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FORTALEZA
Novembro de 2010
FORTALEZA
Novembro de 2010
P319a
BANCA EXAMINADORA
__________________________________________________________
Prof.: Manuel Antonio de Andrade Furtado Neto, Ph.D. (Orientador)
Universidade Federal do Cear UFC
Instituto de Cincias do Mar LABOMAR
__________________________________________________________
Prof.: Jos Renato de Oliveira Csar, Ph.D.
Universidade Federal do Cear UFC
Departamento de Engenharia de Pesca DEP
__________________________________________________________
Prof.: Luis Parente Maia, Ph.D.
Universidade Federal do Cear UFC
Instituto de Cincias do Mar LABOMAR
AGRADECIMENTOS
Primeiramente e acima de tudo aos meus pais, Oscar Pacheco Passos Jnior e
Carmensita Matos Braga Passos, no por terem me ensinado tudo que eu sei, mas por terem
me preparado para aprender.
minha irm, Daniele Braga Passos, por fazer do convvio de casa um ambiente
agradvel e propcio ao desenvolvimento de parte da redao deste trabalho.
Daniele Ferreira Marques, pelo carinho, compreenso, companheirismo e apoio em
todas as horas.
Ao meu orientador, professor Manuel Antonio de Andrade Furtado Neto, pelos
ensinamentos, pacincia, por disponibilizar dentro de sua agenda sempre cheia, fato inerente
ao cargo de Diretor do Labomar, tempo para discutirmos e por ter se mostrado mais que um
orientador, um amigo.
empresa Technoaqua Servios e Consultoria Ltda. na figura de Rossi Lelis Muniz de
Souza, por ter financiado este projeto por meio de uma parceria pblico-privada com a
Universidade Federal do Cear e pela amizade j de outras datas.
Ao professor Jos Renato de Oliveira Csar, pelas importantes orientaes
principalmente no incio do trabalho, quando ainda nos encontramos um pouco perdidos e por
ter aceitado ser membro integrante da banca examinadora da presente dissertao de
mestrado.
Ao professor Luis Parente Maia por ter aceitado ser membro integrante da banca
examinadora da presente dissertao de mestrado.
professora Silvana Saker Sampaio pelos importantes e valiosos ensinamentos em
estatstica.
Ao Roberto Kiyoshi Kobayashi, o Koba, por ter conduzido a gerncia do
LAQUIMAR/CEAC/LABOMAR com calma, sabedoria e, acima de tudo, muita pacincia.
Por ter se tornado um grande amigo (brother) e de quem eu sempre ouvia e avaliava as
sugestes e conselhos com muita ateno.
Ao amigo Bruno Braulino Batista, o BBB, pela ajuda ao entendimento da parte
estatstica do presente estudo e sempre que lhe foi solicitado.
Ao amigo Juarez Coelho Barroso, o Parangaia, e ao professor Ral Cruz Izquierdo
(Senior Research Universidad de La Habana) pelo interesse demonstrado em auxiliar na
aquisio de trabalhos para a presente pesquisa.
Aos amigos Luiz Eduardo Lima de Freitas, o Lula, e Ricardo Camura Correia Pinto
pelos
ensinamentos
referentes
ao
funcionamento
da
estrutura
fsica
do
LAQUIMAR/CEAC/LABOMAR.
Aos demais bolsistas, pesquisadores e funcionrios do CEAC, Marcelo Miranda, Tiago
Ribeiro, Felipe Goyanna (Boco), Micael Paz, Eduardo, Ulisses, Sidney, Wilamar e Diego
Holanda.
Biblioteca do Instituto de Cincias do Mar, na figura da bibliotecria Nadsa Maria
Cid Gurgel, pela importante ajuda na obteno de parte dos trabalhos consultados, na
organizao das referncias citadas no presente estudo e por sempre responder prontamente
aos meus e-mails.
Fundao Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico
(FUNCAP) pela concesso da bolsa de mestrado.
No mais, agradeo a todos aqueles que de alguma forma se sentirem agradecidos.
RESUMO
O presente estudo teve como objetivo avaliar a desova induzida hormonalmente e
a qualidade dos ovos do ariac, Lutjanus synagris. Foram avaliadas as fecundidades absoluta
e relativa, o dimetro dos ovos e de suas respectivas gotculas de leo, a porcentagem de ovos
flutuantes, a taxa de fecundao, a taxa de ecloso e sobrevivncia das larvas aps consumo
da reserva vitelnica. O estudo foi desenvolvido no Centro de Estudos Ambientais Costeiros
(CEAC) do Instituto de Cincias do Mar (LABOMAR) da Universidade Federal do Cear
(UFC). Indivduos juvenis foram capturados na natureza por meio de pesca com anzol,
levados ao laboratrio e mantidos sob quarentena. Para finalizar o processo de maturao
gonadal os indivduos foram transferidos para o sistema interno, mantidos sob fotoperodo de
14 horas de claro e alimentados alternadamente com sardinha, camaro e lula. Aps a
verificao da maturao gonadal foi iniciado o perodo de induo hormonal. Os animais
foram capturados, anestesiados, medidos e pesados. O critrio de maturidade utilizado foi
liberao de smen para os machos e dimetro mdio dos ovcitos maior que 400 m para as
fmeas. As indues ocorreram entre os meses de novembro de 2009 e maro de 2010 com
injees de gonadotrofina corinica humana (hCG) na base da nadadeira peitoral. Foram
utilizadas doses de 1.500 UI kg -1 e avaliados dois protocolos. No Protocolo 50/50 foram
aplicadas duas injees contendo 50% da dose total e no Protocolo 70/30 a primeira dose foi
de 70% e a segunda de 30% da dose total. A segunda injeo foi aplicada 24 horas aps a
primeira. Os machos receberam dose nica de 750 UI de hCG kg -1 no momento da segunda
injeo na fmea. A proporo sexual (fmea:macho) utilizada foi de 1:2. A porcentagem de
ovos flutuantes apresentou diferena significativa com valores mdios de 78,18 39,71% e
33,68 41,02% para os Protocolos 50/50 e 70/30, respectivamente. No foi observada
diferena significativa para nenhum dos demais parmetros avaliados. Os valores mdios para
fecundidade relativa foram de 306.815,10 135.218,18 vulos kg-1 (Protocolo 50/50)
404.511,27 261.545,16 vulos kg -1 (Protocolo 70/30). A fertilizao dos ovos flutuantes
variou entre 92 e 100% com dimetro mdio de 726,0 16,89 m a 795,0 19,43 m e da
gotcula de leo de 122,5 8,07 m a 141,5 11,89 m. A ecloso ocorreu em 16 horas sob
temperatura mdia de 29,3 0,9oC. Ovos com mltiplas gotculas de leo apresentaram
ecloso e sobrevivncia similares queles com uma gotcula. O ariac se mostrou uma espcie
que se adapta bem ao cativeiro respondendo positivamente ao manejo e induo hormonal.
Os resultados positivos mostram que o hCG eficaz na reproduo induzida desta espcie,
contudo a variabilidade dos dados encontrados no presente estudo revela que a tcnica precisa
ser aprimorada.
Palavras-chave: Desova induzida. Fecundidade absoluta. Fecundidade relativa. Lutjanidae.
Lutjanus synagris. Qualidade de ovos.
ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the hormone induced spawn and egg quality
of lane snapper, Lutjanus synagris. The absolute fecundity, relative fecundity, egg and oil
globule diameter, percentage of floating eggs, percentage of fertilization, hatching rate and
larval survival up to yolk consumption were assessed. The study was conducted at Centro de
Estudos Ambientais Costeiros (CEAC) from Instituto de Cincias do Mar (LABOMAR) from
the Universidade Federal do Cear (UFC). Wild juveniles were captured by hook, took to the
laboratory and held in a quarantine system. Fishes were transferred to the internal system to
complete gonadal maturation under a 14h-light photoperiod and fed fish, shrimp and squid.
After gonadal maturation, induced spawn period was started. Individuals were captured,
anesthetized and measured. Maturity criteria were running milt for males and mean oocyte
diameter greater than 400 m for females. Induced spawns were attempted in the period
between November 2009 and March 2010, by using human chorionic gonadotropin (hCG)
injections at the base of the pectoral fin. Total doses of 1.500 IU kg-1 were used and two
experimental protocols were evaluated. In the Protocol 50/50, injections of hCG were given in
two doses of 50% of total dose while in the Protocol 70/30, the first dose was 70% and the
second was 30% total dose. The second injection was given after 24 hours. Males received
only one injection of 750 IU kg-1, at the time of the second injection to females. The sex ratio
(female:male) was 1:2. The percentage of floating eggs was significantly different, with mean
values of 78.18 39.71% and 33.68 41.02% for Protocols 50/50 and 70/30, respectively.
