GUIA DE DETERMINACIN DE PROTEINAS POR MTODO DE

KJELDAHL

OBJETIVO
Determinar la concentracin de nitrgeno presente en la muestra
para luego ser transformado a travs de un factor en protena.
FUNDAMENTO
El mtodo se basa en la destruccin de la materia orgnica con cido
sulfrico concentrado, formndose sulfato de amonio que en exceso
de hidrxido de sodio libera amonaco, el que se destila recibindolo
en:
a) cido sulfrico donde se forma sulfato de amonio y el exceso de
cido es valorado con hidrxido de sodio en presencia de rojo de
metilo.
b) cido brico formndose borato de amonio el que se valora con
cido clorhdrico.
MATERIAL Y EQUIPO

Balanza analtica, sensibilidad 0.1 mg.

Equipo Kjeldahl
Manto calefactor
pHmetro
Material usual de laboratorio.

REACTIVOS

cido sulfrico concentrado, p.a.

Sulfato de potasio o sulfato de sodio, p.a.
Sulfato cprico, p.a.
Solucin de hidrxido de sodio al 15 %. Disolver 150 g de NaOH
y completar a 1 litro.
Solucin de cido sulfrico 0.1 N. Tomar 2.7 ml de H2SO4 conc.
y completar a 1 litro, luego estandarizar con Na2CO3 anhidro
p.a.
Solucin de hidrxido de sodio al 30 %. Disolver 300 g de NaOH
y completar a 1 litro.
Solucin indicadora de rojo de metilo al 1 % en etanol. Disolver
1 g de rojo de metilo en 100 mL de etanol (95 %).

Solucin de hidrxido de sodio 0.1 N. Tomar 4 g de NaOH y

enrasar a 1 litro con agua recientemente hervida y enfriada.
Valorar con cido succnico.
cido brico al 3 % . Disolver 30 g de cido brico y completar a
1 litro.
Indicador de Tashiro: rojo de metilo al 0.1 % y azul de metileno
al 0.1 % en relacin de 2:1, en alcohol etlico.
Solucin de cido clorhdrico 0.1 N. Tomar 8.3 mL de HCl conc. y
enrasar a 1 litro.
Valorar con Na2CO3 anhidro.

PROCEDIMIENTO
1.- Realizar la muestra en duplicado.
2.- Efectuar un ensayo en blanco usando una sustancia orgnica sin
nitrgeno (sacarosa) que sea capaz de provocar la reduccin de los
derivados ntricos y nitrosos eventualmente presentes en los
reactivos.
3.- Pesar al 0.1 mg. alrededor de 1 g de muestra homogeneizada (m)
en un matraz de digestin Kjeldahl.
4.- Agregar 3 perlas de vidrio, 10 g de sulfato de potasio o sulfato de
sodio, 0.5 g de sulfato cprico y 20 mL de cido sulfrico conc.
5.- Conectar el matraz a la trampa de absorcin que contiene 250 mL
de hidrxido de sodio al 15 %. El disco poroso produce la divisin de
los humos en finas burbujas con el fin de facilitar la absorcin y para
que tenga una duracin prolongada debe ser limpiado con regularidad
antes del uso. Los depsitos de sulfito sdico se eliminan con cido
clorhdrico.
Cuando la solucin de hidrxido de sodio al 15 % adicionada de
fenolftalena contenida en la trampa de absorcin permanece incolora
debe ser cambiada (aprox. 3 anlisis ).
6.- Calentar en manta calefactora y una vez que la solucin est
transparente, dejar en ebullicin 15 a 20 min. ms. Si la muestra
tiende a formar espuma agregar cido esterico o gotas de silicona
antiespumante y comenzar el calentamiento lentamente.
7.- Enfriar y agregar 200 mL de agua.
8.- Conectar el matraz al aparato de destilacin, agregar lentamente
100 mL de NaOH al 30 % por el embudo, y cerrar la llave.

