Identificacin y cuantificacin

de componentes del
aceite de clavo de olor
[Syzygium aromaticum]
En Estacin Experimental Mario A. Cassinoni

Beln Dvila y Carolina Palacios.

CeRP.
Qumica 4to ao.

1. Objetivo y campo de aplicacin

En esta prctica se identificarn y cuantificarn los componentes mayoritarios
(eugenol, -cariofileno y acetato de eugenilo) de aceite esencial de clavo (Syzygyum
aromaticum) por cromatografa gaseosa (GC) utilizando una columna capilar con una
fase estacionaria adecuada.

2. Marco terico.
Aceites esenciales
Los aceites esenciales son las fracciones voltiles, generalmente destilables por
arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las
plantas y que son importantes en la industria cosmtica (perfumes y aromatizantes), de
alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica (aromatizantes, saborizantes,
fitoterpicos, otras aplicaciones).
Los aceites esenciales son mezclas complejas tanto desde el punto de vista
cualitativo como cuantitativo. En todos los aceites esenciales se encuentra un nmero
elevado de componentes individuales pertenecientes a diferentes clases de grupos
funcionales. Los ms importantes pertenecen a dos grupos de metabolitos secundarios:
los terpenos y los fenilpropanos. En pocos casos los aromas se deben a compuestos
alifticos que pueden ser alcoholes, aldehdos, cetonas, teres y/o steres.
Entre los terpenos predominan los monoterpenos, de formula general C10H16, los
sesquiterpenos de formula general C15H24, y los derivados oxigenados de ambos
grupos, por ejemplo, alcoholes, aldehdos, cetonas y steres. Generalmente estos
derivados oxigenados son los responsables del aroma caracterstico del aceite esencial.
Los fenilpropanos se caracterizan por tener un anillo aromtico unido a una cadena
lineal de 3 carbonos. Derivan biosintticamente del cido shikmico. El anillo aromtico
puede estar sustituido en las posiciones 3, 4 y 5 de anillo por grupos hidroxilo, metoxilo o
metilendioxilo.
En el siguiente cuadro se expresan los principales componentes que presentan los
aceites esenciales, relacionando las propiedades teraputicas con los grupos funcionales
que constituyen las mismas.

Cuadro 1.
Principales componentes de los aceites esenciales
Propiedades teraputica y su relacin con grupos funcionales.
Propiedades
FENOLES

Nombre vulgar

Principio activo.

Estimulantes,
Tomillos,
mejoranas, Timol,
carvacrol,
bactericidas, fungicidas organos, albahacas, eugenol,
mentol,
viridicidas, parasiticidas clavo de olor, ajedreas. borneol, thujanol.
inmunomodu-lantes.

DERIVADOS
DEL Estipulantes,
FENILPROPANO
antispticos
antiespasmdicos.

Canelas,
clavo,albahaca,
nuez moscada.

Aldehdo
cinmico,
ans, metileugenol,metil
chavicol,
anetol,
miristicina.

CETONAS

Citofilctico mucoltico Eucalyptus,

mentas, Pinocarvona, pulegona,
cicatrizante.
hissopus decumbens, verbenona,
thujona
romero a cineol
mentona carvona.

ALDEHDOS

Sedantes antispticos.

Alcoholes
(Monoterpnicos
sesquiterpnicos)

Energizantes,
y vigorizantes,
antimicrobianos,
antivirales, diurticos.

Lemongrass,citronela,p Citral:
almarosa,May Chang
citronenelal,
geranial.
Lavandas, lavandines, Linalol,
petit grain, palo rosa, piperitol,
coriandro, rosa Otto, cedrol,
eucaliptos,
sndalo, nerolidol,
cedros.
santolol.

neralneral,
citronelol,
mentrol,
lavandulol,
globulol,

STERES

Sedantes,
antiespasmdicos,
antifngicos.

Manzanilla
romana, Acetato
de
lavanda
verdadera, camazuleno,
acetato
salvia sclarea.
de linalilo, de geralino.

XIDOS

expectorantes

Eucalyptus
globulus, 1.8 cineol, linalol-xido,
laurus nobilis
bisabolxido, safrol.
Hissopus decumbens

HIDROCARBUROS
TERPNICOS

Vigorizantes,
Limn, naranja, cedros, Limoneno, alfa-pineno,
bactericidas,antivirales, bergamota,
pimienta canfeno, pinenos.
diurticos.
negra, pinos,
nuez
moscada, anglica.

SESQUITERPENOS

Sedantes,
antiinflamatorio,
bacteriostticos,
dermatoflicos,
antivirales.

Manzanilla
alemana Camazuleno
Rosa Otto Clavo de singibereno,
olor
Farneseno, bisaboleno
beta cariofileno.

Extrado de Romero, D. (2004) Plantas aromticas: Tratado de aromaterapia cientfica.