There were no significant differences in any other evaluated parameters. The mean values of
relative fecundity were 306,815.10 135,218.18 egg kg-1 (Protocol 50/50) and 404,511.27
261,545.16 egg kg-1 (Protocol 70/30). The percentage of fertilization in floating eggs ranged
from 92 to 100% with mean egg diameters from 726.0 16.89 m to 795.0 19.43 m and
oil globule diameters from 122.5 8.07 m to 141.5 11.89 m in Protocols 50/50 and
70/30. Hatching occurred 16 hours after spawning at mean temperature of 29.3 0.9oC.
Spawns with eggs having multiple oil globules had a similar hatching rate and larval survival
than those with simple oil globule. Lane snapper can successfully adapt to captivity
conditions and positively respond to handling and induced spawn. The positive results show
that hCG induced spawn is feasible, however the variability of the found data in the present
study reveals that this technique needs to be improved.
Key words: Absolute fecundity. Egg quality. Induced-spawn. Lutjanidae. Lutjanus synagris.
Relative fecundity.
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1
FIGURA 2
FIGURA 3
FIGURA 4
FIGURA 5
FIGURA 6
FIGURA 7
FIGURA 8
FIGURA 9
FIGURA 10
FIGURA 11
FIGURA 12
FIGURA 13
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FIGURA 14
FIGURA 15
FIGURA 16
FIGURA 17
FIGURA 18
FIGURA 19
FIGURA 20
FIGURA 21
FIGURA 22
FIGURA 23
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FIGURA 25
FIGURA 26
LISTA DE TABELAS
TABELA 1
TABELA 2
TABELA 3
TABELA 4
TABELA 5
TABELA 6
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SUMRIO
1
2
2.1
2.2
2.3
INTRODUO........................................................................................
REVISO BIBLIOGRFICA................................................................
Descrio de espcie Lutjanus synagris.....................................................
Bioecologia de espcie Lutjanus synagris..................................................
Breve histrico sobre a explorao comercial do ariac no Nordeste do
Brasil..........................................................................................................
2.4
Reproduo induzida.................................................................................
2.4.1 Extrato de hipfise.....................................................................................
2.4.2 Gonadotrofina corinica humana (hCG)....................................................
2.4.3 Hormnio liberador de gonadotrofina (GnRH).........................................
2.4.4 Reproduo induzida de lutjandeos e engorda de juvenis.........................
3
MATERIAIS E MTODOS.....................................................................
3.1
Local de realizao do estudo...................................................................
3.2
Captura dos indivduos e estocagem no sistema de cultivo......................
3.3
Sistema interno de cultivo.........................................................................
3.3.1 Sistema de filtragem..................................................................................
3.3.2 Tanques de maturao...............................................................................
3.3.3 Tanques de reproduo e coletoras de ovos..............................................
3.3.4 Captao, armazenamento e trocas parciais de gua................................
3.4
Protocolos de induo hormonal..............................................................
3.5
Desova......................................................................................................
3.6
Taxa de ecloso e sobrevivncia 36 horas aps a ecloso........................
3.7
Anlise estatstica dos dados....................................................................
4
RESULTADOS........................................................................................
4.1
Estoque reprodutor....................................................................................
4.2
Caractersticas da desova...........................................................................
4.3
Caractersticas do ovo/vulo......................................................................
5
DISCUSSO............................................................................................
6
CONCLUSES E RECOMENDAES..................................................
REFERNCIAS...................................................................................................
15
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72
15
INTRODUO
16
17
todo o Caribe (ACOSTA; APPELDOORN, 1992, CLARKE et al. 1997) juntamente com
outras espcies como a cioba, L. analis, (WATANABE et al. 1998), a guaiba, Lutjanus
(Ocyurus) chrysurus1 (CLARKE et al. 1997) e o L. campechanus (BOURQUE; PHELPS,
2007, PAPANIKOS et al. 2008), alm de compreenderem uma menor, mas significante,
parcela na pesca esportiva ao longo de suas reas de ocorrncia (CLARKE et al., 1997).
No incio da dcada de 1970 o ariac j era considerado como uma espcie de
importncia econmica no nordeste do Brasil (ALEGRA; MENEZES, 1970). E nos dias
atuais, as espcies de lutjandeos ainda esto entre as categorias de pescado mais valiosas nos
mercados do Cear, Rio Grande do Norte e Pernambuco, sendo consideradas como peixes de
primeira qualidade (REZENDE et al., 2003). Quando comparados com a sardinha
(Opsthonema oglinum), a tainha (Mugil spp.) e o camaro (Penaeus brasiliensis), o ariac e a
guaiba foram considerados os pescados de melhor valor nutricional e composio de cidos
graxos para consumo humano segundo Andrade et al. (2009).
Devido grande aceitao como alimento, o alto valor de mercado e a limitada e
cada vez menor oferta pela pesca, existe muito interesse na reproduo de diversas espcies
de lutjandeos sob condies de cativeiro (TURANO et al. 2000) como mostram os trabalhos
desenvolvidos com L. campechanus (PHELPS et al., 2009), L. guttatus (BOZA-ABARCA et
al., 2008), L. argentiventris (MUHLIA-MELO et al., 2003) e L. griseus (CABRERA et al.,
1997). Estes estudos visam um melhor entendimento das caractersticas reprodutivas, de
soluo de problemas associados sobrevivncia das larvas, bem como de fornecimento de
formas jovens tanto para a produo quanto para o desenvolvimento de novas pesquisas
(PHELPS et al., 2009).
A espcie Lutjanus synagris, assim como diversos outros lutjandeos, tais como L.
campechanus (BOURQUE; PHELPS, 2007), L. argentimaculatus (EMATA, 2003) e L.
analis (WATANABE et al. 1998), uma espcie altamente fecunda que pode produzir
centenas de milhares de ovos fecundados em uma nica desova (GESTEIRA; ROCHA,
1976). Nestas condies, uma larvicultura necessitaria de uma pequena quantidade de
reprodutores, uma grande vantagem para o desenvolvimento e estabelecimento de cultivo de
peixes da famlia Lutjanidae de forma sustentvel.
A reproduo em cativeiro fornece, dentre outros benefcios, a possibilidade do
estudo da evoluo diria e descrio das caractersticas morfolgicas dos peixes desde a fase
_______________
1
O leitor encontrar ao longo presente estudo a guaiba, ora sendo referida como Lutjanus chrysurus, ora como
Ocyurus chrysurus. A opo feita em utilizar ambas as denominaes a de manter fidelidade ao texto citado.
No faz parte do presente estudo discutir a existncia ou no do gnero Ocyurus.
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REVISO DE BIBLIOGRAFIA
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Figura 3 Aspecto geral do ariac, Lutjanus synagris, quando em (a) guas rasas e em (b) guas profundas
Fonte: FAO (1985).
23
2.3
_____________________________
2
No Cear, no Rio Grande do Norte e em Pernambuco cinco espcies de lutjandeos so atualmente
comercializadas com o nome de pargo, sejam elas, pargo-verdadeiro (L. purpureus), pargo-olho-de-vidro (L.
vivanus), pargo-boca-negra (L. bucanella), pargo-mariquita (Etelis oculatus) e o pargo-piranga (Rhomboplites
aurorubens) (REZENDE et al. 2003).
24
2.4
Reproduo induzida
25
hormonalmente induzida deve haver uma perfeita sincronia entre o momento da ovulao e a
coleta dos vulos. Aps a ovulao, momento em que as clulas germinativas se separam das
clulas foliculares, os vulos perdem contato com a corrente sangunea que lhes possibilitava
as trocas gasosas (ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER, 2007) causando sua rpida
deteriorao e diminuindo o sucesso da fecundao (ROTTMANN et al. 1991a). Para efetivar
a fecundao, aps a mistura dos gametas se procede a adio de gua para ativao do
smen, porm a quantidade a ser adicionada precisa ser bem dimensionada. A incluso de
muita gua causa a diluio do smen e diminui a probabilidade dos espermatozides
encontrarem a micrpila, por outro lado uma quantidade insuficiente pode causar a obstruo
da micrpila pelo muco do ovrio ou pelo contato com outro vulo (ZANIBONI FILHO;
WEINGARTNER, 2007).
Os primeiros trabalhos de induo hormonal desova de peixes foram
desenvolvidos para peixes reoflicos no incio da dcada de 1930 paralelamente na Argentina
por Houssay (ZOHAR; MYLONAS, 2001, ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER, 2007) e
no Brasil por Rodolpho von Ihering (ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER, 2007). Neste
perodo foram obtidos resultados positivos de induo maturao final e desova de peixes
migradores a partir da aplicao de hormnios naturais presentes na hipfise de peixes
maduros (ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER, 2007), processo conhecido como
hipofisao. Essa tcnica continua sendo uma das alternativas utilizadas para induzir a
reproduo de peixes e embora seja bastante antiga o mesmo princpio tem sido utilizado para
uma grande variedade de peixes com pouca ou nenhuma modificao devido ao fato de o
mecanismo interno que regula a reproduo ser similar para a maioria das espcies
(ROTTMANN et al., 1991b).
