MANEJO DEL AUTOCLAVE, DESINFECCIN Y EESTERILIZACIN DEL

LABORATORIO Y SUS MATERIALES.

INTRODUCCION.
La esterilizacin es un proceso esencial para el funcionamiento de un hospital, en el cual
se deben utilizar todos los instrumentos quirrgicos, implantes y muchos otros
dispositivos absolutamente esterilizados. La desecacin y la congelacin eliminan
muchas especies de bacterias, pero otras simplemente permanecen en estado vegetativo.
El calor seco o hmedo elimina todas las bacterias combinando adecuadamente factores
como la temperatura a la que se someten y el tiempo de exposicin. Se puede esterilizar
por calor seco en estufas a ms de 160 C durante media hora, o por calor hmedo en
autoclaves a 120 C durante 20 minutos y a presin superior a la atmosfrica. La
ebullicin a 100 C no elimina todos los grmenes patgenos (entre los que no slo estn
incluidas las bacterias sino tambin virus y levaduras). Otro medio habitual de
esterilizacin, utilizado para objetos no resistentes al calor, son los medios qumicos: el
cido fnico, iniciador de la era de la antisepsia (vase Fenol), el cido cianhdrico (vase
Cianuro de hidrgeno), el xido de etileno, la clorhexidina, los derivados mercuriales, los
derivados del yodo (especialmente la povidona yodada) y muchas otras sustancias. El
alcohol etlico no produce esterilizacin completa. Otro medio de esterilizacin actual son
las radiaciones ionizantes (beta, gamma).
La esterilizacin implica la destruccin, de todos los organismos incluyendo esporas, y la
desinfeccin supone la destruccin de los microrganismos vegetativos que pueden causar
enfermedades, pero la desinfeccin no mata necesariamente esporas.
Los mtodos ms usados corrientemente en los laboratorios microbiolgicos son:
Calor rojo (flameado).
Calor seco (aire caliente).
Vapor a presin (calor hmedo)
Vapor fluente (tyndallizacin)
Calor rojo: Los instrumentos tales como las asas y alambres de siembra y varillas secas se
esterilizan calentndolas en la llama del mechero bunsen hasta que se ponga rojo.
Calor seco: Se aplica en un horno calentado elctricamente que se controla mediante
termostatos y que estn provistos de un gran ventilador circulante que asegura la
uniformidad de la temperatura en todas las partes del contenido. Los equipos modernos
pueden llevar la temperatura al nivel requerido, este dispositivo salvaguarda y protege al
personal de quemaduras accidentales. El material que puede esterilizarse por este mtodo
incluye placas petri, matraces, pipetas de vidrio y objetos de metal. El aire no es buen
conductor del calor, por lo que las estufas deben cargarse sin apretar el contenido, de
forma que queden abundantes espacios para permitir que circule el aire caliente. Cuando
se calculan los tiempos de funcionamiento para el equipo de esterilizacin por aire
caliente, deben considerarse tres periodos.

1. El periodo de asenso de temperatura, que es el tiempo necesario para que toda la

carga alcance la temperatura de esterilizacin; puede llevar alrededor de una hora.
2. Los periodos de mantenimiento a las diferentes temperaturas de esterilizacin
recomendadas por el Medical Research Coucil que son 160C durante 45 minutos,
170C durante 18 minutos, 180C durante 7 minutos y 190C durante 1 minutos.
3. El periodo de enfriamiento, que se realiza gradualmente para prevenir la rotura del
material de vidrio como consecuencia de un descenso demasiado rpido de
temperatura; este periodo lleva dos horas.
Vapor a presin: Se realiza mediante la esterilizacin en autoclave. Las bacterias se matan
ms fcilmente por el calor hmedo que por calor seco. El vapor mata las bacterias por
desnaturalizacin de protenas. Una condicin de seguridad convenida para la
esterilizacin es utilizar vapor a 121C durante 15 a 20 minutos. El aire tiene influencia
importante en la eficacia de la esterilizacin, porque su presencia modifica la relacin
presin/temperatura, adems, la existencia de bolsas de aire impedir la penetracin del
vapor, debe de eliminarse todo el aire primero todo el aire que rodea y penetra en la carga
antes de que pueda comenzar la esterilizacin por vapor.

Autoclave.

