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Grupo: 4IM1
Seccin: II
La porosidad del gel la determina las proporciones relativas de poliacrilamida y bisacrilamida, siendo menor el poro cuanta ms bisacrilamida vs. acrilamida se use.
.
La mayora de las protenas se separan bien en el rango 5 a 10%. Un menor
porcentaje (mayor tamao de poro) es mejor para separar protenas de gran tamao.
.
En funcin del estado de las protenas en un proceso electrofortico se clasifican
en ; electroforesis nativas o desnaturalizantes.
Objetivos.
Mtodo experimental.
Armado de gel.
Sobre una placa de vidrio, formar marcos con postes y travesao de tefln.
Untar vaselina por ambos lados de los postes y travesaos, colocar por encima la
placa de vidrio de menor tamao.
Fijar las placas con clips grandes, presionando las placas.
12.5
10.0
7.5
5.5
5.7
4.5
3.45
2.55
1.65
1.65
1.65
1.65
6.15
7.35
8.40
9.30
13.5
13.50
13.50
13.50
Gel empacador.
Preparacin de la cmara.
Desarrollo Electrofortico.
Resultados.
Tabla 1. Caractersticas de los electroferogramas a diferentes %T
Caractersticas
%T
5.5
7.5
10
12.5
7.5
8.2
6.3
3
1
4
6.3
7.2
5.3
8
2
8
6.2
6.8
4.5
4
6
8
8
8.2
6.3
3
2
8
5.5
7.5
10
12.5
Muestra
Suero
Yogurt
Clara
Suero
Yogurt
Clara
Suero
Yogurt
Clara
Suero
Yogurt
Clara
Valores de m de la protena
seleccionada (cm)
6.2
6.2
6
5.3
5.5
5.6
4.5
5.4
5.5
4
4.6
4.5
6.3
6.7
6.7
5.3
5.6
5.7
4.5
5.4
5.3
4.1
4.7
4.5
6.5
6.5
6.5
5.3
5.6
x
4.5
5.5
5.1
3.9
4.6
4.4
Valor
promedio
de m (cm)
Movilidad
electrofortic
a relativa. M
Log
(Mx100)
6.33
6.46
6.4
5.3
5.56
5.5
4.5
5.43
5.3
4
4.63
4.46
0.9184
0.9378
0.9291
0.8588
0.9
0.8912
0.9117
1.1001
1.0738
0.6144
0.717
0.6906
1.9633
1.9721
1.9681
1.934
1.9542
1.9499
1.95
2.0414
2.0309
1.7919
1.855
1.8392
2
1.95
1.9
log (MX100)
1.85
Suero
Yogurt
1.8
Clara
1.75
1.7
5
10
11
12
13
%T
Suero.
A= 2.1109
B= -0.025
R= -0.992
Y= 2.1109-0.025X
Yogurt. A= 2.074
B= -0.017
R=-0.9904
Y=2.074-0.017X
Clara.
B= -0.019
R= -0.988
Y= 2.0816- 0.019
A= 2.0816
a) La protena con mayor peso molecular es el suero mientras que el menor peso es el
yogurt. La protena con mayor carga es el suero y la de menor carga es el yogurt.
b) Escriba la reaccin completa para la copolimerizacin de la acrilamida y la
bisacrilamida por radicales libres.
Qu funcin tiene el TEMED y el pesulfato de
amonio?
La funcin TEMED
como catalizador.
medio va a afectar la carga de las protenas, como comparacin se sabe que la mayora
de las protenas presentes en la clara de huevo tienen un punto isoelctrico bajo y el pH
del regulador de trabajo es de 8.7 a 9.1, por lo tanto la carga de estas protenas ser + y
el arrastre ser del ctodo al nodo.
Conclusiones.
Las protenas del yogurt, clara y suero al presentar carga pueden ser separadas
por electroforesis en gel de poliacrilamida y su movilidad va a depender de la
magnitud de su carga y su PM relativo. Estos valores se pueden obtener por medio
de la grfica de Ferguson.
La concentracin de acrilamida ptima para trabajar las protenas es donde estas
presenten mayor cantidad de bandas y de buena resolucin. El suero es ptimo a
una concentracin de 7.5, el yogurt a una concentracin de 10 y para la clara de
huevo pueden ser a 7.5, 10, 12.5
Bibliografa.
http://www.bvs.sld.cu/revistas/uni/vol1_2_00/uni07200.htm
https://books.google.com.mx/books?id=i_7RXUu44IC&pg=PT52&dq=electroforesis+de+proteinas&hl=es419&sa=X&ved=0ahUKEwiFy9qNsr_MAhWquIMKHb2cBZsQ6AEIGjAA#v=onepage&q=ele
ctroforesis%20de%20proteinas&f=false