INTRODUCCIN

La limpieza, desinfeccin y esterilizacin de superficies, equipos, aparatos e

instrumental, son procesos que estn orientados a la minimizacin de la
transmisin de infecciones, tanto de los estudiantes como del docente
encargado.
Al ingresar a un laboratorio de fitopatologa deben poseer conocimientos
acerca de la correcta utilizacin del material sanitario y de los productos.
Cada vez que se limpian, se desinfectan, o esterilizan productos sanitarios se
forma parte de una cadena, por ello se adquiere una responsabilidad que
obliga a que se garantice la correcta ejecucin de estos procesos.
Es importante recordar que al realizar cualquier procedimiento se debe tener la
seguridad requerida y considerar TODAS las muestras como de alto riesgo.

OBJETIVOS

Que el estudiante se familiarice con los mtodos y procesos de

desinfeccin y esterilizacin comnmente utilizados en un Laboratorio
de Fitopatologa.
Tambin la verificacin del proceso de limpieza y desinfeccin realizado
en las superficies de los laboratorios.
Comprender e identificar la utilidad de los instrumentos y equipo de
laboratorio.
Identificar los smbolos de peligrosidad para ser cuidadosos y no poner
en riesgo la salud y la vida de otros ni la de nosotros mismos.

Limpieza, Asepsia y Esterilizacin de Equipo de

Laboratorio
1.-MARCO TEORICO
CONCEPTOS:
LIMPIEZA: Es la remocin de todos los materiales extraos (protenas, etc.)
que se adhieren a los diferentes objetos. Se realiza con agua, detergentes y
productos enzimticos. Si el instrumental no est limpio los procesos de
desinfeccin y esterilizacin no sern totalmente eficaces, ya que la suciedad
no permitir el contacto del agente con la superficie y actuar protegiendo a
las bacterias.
DESINFECCIN: Produce la destruccin de agentes infecciosos o
contaminantes, total o parcialmente, presentes en objetos y ambientes.
Asegura la eliminacin de formas vegetativas, pero no de esporas bacterianas.
DESINFECTANTE: Sustancia qumica que destruye los microorganismos y que
se aplica sobre material inerte sin alterarlo de forma sensible.
ASEPSIA: Mtodo para prevenir infecciones la llegada de agentes patgenos o
microorganismos, en especial por mtodos fsicos y es fundamental para
realizar trabajos confiables sin contaminacin.
ANTISEPSIA: Conjunto de acciones emprendidas con el fin de eliminar los
microorganismos patgenos presentes en un medio, o inhibir su proliferacin.
ANTISPTICO: Sustancia qumica de aplicacin tpica sobre los tejidos vivos
(piel intacta, mucosas, heridas, etc.), que destruye o inhibe los
microorganismos sin afectar sensiblemente a los tejidos sobre los que se
aplica.
ESTERILIZACIN: Es un proceso para obtener un producto libre de todo
microorganismo en estado latente o activo, causante de enfermedades o
infecciones. La esterilizacin de los materiales de vidrio y medios de cultivo nos
asegura un estado de asepsia que permite trabajar sin dificultades cuando se
ejecuta en forma eficiente.
PASTEURIZACIN: Proceso trmico realizado en lquidos con el objetivo de
reducir la presencia de agentes patgenos.
MICROORGANISMO
enfermedad.

PATGENO:

Para ello necesitamos:

Microorganismo

capaz

de

causar

la

Lega: Qumicamente hipoclorito de sodio, es un

desinfectante de bajo costo.
Detergente: Es una sustancia tensioactiva y
anfiptica que tiene la propiedad qumica de
disolver la suciedad o impurezas de un objeto son
corroerlo.
Alcoholes: Es muy utilizado en trabajos de laboratorio para desinfectar la
superficie de la cmara de flujo laminar as como las superficies de trabajo. Los
alcoholes actan desnaturalizando las protenas,
disolviendo las capas lipdicas y como agentes
deshidratantes.

Para reducir la contaminacin en el

ambiente de trabajo, se pueden realizar
aplicaciones de sustancias antispticas como el Timol.

2.-MATERIALES Y EQUIPOS DEL LABORATORIO DE

FITOPATOLOGA
MATERIALES:
GRADILLAS:
Se emplean para ubicar los tubos de ensayo. Pueden ser
de madera, metal forrado en polipropileno o de metal,
estas ltimas casi no se fabrican ya que son atacadas
por soluciones cidas o bsicas. Las forradas en plstico
o las de material plstico, no sirven para depositar tubos
calientes. En ellas se ubican tubos o microtubos de
ensayo.
MECHEROS:
Existen diversos tipos de mecheros a gas, el ms comn es el
de Bunsen, siendo muy usados el Tekl y el Mecker.