Una buena esterilizacin por autoclave depende de la eliminacin de todo el aire de la

cmara y la carga, de los materiales que van a esterilizarse deben colocarse sin apretarse.
Los artculos limpios pueden ponerse en cestillos de alambre, pero el material
contaminado debe estar en un recipiente de fondo slido en una altura no mayor a 8 cm.
Deben dejarse grandes espacios de aire alrededor de cada recipiente y ninguno debe estar
cerrado. Existen dos tipos de autoclave:
El tipo olla de presin.
El de desplazamiento por la gravedad.
Por razones practicas slo trataremos el tipo olla de presin ya que es el que tenemos en
el laboratorio.
El tipo olla de presin es el ms comn, es un aparato para agua hirviendo a presin .
Tiene una cmara vertical de metal provista de una tapa metlica fuerte que se aprieta y
cierra hermticamente mediante un aro de goma. Se disponen en la tapa una espita para la
salida del aire y el vapor, un indicador de presin y una vlvula de seguridad. El agua del
fondo del autoclave se calienta mediante mecheros de gas exteriores, un calentador
elctrico de inmersin o un serpentn de vapor.

Instrucciones de funcionamiento.
Debe haber agua suficiente dentro de la cmara. Se carga el autoclave y se aprieta la tapa
manteniendo la espita de descarga abierta. Se ajusta seguidamente la vlvula de seguridad
a la temperatura requerida y se conecta ala fuente de calor. Cuando el agua hierva, fluir
el vapor por la espita de descarga, arrastrando con l el aire caliente existente en la
cmara. Se deja que salgan libremente el aire y el vapor hasta que se haya eliminado todo
el aire. Cuando se haya alcanzado esta fase, se cierra la espita de descarga aire-vapor. La
presin del vapor se eleva en la cmara hasta que la presin deseada, generalmente 1,054
kg/cm2, se alcanza y fluye vapor por la vlvula de seguridad. Cuando la carga ha
alcanzado la temperatura requerida se mantiene la presin de 15 a 20 minuto. Al termino
del periodo de esterilizacin, se apaga el calentador y se deja que el autoclave se enfre.
Se abre la espita de descarga muy lentamente una vez que el indicador ha llegado a cero,
se deja que el material se enfre hasta que tenga una temperatura a la cual pueda cogerse
con las manos. Nunca se debe dejar enfriar el autoclave por mucho tiempo, ya si no se
abre se forma un vaco, el cual puede romper el material estril.
Bennet ha elaborado una cinta indicador, la cual se coloca en los materiales, y segn la
tonalidad de dicha cinta, se sabe si fue un buena o mala esterilizacin. Adems, cuando
los autoclaves se descargan, los operarios deben llevar viseras protectoras de toda la cara
del tipo que recubra la piel de la barbilla y de la garganta. Tambin deben usar guantes de
proteccin trmica.
Tyndallizacin: Utilizar un vaporizador de Koch, que es una caja metlica en el fondo de
la cual hierve el agua mediante un mechero de gas o un serpentn de vapor. Se utiliza este
mtodo para esterilizar medios de cultivo que pueden alterarse por exposicin a
temperaturas ms elevadas. Estos medio se vaporizan durante 30-45 minutos al da
durante tres das consecutivos. La primera vez, se matan las bacterias vegetativas;
cualquier espora que sobreviva germinar en el medio nutritivo durante toda la noche,
dando lugar a formas vegetativas que sern muertas durante la segunda y tercera
vaporizaciones.
DESINFECCIN.
Para esto pueden usarse una gran variedad de sustancias qumicas y todas ellas reciben el
nombre comn de biocidas. Los efectos del tiempo, temperatura, pH y la naturaleza fsica
y qumica del artculo que se va a desinfectar y la materia orgnica presente, no son a
menudo totalmente consideradas. Los tipos de desinfectantes son muchos, y su
efectividad depende de la sensibilidad de los microorganismos, los ms sensibles son las
bacterias vegetativas, los hongos y los virus que contienen lpidos. Las mycobacterias y
los virus que no contienen lpidos son menos sensibles y las esporas son por lo general
resistentes. En la eleccin de los desinfectante deben tomarse en cuenta algunas
consideraciones a cerca de su toxicidad y de los efectos perjudiciales que pueden tener
sobre la piel, ojos y vas respiratorias. Los desinfectantes ms utilizados corrientemente
en los trabajos de laboratorio son los fenoles y los hipocloritos. Los aldehdos tienen una
aplicacin limitada y el alcohol y las mezclas de alcoholes son menos populares, aunque
merecen mayor atencin.
En este cuadro se resumen las principales caractersticas de los desinfectantes, y depende
del investigador cual utilizar, segn le convenga.

