INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA QUMICA E INDUSTIAS EXTRACTIVAS

OPTATIVA 1
TCNICAS DE MUESTREO

PROPUESTA
EXTRACCIN DE ACEITE DE ROMERO POR
ARRASTRE DE VAPOR Y ANALSIS DE SUS
PROPIEDADES ANTIOXIDANTES

GRUPO: 2IV94
INTEGRANTES:
LIRA RAMIREZ AURORA VERONICA
PADILLA PUENTE LUISA ALEJANDRA
RIVERO ARAGN JOS LUIS
RODRIGUEZ GALINDO IRENE
SOLANO GARIBAY JAVIER

1. JUSTIFICACIN

El creciente inters por compuestos bioactivos de origen natural como auxiliares

en la prevencin de enfermedades y como mtodo de conservacin ha
provocado que gran parte de las investigaciones estn dedicadas a este rubro,
esto se debe, en gran medida, a su efectividad biolgica al proporcionar bienestar
y salud. Como consecuencia, la demanda de antioxidantes de origen natural ha
aumentado considerablemente.
Los antioxidantes son sustancias capaces de prevenir o retardar la oxidacin de
las molculas; existen antioxidantes sintticos y naturales, stos ltimos se
encuentran en productos como lo son frutas, verduras, cereales, hierbas, entre
otros; de ello se explica que el consumo de este grupo de alimentos sea tan
benfico en la dieta diaria.
El uso de los antioxidantes se extiende desde alimentos hasta medicinas. En la
industria de alimentos han sido ampliamente utilizados para evitar su degradacin,
adems tienen un importante papel para prevenir una gran variedad de
enfermedades crnicas y degenerativas e incluso retardar el envejecimiento,
debido a su capacidad de inhibir la oxidacin de los radicales libres mediante el
bloqueo de la iniciacin o propagacin de reacciones en cadena de oxidacin.
Existe una gran variedad de antioxidantes naturales y de todos ellos, el romero ha
sido bastamente aceptado como una de las especies con el mayor nmero de
actividad antioxidante, esto debido a la gran variedad de compuestos que lo
integran. Diversos estudios sobre los antioxidantes que conforman al romero
indican que los componentes ms activos son los diterpenos fenlicos como el
carnosol, rosmanol, isorosmanol, rosmadial, cido carnsico, metil carnosato, y
otros cidos fenlicos como el rosmarnico y el cafico.
Se han utilizado diversos mtodos para extraer antioxidantes de plantas
aromticas, como la destilacin por arrastre de vapor, extraccin con solvente,
hidrodestilacin y la extraccin con fluidos supercrticos. El mtodo y los
parmetros de extraccin as como otros factores relacionados con la calidad de la
planta original, su origen geogrfico, la fecha de cosecha, su almacenamiento y
procesamiento previo a la extraccin influyen directamente en la composicin final
de los extractos obtenidos
En los ltimos aos se han buscado una gran cantidad de alimentos de origen
natural que se caractericen por tener buenas propiedades antioxidantes, y sean
capaces de emplearse como aditivos en el control de procesos de oxidacin en la
industria alimentaria y como ingredientes activos en complementos alimenticios y
dietticos.
Est investigacin est enfocada en el estudio de la tcnica de destilacin por
arrastre de vapor en el aceite esencial obtenido a partir del romero, as como la
evaluacin de su capacidad antioxidante.
2. OBJETIVOS

Objetivo General
Determinar y caracterizar las propiedades antioxidantes del aceite esencial que
puede extraerse del romero (Rosmarinus Officinalis).
Objetivos Especficos

Extraccin del aceite esencial del romero mediante la tcnica de

destilacin por arrastre de vapor.
Evaluacin de la influencia de la cantidad de muestra en el
rendimiento del extracto.
Determinar el contenido de fenoles totales presentes en el extracto
del romero.
Identificar como afecta el tiempo a las caractersticas antioxidantes
del aceite de romero.