1ed. Kier. Buenos Aires.
Los componentes ms importantes del aceite esencial son eugenol, acetato de
eugenilo y -cariofileno. Pueden ser diferenciados entre s por TLC (utilizando
CH2Cl2/Hexano 7:3 como fase mvil) y por GC.

El aceite utilizado en esta prctica se obtuvo por destilacin por arrastre con vapor
(esto se debe porque muchos componentes de los aceites esenciales son voltiles con el
vapor y pueden ser aislados por dicha destilacin), durante 2 horas. Se utiliza 35 g de
botones florales ya que los componentes de los aceites esenciales se encuentran a

menudo en las glndulas o espacios intercelulares en el tejido de las plantas. A menudo

se concentran en semillas, flores hojas o frutos, como es en este caso.

El

aceite

obtenido se separa y se seca con MgSO4 anhidro.

Clavo de olor
El material conocido como clavo de olor est constituido por los botones florales
desecados de Syzygium aromaticum (L.)Merr. et Perry. Originario de las Molucas y de las
Filipinas, en la actualidad el clavero se cultiva en muchos pases tropicales. El clavo
posee una cantidad importante de aceite esencial (15-20%), rico en eugenol (80-85%),
acetato de eugenilo y -cariofileno. El clavo tambin contiene componentes no voltiles
como taninos (10-13%), muclagos y fitosteroles (sitosterol, estigmasterol y campfesterol).

El clavo se utiliza principalmente como especia y su aceite esencial posee notables

propiedades antibacterianas y se utiliza como antisptico en odontologa. El clavo,
adems de ser usado como aromtico, tambin se usa asociado a otras drogas, como
carminativo, estomacal y tnico. Tiene una accin irritante sobre las mucosas. Posee
potencial efecto excitante sobre el sistema nervioso (en dosis extrateraputicas puede ser
neurotxico).

Eugenol
El aceite de clavos es rico en eugenol (4-alil-2metoxi-fenol).
Es el responsable de la mayor parte del aroma caracterstico de
los clavos, es el componente mayoritario comprendiendo el 7090% del aceite esencial extrado del aceite del clavo de olor, es un
fenilpropanoide derivado de la ruta del del cido shkmico. Es un fenol o un compuesto
hidroxiaromtico. Tiene un punto de ebullicin 250 -253C. Aspecto tomado en cuanta
para la CG
Es utilizando ampliamente en odontologa como un sellador endodntico a base de
oxido de cinc y eugenol con propiedades de accin antibacteriana, evitando la formacin
de microorganismos, actan contra las bacterias que puedan persistir despus de la
preparacin del conducto redicular. Este efecto disminuye en grado considerable luego del
endurecimiento.
-Cariofileno
El cariofileno frmula molecular C15H24, con punto de

ebullicin 254 -257C, es un sesquiterpeno bicclico que se encuentra en los aceites de

clavo de olor, pimienta negro y muchos otros. Es insoluble en agua, un lquido incoloro a
amarillento ligeramente que contiene 88,16% de carbono y 11,84% de hidrgeno. Huele
de madera, picante, y se produce en la naturaleza como una mezcla de ismeros
isocariofileno, alfa-cariofileno (humuleno) y beta-cariofileno. Tambin se destaca por
presentar un anillo de ciclobutano.
Es sintetizado en 1964 po Ej Corey, la cariofileno se describe en la literatura como
anti-edmico, anti-inflamatoria, anti-tumoral, anti-alrgica, bactericida y repelente.

Obtencin extracto de clavo en hexano

Para la obtencin del extracto de clavo, es seleccionada la tcnica de extraccin
con solventes voltiles. Esta tcnica se basa en la facilidad de los disolventes orgnicos
para penetrar en el material vegetal y disolver sus aceites voltiles, debido a las
diferencias de punto de ebullicin entre el aceite esencial y el solvente. Tiene la ventaja de
trabajar a temperaturas bajas, por lo que no provoca la termodestruccin ni alteracin
qumica de los componentes del aceite. Adems ofrece la posibilidad de separar
componentes individuales y/o presentes en poca cantidad.

CROMATOGRAFA.
La cromatografa es una tcnica de anlisis qumico que agrupa un conjunto
importante y diverso de mtodos que facilita la separacin, identificacin y determinacin
de componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas.
La IUPAC define a la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual
los componentes a ser separados se distribuyen entre 2 fases, una de las cuales es la
fase estacionaria mientras que la otra (fase mvil) se mueve en una direccin definida.