PINZAS PARA CRISOLES O CPSULAS:

Son de metal, tienen forma de tijera, pero sus puntas son curvas.
Antes de tomar con ellas un crisol o cpsula caliente conviene
templar sus puntas a la llama para evitar la fisura del elemento.

CAJAS DE PETRI
Prensada con tapa: algunos laboratorios bacteriolgicos las
emplean para el desarrollo de cultivos. Su planicidad y
transparencia facilitan la observacin visual de los
resultados y el recuento de colonias.
Son de construccin robusta y no son afectadas por los factores mecnicos o
qumicos a los cuales son comnmente sometidas en los laboratorios. Aptas
para recibir esterilizaciones hmedas o secas sin opacarse o romperse.

ERLENMEYERS:
Por su forma se adaptan para agitar un lquido (valoraciones) y
como sus paredes son cnicas se evitan proyecciones al
calentar un lquido cuando se reduce demasiado el volumen
durante su calentamiento. Sus graduaciones son aproximadas
en un 5%.

TUBOS DE ENSAYO:
Se los utiliza para realizar trabajos en pequea escala, por ejemplo,
calentamiento, diluciones, desarrollo de coloraciones, distintas
reacciones, etc. El volumen contenido no debe sobrepasar la cuarta
parte del volumen total del tubo. Cuando se efecta un
calentamiento en los mismos, se debe mantener una agitacin
constante (rotar entre los dedos) y la boca del tubo se coloca
apuntando hacia el lado opuesto del operador
PAPEL DE FILTRO
Su funcin es filtrar; se usan junto con un embudo u otro
elemento para su secado.
PINZA
Son de metal, cuya funcin es para sujetar transportar una
materia durante el desarrollo del experimento.

AGUJA DE DISECCIN
Constituidas por una punta recta o curva, esta es
empleada para la seccin de espcimenes y en
disecciones un manejo de tejidos en el copio en el
portaobjetos.

PORTAOBJETO
Lamina de vidrio rectangular
de color transparente utilizada
para almacenar muestras y
objetos con el fin de observarlas bajo el microscopio. Las
dimensiones tpicas de un portaobjeto son de 75mm x
25mm, sin embargo, estn pueden variar dependiendo del tipo de objeto. Los
portaobjetos pueden estar hechos de vidrio, vidrio borosilicatado, y plstico.

CUCHILLA
Es metlica y tiene la funcin de cortar lneas finas o gruesas.
MASCARILLA
Cuenta con una capa hipoalergica y absorbente
que garantiza el filtrado de partculas y
bacterias.

ALGODN
CINTA SCOTH

DEXTROSA AL 5%
AGUA DESTILADA

AGAR

EQUIPO DE LABORATORIO
CMARA DE FLUJO LAMINAR
Estas cabinas estn diseadas para proporcionar
un aire limpio y constante a una velocidad de paso
de aire de 0.30 a 0.50 metros por segundo para
as barrer la superficie de la zona de trabajo y
evitar la suspensin de partculas, as como una
posible contaminacin de las muestras. Aqu se
permite trabajar, sembrar y operar de manera
eficaz en un buen ambiente. Esteriliza los caros
cuando se prende la luz.

CMARA INCUBADORA
Sirve para mantener y hacer crecer cultivos
microbiolgicos o
cultivos
celulares.
La
incubadora
mantiene
la
temperatura,
la
humedad, a los hongos, las muestras en
conservacin y otras condiciones en grado
ptimo, tales como el contenido de dixido de
carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior.

OLLA A PRESIN
Son ampliamente utilizadas como una medida
elemental de esterilizacin de material. Aunque cabe
notar que, debido a que el proceso involucra vapor de
agua a alta temperatura, ciertos materiales no
pueden ser esterilizados en autoclave, como el papel
y muchos plsticos (a excepcin delpolipropileno).
MICROONDAS
En el microondas los enlaces de las molculas de los
reactivos vibran en resonancia con la radiacin recibida,
con lo que reaccionan muy rpidamente y no se destruye
el producto final.

MICROSCOPIO
Es un instrumento que permite observar objetos que son
demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. Se trata de
un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que
permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que
funciona por refraccin.
AUTOCLAVE
PRESIN

ESTERILIZADOR

DE

ELCTIRCO

Es un equipo, tiene 2 modelos en vertical y

horizontal, est diseado con el fin de
eliminar,
de
forma
confiable,
los
microorganismos que de otra manera
estaran presentes en objetos que se
utilizan en actividades de diagnstico,
tratamiento
o
investigacin.
Est
compuesto por una ollita donde el agua no
debe tocar la rejilla y se debe cerrar la tapa
hermticamente y si queremos esterilizar la muestra
primero el agua tiene que llegar a 100 C durante 5 a 6 minutos, despus
durante la ebullicin sacamos la espita para que expulse el aire a presin y la
vuelve a cerrar as llegara a 125 C durante 25 minutos.
REFRIGERADORA
Electrodomstico cuya funcin en el laboratorio es mantener las
muestras y los hongos en buen estado para su prximo
procedimiento o anlisis.

