cincia EVOLUOy

Um cardume
de zebrafish:
modelo de estudos
para a formao
dos trios
e ventrculos
48 z outubro DE 2014

Como explicar

um corao
to dividido

Cmaras cardacas podem ser o resultado da ao

do cido retinoico, usado em cosmticos

Texto Carlos Fioravanti| Fotos Lo Ramos

equenos peixes de listras horizontais

mantidos em um aqurio no Laboratrio
Nacional de Biocincias (LNBio), em
Campinas, esto mostrando muito sobre
a formao e a evoluo do corao das pessoas.
No final de junho, depois de meses examinando os
mecanismos de ativao de genes nos msculos
do corao do minsculo zebrafish, Jos Xavier
Neto e sua equipe concluram uma srie de experimentos que reforaram sua hiptese de que
a estrutura do corao dos seres humanos, com
quatro cmaras internas divididas por vlvulas
que regulam o fluxo do sangue, poderia ter aparecido h pelo menos 500 milhes de anos, bem
antes do surgimento da prpria espcie humana, h 2 milhes de anos. O corao do homem,
portanto, teria nascido antes mesmo do homem.
As implicaes dessa concluso so um pouco
desconcertantes. Nosso corao praticamente
o mesmo, em termos evolutivos, que o da lampreia, assegura Xavier. Em vista da importncia
e dos significados do corao humano, no muito confortvel pensar nessa semelhana, j que a
lampreia um peixe alongado e primitivo, facilmente considerado muito feio, sem nadadeiras
nem maxilar, e cuja boca uma ventosa circular

com o dimetro do corpo. Xavier parece no se

importar com a proximidade. Do ponto de vista
da cladstica, diz ele, referindo-se ao sistema de
classificao dos seres vivos que se baseia na relao evolutiva entre as espcies, nunca deixamos
de ser peixes. Somos peixes modificados, as nadadeiras se transformaram em braos e pernas.
Peixes primitivos como a lampreia j apresentam um corao de quatro cavidades, mas organizadas em sequncia, e no em um bloco nico,
como no corao humano. Em outra espcie evolutivamente muito antiga, que pode ter surgido h
cerca de 400 milhes de anos, a piramboia, um
peixe encontrado na Amaznia (h um exemplar
tambm no laboratrio de Campinas), alongado
como uma cobra e dotado de pulmes, o corao
j mais refinado, com uma diviso interna que
separa o sangue rico em oxignio do rico em gs
carbnico. Para Xavier, o mais importante, a despeito da forma, que o trajeto do fluxo do sangue no corao j forma uma espcie de S, mais
pronunciado nos peixes e mais sutil nas pessoas.
Por meio de experimentos em zebrafish, tambm
chamados de paulistinhas e bem mais simpticos
que a lampreia, em camundongos, codornas e galinhas, a equipe de Campinas tem examinado a
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veis por sua contrao, as miosinas, so lentas. O

ventrculo, de superfcie rugosa e paredes mais
grossas, maior que o trio, com miosinas de ao
rpida, pode contrair com fora para fazer o sangue chegar a todas as clulas do corpo. O corao
humano um rgo do tamanho aproximado de
um punho fechado, com 250 gramas (g) nas mulheres adultas e 300 g nos homens adultos, que
bate 100 mil vezes por dia, bombeando cerca de
cinco litros de sangue tem dois trios acima
dos dois ventrculos.

As cores do
corao: de peixe
e de camundongo
(ao lado)