La cromatografa implica un potente mtodo de separacin con amplias

aplicaciones en todas las ramas de la ciencia. Tal honor debe recaer en el botnico
ruso (Mijal Seminovich Tswett [tambin Tsvett, Tswet, Zwet,
Cvet]) (1872-1919), quien en 1903 emple una fase inmvil de polvo de tiza (carbonato de
calcio) y una fase mvil de disulfuro de carbono para separar los pigmentos vegetales que
estaba estudiando. Se le ocurri introducir la tiza en una columna y luego hizo pasar por
ella los extractos vegetales que contenan los pigmentos que deseaba purificar (clorofilas
[verdes], carotenoides [naranjas] y xantofilas [amarillos]). Observ que se podan separar
muy bien los colores (pigmentos) en forma de anillos a lo largo de la columna, pero no

bautiz an la tcnica con ningn nombre en el artculo que public en ruso al respecto.
Utiliz por primera vez el trmino cromatografa, del griego , - (croma, -atos)
color y - (-graphia) escritura, que quiere decir escritura en colores, en 1906,
en el segundo artculo que ese ao envi a la Berichte der Deutschen Botanischen
Gesells-chaft (Revista de la Sociedad Botnica Alemana). Su propuesta fue (traducida al
ingls1).
Bsicamente, la separacin de los componentes por una cromatografa consiste en
la afinidad que un compuesto puede presentar frente a otro. La muestra se disuelve con
una Fase Mvil (gas, lquido o fluido supercrtico), se hace pasar a travs de una Fase
Estacionaria (inmiscible) fija en una columna o en una superficie slida.

Cmo separar los componentes?

El mtodo de separacin cromatogrfico, independientemente de su estructura y su
complejidad, est constituido por una fase estacionaria y una fase mvil. La muestra (que
contiene los componentes a separar) se disuelve en la fase mvil (que puede ser un gas,
un lquido o un fluido sper crtico) la cual se hace pasar a travs de una fase estacionaria
inmiscible fija en una columna o en una superficie slida.
Para que el trayecto de la fase mvil por la fase estacionaria produzca una
separacin de componentes, uno de los componentes que se desea separar deber tener
un grado relativo de afinidad con la sustancia que conforma la fase estacionaria. De esta
manera, a media que la fase mvil se desplaza por la fase estacionaria, los componentes
tendrn diferente tiempo de migracin debido a las diferentes interacciones que estos
componentes presenten con la fase estacionaria. Es decir, el componente ms afn a la
fase estacionaria se desplazar ms lento y los compuestos menos afines se movern
ms rpido por la columna o superficie.
Como consecuencia de las distintas velocidades de migracin, los componentes de la
muestra se separan en bandas o zonas distintas que se puede analizar en forma
cualitativa y cuantitativa.
Bsicamente, la clave de separacin de componentes en una cromatografa se
basa en los diferentes grados de afinidad y relacionamiento que pueden presentar los
componentes de la mezcla con la fase estacionaria.
Para que la separacin sea fructfera, la seleccin de fase estacionaria y fase mvil
debern ser muy bien pensadas. Conociendo la estructura molecular del componente a
separar se deber elegir de forma que los componentes de la muestra se distribuyan
diferenciadamente entre ambas fases

.
En general se puede describir que los componentes ms retenidos por la F.E. se
mueven con ms lentitud con el flujo de F.M. por tanto, aquellos unidos dbilmente, se
mueven con mayor rapidez.

Clasificacin de los mtodos cromatogrficos.

Los mtodos cromatogrficos se pueden clasificar de dos maneras. Segn los medios
fsicos por los cuales las fases estacionaria y mvil se ponen en contacto y segn los tipos
de fase mvil y fase estacionaria empleados.
Teniendo en cuenta la primera clasificacin podemos

distinguir dos tipos de

cromatografas: la de columna y en plano o capa fina.

En la cromatografa en columna, un tubo estrecho contiene la fase estacionaria a
travs de la cual la fase mvil se fuerza a pasar por presin.
En la cromatografa en plano, la fase estacionaria se fija sobre una placa plana o
en los intersticios de un papel; en este caso la fase mvil se desplaza a travs de la fase
estacionaria por capilaridad o por gravedad. Para la segunda clasificacin, el tipo de fase
mvil y fase estacionaria, se aprecian tres tipos de cromatografas: cromatografa de
gases (CG), cromatografa de lquidos (CL) y cromatografa de fluidos sper crtico (CFS).
Cualquiera de estos tres tipos de cromatografas llevan el nombre del estado en el cual se
encuentra la fase mvil. Esto quiere decir que en una cromatografa puede realizarse con
una fase mvil gaseosa, lquida o con la utilizacin de un fluido sper crtico, como se
haba mencionado antes.
Para la ejecucin de estos tres tipos de cromatografa se hace uso de una
columna. Solamente la cromatografa en lquido se puede llevarse a cabo tanto en una
columna como en una superficie plana si se lo desea.

FIGURA 1
CROMATOGRAFA DE ELUCIN EN COLUMNA

En la cromatografa de elucin en columna, las diferencias en dichas velocidades,

hacen que los componentes se separen en bandas. Es importante pasar por la columna
suficiente cantidad de FM para que dichos analitos sean eludos y detectados. El tamao
de la banda original que contiene al analito siempre es ms pequeo que cualquiera de
las que llega al detector, debido al producto de la dilucin, por lo que es importante que
siempre sea acompaada esta tcnica con la separacin cromatogrfica.