26
aplicada a dose terminal da fmea. Para este propsito so utilizadas hipfises frescas ou
preservadas de peixes maduros (espcie doadora) em peixes receptores da mesma espcie
(homoplsticas) ou de espcie diferente (heteroplsticas), mas frequentemente relacionada.
Contudo, o extrato de hipfise est caindo em desuso devido a desvantagens como
necessidade de sacrificar vrios espcimes maduros para obteno de uma quantidade
aprecivel de glndulas e a impossibilidade de obteno de um produto padronizado, uma vez
que a potncia do extrato de hipfise depende da idade, do sexo, estado de maturao e da
condio nutricional e sanitria da espcie doadora (ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER,
2007).
27
Estmulos Ambientais
Crebro
Hipotlamo
a
GnRH
Hipfise
GtH
Gnada
Esterides
Gametas
Figura 4 Representao esquemtica simplificada do eixo hipotlamo-hipfise-gnada e os respectivos
hormnios envolvidos no sistema regulatrio. Local de ao do hormnio liberador de gonadotrofina (GnRHa ou
LHRHa) (a), local de ao da gonadotrofina corinica humana (hCG) e do extrato de hipfise (b). Adaptado de
Rottmann et al. (1991c).
28
como desvantagem o tempo mais prolongado de resposta dos peixes (ZOHAR; MYLONAS,
2001) e necessidade de ser administrado juntamente com bloqueadores de dopamina em
algumas espcies (ROTTMANN et al., 1991c).
29
(BOURQUE; PHELPS, 2007, BOZA-ABARCA, 2008, CLARKE et al., 1997, DUMAS et al.,
2004, EMATA, 2003, PAPANIKOS et al., 2003, WATANABE et al., 1998) e o GnRHa ou
LHRHa (EMATA, 2003, IBARRA-CASTRO; DUNCAN, 2007).
Zohar e Mylonas (2001) relatam que ocasionalmente o tempo de latncia entre a
aplicao hormonal e a ovulao quando se utiliza GnRHa ou LHRHa maior quando
comparado ao hCG. Isto ocorre devido ao fato de hormnios liberadores de gonadotrofina
atuarem no incio do eixo hipotlamo-hipfise-gnada desencadeando no peixe a sntese de
seus prprios hormnios gonadotrficos. Contudo, Emata (2003) comparando desovas
induzidas em L. argentimaculatus utilizando hCG e LHRHa no encontrou diferena
significativa entre os tempos de latncia (entre 38 e 38,5 horas) ao longo dos tratamentos com
os diferentes hormnios. Perodo de latncia entre 32 e 40 horas foi observado por IbarraCastro e Duncan (2007) utilizando implantes intramusculares de GnRHa, valores
considerados dentro do esperado para peixes da famlia Lutjanidae. Phelps et al. (2009)
declararam que aps anos de pesquisas com L. campechanus utilizando hCG o perodo de
latncia variou entre valores um pouco abaixo de 12 horas at 36 horas sendo mais frequente
entre 24 e 32 horas.
Vrios protocolos de induo de fmeas de peixes podem ser utilizados com os
diferentes tipos de hormnios. Os mais utilizados em peixes do gnero Lutjanus incluem
aplicaes nicas de hCG em doses que variaram de 500 UI kg-1 para L. synagris e L.
chrysurus (CLARKE et al., 1997) a 1.500 UI kg-1 para L. argentimaculatus (EMATA, 2003).
Entretanto parece haver certas variaes espcie-especfica dentro do gnero, pois doses de
500 UI kg-1 que se mostraram efetivas para o ariac e para a guaiba (CLARKE et al., 1997)
no foram capazes de induzir a finalizao do processo de ovulao em L. argentimaculatus
na pesquisa desenvolvida por Emata (2003). Doses extremas de 3.400 e 6.400 UI kg-1 foram
utilizadas por Cabrera et al. (1997) para a bana, L. griseus. Tambm so vlidos protocolos
que utilizam o hCG em duas doses em diferentes propores. Boza-Abarca et al. (2008)
utilizaram para L. guttatus uma dose total de 1.600 UI kg-1 em duas injees sendo a primeira
de 896 UI kg-1 (56%) e a segunda de 704 UI kg-1 (44%). Watanabe et al. (1998) e Dumas et
al. (2004) utilizaram para L. analis e L. peru, respectivamente, dose total de 1.500 UI kg-1 da
seguinte forma divida, primeira dose de 500 UI kg-1 (aproximadamente 33%) e segunda de
1.000 UI kg-1 (aproximadamente 67%). Para machos utilizada dose nica de oito a duas
vezes menor que a das fmeas, variando entre 200 UI kg -1 para L. guttatus (BOZA-ABARCA
et al., 2008) e 550 UI kg-1 para L. campechanus (BOURQUE; PHELPS, 2007, PAPANIKOS
30
et al., 2003). A dose do macho geralmente aplicada no momento em que a segunda injeo
da fmea administrada quando se utiliza o protocolo com duas doses.
Outro tipo de hormnio utilizado por Emata (2003) foi o anlogo do hormnio
liberador do hormnio luteinizante (LHRHa). Este autor aplicou doses nicas nas
concentraes de 50 e 100 g kg -1 para fmeas de L. argentimaculatus, ocorrendo desova
somente para aquelas que receberam as maiores doses. Comparando o desempenho
reprodutivo dos reprodutores tratados com ambos os hormnios (hCG e LHRHa), Emata
(2003) tambm observou no haver diferena significativa entre o dimetro dos ovos
produzidos, porm 76,4% das desovas induzidas por 1.000 UI de hCG kg-1 produziram mais
de um milho de ovos enquanto que esta taxa ficou em 50% para 1.500 UI de hCG kg-1 e
penas 30% para 100 g de LHRHa kg-1.
Mais recentemente uma grande variedade de implantes contendo GnRHa tem sido
desenvolvida e testada em peixes cultivados para o controle da maturao final dos ovcitos,
ovulao e espermiao (ZOHAR; MYLONAS, 2001). Estes implantes so alojados
intramuscularmente e liberam pequenas quantidades de hormnio durante um longo perodo e
tem mostrado grande potencial de induzir espcies de desova parcelada (ZOHAR;
MYLONAS, 2001) como o caso dos lutjandeos. Ibarra-Castro e Duncan (2007) avaliaram o
efeito de implantes contendo 0, 25, 50, 75 e 100 g de GnRHa em fmeas de L. guttatus
recentemente capturadas cujos pesos variam de 260 a 683 g. O estudo tambm avaliou a
influncia do tamanho do tanque de reproduo bem como a proporo entre o nmero de
fmeas e machos (1:1, 1:3 e 1:5). No foi observado efeito do tamanho do tanque bem como
da proporo entre machos e fmeas na qualidade e quantidade dos ovos. A anlise dos dados
sob um modelo no-linear e tridimensional mostrou que existe uma faixa tima de
concentrao hormonal (240 a 280 g kg -1) e de dimetro do ovcito (440 a 500 m) que
favorece uma produo de ovos acima de 100.000 kg-1.
Um dos problemas que a induo hormonal pode causar a liberao de ovcitos
que ainda no haviam completado seu desenvolvimento resultando em uma grande variao
de dimetro. Dessa forma existe uma relao entre a alta taxa de vulos no fecundados e a
variao no dimetro resultando em uma desova de baixa qualidade (PHELPS et al., 2007).
A partir de espcimes domesticados possvel a obteno de desovas naturais
estocando os indivduos em tanques-rede em seu ambiente natural como observou Emata
(2003) estudando L. argentimaculatus. O pesquisador observou que as desovas ocorreram de
acordo com a estao de acasalamento da espcie produzindo ovos de melhor qualidade
quando comparada com ovos obtidos por induo hormonal utilizando hCG e LHRHa. A
31
32
MATERIAIS E MTODOS
3.1
33
Figura 5 Laboratrio de Aquicultura Marinha (Laquimar) no Centro de Estudos Ambientais Costeiros (CEAC).
Estrutura interna do galpo (esquerda) e rea externa (direita).
3.2
34
3.3
35
Figura 6 Esquema do sistema interno de recirculao de gua evidenciando os tanques 1,2,3,4 e 5, o sistema de
coleta de ovos, o filtro mecnico e biolgico integrados e o filtro fracionador de protenas ou desnatador
(skimmer).
36
Atravs destas cmaras a gua flua percorrendo as diferentes unidades filtrantes (filtragem
mecnica e biolgica nas cmaras 1 e 3, respectivamente).
Figura 7 Desenho esquemtico representando o filtro externo e suas respectivas cmaras. Para melhor
visualizao das cmaras e suas comunicaes a parede frontal do filtro no mostrada. (a) ponto de tomada de
gua dos tanques para a cmara 1; (b) comunicao entre as cmaras 1 e 2; (c) comunicao entre as cmaras 2 e
3; (d) fluxo em cascata da cmara 3 para a 4.
