UNIVERSIDAD DE CARTAGENA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS

QUMICA FARMACUTICA
LABORATORIO DE TOXICOLOGIA
DETERMINACIN DE HIERRO EN SUERO SANGUNEO POR
ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCIN ATMICA
INTEGRANTES: BELEO TAPIA JHEISON, ESALAS BERRIO HERNAN,
HERNNDEZ GUERRERO JORGE, MUOZ GARCA MARCOS.
RESUMEN
Algunas intoxicaciones por metales no estn relacionadas con el mundo industrial,
como puede ser el caso de la intoxicacin por Hierro (Fe), que principalmente se
toma casi siempre a partir de preparados farmacolgicos, en forma aislada o como
polivitamnicos. Pese a esta fuente de txico tan limitada, la intoxicacin por Hierro
contina siendo un problema comn y grave dentro de las intoxicaciones
accidentales.
En esta prctica se realiz la determinacin de hierro presente en muestras de
suero sanguneo por medio del mtodo de Espectrofotometra de Absorcin
Atmica, utilizando la tcnica de llama. Para este anlisis se realiz una curva de
calibracin, en el que se usaron estndares de (0.5, 1.0, 2.0 y 4.0) mg/L. Por
medio de la ecuacin de la recta y teniendo en cuenta el factor de dilucin se
determinaron las concentraciones de hierro en cada una de las muestras de suero
sanguneo analizadas, donde se encontr que las muestras 1 y 11 estaban en
valores por debajo de los normales de hierro srico; las muestras 3, 5, 7, 8 y 14
estaban dentro del rango de valores normales de hierro srico y las muestras 4, 10
y 12 estaban dentro del rango de toxicidad leve.
INTRODUCCIN
El Hierro es un elemento imprescindible para la vida, no solo por su participacin
en la respiracin humana sino tambin por ser un constituyente clave de un gran
nmero de enzimas. Ingresa al organismo con el sustento diario en cantidad
variable, segn el alimento y el hbito diettico. (Fernndez, 2012)
Un adulto normal, en equilibrio nutricional, tiene un contenido total de hierro de 4,0
g. Aproximadamente 3,0 g circulan por la sangre, en su mayor parte como
hemoglobina en los glbulos rojos y en menor proporcin unido a la transferrina y
alrededor de 0,8 a 1,2 g se encuentra en depsitos tisulares unido principalmente

a la ferritina y menos a la hemosiderina. (Prez, Vittori, Pregi, Garbossa & Nesse.,

2005, p.301)
Entre las numerosas tcnicas analticas existentes, la tcnica de
Espectrofotometra de Absorcin Atmica es la ms empleada en el mbito clnico
para el anlisis elemental.
Esta tcnica consiste en la medicin de las especies atmicas por su absorcin a
una longitud de onda particular. Entre las ventajas tenemos su bajo costo,
simplicidad y alta sensibilidad. Aparte presenta buenos lmites de detencin para
un gran nmero de elementos. (Fernndez, 2012)
El objetivo del presente informe fue la determinacin directa de la concentracin
de Hierro presente en las muestras de suero sanguneo, mediante la tcnica de
Espectrofotometra de Absorcin Atmica, con la finalidad de comparar con los
valores de referencias y poder afirmar si las muestras se encontraban por debajo
de los valores normales o por encima, siendo en algunos casos txicos
dependiendo de la concentracin.
OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentracin de Hierro presente en las muestras de suero
sanguneo mediante la tcnica de Espectrofotometra de Absorcin
Atmica, con el fin de comparar con los valores de referencias.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Capacitar al alumno para que determine y maneje los resultados de Hierro
en suero sanguneo.
Conocer y manipular el espectrofotmetro para determinar absorbancias de
las muestras de suero sanguneo contaminadas con Hierro.
Profundizar en la Toxicologa de hierro
Comparar los resultados de las concentraciones de hierro determinadas en
las muestras de suero sanguneo.
METODOLOGIA
Preparacin de reactivos y estndares para la elaboracin de la Curva de
Calibracin:
En primer lugar se procedi a preparar la solucin de cido Tricloroacetico (TCA)
10% p/v, pesando 10 g de TCA, los cuales se agregaron en un baln aforado de
100 mL y se complet volumen con agua destilada.