CROMATOGRAMAS
Al final de la columna se coloca
un

detector

que

responde

la

concentracin del soluto y se registra su

seal en funcin del tiempo, o del volumen de fase mvil aadido, se obtiene una serie de
picos como se muestra en la parte inferior de la figura
1. Este grfico denominado cromatograma, es til tanto para los anlisis cualitativos
como cuantitativos. La posicin de los picos en el eje del tiempo puede servir para
identificar los componentes de la muestra; las reas bajo los picos proporcionan una

medida cuantitativa de la cantidad de cada componente.

VELOCIDADES DE MIGRACIN DE LOS SOLUTOS

La eficacia de una columna cromatogrfica para separar dos solutos depende en
parte de las velocidades relativas con las que se lavan o se purifican las dos especies.
Esas velocidades estn determinadas por la magnitud de las constantes de equilibrio para
las reacciones mediante las cuales los solutos se distribuyen entre las fases estacionaria
y mvil.

Para A, el equilibrio de distribucin se puede escribir:

Donde la constante de distribucin de equilibrio Kc (constante de distribucin)
es:

Tempo de retencin
Aunque la constante de distribucin es fundamental para las separaciones
cromatogrficas, no se puede medir con facilidad. En cambio, es factible medir la cantidad
llamada tiempo de retencin que es una funcin de Kc.

El factor de selectividad de una columna para los dos analitos A y B se define

como:

KB/KA

Siendo KB la constante de distribucin para la especie ms fuertemente retenida B

y KA la constante para la especie menos retenida (A)

ENSANCHAMIENTO DE BANDA Y EFICIENCIA DE LA COLUMNA

La eficiencia de una columna cromatogrfica se ve afectada por la cantidad de
ensanchamiento de banda que ocurre a medida que un compuesto pasa por la columna.
Las razones por las cuales las bandas se ensanchan mientras bajan por la columna se
detallan a continuacin.
El ensanchamiento de una zona aumenta a medida que desciende por la columna
porque ha habido ms tiempo para que haya dispersin. Entonces, el ensanchamiento de
la zona est relacionado de manera directa con el tiempo de residencia en la columna y
de manera inversa con la velocidad de flujo de la fase mvil.

Descripcin cuantitativa de la eficiencia de la columna

Dos trminos afines se utilizan ampliamente como medidas cuantitativas de la
eficiencia de una columna cromatogrfica:
1) la altura de plato H
2) el nmero de platos o cantidad terica de platos, N.
Los dos estn relacionados por la ecuacin: N= L / H donde L es la longitud (cm) del
relleno de la columna.
La eficiencia de la columna aumenta, cuanto mayor es el nmero de platos N y
cuanto menor es la altura H del plato
Las eficiencias en trminos del nmero de platos varan desde pocos cientos a
varios cientos de miles; son frecuentes las alturas de plato que oscilan desde unas pocas
dcimas hasta una milsima de centmetro o menos.
El origen de los trminos altura de plato y cantidad de platos tericos proviene
de uno de los primeros estudios tericos realizado por Martin y Synge en que trataron a
una columna cromatogrfica como si fuera similar a una columna de destilacin que
estuviera constituida por numerosas capas angostas, o platos, distintos pero contiguos, a
las que denominaron platos tericos.
Se supona que en cada plato se estableca el equilibrio de la especie entre las fases
mvil y estacionaria. El descenso del soluto por la columna se trataba entonces como una
transferencia por etapas de fase mvil equilibrada de un plato al siguiente.
La teora del plato explica de manera satisfactoria la forma gaussiana de los picos
cromatogrficos y su velocidad de desplazamiento por la columna. Pero la teora se
abandon en favor de la teora de la velocidad, debido a que la primera fallaba al intentar
justificar el ensanchamiento de los picos de una manera mecanicista. No obstante, los
trminos originales para la eficiencia se han incorporado a la teora de velocidad. Esto

nomenclatura es tal vez desafortunada porque tiende a perpetuar el mito de que una
columna contiene platos donde hay condiciones de equilibrio. De hecho, el estado de
equilibrio nunca se puede alcanzar con la fase mvil en movimiento constante.

