www.megazyme.

com

AOAC MTODO 985.29

AOAC MTODO 991.42
AOAC MTODO 991.43
AOAC MTODO 993.19
AACC MTODO 32-05.01
AACC MTDOD 32-06.01
AACC MTDO 32-07.01
AACC MTODO 32-21.01

INTRODUCCIN:
La fibra diettica es una mezcla de sustancias orgnicas
complejas, incluyendo compuestos hidrfilos tales como
polisacridos solubles e insolubles y oligosacridos no
digeribles, as como una gama de compuestos no hinchables,
ms o menos compuestos hidrfobos tales como cutinas,
suberinas y ligninas. Los procedimientos para la determinacin
de la fibra diettica total como se indica en este manual se
basan en los mtodos de Lee et al1 y Prosky et al.2, 3 (AOAC
991.43, AOAC 985.29, AACC 32-07.01 y AACC 32-05.01).
Sin embargo, las enzimas en el Kit de fibra diettica total
Megazyme tambin se pueden utilizar en otros mtodos
analticos para fibra diettica tales como AACC Mtodo 3221.01 y el mtodo AACC 32-06.01.
PRINCIPIO (FIBRA DIETARIA TOTAL):
La fibra diettica total (TDF) se determina por duplicado en
muestras secas y desgrasadas (si el contenido de grasa es>
10%). Las muestras se cocinan a ~ 100 C con -amilasa
termoestable para generar la gelatinizacin, hidrlisis y
despolimerizacin de almidn; se incuban a 60 C con proteasa
(para solubilizar y despolimerizar protenas) y
amiloglucosidasa (para hidrolizar fragmentos de almidn a
glucosa); y se tratan con cuatro volmenes de etanol para
precipitar la fibra soluble y eliminar la protena
despolimerizada y glucosa (a partir de almidn). Los residuos
se filtran, se lavan con etanol al 78%, etanol al 95% y acetona;
se secan y se pesan. Un duplicado es analizado para protena y
el otro se incuba a 525 C para determinar ceniza. La FDT es
el peso del filtrado y el residuo seco menos el peso de la
protena y ceniza.
La principal ventaja del Kit de FDT Megazyme es que contiene
enzimas de alta pureza desprovistas de interferencia, y las
actividades de las enzimas estn estandarizadas. La importancia
de la actividad estandarizada de la -amilasa en la medicin de
almidn resistente es bien reconocida. La amiloglucosidasa

Megzyme es esencialmente carente de celulasa, mientras que

otras preparaciones comnmente usadas contienen una
contaminacin significativa con esta actividad, lo que conduce
a la solubilizacin y la subestimacin de -glucanos. Todas las
enzimas del kit de FDT Megazyme se suministran en una forma
lista para usar, estabilizadas, en forma lquida.
ALCANCE:
Aplicable a granos de cereales, frutas y verduras, productos de
cereales y frutas.
PUREZA DE LA ENZIMA Y ESTANDARIZACIN:
La efectividad y la pureza de la -amilasa, proteasa y
amiloglucosidasa Megazyme han sido evaluadas utilizando los
estndares recomendados por la AOAC Mtodo 985.29 y
991.43, y AACC Mtodo 32-05.01. -amilasa termoestable
Megazyme (E-BLAAM) tiene una actividad de 3000 U / ml
(mtodo Ceralpha); la proteasa se suministra a una
concentracin de 50 mg / ml (~ 350 unidades de tirosina / ml);
y la amiloglucosidasa se suministra a una concentracin de 200
U / ml (p-nitrofenil -maltsido sustrato) (o 3.300 U / ml de
almidn soluble). Esta actividad de la amiloglucosidasa es
150% de la concentracin utilizada tradicionalmente en
ensayos de FDT, de manera que 0,2 ml (en lugar de 0,3 ml) se
utilizan en el ensayo.
La amiloglucosidasa Megazyme (E-AMGDF) es esencialmente
carente de celulasa, mientras que otras preparaciones utilizadas
para la determinacin de FDT, la contaminacin por celulasa
puede ser tan alta como en un 1% de la amiloglucosidasa (sobre
una actividad base). Este nivel de contaminacin conduce a una
subestimacin de -glucanos hasta en un 10-15%.
Los mtodos utilizados para la medicin y la normalizacin de
las enzimas Megazyme, estn disponibles bajo peticin.

