Prctica No 4

CRECIMIENTO BACTERIANO Y FNGICO.

Microbiologa
M.C Alma Teresa Miranda Quiroz
Equipo #4
Reynaldo Solorio Salgado
Rocio Arreola Ruiz
Carmen Ferrer Gordillo
Daniel Ayala Guzman
Osvaldo Rafael Borjas Ruiz

Prctica No 4
CRECIMIENTO BACTERIANO Y FNGICO.
OBJETIVO
El alumno Determinara las fases de crecimiento de Escherichia coli, mediante la
absorbancia de la suspensin celular en medio lquido.
Determinar el crecimiento de Penicillium por el mtodo de peso seco.

FUNDAMENTO
Las poblaciones de bacterias pueden crecer de una forma explosiva acumulando grandes
nmeros en un periodo de tiempo muy reducido. Puesto que el efecto nocivo (infecciones
o intoxicaciones) de los microorganismos depende de su nmero en la mayora de los
casos, entender cmo se produce el crecimiento microbiano es importante para poder
evitar o reducir dichos efectos nocivos.
(David P. Clark, John M. Martinko, Michael T. Madigan y Paul V. Dunlap. (2009). Brock.
Biologa De Los Microorganismos. Madrid: Pearson.)

de Brock:
Biologa de
nismos
los
microorga INTRODUCCIN

Las fases de crecimiento de una poblacin bacteriana pueden determinarse midiendo la

turbidez del cultivo. Aunque dicha turbidez no es una medida directa del nmero de
clulas, su incremento es indicativo de crecimiento bacteriano.
Para estas determinaciones se utiliza un espectrofotmetro, en el cual la luz pasa a travs
del cultivo bacteriano hasta alcanzar una clula fotoelctrica conectada a un
galvanmetro. A medida que la concentracin celular aumenta, el cultivo se hace ms
turbio, y se reduce la cantidad de luz transmitida que alcanza la clula fotoelctrica, como
consecuencia de la difraccin de la luz por parte de las clulas.
El cambio de luz se registra como porcentaje de transmisin (cantidad de luz transmitida)
y absorbancia o densidad ptica (D.O.), valor derivado del porcentaje de transmisin,
correspondiente al log del cociente entre la intensidad de luz incidente sobre la
suspensin (Io) y la de la luz transmitida por la suspensin (I). A = log Io/I.
Cuando se inocula una poblacin bacteriana en un medio de cultivo lquido, generalmente
el crecimiento no comienza inmediatamente, hay un perodo de latencia. Una vez que
empieza el crecimiento, se observa un incremento exponencial en la densidad celular,
(llamada fase exponencial). Esta fase es la ms significativa en el crecimiento de los
microorganismos y se caracteriza porque y q se mantienen constantes. A medida que el
crecimiento avanza, la concentracin de los nutrientes disminuye, se acumulan los
productos finales del metabolismo, el crecimiento se detiene, y el cultivo entra en fase
estacionaria. Despus las clulas lentamente mueren, lisndose en algunos casos, en la
fase de muerte celular.

Los hongos presentan dos tipos de morfologa: multicelular (filamentosa) y unicelular

(levaduriforme). La mayora crece en un rango de pH de 2-9 y a temperaturas entre 10 y
40 C.
Los hongos filamentosos (miceliares o mohos), representan el crecimiento ms tpico de
los hongos microscpicos. Son aerobios. En medios de cultivo slido y en superficies en
la que se desarrollen, producen colonias algodonosas o pulverulentas caractersticas. Al
microscopio ptico, presentan estructuras tubulares (hifas), formadas por mltiples
clulas. En su mayora las hifas son tabicadas y con septos que delimitan las clulas. Los
Zygomycota presentan hifas que carecen de septos (cenocticas o sifonadas).
Los hongos con crecimiento levaduriforme dan lugar a colonias lisas en medio de cultivo
slido. Dichas colonias estn formadas por agregados de clulas (3-10 x 5-30 m)
denominadas levaduras. Son anaerobios facultativos. Se dividen por gemacin o por
fisin binaria. En algunos casos, las clulas hijas no se separan de la clula madre,
formndose cadenas cortas (seudohifas). Los hongos que presentan este tipo de
crecimiento, dan lugar a colonias similares a las de levaduriformes.
Los hongos crecen fcilmente en la mayora de los medios de cultivo, necesitan una
fuente de carbono orgnica y nitrgeno. Esta facilidad para crecer en cualquier medio de
cultivo y la presencia de conidios en el aire hace que sean contaminantes habituales en el
laboratorio.