La anchura de una curva gaussiana

est directamente relacionada con su
desviacin estndar o su varianza 2. A
menudo

se

supone que

cromatogrficas

tienen

las

bandas

una

forma

gaussiana, lo cual es conveniente

para definir la eficiencia de una columna
en trminos de la varianza por unidad de longitud de la columna. Es decir, la altura de
plato H viene dada por
:

CROMATOGRAFA GASEOSA
Existen dos tipos de cromatografa de gases: la
cromatografa gas-lquido (CGL) y la cromatografa gasslido (CGS). La primera tiene gran aplicacin en todos los
campos de la ciencia; su denominacin se suele abreviar a
cromatografa de gases (CG).1 La segunda se basa en una fase estacionaria slida en
que la retencin de los analitos ocurre porque hay adsorcin. Su aplicacin es limitada
debido a la retencin semiper-manente de las molculas activas o polares y a la obtencin
de picos de elucin con colas muy notables. La formacin de las colas es resultado de la
naturaleza no lineal del proceso de adsorcin. Por tanto, esta tcnica no ha encontrado
una gran aplicacin excepto para la separacin de ciertas especies gaseosas de bajo
peso molecular.
En la cromatografa gas-lquido el analito se divide entre una fase mvil gaseosa y
una fase lquida inmovilizada sobre la superficie de un relleno slido inerte o en las
paredes de un tubo capilar. El concepto de cromatografa gas-lquido fue enunciado por
primera vez en 1941 por Martin y Synge, quienes tambin perfeccionaron la cromatografa
de distribucin lquido-lquido.

La instrumentacin en cromatografa de gas consiste en:

Sistema de gas portador

En la cromatografa de gases la fase mvil se llama gas portador y
debe ser qumicamente inerte. El helio es el gas para fase mvil ms
comn, pero tambin se usan argn, nitrgeno e hidrgeno. Estos gases
se surten en recipientes a presin. Se requieren reguladores de presin,
manmetros y medidores de flujo para controlar la corriente del gas.
Adems, el sistema del gas portador contiene a menudo un tamiz molecular para eliminar
el agua y otras impurezas.
Los flujos se controlan mediante un regulador de presin de dos etapas colocado en el
cilindro de gas y algn tipo de regulador de presin o de flujo instalado en el
cromatgrafo. Las presiones de entrada normalmente oscilan entre 10 y 50 psi (lb/in.2)
por encima de la presin del entorno, lo que ocasiona flujos de 25 a 150 mL /min con
columnas empacadas y de 1 a 25mL /min en las columnas de capilares tubulares. Por lo
general se supone que los flujos son constantes si la presin de entrada permanece
constante. Los flujos se establecen mediante un rotmetro situado en la cabeza. de la
columna; sin embargo, este dispositivo no es tan exacto como el simple flujmetro de
pompas de jabn

Es importante tener presente los requisitos que debe cumplirse para el gas
portador (gas carrier): este debe ser INERTE, no debe interferir con la muestra, fase
estacionaria o superficies del instrumento. A de ser PURO, debe estar exento de
impurezas que puedan degradar la fase estacionaria y NULA (o escasa) solubilidad en la
fase estacionaria.

Sistema de inyeccin de la muestra

Con el fin de tener una alta eficiencia de la columna se requiere que la muestra sea
de un tamao adecuado y que se introduzca como un tapn de vapor; la inyeccin lenta
o muestras demasiado grandes causan dispersin de las bandas y una mala resolucin.
Por tanto, es una parte fundamental del instrumento ya que se debe asegurar que la
muestra ingresa de forma adecuada a la columna.
Para ello, se utilizan microjeringas para introducir la
muestra lquida (0,1 20L), la jeringa atraviesa un septo de
goma y se introduce en el liner. El inyector est a una
temperatura mayor que el punto de ebullicin del componente
menos voltil de la muestra, para no modificar la misma o
descomponerla. Cuando se utilizan columnas capilares, los
volmenes requeridos son mucho menores (100 veces o ms)
respecto a las columnas rellenas.

Columna y hornos para la columna

En cromatografa de gases se usan dos tipos generales de
columnas, las empacadas y las tubulares abiertas o capilares.
En la mayora de aplicaciones actuales, las columnas empacadas
dejaron paso a las columnas capilares, ms eficaces y rpidas.

Las columnas cromatogrficas empacadas varan desde 1 m hasta 5 m de longitud,

y las columnas capilares varan de pocos metros hasta 100 m. Estn construidas con
slice fundida o con acero inoxidable, pero tambin se usa el vidrio o el Tefln. A fin de
poder colocarse en el interior de un horno con temperatura controlada, se les da la forma
de helicoides con dimetros de 10 a 30 cm.

La temperatura de la columna es una variable

importante que se tiene que regular hasta unas dcimas de
grado en el caso de un trabajo preciso. Por consiguiente, la
columna se suele alojar dentro de un horno con
temperatura controlada. La temperatura ptima de la columna depende del punto de
ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido. En la prctica, con una

temperatura igual o ligeramente superior a punto de ebullicin promedio de la muestra se

obtiene un tiempo de elucin razonable (2 a 30 min). Para muestras cuya temperatura de
ebullicin vara ampliamente, lo mejor es aplicar una programacin de temperatura, con la
cual se aumenta la temperatura de la columna en forma continua o por etapas a medida
que avanza la separacin. En general, la resolucin ptima se asocia con una
temperatura mnima, pero al reducir esta ltima se produce un aumento en el tiempo de
elucin y, por tanto, del periodo necesario para completar un anlisis.
Algunas veces, los analitos de volatilidad limitada se pueden determinar mediante
la formacin de derivados que son ms voltiles. De igual manera, la derivacin se usa a
veces para aumentar la deteccin o el rendimiento cromatogrfico
.