3. MARCO TEORICO
Antioxidantes
Las plantas, dentro de la fotosntesis se encuentran expuestas a una gran
cantidad de radicales libres formados por el mismo proceso, es por eso que stas
necesitan una elevada concentracin de antioxidantes para protegerse a s
mismas del dao celular, dicha proteccin proviene de los compuestos fenlicos,
flavonoides y carotenoides que se encuentra en los pigmentos de las plantas. Se
ha demostrado que estos compuestos, al ser ingeridos por los seres humanos,
generan una proteccin similar adems de generar sinergias importantes ente
algunos compuestos.
Los compuestos bioactivos de origen natural han demostrado ser sumamente
efectivos al proporcionar bienestar y salud, por lo que se ha incrementado el
inters en ellos como previsores de enfermedades. Algunos padecimientos
crnicos y degenerativos como el cncer o enfermedades cardiovasculares y
neuronales, han sido vinculados con la presencia de radicales libres en el
organismo. Es una realidad actual que al incrementar el consumo de antioxidantes
en la dieta es posible lograr un equilibrio entre stos y los agentes oxidantes. Es
precisamente de fuentes naturales o de derivados de un compuesto natural bsico
de donde provienen aproximadamente el 30% de los ms eficaces productos
antineoplsicos.
Estudios afirman que existe una estrecha relacin entre la actividad antioxidante y
la reduccin de riesgos de padecer cncer y algunas enfermedades
cardiovasculares, adems de stas, a los flavonoides y otros compuestos
fenlicos, se les atribuyen capacidades antimicrobiales y antiinflamatorias.
Los antioxidantes son utilizados para impedir o retardar oxidaciones catalticas y
en yacimientos naturales o bien, aquellos que son provocados por la luz, altas

temperaturas, aire y/o residuos metlicos. Con su uso en alimentos se evita o

retarda las oxidaciones que los degradan, ya que se producen grandes prdidas
comerciales y pueden dar lugar a secuelas toxicolgicas de enorme importancia.
Existen dos grupos de antioxidantes: sintticos y naturales.

Sintticos:
Presentan elevada actividad qumica, gran eficacia a dosis bajas, alta
estabilidad y bajo costo, sin embargo pueden formarse productos
secundarios en el proceso de fabricacin del alimento o bien, al ingerirlos.

Naturales:
Tienen menor actividad qumica y se necesitan dosis ms elevadas,
adems, por la dificultad de su extraccin presentan un costo mayor y
menor estabilidad. Pese a todo ello, existen numerosas investigaciones que
demuestran que no slo no presentan problemas a la salud, sino que tienen
considerables efectos benficos.

Caractersticas del Romero

El romero es un arbusto aromtico de hojas perennes, esta especie rara vez, de
manera natural, supera 1 metro de altura. Sus flores se caracterizan por presentar
dos ptalos dispuestos en 2 labios. Sus ramas son abundantes, ascendentes y
paralelas. Las hojas son algo rugosas, alargadas de una tonalidad verde obscura
por el frente y revueltas por el revs. Las flores forman espigas en la parte
superior de los tallos y suelen ser de tonalidades que van desde el azul hasta el
blanco. Suelen aparecer al principio de la primavera o a finales del otoo, aunque
en zonas clidas se dan intermitentemente durante el invierno.
Origen, Familia y Definicin
El romero (Rosmarinus officinalis.) es una planta medicinal y aromtica que
pertenece a la familia de las Laminceas, es tpica de la regin mediterrnea y ha
sido cultivada desde hace mucho tiempo. Algunas evidencias sugieren que fue
usado en el Antiguo Egipto, Mesopotamia, China e India debido a sus virtudes
medicinales, culinarias y cosmticas. Como resultado es ampliamente usado hoy
en da como planta medicinal y tiene una larga lista de demandas relacionadas
con esta caracterstica, incluyendo propiedades antibacteriales y antioxidantes. Es
sabido que es un efectivo agente quimioprotector y antimutagnico, las
investigaciones han indicado que no es txico.
Algunos datos relevantes que reflejan la variacin de acuerdo a la regin de origen
se presentan en la siguiente tabla:

Propiedades Fsico Qumicas

Actualmente el romero se cultiva en casi todos los pases alrededor del mar
mediterrneo, Inglaterra, Estados Unidos y Mxico. Las hojas contienen alrededor
de 1% y 2.5% de aceite esencial. Entre sus componentes ms caractersticos se
encuentran monoterpenos, sesquiterpenos, monoterpenoles, esteres terpnicos,
monoterponas, derivados terpnicos, diterpenos triciclcos, derivados triterpnicos,
polifenoles, flavonoides entre otros que contribuyen a su complejo sabor.
Los componentes principales que conforman la estructura qumica del romero son:
carnosol, cido carnsico, rosmanol, epirosmanol, isorosmanol, rosmarinquinona,
cido rosmarnico y rosmaridifenol. Sin embargo, esta composicin depende de
factores como la variedad de la planta y etapa de desarrollo en que sta es
recolectada, as como el lugar de origen, una lista detallada de sus componentes
ms caractersticos se presenta a continuacin:
Aceite esencial (1-2.5 %)
Monoterpenos: alfa-pineno (15-25 %), beta-pineno, canfeno (5-10 %),
mirceno, limoneno.
Sesquiterpenos: beta- cariofileno, alfa-terpineol (14-24 %)
Monoterpenoles: linanol, borneol (1-6 %)
Esteres terpnicos: 1-8-cineol (15-30 %), acetato de bornilo (1-5 %)
Monoterponas: alcanfor (15-25 %)
Derivados terpnicos
Diterpenos triciclcos: (rosmaridienol, carnosol, cido carnoslico, rosmanol,
7-metoxi rosmarol)
Derivados triterpnicos: cido urslico, cido oleanlico, cido 2-beta
hidroxioleanlico.
Polifenoles

cidos fenil-carboxlicos: cido rosmarnico, cido cafico

Flavonoides: derivados metilados:
4-metoxi: diosmsido, hesperidsico
6-metoxi: homoplantaginsido, cirsimarsido, nepitrsido, cupafolina
7 metoxifegopolin.

Usos y Aplicaciones
El romero es una especie muy popular en muchos pases occidentales, pero es
ms usado en pases mediterrneos, especialmente Italia y Francia. La hoja de
romero es una especie indispensable en la cocina francesa, italiana y espaola.
Es adems una especie ampliamente utilizada como ornamento.
El aceite esencial del romero aumenta la circulacin de la sangre en las
extremidades, tiene efectos antirreumticos y alivia dolores neurlgicos. Adems
de sus aplicaciones teraputicas, su aceite esencial es muy usado dentro de la
industria cosmtica, produciendo varias colonias, esencias de bao, lociones y
shampoo.
Las hojas de romero tienen aplicaciones como antioxidante tanto interno como
externo. Adems de sus propiedades antioxidantes, estudios cientficos han
determinado su efecto inhibitorio en la generacin de tumores y mutaciones
genticas. Tambin se han estudiado sus efectos antimicrobianos. Es bien sabido
que la actividad antioxidante de este extracto en la industria alimenticia y
farmacutica se debe a la presencia de importantes antioxidantes y componentes
fenlicos para prevenir la degradacin oxidativa de lpidos contenidos en los
alimentos.
Igualmente posee actividad antiparasitaria, insecticida y antifungicida,
caractersticas importantes para la preservacin y el control de seres vivos y
padecimientos de origen microbiano. Este punto es particularmente relevante
tomando en cuenta que cada da se presentan ms mutaciones microbianas que
han demostrado incrementar su resistencia a los antibiticos ms comunes.
Algunas de las aplicaciones que se le dan al romero dentro de la fitoterapia son
bactericida, antiparasitaria, insecticida, antivrica, carminativa, antifngica y
antitumoral, todo esto aprovechando las caractersticas que el ser una planta
balsmica le otorga. As mismo es ampliamente recomendado en el tratamiento de
las dispepsias para ayudar a la estimulacin del apetito y de las secreciones
gstricas.
Tiene efectos antiespasmdicos, colagogo, colertico y hepatoprotector, diurtico,
emenagogo, mucoltico, antiinflamatorio y eficaz en los procesos circulatorios. Se
utiliza como linimento en la terapia complementaria de reumatismos y en el agua
del bao por su efecto vasodilatador.