KIT DE ENSAYO DE FDT:

Kits con reactivos para 200 ensayos estn disponibles en
Megazyme y contienen adems el mtodo completo de ensayo:

MTODO 1:
DETERMINACIN DE FIBRA DIETARIA TOTAL,
SOLUBLE E INSOLUBLE

Botella 1:
-amilasa termoestable (20 ml, ~ 3000
U / ml (mtodo Ceralpha); ~ 10000 U / ml de almidn soluble)
(Megazyme cat. n E-BLAAM).

Basado en el mtodo AOAC 991.43 "Fibra diettica total,

soluble e insoluble en los Alimentos" (Primera Accin 1991)
y Mtodo AACC 32-07.01 "Determinacin de fibra diettica
total, soluble e insoluble en alimentos y productos
alimenticios" (Aprobacin Definitiva 10- 16-91).

Botella 2:
Proteasa purificada (20 ml, 50 mg / ml; ~
350 unidades de tirosina / ml) (Megazyme cat. n E-BSPRT).

DEFINICIN:

Botella 3:
Amiloglucosidasa purificada (20 ml,
3300 U / ml de almidn soluble) (Megazyme cat. No. EAMGDF).
Celite545, lavado cido, en paquetes de 100 g o 500 g estn
disponible por separado (cat. No. G-CEL100, o cat. No. GCEL500).

Este mtodo es la modificacin simplificada del mtodo AACC

fibra diettica total (FDT) 32-05.01, y el mtodo AACC fibra
diettica soluble / insoluble (para los productos de avena), 3221.01. (Ver Nota 1, pgina 9.)

ENSAYO DE CONTROL KIT FDT (K-TDFC):

Brevemente, 1 g de las muestras de alimentos secos

(duplicados) se someten a digestin enzimtica secuencial con
-amilasa termoestable, proteasa y amiloglucosidasa.

Este kit se utiliza en conjunto con el Kit de ensayo de FDT para

determinar la eficacia y la pureza de la enzima. El kit contiene
un vial de cada uno de los componentes enumerados a
continuacin y una hoja de datos tcnicos (K-TSCK; Controles
fibra diettica).
La cantidad de cada componente incluido en este kit es
adecuada para al menos 10 ensayos.
Componente
-glucano (cebada)
Amilosa de almidn de maz
Almidn (trigo)
Casena
Pectina

Cantidad
1g
10 g
10 g
5g
1g

1. Principio:

2. Determinacin de fibra diettica soluble/insoluble:

La fibra diettica insoluble (FDI) se filtra, y luego el residuo se
lava con agua destilada caliente. La solucin combinada del
filtrado y agua se precipitan con 4 volmenes de etanol al 95%
(EtOH) para obtener la fibra diettica soluble (FDS). El
precipitado se filtra y se seca. Ambos residuos FDS y FDI se
corrigen de protenas, cenizas y blanco para el clculo final de
los valores FDS y FDI.
3. Determinacin de fibra diettica total:
La FDS se precipita con EtOH y a continuacin el residuo se
filtra, se seca y se pesa. El valor la Fibra diettica total (TDF)
se corrige para protenas y contenido de cenizas.