9.- Destilar no menos de 150 mL en un matraz que lleve sumergido el

extremo del refrigerante o tubo colector en:
a) 50 mL de una solucin de cido sulfrico 0.1 N, 4 a 5 gotas de rojo
de metilo y 50 mL de agua destilada. Asegurar un exceso de H2SO4
para que se pueda realizar la retrotitulacin. Titular el exceso de cido
con NaOH 0.1 N hasta color amarillo o
b) 50 mL de cido brico al 3 %. Titular con cido clorhdrico 0.1 N
hasta pH 4.6 mediante un medidor de pH calibrado con soluciones
tampn pH 4 y pH 7, o en presencia del indicador de Tashiro hasta pH
4.6
Cada cierto tiempo es necesario verificar la hermeticidad del equipo
de destilacin usando 10 mL de una solucin de sulfato de amonio 0.1
N (6.6077 g/L), 100 mL de agua destilada y 1 a 2 gotas de hidrxido
de sodio al 30 % para liberar el amonaco, as como tambin verificar
la recuperacin destruyendo la materia orgnica de 0.25 g de L(-)Tirosina. El contenido terico en nitrgeno de este producto es de
7.73 %. Debe recuperarse un 99.7 %

CLCULO Y EXPRESIN DE RESULTADOS

%N =

14 N V 100
m 1000

Protena=

14 N V 100 factor
m 1000

Dnde:
V : 50 mL H2SO4 0.1 N - gasto NaOH 0.1 N o gasto de HCl 0.1 N
m : masa de la muestra, en gramos
Factor: 6.25: para carne, pescado, huevo, leguminosas y protenas
en general
5.7: para cereales y derivados de soya
6.38: leche
5.55: gelatina
5.95: arroz

Repetibilidad del mtodo: La diferencia entre los resultados de dos

determinaciones efectuadas una despus de otra, por el mismo
analista, no debe exceder 0.06 % de Nitrgeno o 0.38 % de protena.
En la planilla de resultados se indicar mtodo utilizado,
identificacin de la muestra, peso de muestra, gastos de titulacin,
factor utilizado y resultados obtenidos de la muestras en duplicado
con 2 decimales.

ESQUEMA DE DETERMINACIN DE PROTEINAS POR MTODO DE

KJELDAHL PARA LECHE
Digestin: para iniciar el mtodo se pesan en una balanza analtica
0,15 g de sulfato cprico pentahidratado y 5g de sulfato de sodio,
posteriormente se transfirieren por medio de una canaleta a una fiola
que contena 5 ml de leche esterilizada la Pastorea, luego como
agente oxidante se le aaden 13 ml de cido sulfrico concentrado,
como antiespumante 7 gotas de parafina y por ltimo 3 perlas de
vidrio para minimizar la turbulencia en la reaccin.
Luego de obtener la muestra digerida se procede a la segunda
etapa:
Destilacin: esta parte del mtodo de kjeldahl consta en diluir la
muestra con 100 ml de agua destilada, posteriormente se aade 35
ml de NaOH al 50 % para realizar la destilacin en medio bsico,
fueron agregadas 4 granillas de zinc. El destilado se toma en una fiola
que contendr 25 ml de cido brico al 4% y como indicador 3 gotas
de la mezcla de rojo de metilo y azul de metileno, dejar destilar hasta
completar aproximadamente 75 ml del destilado, que por lo tanto se
tendr en la fiola 100 ml de la muestra a valorar.
Valoracin: la muestra obtenida de la destilacin se titula con cido
clorhdrico al 0,1 N, hasta que el titulado vira de color verde a gris
metlico, en este momento se lograra el punto final de la titulacin.

REFERENCIAS
Instituto de Salud Pblica de Chile. DETERMINACIN DE PROTEINAS
Mtodo Kjeldahl (Internet) Rev N: 0. 2012 [citado el 05 de junio

2016]
Disponible
http://www.ispch.cl/lab_amb/met_analitico/doc/ambiente
%20pdf/Proteina.pdf

en: