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TEMA:
SESION PRACTICA N 2
TEMA: ESTUDIO DE PROTOZOARIOS PARASITOS
INTRODUCCION
COLECTA Y CONSERVACION
La colecta de protozoarios en
general ofrece pocas dificultades, ya
que habitan en casi cualquier tipo de
agua; pero la bsqueda de un
determinado grupo o especie es difcil
y depende del conocimiento de su
hbitat y hbitos. Son mltiples los
factores que pueden determinar que
en cierto lugar habite una determinada
poblacin de protozoarios.
Los Rizpodos estn tipificados
por la presencia de seudpodos. Estos
son extensiones no permanentes del
cuerpo que funcionan como rganos
de locomocin y alimentacin. La
forma de los seudpodos varia
considerablemente:
pueden
ser
salientes redondeados (lobopodios),
como en la conocida Amoeba o
estructuras filamentosas largas y finas
Zoomastiginos.
Los Protozoos flagelados se
encuentran en todos los tipos de
hbitat, ya sea en el mar, en las aguas
dulces o en el suelo. Pueden ser de
vida libre, solitarios o coloniales, y
tambin parsitos.
Los
Esporozoos
son
exclusivamente endozoicos, es decir,
todos ellos viven en la cavidad
corporal o en los tejidos de un animal
hospedador. Los miembros del grupo
tienen ciclos vitales complejos, y
reciben su nombre del proceso de
formacin de esporas (esporogonia)
que forma parte del ciclo vital. En la
mayoria de los Esporozoos dicho ciclo
incluye un estado intracelular, con
muchas especies de importancia
mdica.
3%,
hasta
que
mueran
los
protozoarios y se depositen en el
fondo. En seguida, el agua se decanta
dejando slo una pequea cantidad
del fondo junto con el material
sedimentado. Este puede fijarse y
dejarse en alcohol de 70%.
Algunas
especies
de
protozoarios parsitos se pueden
colectar con facilidad en los rganos
internos de sus huspedes. La
cavidad oral y braquial de los
vertebrados puede albergar Amibas.
El tubo digestivo de casi todos los
vertebrados
y
de
muchos
invertebrados es rico en protozoarios.
En la cloaca de las ranas es frecuente
encontrar varias especies. La sangre
de los vertebrados terrestres tambin
puede presentar protozoarios del
grupo
de
los
Esporozoarios
(Gregarnidos,
Coccidios
y
Hemosporidios ).
En
las
"termitas"
hay
Fitomastiginos simbiontes que les
ayudan a transformar la celulosa de la
que se alimentan. Ms de un 50% de
algunas "cucarachas" como, por
ejemplo, Blatta orientalis, Blatella
germanica y Periplaneta americana,
tienen en su intestino protozoarios del
gnero Gregarina. Muchas especies
de Amibas ocupan sitios semejantes.
Las vesculas seminales de la "lombriz
de
tierra"
presentan,
casi
invariablemente,
protozoarios
del
gnero Monocystis.
En cualquiera de los casos
citados, los protozoarios se pueden
observar vivos, ponindolos en
soluciones isotnicas, o bien, pueden
hacerse frotis, teidos con colorantes
vitales como rojo neutro o azul de
metileno en soluciones diluidas ( por
ejemplo al 1/1000 ). Los frotis de
FIJACION
Entre
los
fijadores
ms
recomendables estn los de Schaudin,
Goldschmidt, Boui y Guilson. El
material fijado en estos lquidos se
puede
usar
para
elaborar
preparaciones fijas. Los flagelados,
como Euglena, se pueden fijar con el
lquido de Noland, que produce la
muerte instantnea del protozoario y
permite la observacin clara del
flagelo.
Para
fijar
y
montar
temporalmente algunos protozoarios,
agregue una gota de una solucin de
verde de metilo en cido actico al 1%
a una gota de cultivo de protozoarios.
Este colorante fija y tie de verde los
ncleos.
Los
cultivados
ciliados
o
flagelados
tambin
se
pueden
DIVISION SISTEMATICA
Clasificacin elemental de los Protozoarios: Los Protozoarios se dividen en varias
Clases en atencin a la naturaleza de los rganos locomotores que poseen, los
cuales faltan en el caso de aquellos que estn habituados a la vida parasitaria. Las
cuatro Clases generalmente admitidas son:
Phylum Protozoa
Clase I.
Clase II.
Clase III.
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Orden Amoebida
Orden Testacida
Orden Foraminiferida
3. Clase Sporozoa
Orden Gregarinidae
Orden Coccidida
Orden Haplosporida
Orden Haemosporida
4. Clase Cnidosporida
Orden Myxosporida
Orden Actinomyxida
Orden Microsporida
Orden Helicosporida
1. Subphylum Mastigophora
Clase Phytomastigophora
Orden Chrysomonadida
Orden Silicoflagellida
Orden Coccolithophorida
Orden Heterochlorida
Orden Cryptomonadida
Orden Dinoflagellida
Orden Ebriida
Orden Euglenida
Orden Chloromonadida
Orden Volvocida
Clase Zoomastigophora
Orden Choanoflagellida
Orden Rhizomastigida
Orden Kinetoplastida
Orden Retortamonadida
Orden Diplomonadida
Orden Oxymonadida
Orden Trichomonadida
Orden Hypermastigida
Superclase Opalinata
2. Subphylum Sarcodina
Superclase Rhizopoda
Clase Lobosa
Subclase Gymnamoeba
Orden Amoebida
Orden Schizopyrenida
Orden Pelobiontida
Subclase Testacealobosa
Orden Arcellinida o Testacida
Clase Filosa
Orden Aconchulinida
Orden Testaceafilosida
Clase Granulorreticulosa
Orden Foraminiferida
Superclase Actinopoda
Clase Acantharia
Clase Polycystina
Clase Phaeodaria
Clase Heliozoa
II. Phylum Apicomplexa
Clase Sporozoa
Subclase Gregarinia
Subclase Coccidia
Clase Piroplasmea
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OBJETIVOS
1. Reconocer e identificar los protozoarios de vida libre ms
comunes de nuestra regin.
2. Identificar las principales estructuras y caractersticas de los
diversos grupos taxonmicos de protozoarios de vida libre
observados.
3. Reconocer y diferenciar los protozoarios parsitos.
4. Reconocer y determinar la funcin de las principales
estructuras externas e internas de los protozoarios parsitos.
5. Conocer el ciclo biolgico o vital de los principales
protozoarios parsitos.
MATERIAL
MATERIAL DE LABORATORIO:
- Microscopio
- Lmina porta-objetos
- Laminillas cubre-objetos
- Lminas escabadas
- Vaselina
COLORANTES VITALES:
- Pardo de Bismark
- Rojo Congo
- Verde Jano
- Verde de metilo
- Azul de metileno
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- Algodn
- Glicerina
- Palillos de madera
- Lugol
- Rojo neutro
MATERIAL BIOLOGICO:
- Muestras diversas de aguas con protozoarios.
- Cultivos de protozoarios.
- Lminas con preparaciones permanentes coloreadas y sin colorear de protozoarios
de vida libre y parsitos.
METODOLOGIA
I. OBSERVACION DE PROTOZOARIOS DE VIDA LIBRE
Con el material necesario y las muestras de agua con protozoos proceder segn las
tcnicas de observacin siguientes:
1. TECNICAS DE OBSERVACION:
1. 1.EXAMEN DIRECTO:
Este examen permite la observacin de los protozoos vivos, su morfologa,
locomocin, reacciones, etc., durante la observacin se requiere de enfocar
adecuadamente y diafragmar convenientemente.
Con una lmina portaobjetos y una laminilla cubreobjetos proceda a preparar
y montar una muestra de agua estancada o una gota de cultivo. Observar al
microscopio con mayor y menor aumento.
Si al observar la muestra se nota demasiada movilidad en los especmenes,
agregue a la preparacin unas fibras de algodn (puede tambin utilizarse gelatina,
goma arbiga, glicerina, etc.) para que de esta manera se pueda realizar una mejor
observacin.
Si la muestra es muy pobre, y contiene pocos individuos, se puede consentrar los
protozoos, para el caso se utiliza la filtracin rpida e incompleta a travs de un
pao (tela o papel filtro) el residuo de la filtracin debe ser vaciado rpidamente en
un recipiente adecuado, antes de que se complete la filtracin; puede tambin
utilizarse la centrifugacin a bajas velocidades.
1.2. OBSERVACION EN CAMARA HUMEDA:
A fin de que la pequea gota de lquido que se examina no se concentre o
deseque durante la observacin, no se recurre al sencillo sistema de poner la gota
entre porta y cubre-objeto, sino que se la encierra en un pequeo recinto situado
entre ellos, que permite, adems, entretener la vida de los protozoos durante algn
tiempo. Esto se consigue de tres modos diferentes:
1.2.1. Cmara de Gota Pendiente:
Lquido de Noland:
- Solucin saturada de fenol en
agua destilada................................... 80.0 cc
- Formol al 40%.................................... 20.0 cc
- Glicerol............................................... 4.0 cc
- Violeta de Genciana............................ 20.0 mg
1.6. PREPARACIONES PERMANENTES:
Para el caso se requiere que el material de la muestra sea previamente fijado,
la fijacin puede ser realizada sobre la muestra contenida en un porta-objeto, o en
un pequeo volumen de la muestra. Luego de la fijacin se procede a la coloracin.
