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SUPERIORES DE ECATEPEC
DIVISIN DE INGENIERA QUMICA Y BIOQUMICA
MICROBIOLOGA
PRACTICA No. 5
CUENTA DE COLONIAS POR LAS TCNICAS DE
VACIADO EN PLACA E INOCULACIN EN
SUPERFICIE
EQUIPO 3:
GRUPO: 3551
PRCTICA No. 5
Cuenta de colonias por las tcnicas de vaciado en placa e inoculacin.
OBJETIVO:
El alumno aislar bacterias aerobias por las tcnicas de vaciado en placa e inoculacin en
superficie.
MARCO TERICO:
El crecimiento de las poblaciones microbianas puede medirse de diferentes maneras.
Alguno mtodos determinan el nmero de clulas y otros la masa total de la poblacin,
que a menudo es directamente proporcional al nmero de clulas. La magnitud de la
poblacin normalmente se registra como el nmero de clulas que hay en un mililitro de
lquido o en un gramo de material slido. Como las poblaciones bacterianas suelen ser
muy grandes la mayora de los mtodos de cuantificacin se basan en mediciones directas
o indirectas de muestras muy pequeas; despus se determina mediante clculos el
tamao de la poblacin total. Supongamos, por ejemplo, que una millonsima parte de un
mililitro (10-6 mL) de leche agria contiene 70 clulas bacterianas. Entonces debe haber 70
veces 1 milln de clulas, o sea 70 millones de clulas por mililitro.
Sin embargo, este mtodo resulta poco prctico para medir una millonsima parte de un
mililitro de lquido o de un gramo de alimento. Por consiguiente, el procedimiento se
efecta indirectamente en una serie de diluciones. Por ejemplo, si aadimos 99 mililitros
de agua, cada mililitro de esta dilucin tendr una centsima parte de las bacterias que
tena cada mililitro de la muestra inicial. Si mediante una serie de diluciones de este tipo
se puede estimar con facilidad el nmero de bacterias en la muestra original. Para
encontrar las poblaciones microbianas en alimentos slidos (como en una hamburguesa)
se realiza un homogenizado en una licuadora de alimentos con una parte de alimento y
nueve partes de agua. Despus pueden tomarse muestras de esta preparacin diluida al
10% y realizar ms diluciones o efectuar recuentos celulares.
Recuentos en placa
El mtodo utilizado con ms frecuencia para la medicin de poblaciones bacterianas es el
recuento en placa. Una ventaja importante de esta tcnica es que mide el nmero de
clulas viables. Una desventaja es que se requiere bastante tiempo, por lo general 24
horas o ms. Para que se formen colonias visibles. Esto puede plantear un grave problema
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Pese a estas dificultades, el recuento de viables suministra una buena informacin sobre
el nmero de clulas viables y este procedimiento se usa ampliamente. En la
alimentacin, industria lctea, medicina y microbiologa acutica, el recuento de viables se
emplea rutinariamente. El mtodo tiene la ventaja de una elevada sensibilidad: se pueden
contar muestras con pocas clulas, lo que permite una deteccin muy sensible de la
contaminacin microbiana de productos o materiales. Adems, el uso de medios
selectivos y de ciertas condiciones de cultivo permite contar mediante la determinacin
de viables, tipos celulares particulares en una poblacin mixta de microorganismos.
La gran anomala del recuento en placa
Aunque es una tcnica muy sensible, el recuento en placa puede ser irrealizable cuando se
trata del recuento de muestras naturales suele dar un nmero mucho mayor de
organismos que los que se obtiene en cultivo en placas de cualquier tupo de medio.
Algunos microbilogos se refieren a este hecho como la gran anomala del recuento en
placa. Por qu los recuentos directos al microscopio? Esto se debe a una combinacin
de factores, como el hecho de que los mtodos microscpicos cuentan clulas muertas,
mientras que los mtodos de viables no; y al hecho de que diferentes organismos, incluso
en una muestra muy pequea, pueden tener requerimientos nutricionales y de cultivo
muy diversos. Por tanto, aunque los recuentos en placa especficos con medios altamente
selectivos, como en el anlisis microbiano de aguas residuales o de alimentos, puede dar
resultados fiables, los recuentos del nmero total de clulas de los mismos habitad
pueden ser, y habitualmente son, subestimados en varios rdenes de magnitud.
El gnero Lactobacillus.
Caracteres morfolgicos:
En gnero Lactobacillus (lactis-leche; bacillus pequeos bacilos), se caracteriza por
presentar clulas en forma de bacilos largos y extendidos, aunque con frecuencia pueden
observarse bacilos cortos o coco-bacilos coryneformes; lo cual hace que se puedan
confundir con gnero aislados habitualmente de materiales clnicos. Estos bacilos se
presentan comnmente formando cadenas y en general son no mtiles. Son Gram
positivos y slo las clulas muertas pueden dar resultados variables a la tincin de Gram.
Adems, no esporulan y algunas cepas presentan cuerpos bipolares que probablemente
contentan polifosfato.
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5. Repetir el mismo procedimiento con cada una de las siete diluciones hechas e
incubar durante 2 a 5 das a 30 C.
Conteo de colonias:
1. Seleccionar solo las cajas que tengan entre 30 y 300 colonias.
2. Multiplicar la cuenta por la inversa del factor de dilucin y el resultado ser en
UFC/ml.
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RESULTADOS:
Tcnica de vaciado en placa):
Figura 1
Figura 2
Figura 3
Figura 4
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CONCLUSIN:
El manejo de este tipo de tcnicas es de suma importancia por su manejo tan frecuente en
diversas reas que dependen de la microbiologa. La experiencia mas valiosa obtenida fue
la realizacin de la tcnica, aun que por circunstancias extra no se lograron obtener los
resultados deseados.
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CUESTIONARIO:
1. Explicar las ventajas y desventajas de la tcnica de vaciado en placa.
VENTAJAS
DESVENTAJAS
DESVENTAJAS
-Carencia en la uniformidad de la
extensin
3. Discuta en base al nmero de colonias que encontraron en cada una de las cajas, si
estuvo bien desarrollada la tcnica.
Por que el tiempo de incubacin fue muy largo, el nmero de colonias obtenidas rebasa el
rango que se encuentra entre 30 y 300 para realizar el conteo. As que ese fue un
impedimento para el clculo de UFC.
4. Se desea conocer el nmero de bacterias por gramo de una muestra de pimienta
molida, por lo que realiza siguiente serie de diluciones decimales de 10 -1 a 10-8,
siembra 0.1 ml en cajas por tcnica de inoculacin en superficie y obtiene los
siguientes resultados.
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DILUCIN
CUENTA MICROBIANA
10-1
Incontable
10-2
Incontable
10-3
Incontable
10-4
Incontable
10-5
325
10-6
30
10-7
10-8
Sin crecimiento
10-9
Sin crecimiento
10-10
Sin crecimiento
Qu dilucin utilizar para conocer el nmero de clulas por gramo de pimienta y por
que?
Se utiliza la 10-6 ya que es la nica que tiene un nmero de colonias que cae dentro del
rango (30 300).
Cul es el nmero de bacterias por gramo de pimienta? Indique los clculos a realizar y
sus resultados.
30 10
Nmero de colonias
reportadas en la placa
6 1
30 10 6 UFC
Inversa de la
dilucin de la placa
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BIBLIOGRAFA:
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