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s estudos da equipe de Campinas e outros

nessa linha esto ajudando a entender a
origem de problemas cardacos associados ao cido retinoico, um derivado da vitamina
A bastante usado em cosmticos. Se uma mulher usa no comeo da gestao, a m-formao
quase certa. Por isso os mdicos pedem um teste
de gravidez antes de receitarem cido retinoico
para tratamento de pele, diz Xavier, carioca formado em medicina pela Universidade Federal do
Cear. O ser humano extremamente sensvel
ao cido retinoico, mas sem ele no estaramos
aqui. Tudo depende da dose e do lugar onde vai
atuar. A possibilidade de preveno e a correo
de problemas cardacos por enquanto so remotas, porque o cido retinoico atua nas primeiras
semanas de gestao, quando a mulher em geral
ainda no sabe que est grvida.
Com os experimentos mais
recentes, assim que forem publicados, Xavier pretende reSe uma
forar sua hiptese e contestar
mulher usar
as vises antagnicas de outras
equipes interessadas em elucicido retinoico
dar os mecanismos que definem
o tamanho, a forma e o modo de
no incio
funcionamento de cada cmara
formao das cmaras internas
cardaca. Em 2008, um artigo da
do corao trios ou ventrda gestao,
equipe de Deborah Yelon, atualculos, essenciais para o armaa m-formao
mente na Universidade da Cazenamento ou distribuio do
lifrnia em San Diego, Estados
sangue que circula pelo orgafetal
Unidos, amenizou o papel do
nismo. Quase duas dcadas de
cido retinoico, que estaria astrabalho fizeram concluir que
quase certa
sociado apenas ao tamanho do
os tipos de cmara do corao
corao, e valorizou a protedevem resultar da ao do cido
na produzida a partir do gene
retinoico. uma ao em ondas,
ora mais intensa, ora menos, em momentos espe- Hox-B5, que tambm atua na formao do intescficos do desenvolvimento embrionrio. Segundo tino e dos pulmes, com base em experimentos
ele, quando entram em contato com o cido re- em zebrafish. Quando vi esse paper, lembra-se
tinoico, clulas ainda pouco especializadas rece- Xavier, quase chorei. Por causa da situao de
bem instrues para se organizar na forma de um meu trabalho em 2008, diz Xavier, eu sabia que
reservatrio de sangue, ou seja, um trio. Quando iria demorar para contestar.
Em 2005, como pesquisador do Instituto do
no detectam nada, formam uma forte bomba
Corao (InCor) da Universidade de So Paulo
propulsora de sangue um ventrculo.
So estruturas bem diferentes: o trio, de su- (USP), Xavier, com sua equipe, tinha apresentado
perfcie lisa, funciona como um reservatrio que sua hiptese sobre a formao e a evoluo dos
infla ao receber sangue. As protenas respons- compartimentos de sangue no corao de ani-

Mesmo agora, com mais argumentos, Xavier

sabe que ter de batalhar muito para fazer sua
viso prevalecer; se no conseguir, poder ser
desconsiderada ou mesmo esquecida. Hipteses
sobre evoluo dificilmente podem ser testadas,
observa. Alm disso, o corao facilmente engana quem procura entend-lo. O mdico romano
Claudio Galeno, um dos fundadores da medicina
ocidental, afirmou que o corao era feito de um
tecido especial. Quase 1.500 anos depois, Leonardo da Vinci, depois de
dissecar cadveres, como
Galeno, e fazer vrios desenhos da anatomia do coDepois de dissecar cadveres,
rao, sentenciou: O coraDa Vinci corrigiu Galeno ao ver que o
o o principal msculo em relao fora. J
corao era um poderoso msculo
era um avano, mas outros
equvocos persistiram. Durante sculos se pensava
que as veias transportavam
um tubo cardaco equivalente ao da Ciona, que ar, j que estavam vazias em animais e pessoas
capaz de fazer movimentos semelhantes ao do mortas. Um sculo depois de Da Vinci, o mdiintestino quando impulsiona a massa alimentar co ingls Willian Harvey descreveu a circulao
durante o processo de digesto. Animais como do sangue em detalhes, mostrando que as veias,
a lagosta e outros crustceos representam outro como as artrias, transportavam sangue e no ar.
modelo para a formao das cmaras cardacas,
pois tm apenas uma cmara e so muito mais
avier, como outros cientistas contemporpidos, por exemplo, que os onicforos, vermes
rneos, tambm tomou caminhos equivodotados apenas de um tubo peristltico simples,
cados. Logo depois de chegar Universiafirma. As cmaras cardacas so um atributo de dade Harvard para o ps-doutorado, em 1997, ele
vertebrados, apresentam contrao simultnea e se viu atrado, quase inevitavelmente, pela ideia
so separadas por vlvulas, tudo dentro de uma ento em moda de que um nico gene poderia
membrana, o pericrdio. Uma argumentao ser capaz de definir a formao do corao. Hacoerente, porm, no era o bastante. Eu sabia via um gene candidato, mas os experimentos os
que ainda teria de provar minhas hipteses, diz. camundongos, mesmo sem esse gene, nasciam
Tive de esperar seis anos at refazer os expe- com corao, embora morressem logo depois
rimentos e mostrar o papel do cido retinoico. indicaram que o corao dependia de muitos
mais vertebrados. Com base em experimentos
com uma variedade impressionante de organismos, a exemplo da Ciona intestinalis, um invertebrado marinho cilndrico que representa os
parentes vivos mais prximos dos vertebrados
(a formao do corao desse grupo, os tunicados, similar aos estgios iniciais da formao
do corao dos vertebrados), a equipe argumentava que o corao de cmaras de vertebrados
poderia ter surgido a partir de modificaes de

