En esta sesin prctica tendrs la oportunidad de evidenciar el proceso de osmosis
y sus efectos en clulas de origen vegetal as como en glbulos rojos humanos.
OBJETIVOS
1. Demostrar el comportamiento de la membrana de las clulas de origen vegetal ante un
gradiente de concentracin y los efectos del flujo osmtico de agua sobre dichas
clulas.
2. Demostrar la respuesta de los eritrocitos ante un medio hipotnico e isotnico en
relacin con su medio interno.

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

EXPERIENCIA N 1. smosis en clulas vegetales.

Materiales

Saca bocados o cuchillo

Cilindros graduados de 50 mL (5 unidades)
Papas
Agua destilada
Solucin de NaCl al 0,9% (solucin A)
Solucin de NaCl al 10% (solucin B)

Procedimiento
1. Usando un sacabocado o cuchillo cortar tres cilindros o bastones de papa, cada uno de
aproximadamente 5 cm de longitud por 1 cm de dimetro.
2. Determinar el volumen inicial (Vo) de cada cilindro o bastn de papa, para ello
sumergirlo en un volumen conocido de agua destilada en un cilindro de 50 mL y
observar el volumen de agua desplazada.

Vo = Volumen de la papa = al volumen de agua desplazada

3. Colocar los trozos de papa en las soluciones A, B y C

A. Solucin de NaCl al 0,9%
B. Solucin de NaCl al 10%
C. Agua destilada
4. Despus de 120 minutos (2 horas), retirar los trozos de papa de las soluciones y
determinar el volumen final (Vf), colocndolos de nuevo en agua destilada y
observando el volumen desplazado de agua.
Vf = Volumen de la papa = al volumen de agua desplazada

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5. Calcular el cambio de volumen (VF-Vo) y el porcentaje de cambio de volumen para las

tres soluciones (A;B;C) usando la siguiente frmula:
% cambio = Vf Vo (mL) x 100
Vo (mL)

6. Interpretar los resultados.

EXPERIENCIA N 2. Determinacin de la fragilidad osmtica de los eritrocitos.

Mtodo de Dacie
Este mtodo emplea una solucin salina estabilizada a pH 7,4 con fosfato de sodio
y la sangre se aade en proporcin 1 a 100. La prueba se lleva a cabo a temperatura
ambiente y la lectura del grado de hemlisis se hace fotocolorimtricamente,
expresndose el resultado en forma porcentual para cada tubo, con respecto a la
hemlisis en la solucin 0,10% que se considera 100%.
Materiales

Muestra: sangre desfibrinada o heparinizada.

Solucin Madre amortiguada (pH=7,4) de cloruro de sodio osmticamente

equivalente a 10% de NaCl.
NaCl

180g

Na2HPO4

27,31 g

NaH2PO4.2H2O

4,86 g

H2O destilada

2000 mL

Solucin de cloruro de sodio al 1%(V= 1000 mL)

Solucin madre 10%

100 mL

Agua destilada

900 mL

Soluciones diluidas al 0,85%, 0,75%, 0,65%, 0,60%, 0,55%, 0,50%, 0,45%, 0,40%,
0,35%, 0,30%, 0,20%, 0,10% de cloruro de sodio. Se preparan diluyendo la solucin al
1% en balones volumtricos (de 100 mL) con agua destilada.
Nota: estas soluciones se conservan bien a 4 C por algunas semanas. Deben descartarse si aparecen hongos.