A cmara 1 o ponto de tomada de gua vinda dos tanques por gravidade, nela
era realizada uma pr-filtragem mecnica utilizando-se manta acrlica que era diariamente
retirada, substituda, lavada e desinfetada em soluo contendo cloro. Abaixo desta manta,
ainda na cmara 1, estava localizada a tubulao de aduo de 50 mm de uma eletrobomba de
1,5 CV que succionava a gua, a impulsionava atravs de um filtro mecnico de areia e a
retornava cmara 2. Na extremidade da tubulao de aduo existia uma vlvula de p com
crivo que evitava que a gua retornasse e danificasse a bomba em caso de pane eltrica. A
cmara 2 possua uma comunicao simultnea em sua parte inferior com a cmara 1, que
promovia um equilbrio hidrodinmico entre ambas, e com a cmara 3 (filtro biolgico),
gerando nesta um fluxo de gua ascendente que percorria o material filtrante (rocha calcria)
em toda sua extenso. Por fim, a gua flua em cascata para a cmara 4 onde se encontrava a
tubulao de aduo da eletrobomba de 2,0 CV que alimentava os tanques de maturao e
reproduo. Para auxiliar a filtragem biolgica, parte da gua na tubulao de recalque da
37
eletrobomba de 2,0 CV era desviada para alimentar seis recipientes cilndricos com volume
aproximado de 0,20 m3 contendo cerca de 0,15 m3 de rocha calcria localizados
imediatamente acima da cmara 3, os quais funcionavam como torres de volatilizao de
amnia (Figura 8).
O filtro fracionador de protena, por outro lado, estava localizado dentro do galpo
sendo sua cmara de reao alimentada atravs de parte da gua da tubulao de recalque da
eletrobomba que alimentava o sistema interno. Uma segunda eletrobomba de CV acoplada
a uma vlvula do tipo Venturi fazia a suco, a incorporao de microbolhas de ar e a
devoluo da gua para a cmara de reao. Na extremidade superior do filtro o copo coletor
fazia a reteno e a drenagem da espuma gerada.
38
Figura 9 Representao esquemtica da circulao de gua nos tanques de maturao com detalhe do dreno
central. Parte da parede do tanque e da tubulao de 100 mm no mostrada no desenho para a visualizao dos
detalhes descritos no texto. (A) indica as pequenas aberturas na base da tubulao de 100 mm que possibilitava a
drenagem da gua de fundo.
39
b
a
d
c
Figura 10 Sistema tanque de reproduo-coletora de ovos em funcionamento evidenciando: (a) dreno lateral do
tanque de reproduo; (b) coletora de ovos com volume de 0,01 m3; (c) reservatrio cilindro-cnico de 0,235 m3
e (d) seu respectivo dreno lateral.
A gua salgada utilizada nos tanques do Laquimar durante o presente estudo era
captada no esturio do rio Pacoti (Figura 11) durante as preamares de sizgia (lua cheia e
nova). O ponto de captao distava cerca de 300 m do laboratrio sendo necessria a
utilizao de uma eletrobomba de 4,0 CV de potncia conectada a uma tubulao de aduo e
recalque com 50 e 60 mm, respectivamente, que desembocava em dois tanques-reservatrio
tronco-cnicos com capacidade de 20 m3, totalizando uma capacidade de armazenagem de 40
m3. Acoplado a cada tanque-reservatrio havia um sistema de filtragem constitudo por uma
eletrobomba de 1,5 CV de potncia e um filtro de areia para remoo de material particulado
em suspenso (Figura 12). Adicionalmente filtragem mecnica era realizado um tratamento
40
com cloro ativo (70% de pureza) adicionando-se 100 g deste composto a cada reservatrio, o
que resultava em uma concentrao efetiva de 3,5 ppm de cloro. Aps o tratamento qumico o
sistema permanecia em circulao por trs dias at que pudesse ser utilizado.
1:10.000
Figura 11 Esturio do rio Pacoti, divisa entre os municpios de Fortaleza e Aquiraz, Cear. (a) Centro de
Estudos Ambientais Costeiros CEAC; (b) ponto de captao de gua. Fonte: Google Earth. Imagem acessada
em: 10 out. 2010.
41
3.4
42
Figura 13 Etapas do processo de checagem do estgio de maturao gonadal. (a) indivduo anestesiado em
soluo de eugenol; (b) medio do comprimento com auxlio de um ictimetro; (c) pesagem utilizando-se uma
balana digital; (d) sondagem (canulao).
Para os machos, a liberao de smen sob leve presso abdominal foi adotada
como critrio para determinar a condio de maturao gonadal em imaturo ou maduro. Para
determinar a condio de maturao sexual das fmeas era necessria a retirada de uma
amostra de tecido ovariano utilizando uma sonda (cnula) com dimetro externo de 1,60 mm.
Este instrumento era introduzido cerca de 6 cm no poro urogenital de cada fmea e o material
coletado por meio de leve presso negativa com auxlio de uma seringa. Os ovcitos eram
ento uniformemente dispostos sobre uma lmina para evitar sobreposio de material,
levados ao microscpio ptico munido de uma escala micromtrica com preciso de 12,5 m
e mensurados quanto ao seu dimetro. Neste estudo foram utilizadas apenas as fmeas cujos
ovcitos apresentavam dimetro de aproximadamente 400 m.
As indues foram conduzidas utilizando-se injees de gonadotrofina corinica
humana (hCG) (Choragon) na base da nadadeira peitoral. Foram avaliados dois protocolos
de induo hormonal, ambos com dose total de 1.500 UI de hCG kg-1 para as fmeas. Em
quatro delas foi administrado 70% da dose total na primeira aplicao e 30% na segunda
(Protocolo 70/30) e em outras quatro, foram utilizadas duas doses correspondendo a 50% da
dose total (Protocolo 50/50). O intervalo entre a primeira e a segunda aplicao era de 24
horas independentemente do protocolo avaliado. Os machos receberam aplicao nica na
43
Figura 14 Detalhe do processo de marcao de exemplar de ariac, Lutjanus synagris, com fio de nylon preso
ao segundo espinho da nadadeira dorsal. As setas indicam o cdigo de ns que identifica o indivduo (2 ns mais
1 n), indivduo 2/1.
Induo
1
2
3
4
5
6
7
8
Data do incio da
induo
13/10/2009
19/10/2009
14/12/2009
02/02/2010
21/02/2010
03/03/2010
07/03/2010
12/03/2010
Protocolo
50/50
70/30
70/30
70/30
50/50
50/50
50/50
70/30
3.5
44
Desova
b
a
a
a
b
250 m
b
250 m
Figura 15 Ovos flutuantes (esquerda) e vulos no-flutuantes (direita) de ariac, Lutjanus synagris, induzido a
reproduzir com injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG). (a) ovo flutuante com desenvolvimento
embrionrio normal; (b) vulo no-fecundado; (c) ovo fecundado entre o material no flutuante e cujo
desenvolvimento embrionrio foi interrompido.
45
quantidade de ovos flutuantes e/ou vulos no-flutuante, o volume de gua no aqurio era
reduzido para 10 L, 5 L ou menos com o objetivo de manter a preciso da estimativa.
Figura 16 Tela subdividida em seis quadrantes sobre a qual os ovos e vulos de ariac, Lutjanus synagris,
induzidos a reproduzir com injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG) foram depositados para contagem.
Figura 17 Medio do dimetro do ovo flutuante de ariac, Lutjanus synagris, induzido a reproduzir com
injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG) (A). Exemplo de ovo com mais de uma gotcula de leo no
qual apenas o dimetro da maior foi aferido (B).
46
taxa de fecundao total (%), porcentagem de ovos flutuantes e vulos no-flutuantes com
uma gotcula de leo de acordo com as seguintes equaes:
onde: FRT = fecundidade relativa total, NOF = nmero de ovos flutuantes, NONF = nmero
de vulos no-flutuantes, PF = peso da fmea, FROF = fecundidade relativa aos ovos
flutuantes, %OF = porcentagem de ovos flutuantes, %FT = taxa de fecundao total, %FOF =
taxa de fecundao dos ovos flutuantes, %FONF = taxa de fecundao dos vulos noflutuantes, %X = porcentagem de ovos flutuantes com uma gotcula de leo, NX = nmero de
ovos flutuantes com uma gotcula de leo, %Y = porcentagem de vulos no-flutuantes com
uma gotcula de leo, NY = nmero de vulos no-flutuantes com uma gotcula de leo.
