EXPERIMENTO DE DROSOPHILA MELANOGASTER

INTRODUCCIN:

La Drosophila Melanogaster es un insecto dptero de la familia

Drosophilidae. Es fcil de observar, con frecuencia se encuentra cerca de
donde haya frutas dulces maduras. Por ello, tambin se le conoce como mosca
de las frutas. Su uso en el laboratorio de Gentica empieza en 1906, cuando
W.E. Castle y Woodworth de la Universidad de Harvard, se dan cuenta de que
se pueden cultivar con facilidad. Morgan la utiliza en sus estudios acerca de la
teora cromosmica de la herencia, y desde ese momento ha sido utilizada
ampliamente en los laboratorios de Gentica de todo el mundo. Incluso ha sido
usada por la NASA en pruebas en el espacio extraterrestre.
El propsito del presente trabajo prctico es que usted se familiarice con la
biologa general de la Drosophila Melanogaster y con sus principales tcnicas
de manejo; para que de esta forma comprenda porque es utilizada como
modelo biolgico.

OBJETIVO GENERAL
Valorar el uso de la Drosophila Melanogaster como modelo biolgico en la
investigacin en Gentica.

OBJETIVOS ESPECFICOS
Entender los principios de la transmisin de los caracteres hereditarios y
comprobar las leyes de Mendel.
Determinar las caractersticas morfolgicas externas de la Drosophila
Melanogaster adulta.
Comparar las diferencias anatmicas entre hembras y machos de esta
especie.
Identificar las diferentes etapas del ciclo vital de D. Melanogaster.
Analizar como es el proceso selectivo de las generaciones en F1 Y F2 de las
leyes mendelianas.

MARCO TERICO

El gnero Drosophila contiene unas 2000 especies, bastante diversas en cuanto

a hbitat, morfologa, comportamiento, etc. Entre ellas la ms conocida es
Drosophila Melanogaster, que es una de las especies ms estudiadas. Su
genoma fue secuenciado en el ao 2000 (fue el 2 organismo eucariota que se
consigui obtener tras C. elegans) y actualmente estn llevndose a cabo las
secuenciaciones del genoma de otras 20 especies del gnero.
Se trata de un gnero parafiltico, que se divide en 2 subgneros: Drosophila y
Sophophora. En este ltimo se encuentra el grupo Melanogaster, incluyndose
en l la mayora de las especies que se usan en este estudio.
Los drosoflidos estn distribuidos por todo el mundo, en hbitats tan variados
como desiertos, ciudades, bosques, zonas alpinas... si bien hay mayor nmero
de especies en las zonas tropicales.

Por qu se usa Drosophila en investigacin?

es fcil de manipular y su coste de mantenimiento es bajo.

su ciclo biolgico est muy bien definido, y su tiempo de generacin es

corto, de unos 10 das.
adems es un modelo eucariota, de alta complejidad, pero con slo 4
cromosomas y con estadios germinales equiparables a los de mamferos.

su metabolismo tambin es parecido a mamferos.

hay infinidad de mutantes descritos con multitud de manifestaciones

fenotpicas.
en el aspecto ms puramente gentico tambin presenta varias ventajas:
su genoma est muy estudiado, se pueden obtener fcilmente los cromosomas
politcnicos, que se ven fcilmente al microscopio y permiten un estudio
detallado a nivel citogentico.

CICLO DE VIDA DE LAS DROSOPHILA

Metamorfosis
El desarrollo embrionario que sigue a la fertilizacin y a la formacin del cigoto
se produce por Ovognesis La cual se lleva a cabo dentro de los ovarios
femeninos. Cada ovario contiene ms de una docena de Germania que estn
en una lnea de montaje para las cmaras de nuevo huevo: la maduracin del
ovocito se lleva a cabo dentro de un germario rodeado de clulas foliculares.
Duracin: La duracin de los estadios de la metamorfosis varia con la
temperatura (cuadro 1). Dentro de ciertos lmites, las altas temperaturas
disminuyen la duracin y las bajas la aumentan. Una exposicin continuada a
temperaturas por encima de los 30 grados centgrados puede producir
esterilizacin temporal en los machos o muerte de las moscas. A bajas
temperaturas el ciclo vital se prolonga y la viabilidad disminuye. La
temperatura dentro de un frasco de cultivo puede exceder un poco la del
ambiente debido al calor, que se desarrolla por la fermentacin de las
levaduras. La temperatura del laboratorio es muy adecuada.