Sistemas de deteccin
En algunos casos los cromatgrafos de gases se acoplan a instrumentos
espectroscpicos como los de infrarrojo. En este caso, el dispositivo espectromtrico sirve
no slo para detectar la aparicin de los analitos, sino tambin para identificarlos.

Caractersticas del detector ideal

El detector ideal para cromatografa de gases tiene las siguientes caractersticas:

1. Sensibilidad adecuada. Justo lo que constituye una adecuada sensibilidad no

puede evaluarse de forma cuantitativa. Por ejemplo, las sensibilidades de los
detectores que se describen en esta seccin difieren por un factor de 10 7. Aunque
todos se utilizan extensamente y son satisfactorios en ciertos casos, los menos
sensibles no son adecuados para algunas aplicaciones. En general, las
sensibilidades de los detectores actuales se encuentran en el intervalo de
10 -8 a 10 -15 g de soluto/s.
2. Buena estabilidad y reproductibilidad.
3. Respuesta lineal para los solutos que se extienda a varios rdenes de magnitud.
4. Intervalo de temperaturas desde la temperatura ambiente hasta al menos 400C.
5. Tiempo de respuesta corto independiente de la tasa de flujo.
6. Alta confiabilidad y manejo sencillo. El detector debera estar a prueba de la
impericia de operadores inexpertos, si es posible.

7. No debe destruir la muestra.

Por desgracia, no hay un detector que rena todas estas caractersticas. Algunos de los
detectores ms comunes son los que se mencionan en la tabla que sigue:

ACETILACIN DEL EUGENOL.

Cuando obtenemos un cromatograma obtenemos una grfica. De la misma
podemos obtener, a simple vista una informacin cuantitativa de la cantidad de
componentes que han pasado por el detector, a su vez, de manera cualitativa, se puede
apreciar que hay componentes que tienen mayores y menores velocidad de migracin.
Pero Cmo podemos saber qu componentes son los responsables de los picos que
aparecen en las grficas?
Para la cromatografa de gases en la cual se separarn los componentes ya
mencionados (-cariofileno, eugenol, acetato de eugenilo) se obtendr un cromatograma
de referencia. En la misma se observaran tres grandes picos, a los cuales no tienen
identificacin de parte del cromatograma.
Un mtodo para lograr una identificacin de dichos picos es a partir de la
acetilacin del eugenol para dar acetato de eugenilo.
A partir de esta reaccin se lograr una disminucin en la concentracin del

eugenol (disminucin en el rea del pico) y un aumento de concentracin del acetato de

eugenilo (aumento del rea del pico).
De esta manera, el aceite de clavo con la acetilacin del eugenol se le realizar
una cromatografa de gases para obtener un nuevo cromatograma. Al observar y
comparar ambos cromatogramas (el aceite puro y el aceite acetilado) se podr apreciar la
diferencia de dos picos. El aumento del rea de un pico reflejar el aumento de la
concentracin del acetato de eugenilo, debido a la acetilacin. La disminucin del rea de
otro pico muestra la disminucin de la concentracin del eugenol.
Reaccin:

ESPECTROMETRA DE MASAS
Uno de los detectores ms potentes para cromatografa de gases es el
espectrmetro de masas. La combinacin de cromatografa de gases con espectrometra
de masas se conoce por las siglas GC-MS
Los mtodos espectromtricos son un gran grupo de mtodos analticos que se
basan en la espectroscopa atmica y molecular. La espectroscopa es un trmino general
para la ciencia que trata con las interacciones de varios tipos de radiacin con la materia.
En la espectrometra de masas se bombardean molculas con electrones y otras

partculas, rompindose las molculas. El anlisis de las masas de los fragmentos da

informacin sobre la masa molecular, permite conocer, con cierta frecuencia, la frmula
molecular, y da pautas sobre la estructura y los grupos funcionales presentes en la
molcula. En este anlisis se consume o destruye menos de un miligramo de muestra.
Los mtodos espectromtricos que ms se usan se basan en la radiacin
electromagntica, que es un tipo de energa que adopta varias formas; las ms
reconocibles son la luz y el calor radiante. Las manifestaciones menos obvias son los
rayos gamma y los rayos X, as como la radiacin ultravioleta, la de microondas y la de
radiofrecuencia.