3.6
47
um recipiente cilndrico contendo uma tela com malha de 150 m no fundo. Os indivduos
eram ento fixados em formalina 10% at o momento da contagem. Uma subamostra de 5
indivduos de cada aqurio (20 indivduos) era levada ao microscpio ptico para medio do
comprimento padro da larva recm-eclodida, que foi considerado como o segmento de reta
compreendido entre a regio mais anterior da cabea e a extremidade posterior da notocorda
(CLARKE et al., 1997) (Figura 18).
500 m
Figura 18 Larva recm-eclodida de ariac, Lutjanus synagris, proveniente de reproduo induzida com injeo
de gonadotrofina corinica humana (hCG). Comprimento padro, segmento de reta compreendido entre a regio
mais anterior da cabea e a extremidade posterior da notocorda. Aumento de 4x.
indues ocorridas nos dias 13 (Protocolo 50/50) e 19 (Protocolo 70/30) de outubro de 2009
todos os parmetros foram avaliados com exceo da taxa de ecloso, da porcentagem de
sobrevivncia 36HAE e de sobrevivncia relativa.
48
Figura 19 Aqurios contendo 10 L de gua salgada destinados a avaliar a taxa de ecloso dos ovos e a
porcentagem de sobrevivncia 36 horas aps a ecloso (36HAE) de larvas de ariac, Lutjanus synagris,
proveniente de reproduo induzida com injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG). Notar os trs
aqurios envoltos em papel adesivo preto para avaliar a influncia da luminosidade na sobrevivncia 36HAE.
Figura 20 Larvas de ariac, Lutjanus synagris, proveniente de reproduo induzida com injeo de
gonadotrofina corinica humana (hCG) 36 horas aps ecloso despescadas e concentradas em recipiente plstico
e transparente para separao entre indivduos vivos (translcidos circunferncias) e mortos (esbranquiados e
curvados em forma de C setas).
3.7
49
RESULTADOS
4.1
Estoque reprodutor
50
Salinidade (ppt)
Temperatura (C)
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Figura 21 Variao dos valores mdios de oxignio dissolvido (OD), salinidade e temperatura no sistema
interno durante o perodo de maturao gonadal e de reproduo induzida de ariac, Lutjanus synagris.
51
50/50). O comprimento total desses animais teve mdia de 25,6 2,4 cm variando entre 28,5
cm (19/10/2009 Protocolo 70/30) e 21,5 cm (03/03/2010 Protocolo 50/50) (Tabela 2). Os
machos (n = 16) apresentaram peso e comprimento total com valores mdios de 287,66
71,42 g e 23,7 1,9 cm, respectivamente.
A Figura 22 representa a relao peso/comprimento e mostra que o valor do
coeficiente de alometria (b) obtido pela equao de regresso desta relao, para os
reprodutores de ariac, Lutjanus synagris, foi de 3,2356. O valor do coeficiente b permitiu o
clculo do fator de condio alomtrico (Ka) que variou de 0,80 a 1,13 com mdia de 0,95
0,10 para fmeas e 0,88 a 1,13 (1,00 0,10) para os machos.
Tabela 2 Peso em gramas (P), comprimento total em centmetros (CT) e fator de condio alomtrico (Ka) para
reprodutores de ariac, Lutjanus synagris, induzidos a reproduzir com injeo de gonadotrofina corinica
humana (hCG).
Data do incio da induo
13/10/2009 19/10/2009 14/12/2009 02/02/2010 21/02/2010 03/03/2010 07/03/2010 12/03/2010
P fmea
400,0
492,0
423,6
512,9
271,6
204,2
291,2
250,4
CT fmea
26,5
28,5
28,0
27,5
24,0
21,5
24,5
24,5
Ka fmea
0.99
0,97
0,88
1,13
0,93
1,00
0,93
0,80
P macho 1
292,0
413,0
255,8
371,3
225,2
281,6
228,7
223,4
CT macho 1
25,0
26,5
24,0
26,5
22,0
23,5
22,5
22,0
Ka macho 1
0.88
1,03
0,88
0,92
1,02
1,03
0,96
1,01
P macho 2
330,0
335,0
237,1
386,4
319,5
285,6
133,2
284,7
CT macho 2
24,0
24,5
22,0
26,0
24,5
23,5
19,0
23,0
Ka macho 2
1,13
1,07
1,07
1,02
1,02
1,05
0,97
1,12
800
P = 0,0099CT3,2356
R = 0,955
700
Peso (g)
600
500
400
300
200
100
15
20
25
30
35
Comprimento (cm)
Figura 22 - Relao peso/comprimento de reprodutores de ariac, Lutjanus synagris, induzidos a reproduzir com
injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG).
4.2
52
Caractersticas da desova
Hora-grau
17
400
15
350
13
300
11
250
200
150
100
50
Hora-grau
Perodo de latncia
53
parceladas em duas indues distintas. A primeira teve inicio no dia 21/02/2010 resultando
em duas desovas com um intervalo de dois dias entre ambas, no dia 23/02/2010 com uma
produo de 60.530 vulos e a segunda no dia 26/02/2010 com 10.500 vulos atingindo uma
produo final de 71.030 vulos e uma fecundidade relativa total 261.524,30 vulos kg -1. A
segunda induo foi iniciada no dia 03/03/2010 resultando em duas desovas consecutivas nos
dias 05 e 06/03/2010 com quantidades de 73.600 e 20.530 vulos, respectivamente,
fecundidade absoluta de 94.130 e fecundidade relativa total de 460.969,64 vulos kg -1 (Tabela
3).
Dentre as indues que apresentaram apenas uma desova, a menor fecundidade
absoluta foi observada no dia 07/03/2010 (Protocolo 50/50) com uma produo de 31.600
vulos e fecundidade relativa total de 108.516,48 vulos kg -1. A maior desova foi constatada
para a induo iniciada no dia 13/10/2009 (Protocolo 50/50) com fecundidade absoluta de
158.500 vulos, apresentando fecundidade relativa total com valor de 396.475,00 vulos kg -1.
Tabela 3 Data do incio da induo, peso da fmea, protocolo de induo hormonal utilizado, nmero de
desovas para uma mesma aplicao hormonal, fecundidade para diferentes desovas parceladas, somatrio das
fecundidades e fecundidade relativa total para ariac, Lutjanus synagris, induzidos a reproduzir com injeo de
gonadotrofina corinica humana (hCG).
Data do
Fecundidade (vulos)
Fecundidade
Peso da
Nmero de
incio da
Protocolo
Total
relativa total
fmea (g)
desovas
1
2
3
induo
(vulos kg-1)*
13/10/2009
400,0
50/50
1
158.500
158.500
396.475,00
19/10/2009
492,0
70/30
1
93.600
93.600
190.243,90
14/12/2009
423,6
70/30
1
138.000
138.000
325.779,04
02/02/2010
512,9
70/30
3
251.000 129.600 22.400 403.000
785.728,21
21/02/2010
271,6
50/50
2
60.530 10.500
71.030
261.524,30
03/03/2010
204,2
50/50
2
73.600 20.530
94.130
460.969,64
07/03/2010
291,2
50/50
1
31.600
31.600
108.516,48
12/03/2010
250,4
70/30
1
79.200
79.200
316.293,93
* Referente somatria do nmero de ovos das desovas parceladas.
54
1 desova
2 desova
3 desova
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
4.3
Caractersticas do ovo/vulo
55
56
com uma gotcula de leo foi maior que a porcentagem de vulos no-flutuantes com uma
gotcula de leo, sejam elas, primeira e segunda desova de 03/03/2010 (Protocolo 50/50),
19/10/2009, 14/12/2009 e terceira desova de 02/02/2010 (Protocolo 70/30). Nas desovas dos
dias 13/10/2009, primeira e segunda desovas de 21/02/2010 (Protocolo 50/50) e segunda
desova de 02/02/2010 (Protocolo 70/30) o comportamento foi oposto. Porcentagens iguais
foram encontradas no dia 07/03/2010 (Protocolo 50/50). Na primeira desova de 02/02/2010 e
em 12/03/2010 (Protocolo 70/30) a anlise no foi possvel em virtude da ausncia de ovos
flutuantes.
Protocolo 50/50
Tabela 4 Data do incio da induo, nmero total de ovos/vulos, fecundao, dimetro do ovo/vulo, dimetro
da gotcula de leo (GO) e porcentagem de ovos/vulos com uma gotcula de leo (% com uma GO) para ovos
flutuantes (F) e vulos no-flutuantes (NF) produzidos por fmeas de ariac, Lutjanus synagris, induzidas a
ovular com injeo de gonadotrofina corinica humana (hCG).