El ciclo de vida de la Drosophila pasa por 4 fases diferentes:

Huevo: El huevo de Drosophila melanogaster, mide aproximadamente 0.5 mm
de longitud, el lado dorsal es ms aplanado que el ventral. La membrana
externa o corion, es opaca y tiene hexgonos dibujados en su superficie. En la
regin anterodorsal se presenta un par de filamentos que evita que el huevo se
hunda en la superficie blanda del alimento donde es depositado. El
espermatozoide penetra a travs de una pequea abertura o micrpilo en la
saliente cnica del extremo anterior, durante el recorrido que hace el
huevecillo dentro del tero. Las divisiones meiticas se realizan
inmediatamente despus de la penetracin del espermatozoide, integrndose
el ncleo del vulo (proncleo femenino). Posteriormente el ncleo del
espermatozoide y el del vulo se unen para integrar el ncleo del cigoto, que
se divide para dar los dos primeros ncleos de segmentacin, lo que
representa el estado inicial del desarrollo embrionario.

Estado larvario.
Despus de salir del huevo, la larva sufre dos mudas, por lo que el estado
larvario tiene tres estadios. En el ltimo (tercero), alcanza una longitud
aproximada de 4.5 mm. Las larvas son tan activas y voraces, que el medio de
cultivo en que viven, pronto se ve recorrido por surcos y canales, esto es la
seal ms evidente de que la nueva generacin se est desarrollando con
xito.

Las estructuras anatmicas de la larva ms importantes para la

experimentacin en gentica son:
1. Las gnadas; estn colocadas en los cuerpos grasos laterales de la porcin
posterior de la larva. Los testculos tienen mayor tamao que los ovarios, por lo
que pueden distinguirse con mayor facilidad a travs de la pared transparente
del cuerpo.
2. El ganglio cerebral; est formado por tres lbulos, se localiza en la porcin
anterior de la larva, puede identificarse con facilidad despus de disecar la
larva.
3. Las glndulas salivales, son estructuras que se observan como dos sacos
alargados, conectados al aparato mandibular de la larva. Sus clulas presentan
cromosomas politnicos o cromosomas gigantes.

4. Los discos imagales de las alas, son estructuras de forma aplanada

constituidas por clulas epiteliales que durante la metamorfosis forman las alas
del adulto. Estn situados en el tercio anterior de la larva.
5. Los discos imagales de los ojos, son estructuras de forma aplanada
constituidas por clulas epiteliales que durante la metamorfosis forman los ojos
del adulto. Estn situados en el tercio anterior de la larva.

Pupacion: La pupacin ocurre despus del tercer estado larvario. Cuando la

larva se est preparando para pupar se retira del medio de cultivo fijndose a
una superficie relativamente seca, que puede ser la pared del
frasco. Drosophila pupa dentro de la ltima cubierta larvaria que al principio es
suave y blanquecina, pero luego se hace dura y se obscurece. La pupa mide
aproximadamente 5 mm. de longitud, en este estado, la diferenciacin de
todas las lneas celulares es muy intensa. Al finalizar la metamorfosis dentro
del pupario, emerge el imago o adulto rompiendo el extremo anterior de la
envoltura puparia. Al principio, la mosca es muy alargada, con las alas an sin
extender, que en poco tiempo se extienden y gradualmente el cuerpo toma la
forma definitiva. Las moscas adultas son de color relativamente claro despus
de la emergencia y se obscurecen en las horas siguientes.

LAS DIFERENCIAS ENTRE MACHO Y HEMBRA

ESTRUCTURAS SEXUALES SECUNDARIAS

DE Drosophila melanogasterQUE AYUDAN EN EL
RECONOCIMIENTO DEL SEXO
CARACTERSTICA

HEMBRA

MACHO

Extremo del
abdomen
Aspecto del
abdomen
Nmero de
segmentos
abdominales
Patas delanteras

alargado

redondeado

abultado en la
hembra gestante

sin abultamiento

7 segmentos
visibles al
microscopio
no presenta peine
sexual

5 segmentos
visibles al
microscopio
presenta peine
sexual
(10 cerdas gruesas)

PROBLEMAS Y PLAGAS EN LOS CULTIVOS DE DROSOPHILA

Existen tambin dos tipos de plaga que pueden afectar a nuestros cultivos:

Mohos: Pueden aparecer a los pocos das de empezar el cultivo, incluso

antes de que lleguemos a ver larvas. Generalmente son mohos verdosos o
ligeramente negros, que cubren toda la superficie de la papilla. Aunque las
larvas se los comen en parte, nunca prospera un cultivo con moho igual que
uno sin l. Es mejor utilizar las moscas para alimentar y luego tirarlo: no
intentar hacer un cultivo nuevo con l: podran caer esporas de los mohos al
nuevo cultivo.
caros: sta s que es la gran plaga de los cultivos de Drosophila. Los
caros adoran la comida y la humedad, y en nuestra papilla se encuentran en
su mundo maravilloso. Las moscas adultas de un cultivo con caros pueden
llevar pegados huevos de caros, as que aunque no los veamos, podemos
tenerlos luego en el cultivo. Lo ideal es conseguir cultivos sin caros o usar
algn acaricida.
Debemos tapar bien los botes para que no puedan entrar y tener cuidado con
dnde dejamos la tapa.