1.6.1. Fijadores:
- Fijadores Fsicos: calor, frio.
- Fijadores Qumicos: simples, compuestos.
1.6.2. Coloraciones:
- Hematoxilina - Eritrocina - Orange G.
- Hematoxilina Frrica de Heidenhain.
- Impregnacin Argntica.
- Shorr.
- Giemsa.
- Leisshmann
- Hemalumbre de Mayer.
- Hematoxilina - Mtodo A.
Para mayores detalles consultar la bibliografa especializada.
2. OBSERVACION DE FLAGELADOS:
Realizando las preparaciones que considere necesarias, proceda a observar y
reconocer los protozoarios flagelados ms comunes, identificar los organelos
constituyentes, rotular los grficos y ubicarlos sistemticamente.
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3. OBSERVACION DE CILIADOS:
Proceda a preparar y observar muestras de
ciliados, diferencie los diversos organelos, rotule
los grafico y ubique sistemticamente lo
observado.
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CUESTIONARIO
1. Cuales son los factores o condiciones ambientales que influyen en el
desarrollo de los protozoarios dulceacucolas?
Los factores que influyen en el desarrollo de los protozoos dulceacucolas son:
pH: En aguas altamente cidas predominan los protozoos que presentan
testas. En aguas altamente alcalinas predominan los gneros Acantochystis,
Hyalobryon, etc. En agua estancada la zona profunda es cida debido a la
descomposicin de materia; mientras que la zona superficial es alcalina
debido a plantas que realizan el proceso de la fotosntesis ya que consumen
CO2.
Luz solar: Es muy importante para los protozoos que realizan fotosntesis
como es el caso de los fitomastigforos y tambin para los protozoos que
dependen de estos como principal fuente de alimento.
Temperatura: Los protozoos de vida libre soportan una temperatura mxima
entre 30 y 40 C. La temperatura ptima se encuentra entre 16 y 25 C. No
obstante, en estado de quiste soportan mayores cambios de temperatura.
Cantidad de alimento: Es un factor muy importante que define la proliferacin
de las especies que se van a encontrar en el hbitat.
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11. Caracterice las estructuras adicionales que presentan los flagelos de los
protozoos parsitos.
Los cinetoplstidos tripanosmicos son parsitos del digestivo de insectos y
parsitos sanguneos de los vertebrados. Solamente presentan el flagelo anterior,
mientras que el segundo falgelo est representado por el cuerpo basal. Por lo
comn, el flagelo es posterior y esta conecatdo a los lados del cuerpo por una
membrana ondulante.
12. Refiera la accin parasitaria de los ciliados.
El gnero Balantidium se encuentra en el intestino de crustceos, insectos, peces,
anfibios y mamferos. La nica especie que afecta al hombre es Balantidium coli. Es
el parsito ms grande que infecta humanos. Es comn en zonas tropicales, pero
tambin est presente en climas templados. Tiene efecto y epidemiologa similar a
Entamoeba histolytica. Aparentemente es un parsito primario de cerdos, que se ha
adaptado a otros huspedes. Tiene quiste y trofozoitos, que cuando estn vivos se
ven amarillos o verdosos:
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Proterospongia
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Nutricin
Reproduccion
asexual
Euglena
A travs de un flagelo
longitudinal.
Auttrofa, pudiendo
llegar a ser hetertrofa
de pendiendo de las
circunstancias.
Parameciu
m
A travs de cilios.
Hetertrofa.
Ameba
A travs de
seudpodos, mas
especficamente por
lobopodios.
Hetertrofa.
Por fisin
binaria.
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BIBLIOGRAFIA
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GAVIO DE LA TORRE; JUAREZ LOPEZ Y FIGUEROA TAPIA. 1985. Tcnicas
Selectas de Laboratorio y de Campo. Ed. Limusa.
JIMENEZ, P. 1977. Apuntes para la Elaboracin de un Manual de Invertebrados.
Informe Bilogo. UNSA.
LINCOLN, R. Y SHEALS, G. 1989. Gua de Captura y Conservacin Invertebrados. Ed. Interamericana McGraw - Hill.
LOPEZ, E. Y MORALES, A. 1985. Gua de Investigacin para el Estudio de
Protozoos. Departamento Acadmico de Biologa. UNSA.
KUDO, R. 1966. Protozoologa. Ed. Continental S.A.
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WESTPHAL, A. 1977. Protozoos. Ed. Omega S. A.
V B
JEFE DE PRACTICAS