Preparacin de estndares: Se parti de una solucin stock de Hierro de 1000

mg/L, y se diluy hasta 50 mg/L; tomando una alcuota de 2,5 mL; con la ayuda de
una pipeta de escala graduada de 5 mL, transfirindola a un baln de 50 mL, y
completando volumen con agua destilada.
A partir de la solucin de 50 mg/L se prepararon cuatro soluciones de
concentraciones de 0.5, 1.0, 2.0, y 4.0 mg/L; tomando alcuotas de 0.5, 1, 2 y 4 mL
respectivamente de la solucin intermedia (50 mg/L), y cada una de ellas fue
agregada en balones de 50 mL. A cada una de las soluciones se le agregaron 25
mL de la solucin de TCA y se complet el volumen hasta el aforo con agua
destilada.
Preparacin blanco de reactivos: en un baln de 50 mL; se agregaron 25 mL de
solucin TCA y se llev hasta el aforo con agua destilada.
Preparacin de las muestras: fueron 14 muestras en total, de las cuales fueron
asignadas al grupo los nmeros 12 y 5.
En primer lugar se agregaron 4 mL de muestra de suero ms 4 mL de solucin
TCA a un tubo de centrifuga de 10 mL, cuyo valor de factor de dilucin (Fd) fue 2 y
se centrifug a 3000 RPM por 10 minutos.
Una vez transcurrido el tiempo de centrifuga, se calent en bao de Mara a 90 C
por 15 minutos.
El sobrenadante que se obtuvo en la segunda centrifugacin, se llev a tubos de
ensayo limpios; aspirando la mayor cantidad posible directamente desde el tubo
de centrifuga con la ayuda de una pipeta de escala graduada de 5mL. Finalmente
sta muestra se aspir directamente desde el equipo de Absorcin Atmica.
Calibracin del equipo: las condiciones de operacin con las cuales se realiz la
curva de calibracin y el anlisis de las muestras de suero fue el siguiente;
Longitud de onda: 248,9 nm
Slit Width: 0,7 nm
Llama: Aire-Acetileno oxidante (llama azul)
Equipo utilizado: Espectroscopia de Absorcin Atmica
Modo de seal: concentracin
Sensibilidad: 0,2 4,0 mg/L
RESULTADOS Y DISCUSIN

En la Tabla 1, se muestra los valores de las absorbancias de cada uno de las

concentraciones de las soluciones de Hierro utilizadas para la elaboracin de la
curva de calibracin

Tabla 1. Concentracin de los estndares de trabajo de Hierro y valores de las

absorbancias.
Tipo de muestra

Concentracin de
referencia (mg/L)

Valores de
absorbancias

En la
Figura
1
se

Blanco
0,0
0,0030
Estndar 1
0,5
0,0215
Estndar 2
1,0
0,0381
Estndar 3
2,0
0,0681
Estndar 4
4.0
0,1316
aprecia el grafico de la absorbancia Vs la concentracin de las soluciones de
Hierro empleadas como patrones, para la elaboracin de la curva de calibracin y
la ecuacin que describe el grfico

Curva de Calibracin de Hierro

0.14
0.12

f(x) = 0.03x + 0
R = 1

0.1
0.08
Absorbancias

0.06

Linear ()

0.04
0.02
0
0

0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

Concentracin (mg/L)

Figura 1. Curva de Calibracin de Hiero.