Nmero
Porcentagem
Dimetro
ovos/vulos
de fecundao
ovo/vulo
Dimetro GO
% com uma
Data
(Porcentagem)
(%)
(m)
(m)
GO (%)
desova
F
NF
F
NF
F
NF
F
NF
F
NF
13/10/2009
1 69.000 89.500
100
72
740,5a 735,0a 141,5a 139,0a
76
84
(43,51) (56,49)
21/02/2010
1 60.000
530
100
32
760,5a 754,0a 133,5a 131,5a
84
88
(99,12) (0,88)
2 8.500
2.000
92
36
795,0a 810,0b 122,5a 124,5a
68
76
(80,95) (19,05)
03/03/2010
1 12.800 60.800
100
12
737,0a 727,0b 131,0a 136,0a 100
96
(17,39) (82,61)
2 17.600 2.930
100
8
761,5a 779,0b 127,0a 129,5a 100
96
(85,73) (14,27)
07/03/2010
1 24.800 6.800
100
4
749,5a 735,5a 126,5a 124,0a 100
100
(78,48) (21,52)
Protocolo 70/30
19/10/2009
1 33.600 60.400
100
16
738,5a 738,0a 132,5a 137,0a
72
56
(35,47) (64,53)
14/12/2009
1 31.600 106.400 100
24
726,0a 727,0a 129,5a 135,0a
84
72
(22,90) (77,10)
02/02/2010
1
0
251.000
0
689,5
140,0
100
(100)
2 110.000 19.600
100
0
757,5a 702,0b 132,0a 135,5a
96
100
(84,88) (15,12)
3 10.200 12.200
100
44
778,0a 765,5a 135,0a 134,0a
96
92
(45,54) (54,46)
12/03/2010
1
0
79.200
16
693,5
131,5
100
(100)
Valores na mesma linha com diferentes letras sobrescritas apresentam diferena significativa (p < 0,05).
- no houve ovos flutuantes na respectiva induo/desova
57
fecundao e porcentagem de ovos/vulos com uma gotcula de leo para ovos flutuantes e
vulos no-flutuantes, bem como para fecundidade relativa total e fecundidade relativa para
os ovos flutuantes. Contudo, a porcentagem de ovos flutuantes produzida segundo o Protocolo
50/50 foi significativamente maior (p-valor = 0,0408) quando comparada com o Protocolo
70/30 com valores mdios foram de 78,18 39,71% e 33,68 41,02%, respectivamente.
Tabela 5 Nmero de ovos/vulos, porcentagem de fecundao, porcentagem de ovos/vulos com uma gotcula
de leo (GO) para ovos flutuantes e vulos no-flutuantes, porcentagem de ovos flutuantes, fecundidade relativa
total e fecundidade relativa dos ovos flutuantes (OF) para ariac, Lutjanus synagris, induzido a reproduzir sob
diferentes protocolos com injees de gonadotrofina corinica humana (hCG).
Protocolo 50/50
Protocolo 70/30
p-valor
Nmero
Ovos flutuantes
24.740,00a 20.618,87
30.360,00a 46.351,79
0,4053
a
vulos no-flutuantes
14.612,00 25.923,89
93.680,00a 96.498,56
0,0757
Porcentagem de fecundao
Ovos flutuantes (%)
99,68a 17,91
100,00a 0,00
0,1869
a
vulos no-flutuantes (%)
12,13 14,44
17,09a 18,91
0,3263
Porcentagem com uma GO
Ovos flutuantes (%)
96,13a 38,25
92,86a 16,64
0,3468
a
vulos no-flutuantes (%)
89.38 18,16
97,28a 33,84
0,1112
Porcentagem de ovos flutuantes (%)
78,18a 39,71
33,68b 41,02
0,0408
Fecundidade relativa total (vulos/kg)
306.815,10a 135.218,18 404.511,27a 261.545,16 0,2722
Fecundidade relativa OF (ovos/kg)
164.686,90a 59.780,86
94.311,26a 99.284,18
0,2891
Valores na mesma linha com letras sobrescritas iguais no apresentam diferena significativa.
1 desova
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
Flutante
2 desova
No-flutuante
Protocolo 50/50
b
Dimetro da gotcula de leo (m)
1 desova
3 desova
b c
Flutante
a a
No-flutuante
Protocolo 70/30
2 desova
3 desova
160
140
58
a ab b
a a a
No-flutuante
Flutante
No-flutuante
120
100
80
60
40
20
0
Flutante
Protocolo 50/50
Protocolo 70/30
Figura 25 Dimetro do ovo flutuante, do vulo no-flutuante (a) e de suas respectivas gotculas de leo (b)
produzidos por ariac, Lutjanus synagris, induzidos a reproduzir sob diferentes protocolos com injees de
gonadotrofina corinica humana (hCG). Diferentes letras indicam diferena significativa (p < 0,05).
59
60
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Protocolo 70/30
a
a
2,50
a
2,00
1,50
a
a
1,00
Comprimento (mm)
Porcentagem (%)
Protocolo 50/50
0,50
0,00
Ecloso (*)
Sobrevivncia
36HAE ()
Sobrevivncia
relativa (#)
Comprimento
padro ()
Figura 26 Taxa de ecloso, porcentagem de sobrevivncia 36 horas aps a ecloso (36HAE), sobrevivncia
relativa e comprimento padro da larvar recm-eclodida de ariac, Lutjanus synagris, produzidas sob diferentes
protocolos de induo hormonal utilizando-se gonadotrofina corinica humana (hCG). Diferentes letras indicam
diferena significativa. (*) p-valor = 0,7085; () p-valor = 0,3235; (#) p-valor = 0,3304; () p-valor = 0,1004.
61
DISCUSSO
1998), L. guttatus
(IBARRA-COSTRO; DUNCAN,
2007),
L. campechanus
62
(PAPANIKOS et al., 2003), L. argentimaculatus (EMATA, 2003). Este fato foi comprovado
para o ariac no presente estudo no qual foram observadas desovas parceladas em trs
situaes distintas nos dias 02/02/2010 (trs desovas), 21/02/2010 (duas desovas) e
03/03/2010 (duas desovas). Sousa Jnior et al. (2008) j haviam comprovado que o ariac
tambm apresentava desova parcelada em seu ambiente natural. Ibarra-Castro e Duncan
(2007) reportaram que o grau de estresse ao qual o animal submetido afeta negativamente o
sucesso da induo hormonal e sugeriram que modificaes no protocolo, tais como, aumento
da dose hormonal, utilizao de animais em estgio de desenvolvimento ovariano mais
avanado (maior dimetro do ovcito) ou o aumento do perodo de observao dos
reprodutores aps a aplicao hormonal (maior perodo de latncia), podem aumentar as
chances de uma induo bem sucedida. Em estudo com reprodutores recm capturados de L.
guttatus os autores supracitados no obtiveram desovas sucessivas bem sucedidas e
argumentam que o protocolo por eles utilizado poderia induzir desovas sucessivas em
indivduos menos estressados, ou seja, devidamente aclimatados s condies de cativeiro.
Emata (2003) relatou no ter observado desovas sucessivas bem sucedidas aps as indues
hormonais em L. argentimaculatus utilizando LHRHa e hCG, bem como em nenhum de seus
trabalhos anteriores em que estudou a reproduo da mesma espcie. O fato de ter havido
desovas sucessivas bem sucedidas partindo-se de ndices previamente estabelecidos para
peixes da mesma famlia em pesquisas anteriores, tais como: maturidade sexual da fmea
(dimetro do ovcito igual ou superior a 400 m) e do macho (liberao de smen sob leve
presso abdominal); proporo sexual (dois machos para uma fmea); e dose hormonal
(prximas a 1.500 IU de hCG kg -1), sugere uma adequada manuteno e manejo dos
reprodutores de ariac no Laboratrio de Aquicultura Marinha (LAQUIMAR) do CEAC.
Dimetro dos ovcitos em torno de 400 m tem sido reportado para vrias
espcies de peixes pertencentes famlia Lutjanidae como indicador de maturidade sexual,
como por exemplo, para L. argentimaculatus (EMATA, 2003), L. guttatus (IBARRACASTRO; DUNCAN, 2007), L. analis (WATANABE et al., 1998), L. peru (DUMAS et al.,
2004) e tambm para L. synagris (SOUSA JNIOR et al., 2008). Contudo mais pesquisas so
necessrias para estabelecer um dimetro mnimo crtico para a reproduo induzida do
ariac.
Os valores encontrados para fecundidade absoluta no presente estudo variaram de
31.600 a 403.000 vulos e foram significativamente maiores quando comparados com os
valores obtidos a partir de fmeas de tamanho equivalente reportados por Gesteira e Rocha
(1976) estudando o contedo ovariano de fmeas de ariac capturadas e desembarcadas na
63
praia do Iguape (Aquiraz CE). Ibarra-Castro e Duncan (2007), utilizando fmeas com faixa
de peso entre 260 e 700 g, semelhante ao utilizado no presente estudo (entre 204,2 e 512,9 g),
encontrou um valor mximo de fecundidade relativa igual a 78.594 vulos kg -1,
aproximadamente dez vezes menor que o valor mximo observado para L. synagris, tal fato
sugere ser o ariac uma espcie mais fecunda que L. guttatus.
