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Departamento de Qumica del Litoral. Facultad de Qumica.

Centro Universitario Regional Litoral Norte

Prctico
Identificacin y cuantificacin de componentes del aceite de clavo de olor
[Syzygium aromaticum (L.) Merr. et Perry sin. Eugenia caryophyllus (Spreng.)
Bullock et S. Harrison]

1. Objetivo y campo de aplicacin


En esta prctica se identificarn y cuantificarn los componentes mayoritarios
(eugenol, -cariofileno y acetato de eugenilo) de aceite esencial de clavo (Syzygyum
aromaticum) por cromatografa gaseosa (GC) utilizando una columna capilar con una
fase estacionaria adecuada.
Previo a la realizacin de esta prctica, el estudiante debe manejar fluidamente los
siguientes conceptos:
1. Aceites esenciales: conceptos generales, funciones en los vegetales, drogas que los
contienen. Importancia y uso de los aceites esenciales para consumo humano
(alimentos, bebidas, frmacos).
2. Cromatografa: conceptos generales de cromatografa gaseosa y cromatografa en
capa fina (TLC).
3. Mtodos cualitativos. Conceptos generales de identificacin de compuestos por
cromatografa gaseosa.
4. Mtodos cuantitativos: cuantificacin por normalizacin de rea, por uso de
estndar interno y por estndar externo. Ventajas y desventajas. Manejo de curvas de
calibracin, clculos de concentracin.
5. Reacciones en qumica orgnica: acetilacin con cloruro de cido.
2. Definiciones
Los aceites esenciales son las fracciones voltiles, generalmente destilables por
arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las
plantas y que son importantes en la industria cosmtica (perfumes y aromatizantes), de
alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica (aromatizantes, saborizantes,
fitoterpicos, otras aplicaciones).
Los aceites esenciales son mezclas complejas tanto desde el punto de vista
cualitativo como cuantitativo. En todos los aceites esenciales se encuentra un nmero
elevado de componentes individuales pertenecientes a diferentes clases de grupos
funcionales. Los ms importantes pertenecen a dos grupos de metabolitos secundarios:
los terpenos y los fenilpropanos. En pocos casos los aromas se deben a compuestos
alifticos que pueden ser alcoholes, aldehdos, cetonas, teres y/o steres.
Entre los terpenos predominan los monoterpenos, de formula general C10H16, los
sesquiterpenos de formula general C15H24, y los derivados oxigenados de ambos grupos,
por ejemplo, alcoholes, aldehdos, cetonas y steres. Generalmente estos derivados
oxigenados son los responsables del aroma caracterstico del aceite esencial.
Los fenilpropanos se caracterizan por tener un anillo aromtico unido a una cadena
lineal de 3 carbonos. Derivan biosintticamente del cido shikmico. El anillo aromtico
puede estar sustituido en las posiciones 3, 4 y 5 de anillo por grupos hidroxilo, metoxilo
o metilendioxilo.

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El aceite utilizado en esta prctica se obtuvo por destilacin por arrastre con vapor,
durante 2 horas, de 35 g de botones florales. El aceite se separ y se sec con MgSO4
anhidro.
Los componentes ms importantes del aceite esencial son eugenol, acetato de
eugenilo y -cariofileno. Pueden ser diferenciados entre s por TLC (utilizando
CH2Cl2/Hexano 7:3 como fase mvil) y por GC.

3. Muestra estudiada
El material conocido como clavo de olor est constituido
por los botones florales desecados de Syzygium aromaticum (L.)
Merr. et Perry. Originario de las Molucas y de las Filipinas, en
la actualidad el clavero se cultiva en muchos pases tropicales.
El clavo posee una cantidad importante de aceite esencial (1520%), rico en eugenol (80-85%), acetato de eugenilo y cariofileno. El clavo tambin contiene componentes no voltiles
como taninos (10-13%), muclagos y fitosteroles (sitosterol,
estigmasterol y campfesterol).
El clavo se utiliza principalmente como especia y su aceite
esencial posee notables propiedades antibacterianas y se utiliza
como antisptico en odontologa. El clavo, adems de ser usado
como aromtico, tambin se usa asociado a otras drogas, como
carminativo, estomacal y tnico. Tiene una accin irritante sobre
las mucosas. Posee potencial efecto excitante sobre el sistema
nervioso (en dosis extrateraputicas puede ser neurotxico).
4. Fundamento
Se obtendr el aceite esencial por destilacin por arrastre
con vapor. El aceite se caracteriza por ser ms denso que el
agua, por lo que se separar en bola de decantacin.
Tambin se realizar una extraccin con Hexano del
material vegetal (botones florales).
Se utilizar GC para la cuantificacin de eugenol, acetato de eugenilo y cariofileno en las muestras problema, mediante el mtodo de cuantificacin por
normalizacin de rea de los picos, considerando los factores de respuesta al detector
(FID) para los diferentes componentes del aceite como uno.
La identificacin por GC se har teniendo en cuenta que el orden de elucin de los
componentes del aceite en una columna semicapilar con fase polar como la utilizada es:
-cariofileno, eugenol, acetato de eugenilo [ver normas "AFNOR" que se adjuntan al