Proceso.
Vaporizacin de la muestra:
La operacin inicial consiste en la produccin de un flujo constante de vapor de la
sustancia. Si esta no se puede vaporizar sin que se descomponga en las condiciones
reinantes en la cmara de vaporizacin (10-2 torr y temperatura regulable hasta 300C),
hay que transformarla en un derivado ms voltil. El vapor producido se transfiere por un
orificio, durante todo el periodo de medicin del espectro, a la cmara de ionizacin, la
cual se mantiene al igual que todo el resto del aparato a 10 6 torr. Como alternativa, se
puede vaporizar sustancias termolbiles introducindolas directamente en la cmara de
ionizacin.
La tasa de flujo procedente de las columnas capilares es casi siempre tan baja que
la salida de la columna se puede alimentar de manera directa a la cmara de ionizacin
del espectrmetro de masas.
En la actualidad las columnas capilares se emplean de modo invariable en los equipos de
GC-MS y los mencionados separadores ya no se utilizan.

Ionizacin y fragmentacin de la muestra.

De acuerdo con el equipo utilizado, la ionizacin de una molcula orgnica se

consigue irradindola con luz ultravioleta de longitud de onda corta (fotoionizacin),

desorbindola de una superficie mediante la aplicacin de un campo elctrico fuerte
(ionizacin de campo) o, ms comnmente, irradindola con un haz de electrones
(ionizacin por bombardeo de electrones). El haz de electrones se produce, a voltaje
variable, por un filamento de volframio mantenido a una temperatura apropiada
(aproximadamente 1800C). Los iones orgnicos resultantes, ya sea por ionizacin de la
molcula o por fragmentacin del ion molecular, se recoge en un electrodo.

Aceleracin de los iones:

Otro electrodo, con un pequeo potencial positivo, expulsa a los iones a una
cmara electrosttica, donde se someten a la accin de un campo elctrico de varios
miles de voltios (~ 3000 V). En consecuencia, un ion de masa m y de carga e es
acelerado a una velocidad v, la que se puede deducir de la relacin de igualdad entre su
energa potencial (eV) y su energa cintica (1/2 mv2).

Enfoque magntico de los iones:

El ion, acelerado en forma conveniente, entra por una ranura al analizador
magntico. En este, un tubo curvo de radio r, situado en un campo magntico de
intensidad H, se mantendr en una trayectoria central si su fuerza centrfuga (mv 2/r) est
en equilibrio con la fuerza centrpeta del campo (Hev).
Dado que el tubo tiene un radio fijo, si se mantiene constante el voltaje del
acelerador, a cada ion o grupo de iones caracterizados por la misma relacin masa/carga
corresponder una determinada intensidad del campo magntico del tubo. Ya que un flujo
constante de la mezcla de todos los iones se desplaza en forma permanente por el tubo,
un barrido magntico enfoca sucesivamente todos los iones, de acuerdo con su relacin
m/e, sobre el colector. En el instante en que todos los iones de determinados valor m/e
inciden sobre el electrmetro, todos los dems se pierden por el sistema de vaco del
aparato.

Enfoque cuadrupolar de los iones:

En ciertos espectrmetros recientes, como alternativa del analizador electromagntico, se
emplea un filtro de masa cuadrupolar, compuesto de cuatro electrodos metlicos,
dispuestos en planos perpendiculares entre si y conectados diagonalmente. Cada par de
barras recibe una combinacin de voltajes de radiofrecuencia (RF) y de corriente continua
(DC), de amplitudes crecientes.

Registro del espectro.

La intensidad de cada haz inico dotado de una relacin especfivca m/e, que sale del
analizador, se puede medir directamente directamente por el mtodo de captura o
directamente, tras de haberlo transformado en electrones, por medio de un electrmetro

3. PROCEDIMIENTOS
1 - Colocar 0.2 mL de la solucin clorofrmica de aceite de clavo en un tubo de rosca con
0.2 mL de cloruro de acetilo, tapar y calentar a 60C por 30 minutos. Luego agregar
cuidadosamente 2 mL de H2O destilada y 2 mL de acetato de etilo. Con pipeta Pasteur
sacar la capa orgnica (capa superior) y secar con MgSO4.
2- Correr en TLC el aceite recibido diluido (1 gota en 1 ml de cloroformo), el acetilado y el
extracto en hexano utilizando la siguiente fase mvil: CH2Cl2/Hexano 7:3. Observar al UV
(254nm) y finalmente revelar con el revelador sugerido: (anisaldehdo/EtOH/H 2SO4).
3- Inyectar en GC el aceite acetilado.

4. CROMATOGRAFA GASEOSA
Cromatgrafo de gases (marca/modelo): GCMSQP 2010
Columna semicapilar (medidad):

Largo: 30 m. Dimetro: 0,5mm. Espesor

film: 0,25 micras

Fase estacionaria:

RTX5MS apolar

Programa de temperatura:

100C aumenta 50C por minuto hasta

230C.

Detector (tipo y temperatura):

Split 280C.

Temperatura del inyector:

250C.