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genes para se formar. E ele se rendeu: muito

mais complicado do que pensvamos.
Depois disso, Xavier conseguiu reunir animais
transgnicos e reagentes apropriados que aos
poucos caam nas mos da coordenadora do laboratrio, Nadia Rosenthal para planejar os
experimentos que poderiam indicar coisas novas
sobre a formao do corao. Mesmo se fracassar, pensei, j sou grato por observar o desenvolvimento do embrio, ele recorda. E, como eu estava comeando na biologia do desenvolvimento,
podia ver com meus prprios olhos os processos
de formao dos rgaos, sem estar contaminado
pelo excesso de leitura de artigos cientficos.

avier comeou ento a examinar como a

expresso da enzima betagalactosidade
poderia indicar a ao do cido retinoico
em diferentes regies do corao de embries
de camundongos de nove dias. Quase descolei
a retina tentando ver o que no existia nos embries de camundongos, diz ele. Aos poucos ele
viu claramente o padro de colorao definido
pela ativao do cido retinoico: Dependendo
da expresso da enzima, as regies do corao

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ficavam verdes, indicando que o cido retinoico

estava atuando naquela rea, como ativador ou
represssor de vrios genes.
Ele observou que at o stimo dia da gestao,
que demora 21 dias, o corao ainda no havia
se formado, nem havia nenhum sinal da ao do
cido retinoico em tecidos cardacos. Dois dias
depois o corao j havia se delineado como um
tubo, ocorria uma descarga de cido retinoico e
o trio se formava. Logo depois, o cido retinoico desaparecia e se formava o ventrculo. Outros experimentos, em codorna, indicaram que,
sem cido retinoico, o trio no se formava e, de
modo complementar, o excesso dessa substncia impedia a formao do ventrculo. O cido
retinoico um ator que entra e sai do palco, na
mesma pea, em papis diferentes, diz Xavier.
O cido retinoico de fato um ator-chave
na formao das cmaras cardacas, observa
Didier Stainier, coordenador de uma equipe da
Universidade da Califrnia em So Francisco
(UCSF), que estuda a formao do corao em
zebrafish. Em 2002, Stainier e Deborah Yelon,
que trabalhou em seu laboratrio, viram o papel
do cido retinoico em um estgio anterior do de-

reproduo de desenho Leonardo da VinciSCIENCE PHOTO LIBRARY

As quatro cmaras
do corao, vistas
por Da Vinci: o
artista desfez
o equvoco de
Galeno, que
imaginava apenas
duas cmaras

Embrio de
galinha: sob a
ao do cido
retinoico

senvolvimento: com outras molculas, poderia

induzir a formao de um tecido embrionrio
primordial chamado endoderme (o corao vai
se formar a partir de outro tecido, a mesoderme).
Segundo ele, Xavier tem estado na vanguarda
dessas investigaes que, sem dvida, levaro a
insights adicionais sobre o processo de desenvolvimento do corao.