ALCANCE:
Este mtodo permite determinar el contenido de fibra diettica
soluble, insoluble y total en los alimentos procesados y las
materias primas, tales como productos de cereales, frutas y
verduras.
EQUIPOS:
1. Beakers de 400 ml y 600 ml.
2. Crisol poroso, Gooch, disco poroso, Pyrex 50 ml, tamao
de poro, grueso, ASTM 40-60 micras, Corning N .3294050C o equivalente. Preparar como sigue:
a. Colocar en mufla durante la noche para tener las
cenizas.
b. Retirar el Celite y cenizas utilizando vaco.
c. Remojar en solucin de Micro limpieza al 2% (reactivo
7) a temperatura ambiente durante 1 hr.
d. Enjuagar los crisoles con agua y agua desionizada.
e. Para el enjuague final, utilizar 15 ml de acetona y aire
seco.
f. Aadir aproximadamente 1,0 g de Celite en crisoles
secos y secar a 130 C hasta peso constante.
g. Enfriar el crisol en desecador durante
aproximadamente 1 hora y registrar el peso del crisol
conteniendo el Celite.
3. Frasco de filtrado, con brazo lateral I-L.
4. Anillos de goma adaptados para uso en frascos de filtrado.
5. Fuente de vaco: bomba de vaco o de aspiracin con
regulador capaz de regular el vaco.
6. Bao de agua, temblando, de gran capacidad (20 a 24 L)
con tapas; capaz de mantener la temperatura de 100 C;
equipado con temporizadores automticos para la
operacin de encendido y apagado.
7. Balanza 0,1 mg de precisin.
8. Dos hornos de conveccin mecnica, fijado en 103 2 y
130 3 C.
9. Cronmetro

10. Desecador hermtico, con desecante SiO2 o

equivalente. Secar el desecante cada dos semanas
durante la noche en horno de 130 C.
11. pH metro.
12. Pipetas y tips, 50-200 l y 5 ml de capacidad.
13. Dispensadores
a. 15 0,5 ml de EtOH al 78%, EtOH al 95% y
acetona.
b. 400.5 mL de buffer.
14. Cilindro, 500 ml.
15. Agitadores magnticos y barras de agitacin.
16. Esptulas de goma.
17. Horno de mufla, 525 5 C
REACTIVOS:
1. Etanol, 95% v / v.
2. Etanol al 78%. Colocar 129 ml de agua en un matraz
aforado de 1-L. Diluir hasta el volumen con etanol al
95%. Mezclar.
3. Acetona, grado reactivo.
4. Enzimas para ensayo de FDT (Megazyme Internacional
Ireland Limited). Almacenar a 0-5 C.
a. -amilasa, estable al calor (E-BLAAM); 3.000
Unidades Ceralpha / mL.
b. Proteasa (E-BSPRT); 50 mg / mL; 350 unidades de
Tirosina / ml.
c. Amiloglucosidasa (E-AMGDF); 200 Unidades de pNP -maltsido / ml (o 3300 Unidades/ ml de
almidn soluble).
5. Agua desionizada.
6. Celite, lavada con cido, pre-incinerada (Megazyme GCEL100 o G-CEL500).
7. Solucin de limpieza, Micro (International Products
Corp., Trenton, NJ). Hacer solucin al 2% con agua
desionizada.
8. MES / TRIS buffer, 0,05 M cada uno, pH 8,2 a 24 C.
Disolver 19,52 g 2 (N-morfolino) de cido
etanosulfnico (MES) (Sigma, M 8250) y 12,2 g de tris
(hidroximetil) aminometano (TRIS) (Sigma, T1503) en