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presente repartido). En las mismas se presentan 2 cromatogramas del aceite de clavo en


dos fases estacionarias diferentes: OV101 corresponde a una fase apolar (similar a la
utilizada en el prctico) y Polietilenglicol 20.000 que es una fase polar. Adicionalmente,
la acetilacin del eugenol (componente mayoritario del aceite) presente en la mezcla,
permitir identificar a este compuesto (pico cuya rea decrece) y al acetato de eugenilo
(pico cuya rea crece) al reinyectar la muestra luego de su acetilacin. Un
comportamiento similar se observar por TLC (mancha de eugenol decrece, mancha de
acetato de eugenilo crece). La acetilacin se realizar directamente sobre el aceite en
CHCl3 utilizando cloruro de acetilo y favoreciendo la reaccin por calentamiento a 60C
durante 30 min. La acetilacin se puede verificar por TLC y GC sembrando el aceite tal
cual y acetilado.
5. Reactivos y Materiales
Aceite esencial: Se obtiene de acuerdo a lo explicado en el punto 8.1
Reactivos: Cloruro de acetilo, solucin de revelador (anisaldehdo/EtOH/H2SO4)
Solventes: cloroformo, diclorometano, hexano, acetato de etilo.
Material vegetal: El estudiante recibe una muestra de aceite y deber obtener una
cantidad similar durante la prctica. A su vez, tambin recibe una muestra de extracto en
hexano y deber preparar uno similar.
6. Aparatos y/o instrumentos
Se utilizar un cromatgrafo de gases, cuyas especificaciones debe solicitarlas en el
momento de inyeccin.
7. Preparacin y conservacin de muestras
Las muestras de aceite, extracto en hexano y de clavo problema son entregadas al
estudiante para el estudio y la extraccin correspondientes. La muestra de aceite
obtenida debe ser entregada para su conservacin en heladera hasta ser utilizada por el
grupo siguiente.
8. Procedimientos
8.1.

Condiciones para la obtencin del extracto en hexano que se dejar para el


siguiente grupo. Colocar 5 g de botones florales sin moler en un Erlenmeyer,
agregar 18 mL de Hexano. Tapar con papel aluminio y dejar en reposo a
temperatura ambiente por 24 hs.

8.2.

Colocar 0.2 mL de la solucin clorofrmica de aceite de clavo en un tubo de


rosca con 0.2 mL de cloruro de acetilo, tapar y calentar a 60C por 30 minutos.
Luego agregar cuidadosamente 2 mL de H2O destilada y 2 mL de acetato de etilo.
Con pipeta Pasteur sacar la capa orgnica (capa superior) y secar con MgSO4.

8.3.

Correr en TLC el aceite recibido diluido (1 gota en 1 ml de cloroformo), el


acetilado y el extracto en hexano utilizando la siguiente fase mvil: CH2Cl2/Hexano
7:3. Observar al UV (254nm) y finalmente revelar con el revelador sugerido:
(anisaldehdo/EtOH/H2SO4)

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8.4.

Inyectar en GC el aceite acetilado.

9. Expresin de resultados
a) Identificacin por tiempo de retencin y orden de elucin, en el cromatograma, de
los principales componentes del aceite de clavo (eugenol, -cariofileno, acetato de
eugenilo). Verificar dicha identificacin por comparacin de los cromatogramas del
aceite y aceite acetilado (adjuntar cromatogramas).
b) Clculo del porcentaje de los componentes principales identificados en el
cromatograma (mtodo de cuantificacin por normalizacin de rea de los picos,
considerando los factores de respuesta para todos los componentes como uno). El
estudiante debe tener en cuenta cules son los inconvenientes de la utilizacin de este
mtodo y ser capaz de plantear mtodos alternativos de cuantificacin (repartidos del
curso).
10. Bibliografa

AFNOR. Norme Franaise NFT 75-207, 1991, p. 364.


Brunetton J., Pharmacognosy, Phytochemistry, Medicinal Plants. Intercept Ltd.:
London, 1995.
Caigueral S, Vila R, Wichtl M., Plantas Medicinales y Drogas Vegetales para
infusin y tisana. Manual para Farmacuticos y Mdicos. OEMF International srl:
Milan, 1998. p. 133 135.
Evans, W.C., Farmacognosia, Trease-Evans. 13 ed., Editorial Interamericana:
Mxico, 1989.
Gnther E., The Essential Oils. Vol IV. Van Nostrand Co.: Nueva York, 1952.
Oliveira Simoes, C.M. & Spitzer V., Oleos volteis en Farmacognosia: da planta
ao medicamento (Oliveira, S.M. et al., eds.). 2da. ed., Editora da
Universidade/UFRGS - Editora da UFSC, Porto Alegre Florianpolis, 2000. p.
387 - 415.
Repartidos del curso y pgina web (http://bilbo.edu.uy/~planta/bolillas.html)
USP XX. US Pharmocopeia & National Formulary, Unites States Pharmacopeial
Convention, Inc.: Roockville, 1980, p. 1222.

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INFORME
IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN DE LOS COMPONENTES
DEL ACEITE DE CLAVO DE OLOR Szygyum aromaticum L.
RESULTADOS
CROMATOGRAFA gaseosa
Cromatgrafo de gases (marca/modelo):
Columna semicapilar (medidas):
Fase estacionaria:
Programa de temperatura:
Detector (tipo y temperatura):
Temperatura del inyector:
Gas carrier: N2
Flujo:
Volumen de inyeccin:

Compuesto

Aceite
tr (min)
% Area

Acetilado
tr (min)
% Area

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

UV

ANISALDEHIDO

DISCUSIN DE RESULTADOS Y CONCLUSIONES

(Contine al dorso de la hoja si es necesario)

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