MICROBIOLOGIA

GENERAL
TRABAJO PRACTICO N 2
CRECIMIENTO MICROBIANO
CURVA DE CRECIMIENTO

Bibliografa

Captulos 5 y 6

Objetivos
Analizar el crecimiento bacteriano en distintas condiciones de
cultivo y utilizando distintas tcnicas de uso frecuente en el
laboratorio de microbiologa.
Analizar el crecimiento bacteriano midiendo la densidad
ptica y mediante el recuento de colonias a distintos tiempos
de incubacin.
Graficar los datos experimentales a fin de obtener la curva
de crecimiento para cada cultivo.
Curva de crecimiento diaxica.
Correlacionar temporalmente el crecimiento diaxico con
los eventos que ocurren a nivel molecular en la regulacin del
opern lac.

Crecimiento microbiano
Temperatura
Oxgeno
pH
Osm.
Aw
Presin
Radiacin

-Macro y micro
nutrientes

Condiciones
Ambientales

Prod. de E

Nutrientes
-Aportados por el
medio de cultivo

Sntesis
macromol
macromolculas

Crecimiento
celular

Divisi
Divisin celular

Crecimiento de la poblacin

Curva de crecimiento

Las cuatro fases de la curva

de crecimiento
Fase de crecimiento
exponencial

Parmetros matemticos para

evaluar el crecimiento microbiano

Tasa de crecimiento (k):

Tiempo de generacin (g):

Ejemplo:
Cultivo bacteriano que pasa de 1 x 103 a 1 x 109 en 10 horas.
Calcular k y g.

Medicin del
crecimiento microbiano

Diauxie (crecimiento diaxico)

Patrn de crecimiento microbiano bifsico que tiene lugar
cuando hay presentes dos sustratos diferentes que
pueden ser utilizados como fuente de carbono (por
ejemplo, glucosa y lactosa).
Este tipo de crecimiento microbiano es debido a la
utilizacin secuencial de las distintas fuentes de carbono.
El metabolismo del microorganismo es selectivo para uno
de los sustratos: primero utiliza el sustrato que permite un
crecimiento ms rpido y cuando este se agota comienza
a metabolizar el otro.

Curva de crecimiento diaxica

glucosa + lactosa: primero utiliza la glucosa y luego

lactosa; notar la fase lag interna o intermedia.

Jacques Lucien Monod (February 9, 1910 May 31,

1976).
J. L. Monod acu el trmino francs diauxie en el ao
1941 para describir el crecimiento de Escherichia coli y
Bacillus subtilis en un medio definido conteniendo una
mezcla de distintos azcares.
Posteriormente, basndose en el modelo de crecimiento
diaxico de E. coli propuso el modelo de regulacin de
expresin del opern lac.
Recibi el premio Nobel de
Fisiologa o Medicina en 1965
(compartido con Franois
Jacob y Andre Lwoff).

Transcripcin: the players

-RNA polimerasa
-Promotor
-Protenas reguladoras--reguladores positivos y negativos
-Secuencia Shine-Dalgarno sobre el transcripto (traduccin)

Induccin / inhibicin
Aumento/reduccin de la expresin gnica como
consecuencia de un cambio en el ambiente (por
ejemplo; nutrientes en el medio, temperatura,
osmolaridad, fase de crecimiento).
Sustrato-----> expresin de las protenas requeridas para
el metabolismo (por ejemplo, lactosa).
Concentracin de un metabolito esencial (por ejemplo.
Fe+3; aminocidos) regula la expresin de las protenas
necesarias para incorporarlos o sintetizarlos. Reduccin
o inhibicin de la expresin cuando la concentracin es
alta e induccin cuando es baja.
Expresin de factores de virulencia inducida por
contacto con el hospedador.

Regulacin coordinada
La expresin de varios genes puede ser controlada
en forma simultnea.
Opern: dos o ms genes que se transcriben a partir
del mismo promotor y cuya expresin es controlada por
las mismas protenas reguladoras.
Reguln: set de genes (y/o opernes) que se
transcriben a partir de distintos promotores, pero su
expresin es controlada por las mismas protenas
reguladoras.

Gen, opern, reguln...

Opern:

lac, trp

Reguln:

fur

Ejemplo: opern lac

Regulacin transcripcional

Genes: metabolismo lactosa

Operador: sitio donde se une la protena reguladora, en este caso

el producto del gen lacI; generalmente se superpone con el promotor
impidiendo de esta manera la unin de la ARN polimerasa.

Ejemplo: opern lac

Elementos regulatorios
Protenas de control negativo
(inhibidores): reduccin de la
transcripcin.
Protenas de control positivo
(activadores): induccin de la
transcripcin.

Elementos regulatorios
Dos protenas reguladoras alostricas
regulan la expresin del opern lac:
LacI ------ alolactosa: regulador negativo
CRP ------ AMPc: regulador positivo

Control negativo
Control Negativo: la unin de la protena inhibitoria LacI asegura la
inhibicin de la expresin del opern lac cuando no hay lactosa
disponible.
-La unin de LacI al operador (O) bloquea la unin de la ARN polimerasa
al promotor (P) inhibiendo la transcripcin del opern lac.
-La protena LacI (codificada por el gen lacI) tiene 4 subunidades
idnticas. La unin a LacI al efector alostrico alolactosa (derivada de la
lactosa) disminuye la afinidad de unin de LacI al operador (O).
-LacI se une al sitio O cuando no hay lactosa presente (y, por lo tanto,
tampoco alolactosa). Resultado, no hay transcripcin del opern lac.
-Cuando hay lactosa disponible, la alolactosa se une a LacI produciendo
un cambio conformacional de la protena regulatoria y esta ya no se une
al sitio operador. Resultado, se transcribe el opern lac.

alolactosa

galactosa-(1-4)-glucosa

galactosa-(1-6)-glucosa

La lactosa, una vez en el citoplasma bacteriano, es

transformada en alolactosa por la -galactosidasa.

Control positivo
Control positivo: asegura que la transcripcin del opern lac
se mantenga en un nivel muy bajo (basal) cuando hay
glucosa disponible.

La protena reguladora, CRP (Catabolite Regulatory Protein; or the

Catabolite Activator Protein or CAP) es un regulador global que
afecta la expresin de varios promotores. Su unin depende de la
concentracin del efector, AMPc.

La concentracin de AMPc es baja cuando hay glucosa disponible

(el transporte de glucosa inhibe la enzima adenilato ciclasa, PTS
transport system), y alta cuando no hay glucosa.

La unin del complejo protena CRP:AMPc facilita la unin de la

ARN polimerasa y la iniciacin de la transcripcin de varios
opernes, incluido el opern lac, que codifican para las protenas
necesarias para el metabolismo de distintos azcares.

Sistema de fosfotransferencia dependiente de fosfoenolpiruvato (PTS)

-El transporte de glucosa modula la concentracin interna de AMPc.

-El complejo CRP:AMPc activa la expresin del opern lac (y otros).
-Azcares includos: glucosa, fructosa, manosa, galactitol, manitol, sorbitol,
xilitol y N-acetilglucosamina.

El opern lac y sus elementos de control

Resumiendo