1,7 L de agua desionizada. Ajustar el pH a 8,2 con

NaOH 6,0 N. Diluir hasta 2 L con agua. Es importante
ajustar el pH del buffer a aproximadamente 8,3 a 20 C
o aproximadamente 8,1 a 27-28 C.
9. Solucin de cido clorhdrico, 0.561 N. Aadir 93,5 ml
de HCl 6 N a aproximadamente 700 ml de agua en un
matraz aforado de 1-L. Diluir hasta 1-L con agua.
10. Estndares de pH. Soluciones tampn a pH 4,0, 7,0 y
10,0.
PUREZA DE LA ENZIMA:
Para asegurar la presencia de actividad apropiada de la enzima
y la ausencia de actividad indeseable, ejecutar la lista de
materiales que se enumeran a continuacin a travs de todo el
procedimiento. Cada nuevo lote de enzimas debe ser probado,
al igual que las enzimas que no han sido probadas durante los 6
meses anteriores.
Alternativamente, la actividad enzimtica y la pureza se pueden
determinar usando procedimientos de ensayo tal como se
resume en las pginas 17 y 18 de este folleto.
Muestra de
prueba
Pectina
ctrica
B-glucano
(cebada)
Almidn de
trigo
Casena
Almidn rico
en amilosa

Actividad
probada
Pectinasaa

Peso de
muestra (g)
0.1

Recuperacin
esperada (%)
90-95c

B-glucanasa
(celulasa)a
Amilasab

0.1

95-100

1.0

0-1

Protesasb
Amilasa

0.3
1.0

0-2
~30d

a. Esta actividad no debe estar presente en las pruebas.

b. Esta actividad debe ser completamente funcional en las
pruebas.
c. Los valores son bajos debido a la precipitacin
incompleta de la pectina ctrica.

d. Este material contiene un alto nivel de "enzima

resistente" al almidn. El valor exacto esperado de
recuperacin se ver afectado por el nivel de -amilasa
termoestable utilizado en la prueba.
PROCEDIMIENTO:
1. Blancos
Con cada ensayo, ejecute dos blancos junto con las
muestras para medir cualquier contribucin de los
reactivos a los residuos.
2. Muestras
a. Pesar por duplicado 1.000 0.005 g de muestras
con precisin en beakers de 400 ml.
b. Aadir 40 ml de solucin tampn MES-TRIS (pH
8,2) a cada beaker. Aadir una barra de agitacin
magntica a cada vaso. Agitar en un agitador
magntico hasta que la muestra est completamente
dispersada en la solucin. (Esto evita la formacin
de grumos, lo que hara que la muestra sea
inaccesible para enzimas).
3. Incubacin con -amilasa termoestable
a. Aadir 50 l de solucin de -amilasa termoestable,
mientras se agita a baja velocidad.
b. Cubrir cada vaso con cuadrados de papel de
aluminio.
c. Coloque las muestras tratadas en bao de agua a 95
a 100 C e incubar durante 35 min con agitacin
continua. Comenzar la sincronizacin una vez que
todos los beakers estn en bao de agua caliente.
4. Enfriamiento
a. Retirar todos los beakers con muestras del bao de
agua caliente y enfriar a 60 C.
b. Retirar las tapas de papel aluminio.
c. Raspe con la esptula cualquier anillo alrededor de
vaso y geles en el fondo del beaker, si es necesario.
d. Enjuague las paredes laterales del vaso de
precipitados y la esptula con 10 ml de agua
destilada utilizando pipeta.

e. Ajuste la temperatura del bao de agua a 60 C

mediante el drenaje de agua caliente y la adicin de
agua fra.
5. Incubacin con proteasa
a. Aadir 100 l solucin de proteasa a cada muestra.
b. Volver a cubrir con papel de aluminio.
c. Incubar en bao de agua a 60 1 C, con agitacin
continua durante 30 min. Iniciar la sincronizacin
cuando la temperatura del bao de agua alcanza 60
C.
6. Verificacin del pH
a. Retire las muestras de los beakers en bao de agua
con agitacin.
b. Retirar las tapas.
c. Dispense 5 ml de solucin HCl 0,561 N en la
muestra, mientras se agita.
d. Verificar el pH, que debera ser 4.1- 4.8. Ajustar el
pH, si es necesario, con una solucin adicional de
NaOH 5% o solucin de HCl al 5% (vase nota 2).
7. Incubacin con amiloglucosidasa
a. Aadir 200 l de solucin de amiloglucosidasa
mientras se agita en un agitador magntico.
b. Volver a colocar la cubierta de aluminio.
c. Incubar en bao de agua a 60 C durante 30 min,
con agitacin constante. Iniciar la sincronizacin
cuando la temperatura del bao de agua alcanza 60
C.