esmo depois do corao formado, o ator

verstil continua em cena. Em 2011, pesquisadores da Universidade Duke, Estados Unidos, mostraram que o cido retinoico,
por causa de sua capacidade de induzir a multiplicao celular, facilitava a regenerao do
endocrdio, a camada interna do corao. Outra
vez, o modelo experimental era o zebrafish; essa
espcie usada h dcadas porque as fmeas produzem muitos ovos, coletados com facilidade, e
o embrio se forma a partir de uma nica clula,
em apenas um dia aps a fertilizao.
Depois de dois anos em Harvard, Xavier voltou
feliz para o InCor disposto a montar um grupo de
pesquisa em gentica do desenvolvimento embrionrio e continuar trabalhando como nos dois anos
em que passou em Harvard. Sua primeira dificuldade foi conseguir camundongos, que no chegavam
na quantidade e no prazo esperados. Ele no se acomodou e saiu perguntando onde poderia comprar
ovo de galinha fertilizado e estufa, de modo a no
deixar o trabalho parar. Muitos anos antes, com a
mesma avidez por fazer cincia, ele tinha caado
sapos para fazer os experimentos previstos em seu
estgio j no primeiro ano do curso de medicina
em Fortaleza. Desde a graduao eu j queria ser
pesquisador, diz ele, ao comentar, em seguida,
que gostava muito das disciplinas bsicas como
bioqumica, para as quais os aspirantes a mdicos
normalmente torcem o nariz. Desde antes ele j
gostava do mundo da cincia, acompanhando o pai,

que era professor de bioqumica na universidade,

aos laboratrios e estufas de plantas. Lembra do
kit Os cientistas, da dcada de 1970? Eu tinha todos. Vivo nesse mundo desde cedo.
Xavier demorou cinco anos at montar sua prpria equipe e o laboratrio de que precisava para
retomar o ritmo de trabalho que desejava. Se ficar sozinho, est perdido, ele conclui. Network
tudo. Por meio de testes em galinhas e em codornas, ele verificou que a ao do cido retinoico,
por sua vez, era regulada pela enzima RALDH2.
Detalhei o que e quando acontecia, diz. Ele no
parou mais de aproveitar os estudos sobre outros
animais vermes marinhos, escargots, lagostas e
outros para examinar os processos evolutivos de
formao do corao e, a partir de 2010, quando
se mudou para o LNBio, continuou a produzir
linhagens de animais transgnicos, a maioria sob
encomenda, para experimentos de outros pesquisadores e de seu prprio grupo. Incapaz de
se aquietar, em agosto ele percorreu outra vez a
chapada do Araripe, no Cear, em busca de fsseis de peixes com idade mdia de 120 milhes de
anos que, examinados por tomografia, poderiam
revelar um pouco mais da evoluo do corao. n

Projeto
Evoluo e desenvolvimento das cmaras cardacas (n 06/50843-0);
Modalidade Auxlio Pesquisa Regular; Pesquisador responsvel
Jos Xavier Neto (LNBio); Investimento R$ 311.558,83 (FAPESP).

Artigos cientficos
SIMES-COSTA M. S. et al. The evolutionary origin of cardiac chambers. Developmental Biology. v. 277, n. 1, p. 1-15. 2005.
MOSS, J. B. et al. Dynamic patterns of retinoic acid synthesis and response in the developing mammalian heart. Developmental Biology.
v. 199, p. 55-71. 1998.
WAXMAN, J. S. et al. Hoxb5b acts downstream of retinoic acid signaling in the forelimb field to restrict heart field potential in zebrafish.
Developmental Biology. v. 15, n. 6, p. 923-34.
YELON D. e STAINIER, D.Y. Pattern formation: swimming in retinoic
acid. Current Biology. v. 12, n. 20, p. 707-9.

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