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ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO
CARRERA INGENIERA AGROPECUARIA
SANTO DOMINGO

Asignatura: Microbiologa

Estudiante:

Renato Andrade Cevallos

Fecha:

Mircoles 22 de mayo del 2013

Prctica No.8

1. TEMA

Tincin de Gram.
2. OBJETIVO GENERAL

Conocer las tcnicas de preparacin y observacin microscpica de bacterias.

3. OBJETIVOS ESPECFICOS:

Aprender a desarrollar de manera adecuada la tincin de Gram

Observar y diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Estudiar las caractersticas morfolgicas de diferentes gneros de bacterias
Determinar la reaccin Gram negativa y positiva de bacterias.
4. REVISIN DE LITERATURA

La tincin de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX. La
Tincin de Gram (o mtodo de Gram) es un mtodo para diferenciar especies
bacterianas en dos grandes grupos (Gram-positivas y Gram-negativas). El nombre
proviene
de
su
inventor,
Hans
Christian
Gram.
Tincin de Gram diferencia las bacterias por las propiedades qumicas y fsicas de sus
paredes celulares mediante la deteccin de peptidoglicano, que est presente en una
capa espesa en las bacterias Gram positivas. Los resultados Gram positivos se denotan
por un color prpura / azul, mientras que las gram negativas son rosa / rojo.
La tincin de Gram es casi siempre el primer paso en la identificacin de un organismo
bacteriano. Mientras que la tincin de Gram es una herramienta de diagnstico valiosa,
tanto en entornos de investigacin clnica, no todas las bacterias pueden ser clasificadas
definitivamente por esta tcnica. Esto da lugar a grupos de Gram-variables y Gramindeterminado. (Forbes, 2009)
La Tincin de Gram es una tcnica de laboratorio bacteriolgico se utiliza para
diferenciar especies bacterianas en dos grandes grupos (Gram-positivas y Gramnegativas) sobre la base de las propiedades fsicas de sus paredes celulares. La Tincin
de Gram no se utiliza para clasificar las arqueas, anteriormente arqueobacterias, ya que
estos microorganismos producen muy diversas respuestas que no siguen sus grupos
filogenticos. (Cavallini, 2005 )
La tincin de Gram no es una herramienta infalible para el diagnstico, identificacin, o
filogenia, y es de uso muy limitado en la microbiologa ambiental. Se ha sustituido en
gran medida por las tcnicas moleculares, incluso en el laboratorio de microbiologa
mdica. Algunos organismos Gram son variables (que significa, que pueden manchar ya
sea negativo o positivo); algunos organismos no son susceptibles a la mancha ya sea
utilizado por la tcnica de Gram. En un moderno laboratorio del medio ambiente o la
microbiologa molecular, la mayora identificacin se realiza utilizando secuencias
genticas y otras tcnicas moleculares, que son mucho ms especfico e informativo que
la tincin diferencial. (Cavallini, 2005 )

Las bacterias Gram-positivas tienen generalmente una sola membrana rodeada por una
gruesa capa de peptidoglicano. Esta regla es seguida de dos filos-Firmicutes (a
excepcin de las clases de Mollicutes y Negativicutes) y Actinobacteria. Por el
contrario, los miembros de la Chloroflexi (bacterias verdes no del azufre) son
monodermas pero poseen una capa delgada de peptidoglicano y pueden manchar
negativo, positivo o indeterminado. Los miembros del grupo Deinococcus-Thermus,
tien positivamente. (Forbes, 2009)
Las bacterias Gram-negativas poseen generalmente una fina capa de peptidoglicano
entre dos membranas (didermas). La mayora son phyla bacteriana Gram-negativas,
incluyendo las cianobacterias, espiroquetas y bacterias verdes del azufre, y la mayora
de Proteobacteria. (EUNED, 2004)

5. EQUIPOS:

Microscopio estereoscopio
Microscopio compuesto
Estufa de incubacin
Estufa de esterilizacin
Cmara de flujo laminar
Autoclave
Cocineta elctrica
6. MATERIALES:

Cultivos bacterianos
Placas porta objeto
Laminas cubre objeto
Vasos de precipitados
Kit de diseccin
Mechero de alcohol
Platos petri conteniendo medio de cultivo
Sacabocado
Asas de inoculacin
Goteros
7. REACTIVOS E INSUMOS:

Alcohol antisptico
Agua destilada
Cristal violeta
Alcohol cetona
Yoduro de potasio
Safranina
Aceite de inmersin

8. PROCEDIMIENTO:

Tincin simple

Se limpi bien las placas portaobjeto, eliminando la grasa y pelusas. Las grasas sern
eliminadas con xilol y las pelusas haciendo una o dos pasadas de la placa por sobre la
columna de calor del mechero,
Frotis. Consiste en extender o repartir la suspensin de bacterias sobre la placa
portaobjeto, una vez que ha sido depositada la gota de agua-bacteria, ste extensin se
har con la ayuda de un asa o placa portaobjeto limpia, lo que permitir realizar una
mejor observacin
Fijacin. Fije las bacterias a la placa haciendo pasar tres veces el portaobjeto en la
llama del mechero de alcohol a una altura prudencial, para no deformar las agrupaciones
bacterianas que pudieran existir.
Tincin. emplee un solo colorante como el azul de metileno, fuscina, rojo congo,
tie la placa completamente y deje actuar el colorante por un minuto.
Retire el colorante, enjuague y luego squela a la columna del mechero de alcohol o
por simple exposicin al aire con movimientos horizontales
Agregue una gota de aceite de inmersin sobre el frotis y observe las bacterias al
microscopio, utilizando el lente hmedo o de inmersin.
Tincin Compuesta
-

Se coloc el colorante A (violeta de genciana) por espacio de medio minuto.,

elimine el exceso.
Se agreg el colorante B (solucin de yodo) por un minuto. Elimine el exceso con
leves sacudimientos de la placa o con la pisceta.
Aada la solucin C (safranina) por 30 segundos.
Se lav la placa con agua corriente y luego squela a la columna del mechero de
alcohol, o por simple exposicin al aires con movimientos horizontales.
Se agreg una gota de aceite de inmersin sobre el frotis y observe las bacterias al
microscopio, utilizando el lente hmedo o de inmersin.
9. RESULTADOS
10.

CONCLUSIONES

11.

CUESTIONARIO.

Qu es una tincin diferencial?

Defina cual es el rol de los colorantes utilizados en la Tincin compuesta
Es en la que se usa mas de un colorante, son tinciones usadas para diferenciar
estructuras bacterianas, como Schaefer-fulton para endosporas, como la tincin de Gram
para gram - y gram+.

12.

BIBLIOGRAFA

Cavallini, E. R. (2005 ). Bacteriologa General: Principios Y Prcticas de Laboratorio.

Costa Rica: Universidad de Costa Rica.
EUNED. (2004). Introduccin a la microbiologa. Reverte.
Forbes, B. A. (2009). Diagnostico Microbiologico. Mdica Panamericana.