En la industria alimentaria se utiliza por sus propiedades conservadoras, por su

aroma e incluso llega a ser utilizada como condimento. Se utiliza tambin para
mejorar la calidad de los productos de origen animal, en los que el uso de vitamina
E, a altas dosis, por ejemplo, es ya una prctica bastante frecuente.
El Romero como Antioxidante
El extracto de romero carece de toxicidad, es estable hasta los 240, su actividad
antioxidante se debe principalmente al cido carnsico y al carnosol en lo que
concierne a las bases grasas y al cido rosmarnico y rosmanol ante los productos
acuosos. Todos ellos mejoran su actividad cuando se combinan con tocoferoles,
cido ascrbico y cido ctrico. De acuerdo a Costa-Batllori (2003) podemos hablar
de una eficiencia antioxidante del extracto de romero (ER) de 2 a 4 veces superior
a los antioxidantes sintticos BHT y BHA.
Soportando esta afirmacin establece que:
200 ppm de ER > 100 ppm de ER + 100 ppm de BHA > 200 ppm de BHA
La eficiencia antioxidante del extracto de romero es altamente positiva. Sin
embargo, es necesario realizar ms investigaciones para desarrollar posibles
sinergias con otros extractos naturales con el fin de mejorar los resultados y
reducir su costo.

Aceites Esenciales
Estos son mezclas complejas de sustancias contenidos en los vegetales, se
caracterizan por presentar un olor aromtico intenso, por lo general son lquidos
voltiles. Muchas son las especies que los contienen y este puede estar presente
en todos los rganos de la planta, sus flores, corteza, semillas, races, hojas, tallo,
etc. An dentro de la misma especie las composiciones tanto cualitativa como
cuantitativa varan de acuerdo al rgano considerado, as como de las condiciones
ambientales en que la especie fue desarrollada y la poca del ao en que fue
cultivada.
Debido a sus mltiples propiedades son utilizados en una gran variedad de
productos comerciales.

Propiedades de los Aceites Esenciales

Los aceites esenciales son generalmente lquidos a temperatura ambiente. Una de
las diferencias con respecto a los aceites fijos (lpidos) radica en su volatilidad o
capacidad de evaporacin al contacto con el aire a temperatura ambiente. Para

que los compuestos aromticos puedan volatilizarse su peso molecular debe ser
menor a 250 g/gmol.
Estos son sensibles a la oxidacin, no se enrancian como los aceites fijos, son
fcilmente alterables y presentan una tendencia a polimerizarse formando as
productos resinosos, incrementndose esta tendencia en aquellos que contienen
alcoholes terpnicos insaturados, es decir, aquellos que se auto-oxidan, variando
su viscosidad, color y olor. Presentan una variacin de densidad que va de 0.84 a
1.18, la mayora de estos son menos densos que el agua, dos de las especies
ms pesadas son la canela y el clavo. Por lo general presentan actividad ptica,
as como un ndice de refraccin elevado, el cual arroja un promedio de 1.5.

Obtencin de Aceites Esenciales

Los mtodos como prensado, fermentacin, destilacin, etc. son utilizados para
extraer el aceite de plantas que no poseen maderas. Sus rendimientos oscilan de
0.1 a 2%, aunque existen algunas excepciones como el clavo de olor que presenta
un rendimiento de 15%.
Algunos mtodos de obtencin de aceites esenciales se presentan a continuacin:

Destilacin por Arrastre de Vapor

El fundamento detrs de esta tcnica de extraccin est dado por el

rompimiento del tejido vegetal por efecto de la temperatura del vapor (100C)
liberando as el aceite esencial despus de un cierto tiempo.
Los aceites esenciales obtenidos de esta forma debern ser insolubles en
agua, de no serlo, los componentes solubles en agua se quedarn en la fase
acuosa an despus de pasar por el condensador y el separador que permite
aislar la fase de aceite esencial de la de agua.
El condensador o generador de vapor, como su nombre lo dice, es el
responsable de producir el vapor que llega al tanque extractor por la parte de
abajo pasando por la rejilla que contiene la muestra de la que el aceite es
liberado por efecto del vapor y arrastrado por este hacia el condensador y
despus por el separador que permite recolectar el aceite esencial y el agua de
residuo.

Existen varios factores que influyen en la extraccin, entre ellos se encuentran:

El tiempo de secado del material, este vara mucho dependiendo de la
especie, algunas, como el eucalipto puede durar hasta 4 meses.

 El tiempo de extraccin, despus de un tiempo ya no sale ms aceite y si el

vapor contina pasando a travs del sistema se provocar una disminucin
en el rendimiento por arrastre por solubilidad o emulsin del aceite.
La presin del vapor, si esta es muy elevada se presentar hidrlisis en el
aceite disminuyendo su calidad y rendimiento.
La condensacin interior, esta suele evitarse realizando una purga previa a
los 30 minutos de haber iniciado el proceso, adems de mantener bien
aislado el tanque.
La distribucin interior del vapor, esta se logra colocando una flauta de
distribucin en el fondo del tanque.