Bourque e Phelps (2007) estudando a reproduo induzida por hCG seguida de
extruso e fertilizao artificial em Lutjanus campechanus observaram a existncia de uma
correlao negativa entre a fecundidade absoluta e a sobrevivncia das larvas com menores
fecundidades e maiores sobrevivncia no incio da estao de acasalamento e comportamento
oposto ao final da estao. Os autores encontraram valores de fecundidade relativa total que
variaram de 171.703 a 503.122 vulos kg -1 (343.377 30.805 vulos kg -1), j para os valores
de fecundidade relativa dos ovos flutuantes os pesquisadores supracitados relataram valores
cuja mdia mais que duas vezes maior (267.966 39.849 ovos kg -1) ao encontrado para L.
synagris (129.499,08 87.645,81 ovos kg-1). Cerqueira et al., (2005) realizando induo
hormonal em Centropomus parallelus verificaram um maior nmero de larvas viveis
utilizando fertilizao artificial (58% das indues) quando comparada com a fertilizao
natural (43% das indues). Considerando as caractersticas fisiolgicas dos gametas dos
peixes, a fertilizao artificial pode ser considerada o melhor mtodo, pois possibilita a
vantagem de ampliar o tempo para o manejo dos gametas, alm de aumentar a taxa de
fertilizao (ZANIBONI FILHO; WEINGARTNER, 2007).
Como salientado na seo 3.5, o material sem flutuao proveniente da desova do
ariac era constitudo em sua maior parte por vulos no fecundados e ovos fecundados cujo
desenvolvimento embrionrio havia sido interrompido. Este material quando em
decomposio propicia o desenvolvimento de organismos como fungos e bactrias que podem
comprometer a qualidade dos ovos saudveis e da gua de cultivo em um laboratrio de
larvicultura. A poro flutuante, por sua vez, era constituda por ovos que apresentaram
porcentagem de fecundao de 100% com exceo de uma desova que apresentou 92% de
fecundao. Watanabe et al. (1998) observaram para L. analis uma taxa de fertilizao de
ovos flutuantes de 84% enquanto que a taxa de fertilizao total (flutuantes e no-flutuantes)
foi de 75,7%. Taxas de fertilizao dos ovos flutuantes e no-flutuantes de 83,3 2,33% e
38,2 3,36%, respectivamente, foram reportadas por Bourque e Phelps (2007) para L.
campechanus. Da mesma maneira em que foi observado no presente estudo, estes
pesquisadores relataram ausncia de ovos flutuantes em algumas desovas. Contudo nas
desovas em que pelo menos uma parte dos ovos flutuou a porcentagem de ovos flutuantes
64
variou de 81,3% a 98,6% (91,8 1,75%) para L. campechanus, enquanto que para L. synagris
a variao foi mais pronunciada indo de 17,39 a 99,12% (64,53 40,63%). Papanikos et al.
(2008) relataram em seu trabalho com L. campechanus taxas de fertilizao que variaram de
zero a 99%. Papanikos et al. (2003) alimentando reprodutores de L. campechanus com uma
dieta a base de lula, sardinha e camaro encontraram taxa de fertilizao significativamente
maior para desova natural (91,6 12,9%) quando comparada com desova induzida (79,3
15,6%). Turano et al. (2000) tambm obtiveram sucesso na reproduo da guaiba, Ocyurus
chrysurus, alimentando os reprodutores com lula, sardinha e camaro. Estes autores
salientaram a importncia da variedade de itens alimentares na dieta dos reprodutores que
apresentaram reduo na qualidade da desova quando alimentados somente com lula.
Fernndez-Palacios et al. (1997) demonstraram em seu trabalho um aumento na qualidade dos
ovos quando os reprodutores de Sparus aurata so alimentados com raes contendo a frao
insolvel da farinha de lula, em termos de fecundidade relativa, porcentagem de ovos viveis
e taxa de fertilizao.
Bourque e Phelps (2007) relataram que a porcentagem de ovos com uma gotcula
de leo variou entre 83% e 99,6% (91,2 2,2%) para Lutjanus campechanus. Estes
pesquisadores argumentaram que a quantidade de ovos com uma gotcula de leo no reflete a
qualidade da desova uma vez que foram observadas altas taxas de ecloso, baixa incidncia de
larvas com deformidades e boa sobrevivncia em desovas com grande nmero de ovos com
mltiplas gotculas de leo. Tais observaes esto de acordo com o observado no presente
estudo onde os maiores valores de taxa de ecloso (87,91 21,20%) e de sobrevivncia
36HAE (47,67 22,27% em aqurios transparentes e 57,63 19,37% em aqurios pretos)
foram encontrados na desova que apresentou a menor porcentagem de ovos com uma gotcula
de leo (68%). Por outro lado, mltiplas gotculas de leo parecem ser indicadoras de
qualidade da desova em se tratando outras espcies de peixes marinhos, uma vez que
Fernndez-Palacios et al. (1995, 1997) associam esta caracterstica a concentraes de cidos
graxos altamente insaturados (HUFA) da srie mega trs ( 3) abaixo das requeridas para
reprodutores de Sparus aurata. A taxa de fertilizao parece ser uma possvel indicadora da
qualidade dos ovos em salmondeos, contudo este fato no sempre correlacionado
qualidade de ovos de demais espcies de peixes de gua salgada (KJRSVIK et al., 2003),
como observado para L. campechanus por Bourque e Phelps (2007) e para L. synagris no
presente estudo. Estes ltimos pesquisadores acrescentaram ainda que, alm da taxa de
fertilizao, a porcentagem de ovos flutuantes e o dimetro dos ovos tambm so ineficazes
como indicadores da qualidade dos ovos em lutjandeos. Entretanto Papanikos et al. (2003),
65
relataram que larvas com maiores gotculas de leo possuem maiores chances de sobreviver
ao incio da alimentao exgena. Os melhores indicadores da qualidade dos ovos para
lutjandeos, por sua vez, parecem estar mais relacionados ao processo de maturao dos
reprodutores como tamanho do tanque, densidade de estocagem, qualidade de gua,
temperatura, fotoperodo e alimentao e ao processo de induo/reproduo em si como a
escolha dos reprodutores, o manejo adequado e a poca do ano. Phelps et al. (2009),
concordam com esta afirmao ao declararem que parte da dificuldade associada qualidade
das larvas resulta da qualidade do estoque reprodutor e ao processo de reproduo.
A qualidade dos ovos de peixes pode ser afetada, segundo Kjrsvik et al. (2003),
pela idade da fmea e o fator de condio, a poca do ciclo reprodutivo, processo de
maturao, fatores genticos e tambm por propriedades intrnsecas ao ovo. Estes autores
afirmaram que a anlise conjunta entre a fertilizao e a simetria das clulas durante os
primeiros estgios de clivagem do ovo (blastmeros normais) pode ser considerado como um
indicador da qualidade da desova para peixes marinhos de uma maneira geral. Eles ainda
relataram que esta caracterstica inicial da qualidade dos ovos se refletiu quantitativa e
qualitativamente nas larvas e em seu desenvolvimento at a fase de juvenil para Scophthalmus
maximus.
O valor do coeficiente de alometria (b) obtido pela equao da relao
peso/comprimento permitiu o clculo do fator de condio alomtrico. De acordo com
Vazzoler (1996), o fator de condio um indicador quantitativo do grau de higidez ou de
bem estar do peixe, refletindo as condies alimentares recentes e/ou os gastos de reservas em
atividades cclicas, possibilitando relaes com condies ambientais e aspectos
comportamentais da espcie. No presente estudo, o fator de condio alomtrico apresentou
valor mdio de 0,95 0,10 para fmeas 1,00 0,10 para os machos. Dentre os trabalhos
desenvolvidos com o ariac (ALEGRA; MENEZES, 1970, ACOSTA; APPELDOORN,
1992, GESTEIRA; ROCHA, 1976, CLARKE et al., 1997, SOUSA JNIOR et al., 2008) no
foi reportado em nenhum deles o clculo do fator de condio dos indivduos. Entretanto
devido os reprodutores de ariac do CEAC apresentarem boas condies de sade e terem
respondido positivamente s indues hormonais podemos inferir que os valores encontrados
quantificam uma condio saudvel para os animais. Contudo, recomendada a avaliao do
fator de condio em um nmero mais expressivo de indivduos para que um valor mais
confivel seja estabelecido.
O valor do coeficiente de alometria para L. synagris (3,2356) est em consonncia
com o valor encontrado para outras espcies de lutjandeos nos trabalhos de Castillo-
66
Vargasmachuca et al. (2007) com L. guttatus (3,1452), Ximenes e Fonteles Filho (1988) com
L. purpureus (2,995), Benetti et al. (2002) com L. analis (3,11 e 3,22), Freitas (2009) tambm
com L. analis (3,201) porm acima do valor encontrado para L. synagris (2,75) por Acosta e
Appeldoorn (1992). Valores de b maiores que 3,0 indicam um crescimento alomtrico
positivo, ou seja, h um maior incremento em comprimento quando comparado ao peso.