10. Lavar los residuos dos veces con 10 ml de agua

destilada precalentada a 70 C. Usar agua para enjuagar
el beaker antes de lavar los residuos en el crisol. Guarde
los lavados de filtrado de agua para la determinacin de
DFS.
11. Lavar el residuo dos veces con 10 mL de:
a. Etanol al 95%
b. Acetona
12. Secar crisol que contiene residuo durante la noche en
horno a 103 C.
13. Enfriar el crisol en desecador durante
aproximadamente 1 hora. Pesar crisol que contiene
residuos de fibra diettica y de Celite. Para obtener el
peso de residuos, restar el peso de tara, es decir, el peso
del crisol seco y Celite.
14. Determinacin de fibra y cenizas.
Un residuo a partir de cada tipo de fibra se analiza para
protena, y el segundo residuo del duplicado se analiza
para cenizas.
a. Realizar el anlisis de protenas en el residuo
mediante el mtodo Kjeldahl. Utilice el factor de
6,25 para todos los casos para calcular los g de
protena.
b. Para el anlisis de la ceniza, incinerar el segundo
residuo durante 5 horas a 525 C. Enfriar en
desecador y pesar con precisin de 0,1 mg. Restar el
peso del crisol y de Celite para determinar ceniza.
(Ver nota 3.)

A. FIBRA DIETETICA INSOLUBLE

8. Filtracin
a. Tarar el Crisol conteniendo Celite ms cercano a 0.1
mg.
b. Mojar y redistribuir el lecho de Celite en el crisol
utilizando aproximadamente 3 ml de agua destilada.
c. Aplicar succin al crisol para dibujar el Celite sobre
el vidrio poroso como un colchn.
9. Filtrar la mezcla de enzimas de la Etapa 7 a travs del
crisol en un matraz de filtracin.

B. FIBRA DIETETICA SOLUBLE

1-10. Siga los pasos 1-10 del mtodo FDI.
11. Pesar la solucin combinada de filtrado y los lavados de
agua en el vaso beaker preparado desde el paso 10 del
procedimiento FDI.
12. Precipitacin de FDS
a. Aadir 4 volmenes de EtOH al 95% precalentado a
60 C. Utilice una porcin de EtOH para enjuagar
el matraz del procedimiento de filtrado FDI (Paso
10). Alternativamente, ajustar el peso de la solucin
combinada de filtrado y los lavados de agua a 80 g y

aadir 320 ml de EtOH precalentado (60 C) al

95%.
b. Permitir la formacin de precipitado a temperatura
ambiente durante 60 minutos.
13. Configuracin de la Filtracin
a. Tarar el Crisol conteniendo Celite lo ms cercano a
0.1 mg.
b. Mojar y redistribuir el lecho de Celite en el crisol
utilizando 15 ml de EtOH al 78% desde la botella
de lavado.
c. Aplicar succin al crisol para dibujar el Celite sobre
el vidrio poroso como un colchn.
14. Filtracin
a. Filtrar el precipitado a digerir por la enzima a partir
del paso 12 de FDS a travs del crisol.
b. Usando una botella de lavado con EtOH al 78% y
una esptula de goma, trasvasar todas las partculas
restantes en el crisol.
15. Lavado
Usando un vaco, lavar residuo sucesivamente con dos
porciones de 15 ml de las siguientes: (Ver Nota 4).
a. Etano al 78 %
b. Etanol al 95 %
c. Acetona
16. Secar el crisol que contiene los residuos toda la noche
en el horno a 103 C.
17. Contine con los pasos 13 y 14 del mtodo de FDI.

c. Permitir formacin de precipitado a temperatura

ambiente durante 60 min.
8. Contine con los pasos 13-17 de procedimiento FDS.