Se observa en la Figura 1, que el Coeficiente de correlacin (0,9994) es bastante
cercano a 1, el cual nos garantiza un curva de calibracin idnea y confiable para
emitir una decisin.
En la tabla 2; se registran los valores de las concentraciones de las 14 muestras
analizadas, utilizando el equipo de Espectroscopia de Absorcin Atmica

disponible en el laboratorio. La concentracin original; se obtuvo multiplicando la

concentracin diluida por el factor de dilucin que fue de 2.

Tabla 2. Valores de las absorbancias, de las concentraciones diluidas y

concentradas de Hierro, de las muestras de suero sanguneo analizadas.
Muestras
Absorbancias
Concentracin de
Concentracin de
Hierro en muestras
Hierro en muestras
diluidas (mg/L)
concentradas (mg/L)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

0,0113
0,0512
0,0162
0,0693
0,0150
0,0558
0,0323
0,0277
0,0447
0,0633
0,0113
0,0625
0,0338
0,0176

0,2064
1,461
0,3597
2,091
0,3227
1,6033
0,8668
0,708
1,2554
1,8396
0,206
1,8154
0,9124
0,405

0,4128
2,922
0,7194
4,182
0,6454
3,2066
1,7336
1,416
2,5108
3,6792
0,412
3,6308
1,8248
0,81

Las muestras sealadas en negro (1 y 11) se encuentran en valores por debajo de

los normales de hierro srico, lo cual se podra explicar por una dieta pobre en
este metal o el consumo de diferentes fuentes de calcio, los cuales producen un
efecto inhibitorio sobre la absorcin de hierro (Minotti y col. 1993)
Las muestras sealadas en azul (3, 5, 7, 8 y 14) se encuentran dentro del rango
de valores normales de hierro srico, que va desde 0,5 1,75mg/L. Lo cual nos
indica que estos pacientes no presentan ningn estado patolgico donde se vea
alterada la absorcin o eliminacin del hierro que obtienen de la dieta.
Las muestra sealadas en verde (2, 6, 9, y 13) se encuentran dentro del rango de
valor no txico que va desde 1,75 3,5 mg/L. Lo cual nos indica que estos
pacientes tienen un exceso de hierro srico que no compromete la salud, puesto
que es normal que el metal se encuentre unido a la transferrina.
Las muestras sealadas en rojo (4, 10 y 12) se encuentran dentro del rango de
toxicidad leve, lo cual nos indica que estos pacientes presentan un estado

patolgico donde se ve alterada la eliminacin del hierro; tales como anemia

ferropenica (Minotti y col. 1993), o en su defecto estn consumiendo un
suplemento multivitamnico fortificado con hierro, lo cual causa este aumento del
hierro srico.
CONCLUSIONES
En esta prctica aprendimos a realizar una determinacin de Hierro en
suero sanguneo. Los resultados obtenidos nos permiten concluir que la
Espectrofotometra de Absorcin Atmica es una tcnica eficaz para la
determinacin de hierro que puede ser muy til en el mbito clnico para
evaluar pacientes que se encuentren o no intoxicados con Hierro.
El anlisis de las muestras no arrojan resultados de toxicidad severa ni
tampoco letal.
Es importante monitorizar el hierro srico en caso de pacientes con
enfermedades hepticas que son sometidos a dilisis, anemia por
enfermedad crnica, la transferrina srica y la capacidad total de fijacin del
hierro son bajos o normales. La transferrina disminuye con muchas
enfermedades inflamatorias. Con la enfermedad crnica existe un bloqueo
en el transporte y utilizacin del hierro por la medula sea. Esto indica el
hierro srico bajo y disminuye la eritropoyesis.
BIBLIOGRAFIA
Fernandez, S. (2012). Determinacin de hierro en muestras biolgicas.
Trabajo de grado. Universidad de Oviedo, Espaa.
Prez G, Vittori D, Pregi N, Garbossa G, Nesse A. Homeostasis del hierro.
Mecanismos de absorcin, captacin celular y regulacin. Acta Bioqum
Cln Latinoam 2005; 39 (3): 301-314.