Valores de b menores que 3,0 indicam um crescimento alomtrico negativo, o que significa
dizer que o peso o fator preponderante. O crescimento isomtrico (b = 3,0), por sua vez,
indica igual contribuio das variveis biomtricas (LE CREN, 1951).
Um dos aspectos mais importantes na produo de larvas a produo de ovos
fertilizados que iro gerar larvas com altas taxas de sobrevivncia e crescimento. Alguns
componentes presentes na alimentao influenciam de maneira decisiva a qualidade da desova
em vrias espcies e a deficincia desses nutrientes nas dietas dos reprodutores diminui a
qualidade de ovos e larvas (FURUITA et al., 2000). Durante o ciclo de maturao gonadal de
telesteos, as fmeas do estoque reprodutor possuem grandes requerimentos por micro e
macro nutrientes que sero disponibilizados para o desenvolvimento dos ovcitos e
vitelognese. Isto envolve uma adequada alimentao no perodo reprodutivo, alm da
mobilizao de nutrientes previamente estocados (perodo pr-reprodutivo) (BRUCE et al.,
1999). Furuita et al. (2000) evidenciaram em seu trabalho que o requerimento por 3
HUFA aumenta durante o perodo reprodutivo em fmeas de Paralichtys olivaceus uma vez
que ocorre um redirecionamento das reservas de seus corpos para a produo de ovos. Desde
que se evidenciou a importncia da nutrio no perodo pr-reprodutivo, diversos trabalhos
vm sendo publicados sobre os requerimentos nutricionais referentes a protenas e,
principalmente, cidos graxos essenciais altamente insaturados (HUFA; highly unsaturated
fatty acid) das sries mega 3 ( - 3) e mega 6 ( - 6) (SARGENT et al., 1995, BRUCE et
al., 1999, FURUITA et al., 2000, WATANABE; VASSALLO-AGIUS, 2003).
Os lipdeos so uma importante fonte de nutrientes responsveis pelo sucesso no
desenvolvimento embrionrio de peixes (SARGENT et al., 1995). Bruce et al. (1999) e
Furuita et al. (2000) afirmaram ao longo de seus trabalhos que o cido eicosapentanico (20:5
- 3; EPA) e o cido docosahexanico (22:6 - 3; DHA) esto entre os nutrientes mais
importantes na dieta de reprodutores marinhos. Estes compostos possuem importante papel na
formao dos tecidos neural e ocular na fase embrionria (BRUCE et al., 1999).
Consequentemente, qualquer deficincia destes compostos pode ocasionar anormalidades no
sistema neural, bem como deficincias visuais, limitando o sucesso na visualizao e captura
da presa durante o perodo larval. O requerimento por cidos graxos essenciais como um
67
68
contudo, relataram desovas sucessivas seguida de uma nica induo como foi observado no
presente estudo.
Durante os dias em que se seguiram as desovas sucessivas foi observado um
aumento gradativo no dimetro dos ovos/vulos liberados pela fmea. Este aumento de
volume dos ovos/vulos (maior dimetro) observado ao longo das desovas sucessivas para
ambos os protocolos avaliados se deveu, segundo Bourque e Phelps (2007), a um maior
tempo de hidratao dos ovcitos no ovrio. Porm, este tempo adicional no se refletiu em
aumento de volume das gotculas de leo que permaneceram com iguais volumes ao longo
das desovas sucessivas com exceo das gotculas dos ovos flutuantes do Protocolo 70/30 que
apresentaram uma tendncia crescente. Seria de se esperar, neste caso, que o aumento do
volume dos ovos/vulos somado estagnao do volume de suas respectivas gotculas
ocasionasse uma maior taxa de afundamento dos ovos. Contudo, Carnevali et al. (1999)
estudando a biologia reprodutiva do Sparus aurata, postularam que a flutuabilidade est mais
relacionada ao teor de gua nos ovos determinado no ovrio durante o processo de hidratao
e hidrlise protica que ocorre no final da maturao do ovcito. Estes pesquisadores
apontaram ainda este processo como o evento-chave na reproduo desta espcie uma vez que
a flutuabilidade dos ovos determina o sucesso da disperso pelas correntes martimas. Outros
fatores tambm contribuem para uma maior ou menor flutuao dos ovos, dentre eles, a
salinidade. Shi et al. (2008) observaram que a flutuabilidade de ovos de Pampus
punctatissimus decrescia com a diminuio da salinidade. Nenhum ovo flutuante foi
observado por estes pesquisadores em salinidades inferiores a 20 ppt, enquanto que todos os
ovos flutuaram em salinidade igual ou superior a 30 ppt e flutuabilidade neutra foi constatada
entre 25 e 29 ppt.
O perodo de incubao para o ovo do ariac apresentou uma moda de 16 horas
sob temperatura mdia de incubao de 29,7 0,5 oC e o comprimento padro da larva recm
eclodida foi de 2,22 0,16 mm. Clarke et al. (1997) estudando a morfologia de larvas de
Lutjanus synagris ao longo do desenvolvimento embrionrio relataram comprimentos padro
que variaram de 2,0 a 2,2 mm para a larva recm eclodida. Em temperatura dois graus inferior
(27,7 oC) ao do presente estudo, Watanabe et al. (1998) observaram perodo de incubao de
17h para L. analis. Estes pesquisadores relataram comprimento padro acima do observado no
presente estudo, contudo a medio por eles realizada (2,66 mm) ocorreu no segundo dia aps
a ecloso. Dumas et al. (2004) relataram comprimento padro de larva recm eclodida de L.
peru de 1,85 mm e 2,83 mm dois dias aps a ecloso. Ibarra-Castro e Duncan (2007)
declararam ter observado comprimento padro de larvas de L.guttatus de 2,14 0,21 mm.
69
Papanikos et al. (2003) apresentaram valores de 2,2 0,1 mm em desova natural e 2,1 0,1
mm em desova induzida em seu estudo com L. campechanus. Cabrera et al. (1997)
encontraram as maiores variaes em comprimento padro de larvas recm eclodidas para L.
griseus com valor mnimo de 1,87 mm e mximo de 2,33 mm.
Dentre os parmetros de marcada importncia dentro de um laboratrio de
reproduo e larvicultura de peixes esto a taxa de ecloso e a sobrevivncia das larvas nos
primeiros dias de vida, quando se inicia a alimentao exgena. As taxas de ecloso
encontradas no presente estudo para os Protocolos 50/50 e 70/30 (69,80 27,40% e 66,42
24,62%, respectivamente) foram superiores quela encontrada por Papanikos et al. (2003) na
desova induzida de L. campechanus utilizando 1.100 UI de hCG kg-1 (53,2 28,7%), contudo
foram inferiores aos valores observados para as desovas naturais (83,6 9,5%) neste mesmo
estudo. Em estudo comparativo entre desovas induzidas decorrentes de injeo de hormnio
exgeno e desova natural, Emata (2003) avaliou o efeito da gonadotrofina corinica humana
(hCG) e do anlogo do hormnio liberador do hormnio luteinizante (LHRHa) em
reprodutores de L. argentimaculatus. O pesquisador citado acima no obteve sucesso com
doses de 500 UI de hCG kg-1, contudo doses de 1.000 e 1.500 UI de hCG kg-1 e 100 g de
LHRHa kg-1 produziram desovas cujas taxas de ecloso foram de 45,9 7,43%, 27,3 9,3%
e 45,8 13,1%, respectivamente, enquanto que para desova natural a taxa foi de 68,7 0,8%.
O referido estudo mostrou ainda uma maior eficincia do hCG (acima de 50% das indues
com produo acima de um milho de ovos) em relao ao LHRHa (30% das indues acima
de um milho de ovos). Ainda segundo o observado por Emata (2003) outros parmetros
referentes qualidade da desova como porcentagem de larvas normais e a sobrevivncia
acumulada (produto da taxa de ovos viveis, ecloso e larvas normais) so significativamente
maiores em desovas naturais. Contudo, a reproduo induzida hormonalmente possui como
vantagem sobre as desovas naturais o fato de poder ser programada para a data desejada de
acordo com a demanda (WATANABE et al., 1998, PHELPS et al., 2009), alm de tambm
ser uma boa fonte de ovos e larvas de qualidade. Para as espcies que desovam
espontaneamente em condies de cativeiro o momento exato da desova frequentemente
imprevisvel e problemas como disponibilidade de ovos e larvas so restritivos produo em
escala (MARTE, 1990). Por outro lado, temos que os resultados obtidos por meio de desova
induzida hormonalmente so mais variveis (PAPANIKOS et al., 2003, PHELPS et al., 2009,
TURANO et al., 2000) como pode ser observado nos dados acima deste e dos demais estudos
apresentados.
70
71
CONCLUSES E RECOMENDAES
72
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