C. FIBRA DIETARIA TOTAL

NOTAS:

1-7. Siga los pasos 1-7.

8. Precipitacin de Fibra diettica con EtOH.
a. Para cada muestra, aadir 225 ml de EtOH al 95%
precalentado a 60 C. Medir el volumen despus del
calentamiento. La relacin de volumen de EtOH y el
volumen de la muestra debera ser de 4: 1. Si el EtOH al
95% se sobrecalienta accidentalmente a 65 C, aadir
228 ml para ajustar y expandir el volumen de alcohol.
b. Cubrir todas las muestras con hojas grandes de papel
aluminio.

CLCULOS:
Fibra diettica (%) =

Dnde:
R1 = Peso del residuo 1 de m 1; R2 = Peso del residuo 2 de m2;
m1 = Peso de la muestra 1; m2 = Peso de la muestra 2;
A = Peso de cenizas de R1; p = Peso de protena de R2; y
B = blanco

Dnde:
BR= residuo del blanco
BA= Cenizas del blanco procedente de BR2.
BP= Protena del blanco procedente de BR1.
NOTA: Estos clculos se pueden simplificar mediante el
uso de Megazyme Mega-CalcTM, descargable desde la
pgina web de Megazyme (www.megazyme.com).

1. Diferencias entre este mtodo y los mtodos AACC 3205.01 y 32-21.01 son los siguientes:
a. Cuarenta (40) milmetros de tampn buffer MESTRIS, 0,05 M cada uno, pH 8,2 a 24 C se utilizan
en lugar de 50 ml de tampn fosfato, 0,08 M, pH
6,0. El pH del tampn buffer MES-TRIS cambia
con la temperatura. El pH del tampn buffer MESTRIS (es decir, 8,2 a 24 C) alcanza 6.9-7.2 a 85-90
C y 7.4-7.6 a 55-60 C. Note que el pH ptimo de

-amilasa termoestable va de pH 6,0 a 60 C a pH

7.0 a 90C.
b. El volumen de -amilasa termoestable utilizado ha
sido reducido de 200 L a 50 L debido a la
actividad superior de la enzima empleada aqu.
c. Cualquier anillo dejado alrededor del beaker
despus de la incubacin de la -amilasa
termoestable se raspa si es necesario. Con la pipeta,
se aaden 10 ml de agua para enjuagar la esptula y
lados de la pared del beaker despus de la
incubacin de la -amilasa termoestable.
d. No es necesario ningn ajuste de pH para la accin
de la proteasa por lo que no se aade NaOH a la
mezcla de incubacin.
e. Para la accin de la amiloglucosidasa, se aadieron
5 ml de HCl 0,561 N.
f. Para la determinacin FDT, la cantidad de EtOH al
95% aadido para la etapa de precipitacin es en su
lugar 225 ml de 280 mL. Para la determinacin de
FDS/ FDI, el peso de la solucin de filtrado y
lavado se ajust a 80 g en lugar de 100 g. De este
modo, se aade 320 ml de EtOH al 95% a 60 C.
Alternativamente, pesar solucin combinada de la
solucin de filtrado y lavado y aadir 4 vol. de
EtOH al 95%. El volumen total de filtracin se
reduce a 375-400 ml con esta modificacin. (Ver
Figs. 1 y 2.).
2. Es importante dejar el beaker a 60 C en bao de agua
hasta que est listo para el ajuste del pH, ya que el pH
de la solucin aumenta con temperatura ms baja.
Normalmente, el ajuste del pH adicional (con HCl al
5% o NaOH al 5%) no se requiere para la mayora de
las avenas, cebada, trigo y productos de maz. Para estos
productos, se puede omitir el procedimiento de
verificacin de pH despus de la adicin de 5 ml de HCl
0,561 N a la muestra. Control sistemtico del pH del
blanco se recomienda como un control de desastres. Si
el blanco no est dentro del rango de pH deseable, las
muestras deberan ser revisadas.