Gas carrier:

Helio

Flujo:

1ml por minuto

Volumen de inyeccin:

1 microlitro

CLCULOS Y RESULTADOS
DATOS:
ACEITE

ACETILADO

rea eugenol:

5992102000

rea eugenol:

511948032

rea acetato de

1523131334

rea acetato de

7310363128

eugenilo:

eugenilo:

CLCULOS:
ACEITE

ACETILADO

rea total = rea eugenol + rea acetato de rea total = rea eugenol + rea acetato de
eugenilo
eugenilo
rea total = 5992102006 + 1523131334

rea total = 511948031 + 7310363128

rea total = 7,5x109

rea total = 7,8x109

% rea eugenol = (rea eugenol / rea % rea eugenol = (rea eugenol / rea
total)x100
total)x100
%
rea
eugenol
/7,5x109)x100

(5992102006 %
rea
eugenol
(511948031/7,8x109)x100

% rea eugenol = 80,0%

% rea eugenol = 6,6%

% rea acetato de eugenilo = (rea acetato % rea acetato de eugenilo = (rea acetato
de eugenilo / rea total)x100

de eugenilo / rea total)x100

% rea acetato de eugenilo = (1523131334 % rea acetato de eugenilo = (7310363128

/ 7,5x109)x100

/7,8x109)x100

% rea acetato de eugenilo = 20,3%

% rea acetato de eugenilo = 93,7%

5. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

UV

ANISALDEHIDO
Eugenol
Acetato de
eugenilo.

6. DISCUSIN DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES

Deteccin por luz UV:
Considerando los componentes a detectar, -cariofileno, eugenol y acetato de
eugenilo, de los cuales, el eugenol y acetato de eugenilo, son poseedores de grupos
cromferos, se realiz la deteccin por luz UV (254 nm) para visualizar el tiempo de
retencin.
Segn las normas AFNOR es de esperarse el siguiente orden: -cariofileno,
eugenol y acetato de eugenilo.
El resultado obtenido reflejo lo esperado. Se puedo observar dos manchas donde
se demuestra dos componentes con diferentes tiempos de retencin.

Conclusin
Al tener conocimiento de las estructuras de los componentes podemos concluir lo
siguiente:
En esta instancia se esperaba un resultado en donde el -cariofileno sea el

componente que mayor distancia recorra, indicando su baja afinidad a la fase

estacionaria y su alta afinidad a la fase mvil, pero, debido a su falta de grupo cromfero
no pudo ser apreciado, en cambio s se pudo observar con claridad los otros dos
componente que lo seguan en tiempo de retencin. Seguido al -carofileno, el acetato de
eugenilo y por ltimo el eugenol (en el caso del aceite esencial y el aceite esencial con
hexano).

Cromatografa de gases
Al analizar los cromatogramas y espectros de masas para el aceite esencial puro y
para el acetilado, se observ que el orden de elucin fue el siguiente: eugenol, betacariofileno y acetato de eugenilo coincidiendo con lo planteado en las normas AFNOR.
Otro observacin a tener en cuente es la comparacin de los cronogramas del
aceite de clavo puro y el acetilado. Utilizando como referencia el cromatograma del aceite
de clavo puro, se observ para el eugenol, el rea del pico decrece en el cromatograma
del aceite acetilado; mientras que para el acetato de eugenilo el rea del pico no aumenta
como era de esperarse segn las normas ANFOR.

Conclusin
Experimentalmente el orden de elucin coincidi con lo abordado tericamente en
base a su afinidad a una fase estacionaria apolar (OV 101, como lo planteado en las
normas ANFOR).
Con respecto a las alteraciones presentes en las reas de los picos del
cromatograma del aceite acetilado, nos animamos a considerar que es como resultado a
una reaccin incompleta de la acetilacin del eugenol para la formacin del acetato de
eugenilo. Como consecuencia la concentracin del acetato de eugenilo no aument.
A su vez, acetilacin del eugenol, aun cuando no fue llevada a cabo como se
deseaba, sirvi para identificar el pico perteneciente al eugenol en el cromatograma, tanto
para el aceite puro y el aceite acetilado, debido a la comparacin de ambos.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Gottlieb, O.R. Filho, R.B. (1976) Introduccin a la espectrometra de masa de

sustancias orgnicas. Serie de qumica. Monografa n.17. Washington, D.C.

Romero, D. (2004) Plantas aromticas: Tratado de aromaterapia cientfica. 1ed.

Kier. Buenos Aires.

Skoog,D.A. Holler, F.J. Crouch, S.R. (2008) Principios de anlisis instrumental

Cap. 26 y 27 6ta Ed. Cengage Learning Editores, Mxico, D.F.

9. REFRENCIAS WEB

http://www.oleosessenciais.org/cariofileno/

www.medtrad.org/panacea/IndiceGeneral/n33-Entremeses-Diaz.pdf