MATERIALES

REACTIVOS Y
CULTIVOS

Matraces 125 ml
Medio LB
Probetas 100 ml
Agua
Tubos ensaye con tapn de Alcohol
rosca
Micropipeta 1 ml
Caldo extracto malta
Puntas micropipeta 1 ml
Escherichia coli
Celdas de cuarzo
Penicillium
Vasos pp 250 ml
Papel filtro
Embudos chicos
Pinzas de diseccin

EQUIPO
Balanza analtica
Autoclave
Campana flujo laminar
Agitadora
Espectrofotmetro UV-VIS
Incubadora
Horno de secado

METODOLOGA
Crecimiento bacteriano
Preparacin del preinculo: se siembra E.coli en un matraz con 25 ml de medio LB, y se
cultiva a 37C en agitacin a 120 r.p.m. en un agitador orbital durante 15-20 h. A partir de
este cultivo reciente, se siembra con pipeta estril 1 ml en un matraz con 50 ml de LB, y
se mide la D.O. en el espectrofotmetro. Esta medida corresponde al tiempo 0.
Colocar el matraz en una incubadora orbital a 37C y 120 r.p.m. La D.O. debe medirse
cada 30 min, teniendo cuidado de agitar el matraz antes de tomar la muestra para realizar
las medidas.
Realizar dos ltimas lecturas de D.O. a las 16 y 20 hrs.
Medida del crecimiento por espectrofotometra.
1.- Encender el espectrofotmetro 15 minutos antes de realizar la lectura.
2.- Cargar el programa de longitud de onda programable
3.- Fijar la A=600 nm, para absorbancia mxima de E.coli y mnima del medio de cultivo.
4.- Colocar el blanco correspondiente al medio de cultivo sin inocular en el lugar de las
muestras y calibrar el equipo.
5.- Para medir las muestras, tomar 3 ml de cultivo bien homogeneizado en un tubo y
situarlo en el lugar de las muestras y anotar la absorbancia (D.O.).

encender
espectofotome
tro a 600nm

colocal blanco
de caldo lb y
calibrar

tomar 3 ml de
E.coli con
micropipeta y
colocarlos en
el
espectofotome
tro

tomar lectura
de la
absorbancia y
medir cada
media hora

Crecimiento fngico
Se siembra un trocito de 1 cm 2 en varios matraces que contengan 25 ml del medio
extracto de malta y se cultiva a 28C durante 7 das.
Cada 24 h, se tomar un matraz y se realizar la filtracin mediante papel filtro
previamente pesado y secado.
El filtrado obtenido se colocar en el horno de secado a 60 C/24 h y se determinar el
peso del filtrado.
Lo mismo se har con los siguientes matraces en los das posteriores.

sembrar en 7
matraces el
hongo

realizar
medicion
durante 7 dias

tomar muestra
de cada matras
1 cada 24hr

determinar peso
del filtrado

filtrar por medio

de papel filtro

el filtrado
colocarlo en el
horno de
secado a
60C/24hr

RESULTADOS
Crecimiento Bacteriano

Crecimiento Fngico

No. Toma
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Resultado D.O.
0.047 A
0.033No.
A De filtro
0.480 A
1.3431A
1.0132A
0.9773A
1.3174A
1.4105A
1.4976A
1.371 A