Extraccin con Solvente

Este mtodo de extraccin requiere que las muestras sean previamente

molidas, picadas o maceradas a modo de incrementar el rea de contacto
entre ellas y el solvente a utilizar. Una vez juntos el slido y el lquido se busca
que se encuentren en constante movimiento, esta agitacin permitir
incrementar la eficiencia del mtodo. Las condiciones de temperatura y presin
para la extraccin pueden ser las ambientales. Entre los solventes ms
utilizados se encuentran: etanol, ter etlico, metanol, hexano, ciclohexano,
isopropanol, ter isoproplico, tolueno, xileno, cloroformo, etc. Aunque el
benceno tambin puede ser utilizado no es recomendado por su peligrosidad
para la salud. Los solventes son recuperados por destilacin y reutilizados.
Durante el proceso tambin son extrados algunos otros componentes como
gomas, ceras, grasas, colorantes, protenas y carbohidratos. Despus de los
condensadores, en la etapa de recuperacin del solvente, se dispone una
unidad de enfriamiento con el objetivo de minimizar la prdida del solvente. El
material residual suele ser de consistencia semislida, pues como ya se dijo,
contiene adems ceras y otros componentes.

Extraccin Supercrtica

La extraccin supercrtica se fundamenta en el punto en el que un gas o vapor

ya no puede ser licuado por cambios de presin y/o temperatura. Una
caracterstica importante es que no existe diferencia visible entre las fases
lquida y gaseosa. Ante estas condiciones la sustancia ms empleada suele ser
el CO2, puesto que presenta baja viscosidad, baja tensin superficial y un alto
coeficiente de difusin que permite incrementar el contacto con la superficie del
material por lo que puede penetrar pequeos poros o rendijas, asegurando as
una extraccin ms eficiente en un menor tiempo. Al finalizar el proceso de
extraccin se remueve el solvente a baja temperatura y/o presiones para, de
este modo, disminuir la prdida de sustancias voltiles y evitar que se formen
olores y sabores extraos.

Hidrodestilacin

Primeramente se coloca agua para cubrir la parte inferior del tanque extractor,
despus se coloca la parrilla que soporta el material que ser extrado
sumergindola en el agua. La salida de los vapores puede estar localizada en
la parte lateral del tanque o en la tapa de este. Un serpentn o espiral enfriado
por agua es colocado a la salida del vapor, despus de pasar por ah, el vapor
condensado y el aceite esencial son recolectados por un separador de fases, el
cual debe caracterizarse por su altura y dimetro suficientes para evitar perder
aceite y facilitar la recoleccin del mismo.

4. MATERIAL Y EQUIPO
Muestras de Romero (Rosmarinus Officinalis): mantenerla en un
lugar seco y fresco alejado de los rayos solares durante 30 dias.
Separar manualmente la hoja y tallo del romero, conservando
nicamente las hojas.
Etanol al 96% (v/v)
Solucin de DPPH 1 mM (radical 2,2-difenil-picrahidrazil): se prepara
con 0.0394 g de DPPH y aforar con etanol a 100ml, esta solucin se
debe cubrir con papel aluminio y mantenese en la obscuridad y
refrigeracin entre cada medicin.
Solucin catecol 10 mM: se prepara con 1.10 g de catecol (C5H5O2)
a 100ml de agua destilada.
Solucin de carbonato de sodio 1.4 M: se prepara con 148.4 g de
carbonato de sodio (Na2CO3) y aforar a 1L.
Reactivo de Folin-Ciocalteu: Mezcla de fosfomolibdato y
fosfotungstato.
cido tricloroacetico al 10% (p/v): 10 g de cido por cada 100ml.

Para la extraccin del Aceite Esencial:

Parrilla
Rejilla de metal
Matraz de vidrio de 2L
Perlas de ebullicin
Matraz para la muestra de romero

Red plastificada
Cabeza del destilador

Condensador adaptado
a un refrigerante

 Auto-separador
con
vlvula
Dos abrazaderas
Tela de asbesto
Tres termmetros
Bao recirculador para
enfriamiento

Dos mangueras
Matraz de 500ml para la
recepcin
del
agua
condensada
Frascos color albar para
conservar el aceite.

 Para la determinacin de Actividad Antioxidante:

Espectrmetro UV-Vis.