COCINA ELECTRICA
Este artefacto sirve para calentar sin llama, evitando la
combustin
espontnea
de
compuestos
gaseosos
inflamables. Tambin para secar compuestos que presenten
un cierto grado de humedad, y que puedan descomponerse
al contacto con el fuego.

HORNO ELECTRICO

Es un tipo de horno comnmente usado para deshidratar

reactivos de laboratorio o secar instrumentos. El horno
aumenta su temperatura gradualmente conforme a su
programacin, cuando la temperatura sea la ptima, el
trmico mantendr la temperatura; posee un tablero de
control que muestra el punto de regulacin y la
temperatura real dentro del horno y cuentan con una
perilla graduada la cual regula temperatura del horno.

3.-ANTESALA
En este espacio se intercambia todo tipo de informacin y muestras de las
enfermedades fitopatgenos.

4.-INSTRUCCIONES PARA EL USO DE LOS LABORATORIOS DE

FITOPATOLOGIA
El laboratorio constituye un lugar de trabajo para la enseanza y la
investigacin. Los mayores peligros que representan no lo son ni el fuego ni las
descargas elctricas, sino el descuido y la responsabilidad de los usuarios.
Para la conversin y mejor servicio de los laboratorios de fitopatologa, las
personas que deseen usarlo debern apegarse a la siguiente disposicin:

Procedimiento:
El personal de laboratorio antes de ingresar debe lavarse las manos con jabn
lquido antes de ingresar al laboratorio.

O tambin con un trapito hmedo con agua y

lega lo necesario, enjuagar con otro trapito en
agua y bien escurridas y si usan los guantes
quirrgicos al ponrselo se lava por igual.
La superficie de trabajo debe estar seca y
esterilizada antes de proceder con la prctica,
incluyendo
los
materiales
en
buenas
condiciones de limpieza.
El material de vidrio que se use deber llevarse
inmediatamente al lavadero para que el ayudante lo tenga limpio para su uso
inmediato.
El material usado por los alumnos en actividades extraclase, deber ser lavado
por el mismo.
Cuando no se utilicen las mesas de trabajo,
debern permanecer libres de polvo y de otros
materiales: no dejar materiales innecesarios
sobre ellas.
Cuando el caso lo amerite, se debern cubrir el
material (tubos, cajas de Petri, material vegetal,
etc.) con un papel polietileno, indicando su
nombre y la fecha en que lo deja.
Los materiales de deshecho debern depositarse en el recipiente de basura, no
dejarlos nunca sobre la mesa o tirarlos al suelo.
Al finalizar a limpieza c/u de las reas el material de trabajo se debe limpiar
con agua y detergente, se desinfectar as mantenindolo durante 15 minutos
con una solucin de leja: Enjuagar, aclarar, posteriormente secar y almacenar.
Por ultimo guardar ordenadamente los materiales en su lugar elegido por el
grupo de estudiantes as estar listo para la prxima clase de prctica en el
laboratorio.

5.-METODOS DE ESTERILIZACIN.
A.-Esterilizacin Fsica
1.-Esterilizacin mediante el calor seco. Se lleva a cabo en:

Fuego directo para objeto de metal.

Estufas u hornos alimentados por energa elctrica o por gas.

En fuego directo es el caso de la anzas

directamente al fuego, tambin pinzas,
bisturs agujas pasa por etanol 96 y flamear.
El periodo de exposicin vara segn la
temperatura del horno, en este laboratorio
generalmente se expone el material por tres
horas a 140 180 C, para esterilizar materia
de vidrio o metal. No esterilizar medios de
cultivo con calor seco. Acta oxidando y
desnaturalizando las protenas y con materiales
resistente al calor no inflamables.
ESTERILIZACIN CON CALOR SECO.

1) Desopite el material seco y limpio en la estufa.

2) Cierre perfectamente y encienda el interruptor.
3) Ajuste el regulador a la temperatura deseada, cheque la temperatura
con el termmetro y cuente el tiempo de
esterilizacin cuando alcance la temperatura
requerida (100-180 C)
4) Concluido el tiempo de exposicin, apague el
aparato.
No saque cristales muy calientes de la
estufa, pues al contacto con el aire frio o caliente se
revientan.
ADVERTENCIA:

2.-Esterilizacin con calor hmedo. Es el mtodo ms rpido y eficaz, usndose

ollas de presin (express) o autoclaves. El principio
se basa en el uso de agua a presin, contenidos en
recipientes hermticamente cerrados. Los medios
se esterilizan normalmente a 120 C por espacios
de 15-20 minutos. El suelo y otros suelos pueden
requerir tiempos mayores a 30 minutos, segn e
desee esterilizar o pasteurizar.
Para optimizar la eficacia: eliminar el aire,
contenidos similares, no apretados, dejar espacios
verticales. Precauciones:
tapas sueltas,

recipientes con hasta 1/3 de volumen, vuelta a

presin normal lenta.