EXPERIMENTOS DE CRUZA
La Drosophila resulto ser un material experimental ideal para el trabajo que
realizamos.

Todo experimento de cruza debe ser previamente planificado, anotando el

genotipo y fenotipo de los individuos a cruzar, lo que se espera obtener en F1,
en F2 y en la cruza de prueba de la F1. Estos datos constituirn luego los
"resultados esperados".
Una vez establecidos los cultivos, deben vigilarse diariamente hasta la
aparicin de las primeras pupas; en ese momento se retiran los adultos que
han dado origen al cultivo.
Al trmino de un experimento, cuando se ha completado el cuadro de datos, se
procede a elaborar los resultados: los TOTALES obtenidos para cada FENOTIPO
corresponden a los "resultados observados"; junto con las frecuencias
correspondientes a los "resultados esperados", se confecciona un cuadro para
aplicar un test de hiptesis (normalmente se utiliza Chi-Cuadrado).
Se utilizarn las siguientes mutaciones: BAR" (L) produce el fenotipo cuerpo
Largo, Alas Largas (A) "bar" (l) cuerpo corto, Alas Cortas (a). Donde la primera
est formada por dos cromosomas iguales (XX) denominadas Autosomas y
la segunda est formada por un cromosoma (X) y otro (Y), denominada
cromosoma sexual.
Normalmente se planifican cruzas recprocas, esto significa preparar dos
frascos por cada cruzamiento, del siguiente modo: 1) hembras mutantes x
machos normales y 2) hembras normales x machos mutantes. Esto permite
controlar la influencia que el sexo puede tener sobre la herencia del carcter
en estudio. No es necesario cuando se cruza F1 x F1 para obtener F2, en el
caso en que exista un solo fenotipo en F1.

Ejemplo: se realizo un cruce de especies Drosophila Melanogaster que tienen:

Cuerpo Largo (L)

Cuerpo Corto (l)

Alas Largas (A)

P1-

LLAA

G1-

LA LA

Alas Cortas (a)

llaa
x

la la

F1
Macho/Hembra

LA

LA

La

LlAa

LlAa

La

LlAa

LlAa

Resultados:
Fenotipo 100%

Cuerpo Largo, Alas Largas.

Genotipo 100%

Heterocigoto Dominante.

P2-

LlAa

G2- LA La lA la

LlAa
x

LA La lA la

F2
Macho/Hembra

LA

La

lA

la

LA

LLAA

LLAa

LlAA

LlAa

La

LLAa

LLaa

LlAa

Llaa

lA

LlAA

LlAa

llAA

llAa

la

LlAa

Llaa

llAa

llaa

Resultados:

Homocigoto Dominante:

Genotipos

Posicin

Fenotipos

LLAA

1/16

9/16 cuerpo largo, Ala

largas

LLAa

2/16

LlAA

2/16

3/16 cuerpo largo,

alas cortas

Heterocigoto Dominante

Homocigoto Recesivo

LlAa

4/16

LLaa

1/16

Llaa

2/16

llAA

1/16

llAa

2/16

llaa

1/16

3/16 cuerpo corto,

Alas largas

1/16 cuerpo Corto,

alas cortas

CONCLUSIN
Durante la realizacin de esta prctica se logro ampliar los conocimientos
previos expuestos por Gregorio Mendel, mediante el planteamiento de las leyes
y los principios de la transmisin de los caracteres hereditarios. Al mismo
tiempo y gracias al refuerzo de la mosquita Drosophila Melanogaster,
conseguimos extraer los resultados esperados bajo los parmetros estipulados
al momento de hacer los cruces con dichas mosquitas.
Despus de observar y conocer las caractersticas morfolgicas externas,
conseguimos identificar los fenotipos y las diferencias que existen tanto en las
hembras como en los machos.
Al obtener los anlisis de resultado nos permitieron identificar las diferentes
etapas en el ciclo vital de esta especie, conociendo el porqu de estos cambios
y entendimos aun ms la importancia del estudio de las generaciones a medida
que va transcurriendo el tiempo.