Antes del filtro

0.8366 gr
0.8344 gr
0.8205 gr
0.8435 gr
0.8167 gr
0.8217 gr

Despus del
filtro
0.9202 gr
0.9248 gr
0.9337 gr
0.9211 gr
0.9224 gr
0.9470 gr

INTERPRETACION DE RESULTADOS
Se puede apreciar un crecimiento de bacteologico o fngico a medida que pasa el
tiempo, ya que se produce un crecimiento constante en sus diferentes fases,
conforme paso el tiempo pudimos apreciar un incremento del Microorganismos de
manera constante, que se representaba en las lecturas del espectrofotometro
CONCLUSIONES
Desde el primer momento en que se toma la muestra de los microorganismos se
puede apreciar como estos van aumentando su crecimiento exponencialmente
conforme mas pase el tiempo, lo que nos da un ndice de a qu velocidad se
reproducen los microorganismos analizados en esta prctica.
La tcnica empleada en las bacterias y los hongos fue distinta, pero en ambas se
puede denotar como es el crecimiento de los microorganismos con el paso del
tiempo desde su reproduccin hasta su muerte.

CUESTIONARIO.
1. Describa los cambios fisiolgicos que ocurren en la clula bacteriana durante cada
fase de crecimiento.
Bacteria
a) Durante la fase de adaptacin o rezago, las bacterias se adaptan a las
condiciones de crecimiento. Es el perodo en el que las bacterias

individuales estn madurando y no tienen an la posibilidad de dividirse.

As que en esta fase los microorganismos no estn latentes.
b) La fase de liberacin logartmica o exponencial es un perodo caracterizado
por la duplicacin celular. El nmero de nuevas bacterias que aparecen por
unidad de tiempo es proporcional a la poblacin actual. Si el crecimiento no se
limita, la duplicacin continuar a un ritmo constante, por lo tanto, el nmero de
clulas de la poblacin se duplica con cada perodo de tiempo consecutivo.

c) Durante la fase estacionaria, la tasa de crecimiento disminuye como

consecuencia del agotamiento de nutrientes y la acumulacin de productos
txicos. Esta fase se alcanza cuando las bacterias empiezan a agotar los
recursos que estn disponibles para ellas. Esta fase se caracteriza por un valor
constante del nmero de bacterias a medida que la tasa de crecimiento de las
bacterias se iguala con la tasa de muerte bacteriana.
d) En la fase de declinacin, las bacterias se quedan sin nutrientes y mueren.
2. Qu mtodos se reportan para medir la cintica de crecimiento de una bacteria y
de un hongo?
Mtodos Directos
Cuantificacin del nmero de clulas
Peso seco celular
Determinacin de nitrgeno o protenas
Determinacin de ADN
Mtodos Indirectos
Cuantificacion de colonias en la placa
Recuento sobre el filtro de la membrana
Consumo de oxigeno
Liberacin de CO2
Medida de turbidez
3. Cul es la importancia de realizar esta medicin?
Para poder apreciar la cinetica del crecimiento en microorganismos para
poder prevenir y conocer la forma de reproduccin de los microorganismos,
sus faces de crecimiento hasta su muerte
4. Qu factores se toman en cuenta para un registro correcto de este tipo de
variable en biotecnologa?
se debe tomar en cuenta que el mtodo que se haya empleado sea viable
y coherente para poder comprobar que el proceso sea confiable, de lo
contrario se deben hacer pruebas para comprobar su eficacia

BIBLIOGRAFIA
Leveau, Jean-Yves y Bouix, M. 1985. Cintica Microbianas en Biotecnologa. De
Ren Scriban. Ed. El Manual Moderno. Mxico. pp: 132-165.

 DUERDEN. 1993. Microbiologa de enfermedades infecciosas. 1 Edicin. Edit.

Limusa. Mxico, D.F. paginas: 515.
MADIGAN, M.T; MARTINKO, J.M; AND PARKER J. 2004. Brock Biologa de los
Microorganismos. 10 Edicin. Edit. Pearson Prentice Hall. Espaa. pginas 1011.
David P. Clark, John M. Martinko, Michael T. Madigan y Paul V. Dunlap. (2009).
Brock. Biologa De Los Microorganismos. Madrid: Pearson.
Skarstad K, Steen HB, Boye E (1983). Cell cycle parameters of slowly growing
Escherichia coli B/r studied by flow cytometry. J. Bacteriol.