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Procedimiento
1. Extraer una muestra de sangre venosa a un compaero.
2. Preparar 12 tubos de 100 x 13 mm y numerarlos del 1 al 12.
3. Dispensar con una pipeta volumtrica 2 mL de cada solucin diluida en los tubos
numerados comenzando por la solucin de menor concentracin (0,10%) en el tubo 1,
0,20% en el tubo 2 y as sucesivamente hasta terminar con la solucin de mayor
concentracin (0,85%) en el tubo 12.
4. Aadir exactamente 0,02 mL (20 uL) de sangre heparinizada o desfibrinada bien
mezclada a cada uno de los tubos, mezclando inmediatamente.
5. Dejar los tubos a temperatura ambiente (20-25C) por 30 minutos.
6. Mezclar nuevamente y centrifugar a 2000 rpm por 10 minutos.
7. Remover cuidadosamente con una pipeta Pasteur la mxima cantidad de
sobrenadante sin mezclarlo con el sedimento. Cada sobrenadante debe ser recogido
en un tubo de 100 x 13 mm debidamente rotulado.
8. Leer la absorbancia de cada sobrenadante utilizando un colormetro a 540 nm o filtro
verde, blanqueando el aparato con el sobrenadante del tubo 12 (0,85%). La cantidad
de hemlisis en cada tubo se compara con la del tubo de 0,10% NaCl (100% de
hemlisis).
9. Considerando que el 100% de hemlisis corresponde a la lectura obtenida en el tubo 1
(0,10%), calcular los porcentajes de hemlisis de los tubos restantes a travs de una
regla de tres.
10. Los resultados se expresan en una grfica en papel milimetrado del porcentaje de
hemlisis (eje Y u ordenadas) en funcin de la concentracin de las soluciones (eje X o
axcisas).
11. Interpretar los resultados.

VALORES NORMALES (A pH 7,4 Y 20 C )

0,30% NaCl
0,35% NaCl
0,40% NaCl
0,45% NaCl
0,50% NaCl
0,55% NaCl

97 a 100% de hemlisis
90 a 99% de hemlisis
50 a 90% de hemlisis
5 a 45% de hemlisis
0 a 5% de hemlisis
0% de hemlisis

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TABLA DE REPORTE DE RESULTADOS

Tabla 1. smosis en clulas vegetales

SOLUCIN

Vo (mL)

NaCl al 0,9%

NaCl al 10%

Agua destilada

Vf (mL)

Vf-Vo (mL)

% de cambio

Tabla 2. Fragilidad osmtica de los eritrocitos

SOLUCIN
0,85% NaCl
0,75% NaCl
0,65% NaCl
0,60% NaCl
0,55% NaCl
0,50% NaCl
0,45% NaCl
0,40% NaCl
0,35% NaCl
0,30% NaCl
0,20% NaCl
0,10% NaCl

Absorbancia

% HEMLISIS

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ANEXO

CLCULOS PARA LA PREPARACIN DE LAS SOLUCIONES

QUE SE EMPLEAN EN LA PRCTICA
VEGETAL:
Solucin de NaCl 0,9%
100 mL Agua
0,9 g NaCl
500 mL Agua

4,5 g NaCl

Solucin de NaCl 10%

100 mL Agua
10 g NaCl
500 mL Agua

50 g NaCl

FRAGILIDAD OSMTICA DE LOS ERITROCITOS:

SOLUCIN MADRE: (NaCl al 10% TAMPONADA)

PREPARAR 1000 mL

Na2HPO4
Na2HPO4.2H2O
NaCl
Volumen de solucin

27,31 g

13,65 g

6,828 g

4,86 g
180 g
2000 mL

2,43 g
90 g
1000 mL

1,215 g
45 g
500 mL

SOLUCIN DE TRABAJO: (NaCl al 1%) Preparar 1000 mL/ 2 grupos

Solucin Madre
100 mL
Agua destilada
900 mL
SOLUCIONES EXPERIMENTALES: V= 100 mL (2 GRUPOS)
Solucin
Volumen de
Volumen de
experimental solucin al 1% (mL) agua destilada (mL)
0,85%
85
15
BLANCO (0% Hemlisis)
0,75%
75
25
0,65%
65
35
0,60%
60
40
0,55%
55
45
0,50%
50
50
0,45%
45
55l
0,40%
40
60
0,35%
35
65
0,30%
30
70
0,20%
20
80
0,10%
10
90
Mximo % de hemlisis
V (1%)= 575 mL