MATERIALES Y METODOS ESTERILIZANDO POR CALOR HUMEDO

1) Revise que el agua se encuentre al nivel de la rejilla basal.

2) Introducir el material a utilizar.
3) Cierre el recipiente correctamente.

4) Abra la vlvula d escape para que salga el aire seco y encienda la olla
presin.
5) Un minuto despus de que empieza a salir el aire y vapor, cierre la
vlvula d escape. El tiempo de esterilizacin se empieza a contar hasta
que la aguja alcance 15 libras/pulgadas cuadradas.
6) Luego de 15 20 min. apagar fuego y dejar enfriar.
7) Concluido el tiempo de esterilizacin, el aparato, espere a que baje a
cero presiones antes de sacar con cuidado el material caliente.Abrir
vlvula luego de >20 min.
ADVERTENCIA:

Nunca deje aparato encendido sin vigilancia.

B.-Esterilizacin Mecnica

Esterilizacin por Filtracin.

Elimina microorganismos >virus
Para: cantidades pequeas, vitaminas, hormonas, antibiticos, etc.
Estos filtros evitan el paso de esporas, bacterias, aun de las ms
pequeas, de tal forma que las sustancias pasan libres de
contaminantes.
Lenta y costosa.
Se usa slo para sustancias termolbiles, que no se pueden esterilizar en
autoclave.

C.-Esterilizacin por radiacin.

Para esterilizar cuartos o cmaras de transferencia de
cultivos, comnmente mediante luz ultravioleta.

Mecanismo de accin: se atribuye a absorcin

por ADN uniones covalentes entre residuos de
pirimidina pertenecientes a la misma cadena distorsiones del DNA
apareamiento de bases inhibicin de la sntesis de ADN inhibicin
del crecimiento y la respiracin.
Igualmente efectivas para Gram(+) y Gram (-).
Uso principal: esterilizar el aire y superficies no penetran en slidos y
pobremente en lquidos.

D.-Esterilizacin Qumica
Nivel de desinfectantes

De alto nivel: xido de etileno, formaldehido, etc.

De mediano nivel: Clorados, iodados, alcoholes, fenlicos, etc.
De bajo nivel: Compuestos de amonio cuaternario, mercuriales.

xido de etileno: muy efectivo pero mutagnico, inflamable en contacto con

aire, hierve a 10,8C Formaldehdo (formol): gases altamente irritantes, txicos
y carcinognicos.

Entre los gases, el ms usado es el xido de propileno, para esterilizar material

vegetal. El suelo puede ser esterilizado con gases tales como mezclas de
bromuro de metilo y cloropicrina a altas dosis. Este mtodo requiere de
recipientes cerrados y es peligroso, por lo que su uso es muy limitado.
Esterilizacin Lquida. La esterilizacin con lquidos no es comn. En laboratorio
es frecuente la desinfeccin con alcohol o hipoclorito de sodio, pero esta
prctica no es una esterilizacin en sentido estricto.
Ventajas: no requiere altas temperaturas ni aparatos costosos
Desventajas: mayor tiempo, sustancias inflamables y muy txicos y alto costo

6.-DISCUSIN
El primer problema en un laboratorio de fitopatologa son los caros. La dentro
de bibliografa incluye el tiempo reglamentado en la esterilizacin de calor
hmedo con el autoclave y est mejor ordenado segn su ambiente de trabajo
y las caractersticas de los materiales a usar los mtodos de esterilizacin y los
conceptos que deberamos mantener en cuenta para un mejor reconocimiento
de los materiales y actividades que realicemos en el laboratorio.

7.-CONCLUSIN
Para mantener el mayor cuidado en la limpieza del material y del laboratorio
mismo es fundamental realizar trabajos confiables. El medio ambiente se
encuentra cargado de microorganismos diversos que ni a vista de nosotros
est y que pueden contaminar el mbito de trabajo, por ello es conveniente no
descuidar la limpieza de los materiales, instrumentos y equipo necesario para
el trabajo, en caso de olvidar algn detalle o manejo de del equipo consultar
con el docente o ingeniero responsable para evitar cualquier accidente.

BIBLIOGRAFIA

http://www.asturias.es/Astursalud/Articulos/AS_SESPA/AS_Gestion
%20Clinica/AS_Seguridad%20Paciente/PDF%20LIMPIEZA.pdf
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursometodosfito/02Esterilizacion_desinfeccion2012VG.pdf
http://cipotato.org/wp-content/uploads/2014/09/AN65216.pdf