Activo contra
Bacteria
s
Fenolicos
Hipoclorito
Alcoholes
Farmaldehi
Glutaraldeh
Iodforos
CAC

Inactivado por

Hongos

G
+

G
-

Mycobate
rias

Esporas

Proteina

Prod.
Natural.

Prod.
Manuf.

Agua
dura

Deterge
nte

Piel

Bueno
Dbil
Nula
Buena
Buena
Buena
Dbil

B
B
B
B
B
B
B

B
B
B
B
B
B
M

Media
Media
Buena
Buena
Media
Media
Nula

Nulo
Media
Nulo
Buena
Buena
Dbil
Nula

Dbil
Buena
Dbil
Dbil
NA
Buena
Buena

Media
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Buena

Media
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Buena

Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Dbil
Buena

Catin
Catin
Nulo
Nulo
Nulo
Anin
Anin

Deb.
Deb.
Nulo
Deb.
Deb.
Deb.
Deb.

Todos estos desinfectantes, a diferencia de Iodforos y CAC, que se utilizan para

desinfeccin area, todos los demas son utilizados en desinfeccion de superficies y
materiales.

RESULTADOS Y DISCUSIN.
Podemos decir que esta fue una prctica terica, ya que lo que hicimos fue:
Observar e identificar, las partes del autoclave.
Introducir el material al autoclave.
Observar la esterilizacin de una de las mesas de trabajo.
Observar, y obtener los datos de las concentraciones para los desinfectantes.
Aprender a elevar la temperatura del autoclave.
Entonces, esta prctica al ser slo terica, nos da un panorama mejor del correcto manejo
del autoclave para realizar una buena esterilizacin, nos aclara los conceptos de
esterilizacin y desinfeccin, hacindonos inacapi en que no son conceptos que
signifiquen lo mismos, ya que el grado de eliminacin de grmenes es mas alto en la
esterilizacin que en la desinfeccin.
Otra cosa muy importante con respecto al autoclave, fue el de la forma de abrir el
autoclave, ya que como se sabe, el autoclave para esterilizar utiliza un presin ms alta
que la del atmsfera, por lo que cuando se termina de usar hay que esperar que se enfrie,
para dejar salir poco a poco el vapor, hasta que el interior del autoclave iguale la presin
atmosfrica.
Y quizs lo mas importante radica en que gracias a esto, nosotros podemos aplicar estos
conocimientos a la hora de cultivar nuestras sepas, ya que una correcta esterilizacin y
desinfeccin del material a utilizar, nos protege a nosotros y a nuestras sepas, ya que estas
se pueden contaminar y alterar los resultados que busquemos; por eso, se deben de aplicar
estas prcticas en todas las sesiones de laboratorio, ya que esto nos garantiza un trabajo
de calidad.
Por ltimo, aunque no se mencionaron ampliamente en la sesin, uno de los puntos ms
importantes es el de tomar las medidas de seguridad pertinentes, por ejemplo en el
autoclave, tratar de hacerlo con alguna careta que nos proteja la cara, porque se puede dar
el caso de que el manmetro se avere, y nosotros confiados abramos el autoclave y
suframos un accidente, y con los desinfectantes, dependiendo del que usemos, tomar la
precaucin de estudiar su toxicologa, para poder protejernos de el, pero aunque se diga
que tiene una toxicidad baja, tratar de realizar la desinfeccin de las mesas con guantes, y
lo ms ventilado posible, por lo tanto podemos concluir que:

CONCLUSIONES.

El autoclave es el mejor mtodo para esterilizar, ya que acaba incluso con las esporas.
Existe una notable diferencia entre esterilizar y desinfectar.
La esterilizacin y desinfeccin siempre se deben realizar con las precauciones
necesarias.
La correcta esterilizacin y desinfeccin del material para trabajar, nos dar unos
mejores resultados, y su confiabilidad ser mayor.
En microbiologa la esterilidad y desinfeccin son tan importantes, que un
incumplimiento de estos nos cambian por completo los resultados de cualquier
investigacin.

BIBLIOGRAFA.
Enciclopedia Microsoft Encarta 99. 1993-1998 Microsoft Corporation.
Reservados todos los derechos.
Mtodos Microbiolgicos. C.H. Collins y Patricia M. Lyne. Ed. Acribia. Espaa,
1989. Pp.524