3. Hay algunos indicios de que la demora en los residuos

de lavado de FDI con EtOH al 95% y acetona puede
causar valores inflados de FDI. Por lo tanto, se sugiere
que los residuos de FDI no deben lavarse hacia el final
del procedimientos FDS / FDI.
4. En algunas muestras, se forma una goma atrapando
lquido. Si esto ocurre, romper la capa de la pelcula
con esptula.
REFERENCIAS
1. Lee, S.C., Prosky, L. and DeVries, J.W., (1992).
Determination of total, soluble, and insoluble, dietary
fiber in foods - enzymaticgravimetric method, MESTRIS buffer: Collaborative study. J.Assoc. Off.Anal.
Chem. 75: 395-416.
2. Prosky, L.,Asp., N.-G., Schweizer,T.F., DeVries, J.W.
and Furda, I. (1988). Determination of insoluble,
soluble, and total dietary fibre in foods and food
products. Interlaboratory study. J.Assoc. Off. Anal.
Chem. 71: 1017-1023.
3. Prosky, L.,Asp, N.-G., Schweizer,T.F., DeVries, J.W.
and Furda, I., (1992). Determination of insoluble and
soluble dietary fiber in foods and food products:
Collaborative study. J.Assoc. Off. Anal. Chem. 75:
360-367.

Muestra (1g) por duplicado

+
40ml
buffer,
pH
8.2
a
24
CMES/TRIS,
(MES/TRIS,
M)8.2 a 24 C
Adicionar 40 ml de buffer
0.050.05
M, pH
Muestra (1g) por duplicado en beaker de 600 ml

Adicionar 50 L de -amilasa termoestable

Agitar los beakers

conagua,
muestra
conC,agitador
Bao de
98-100
30 min
magntico para la dispersin uniforme de la muestra

Raspe la pared del beaker con la esptula, si es necesario. Enjuagar con 10

ml de agua

Aadir 50 de solucin de -amilasa. Bao de agua a

Adicionar 100 L de proteasa (no ajustar pH)
95 - 100 C, 35 min.
Bao de agua, 60 C, 30 min

Enfriar
a 60 5 ml
C. de
Raspar
la pared
del4.1
beaker
una 200 L de
Adicionar
HCl 0.56
N a pH
-4.8 ycon
adicionar
esptula
y enjuague
conen
10beakers
ml de agua
L de
amiloglucosidasa
((Dejar
a 60 +C100
en bao
de agua hasta la
solucin de proteasa.
60C, de
30pH
min/ ajuste
de incubacin.
comprobacin
de paso).
Bao de agua, 60 C, 30 min.

Aadir 5 ml de HCl 0,561 M a pH 4,5 (4,1 - 4,6) +

Filtrar a travs del 60C,
crisol. 30 min
200L solucin de amiloglucosidasa.
de incubacin.

Lavar con 2 porciones de 10 ml de agua a 70 C (Usar agua para enjuagar el

beaker antes de lavar los residuos).

Precipitar con 4 vol. EtOH al 95% (~ 225ml)

precalentado a 60 C.
Filtrado + agua de lavado

Residuo

Peso de solucin Filtrar

Adicionar 4 vol. De EtOH al 95 % a 60 C
(Use una porcin de EtOH para
enjuagar
Secar
matraz de filtracin y vaso de precipitados.)

Protena

Ceniza

Fibra diettica insoluble

(FDI)

Precipitar por 1 hr.

2 residuos

Filtrar y secar el residuo

Protena
Protena

Ceniza

Ceniza

Fibra dietaria total

Fibra diettica soluble
(FDS) (FDT)
Figura 2. Esquema analtico para el procedimiento de determinacin total de fibra
Figura 1. Esquema analtico para el procedimiento de determinacin total de fibra
diettica soluble e insoluble.
diettica.