5. DESARROLLO EXPERIMENTAL
Extraccin del Aceite esencial.

agregar 1200ml de agua

destilada en un matraz de
ebullicion de 2L asi como 6
perlas de ebullicion y colocar
en parrilla con una rejilla.

colocar un corcho con un

termometro en una de las
bocas del mataz para poder
medir constantemente la
temperatura de ebullicin

pesar los gramos necesarios

de romero en una bscula e
introducir en el matraz
poniendo una malla
plastificada para retener la
muestra y permitir el paso del
vapor.

montar el matraz de la
muestra sobre el matraz que
contiene el agua previamente
calentada y cubrir con una tela
de asbesto que funcionara
como aislante para optimizar
el calentamiento.

ensamblar la cabeza del

destilado al matraz de la
muestra y al refrigerante con
su respectiva abrazadera y
termometro en la parte
superior.

conectar la entrada y salida

del serpentin del refigerante a
un sistema de agua de
enfriamiento.

agregar 10ml de agua

destilada al auto-separador
para evitar perdidas de aceite

acomplar al refrigerante con

una abrazadera el autoseparador y colocar un
recipiente para recepcion del
agua condensada.

una vez listo el equipo,

encender el sistema de
refrigeracion y colocar un
termometro en el sistema para
controlar la temperatura
durante todo el proceso de
destilacion, el agua de
enfriamiento debe estar a 6C
max.

la destilacion debe iniciar a

23C y presion atmosferica, se
debe controlar la temperatura
disminuyendo cada 8 min a
MEDIO -MEDIO para controlar
la destilacin.

cuando el vapor generado

sube a la cabeza del
destilador, se condensa y
comienza la obtencion del
aceite, el liquido extraido se
acumula en el auto-separador
donde se observa la
separacin de fases.


Determinacin de la densidad del aceite.

Tomar probeta
de 10 ml.
pesarla y agrear
1ml de aceite
concentrado

pesar
nuevamente y
por diferencia
obtener la masa
del aceite

realizar esto por

triplicado

con la formula
de densidad
determinar la
densidad del
aceite.

Determinacin de Actividad Antioxidante.

neutralizar al DPPH con

el antioxidante presente
en el aceite de romero

preparar un blanco de
DPPH con 300 L de DPPH
y 2.7 ml de etanol

tomar alicuotas de 0.1

a 0.5 ml de solucion
de aceite de romero
en tubos de ensaye y
aadir 300 L de
solucion 1mM DPPH

agregar etanol hasta

llegar a un volumen de
3ml en cada tubo

dejar reposar las

muestras durante 15min
a temperatura ambiente
y obscuridad

transcurrido el tiempo,
determinar la
absorbancia a 517nm
usando etanol como
blanco en un
espectrometro UV-Vis
para determinar el % de
inhibicion


Determinacin de Fenoles Totales

utilizar una curva

estandar tomando
2,3,6,8 y 10 ml de
solucin de catecol
10mM

aforar cada muestra a

100ml con agua
destilada

en 5 tubos de ensaye se
mezclaron 1ml de las
soluciones preparadas
con 1ml de acido
tricloroacetico al 10%

de cada muestra de
toman 0.75ml y se
colocan en otros tubos
para agregarles 1.5 ml
de carbonato de sodio
1.4M, agitar y aadir
0.45 ml de reactivo de
Folin-Ciocalteu

La reaccion dura 2hrs a

temperatura ambiente y
medir la absorbancia a
650 nm en el UV con
agua destilada como
blanco

Para la determinacion se
toma 0.75ml de aceite
con 1.5 ml de carbonato
de sodio 1.4M en un tubo
de ensaye

agitar y agregar 0.45 ml

de reactivo de FolinCiocalteu, deposar 2hs

hacer la lectura en el UV
a 650nm

comparar la medicin de
absorbancia de la
muestra con la de la
curva de calibracin.

BIBLIOGRAFA

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Cerpa, M. (2007). Hidrodestilacin de Aceites Esenciales: Modelado y

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Costa-Batllori, D. (2003). Antioxidantes naturales en alimentacin animal.

Conferencia inaugural del curso acadmico 2003-2004. Real Academia de
Ciencias Veterinarias

http://www.racve.es/actividades/ciencias-bsicas/2003
1008PereCostaBatllori.htm