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Sistemas de la membrana
citoplsmica: estructura, funcin
y trfico de membrana
8-1 Naturaleza dinmica del sistema endomembrana
8-2 Algunas tcnicas para el estudio de las citomembranas
H-3 Retculo endoplsmico
i-4 El complejo de Golgi
8-5 Lisosomas
FIGURA 8-A. En esta micrografa se indican varios elementos del sistema endomembrana de un par de clulas epiteliales cultivadas, teidas con
anticuerpos fluorescentes para mostrar la presencia del retculo endoplsmico
(verde) y de os endosomas (rojo). El ncleo aparece en azul. (Cortesa de
Katrina Alien, Man/ Rycoiuski y ]ean Wilson, Universidad de Arizona.)
276
FIGURA !-1. Organelos membranosos citoplsmicos. El citoplasma de esta clula de la cubierta de la raz de una planta de maz tiene
diversa disposicin de organelos membranosos. En este captulo
examinaremos la estructura y funcin de muchos de estos organelos.
(Cortesa de Hton H. MoUenhauer.)
277
del retculo endoplsmico al complejo de Golgi, son minsculas vesculas de transporte que se forman por gemacin a partir de un compartimiento membranoso. Estas
vesculas se mueven a travs del citoplasma de manera dirigida, con frecuencia a lo largo de vas formadas por elementos del citoesqueleto, y luego se fusionan con la membrana
de un compartimiento diferente que acepta tanto la carga
soluble de la vescula como su envoltura membranosa (fig.
8-2, V). Ciclos repetidos de gemacin y fusin desplazan
materiales a lo largo de las vas a travs de la clula.
Se han identificado diversas vas en el citoplasma (fig.
8-2). Se puede notar una va biosinttica en la cual se sintetizan materiales en el retculo endoplsmico o en el complejo de Golgi, se modifican durante su paso a travs del complejo de Golgi y se transportan en el citoplasma a diferentes
destinos, como la membrana plasmtica, un lisosoma, o la
vacuola ms grande de una clula vegetal. Esta ruta se conoce como la va secretoria, pues gran parte de los materiales sintetizados en el retculo endoplsmico o en el complejo
de Golgi estn destinados a ser descargados (secretados)
hacia afuera de la clula. La va biosinttica secretoria incluye flujo de lpidos, carbohidratos y protenas. En la primera
parte del captulo slo consideraremos sntesis y transporte
de protenas (fig. 8-2) y ms tarde volveremos al ensamblado y desplazamiento de ciertos carbohidratos y lpidos de
membrana.
Las actividades secretorias de la clula se pueden dividir en dos tipos: elemental y regulada. Durante la secrecin
elemental se transportan materiales desde su sitio de sntesis y se descargan en el espacio extracelular de manera continua, no regulada. La mayor parte de las clulas participan
en la secrecin elemental, proceso que contribuye no slo a
la formacin de matriz extracelular (seccin 7-1), sino tambin a la formacin de la propia membrana plasmtica.
Durante la secrecin regulada se secretan y almacenan
materiales en granulos secretorios rodeados de membrana en
las regiones perifricas del citoplasma y slo se descargan
en respuesta a un estmulo apropiado. La secrecin regulada ocurre, por ejemplo, en clulas que producen y liberan
hormonas o enzimas digestivas y en clulas nerviosas que
liberan sustancias neurotransmisoras.
. En tanto que la va secretoria desplaza materiales hacia
afuera de la clula, la va endoctica opera en direccin
opuesta llevando materiales del exterior de la clula (y desde la superficie de la membrana celular) a compartimientos
como los endosomas y lisosomas localizados en el interior
de la clula (fig. 8-2).
El movimiento de vesculas y de los materiales encerrados en ellas a lo largo de diferentes vas dentro de una
clula es anlogo a los movimientos de vehculos de carga
que llevan diferentes tipos de carga a lo largo de las calles
de una ciudad. Ambos tipos de transporte requieren normas definidas de trfico para garantizar que los materiales
destinados a diferentes localidades sean entregados con
precisin en los sitios apropiados. Por ejemplo, el trfico de
protenas al interior de una clula de la glndula salival
requiere que las protenas del moco salival, elaboradas en el
retculo endoplsmico, se dirijan especficamente hacia las
vesculas secretorias; en tanto que las enzimas lisosmicas,
tambin elaboradas en el retculo endoplsmico, se enven
278
Exocitosis
Exterior
Endocitosis-
FIGURA 8-2. Las vas biosinttica y endoctica unen a las endomembranas en una red dinmica interconectada. a) La va biosinttica describe
el flujo de materiales {especialmente protenas) del retculo endoplsmico
a travs del complejo de Golgi hacia diferentes sitios, incluyendo lisosomas, endosomas, vesculas secretorias, vacuolas y la membrana plasmtica. La va endoctica mueve materiales desde la superficie de la clula al
interior de la misma por medio de endosomas y isosomas, donde en general son desdoblados por las enzimas lisosmicas. La va endoctica incluye el desplazamiento de protenas de membrana y materiales extracelulares. Los carbohidratos y los lpidos pueden seguir rutas semejantes, segn
se describe al final del captulo, b) Diagrama que ilustra el proceso de
transporte vesicular mediante el cual los materiales son llevados desde un
compartimiento donador a un compartimiento receptor. Las vesculas se
forman por gemacin de la membrana, durante la cual las protenas de la
membrana donadora se pueden incorporar a la vescula membranosa y las
protenas solubles en el compartimiento donador pueden quedar encerradas en la luz de la vescula. Cuando posteriormente la vescula de transporte se fusiona, las protenas de la vescula de la membrana entran a
formar parte de la membrana receptora y las protenas solubles quedan
secuestradas en la luz del compartimiento receptor.
Los primeros estudios con microscopa electrnica suministraron a los bilogos una descripcin detallada del citoplasma de las clulas con muy poca atencin a las funciones que
desempeaban las estructuras observadas. Para definir las
funciones de los organelos citoplsmicos fue necesario desarrollar nuevas tcnicas y efectuar experimentos innovadores. Los primeros esfuerzos en este campo fueron recompensados en 1974 con el Premio Nobel para tres bilogos
celulares: Christian De Duve, de la University of Louvain,
en Blgica, y Albert Claude y George Palade, de la Rockefeller University. Los mtodos experimentales descritos en
las siguientes secciones son particularmente tiles para suministrar bases de conocimiento sobre las cuales se basa la
investigacin actual acerca de membranas ctoplsmicas.
279
280
ductos diferentes de los que se encuentran en la mayor parte de los organismos (o clulas) dentro de la poblacin. Si el
producto de un gen muante no puede efectuar su funcin
normal, la clula con esta mutacin muestra una deficiencia
caracterstica. Al determinar la naturaleza precisa de la deficiencia se obtiene informacin acerca de la funcin del
producto del gen normal.
El estudio de las bases genticas de la secrecin se efectu principalmente en clulas de levaduras en el laboratorio de Randy Schekman, de la Universidad de California,
en Berkeley. Las levaduras son particularmente adecuadas
para estudios genticos, ya que tienen un nmero relativamente pequeo de genes (en comparacin con otros tipos
de eucariotes); son organismos unicelulares relativamente
pequeos que pueden crecer en cultivo y se desarrollan
como clulas hapoides. Una mutacin en un solo gen de
una clula haploide de levadura produce un efecto observable, puesto que las clulas carecen de una segunda copia
del gen para enmascarar la presencia de un gen anormal.
En el transcurso de casi dos decenios, los investigadores
aislaron docenas de diferentes mulantes en los cuales prcticamente se han fraccionado todos los pasos de la va
secretoria. Muchos de los genes encargados de estos efectos
fueron clonados y las protenas codificadas, aisladas y
secuenciadas. El aislamiento de protenas de las levaduras
motiv investigaciones exitosas de protenas homologas en
sistemas de mamferos.
Una de las lecciones ms importantes que se aprendieron a partir del empleo de todas estas tcnicas es que las
actividades dinmicas en las que participan elementos de
los sistemas endomembrana son muy persistentes. Clulas
de levaduras, plantas y el cerebro humano no slo ejecutan
procesos similares, sino que tambin emplean protenas
notablemente semejantes. Es evidente que la diversidad
estructural de las clulas oculta su similaridad molecular
subyacente. En muchos casos, protenas de especies muy
divergentes son intercambiables. Por ejemplo, sistemas in
vitro derivados de clulas de mamferos, en condicones tpicas son capaces de utilizar protenas de levaduras para facilitar el transporte de las vesculas. A la inversa, clulas de
levaduras con deficiencias genticas que interrumpen alguna fase de la va biosinttica pueden "curarse" en experimentos de ingeniera gentica empleando genes de mamferos.
ribosomas siempre se encuentran en la superficie que enfrenta el espacio citoslico. El RER aparece como un organelo membranoso extenso compuesto principalmente de
sacos aplanados (cisternas) separados por un espacio citoslico como se muestra en la figura 8-6, a-c. Las micrografas electrnicas muestran el espacio cisternal del RER
dividido en compartimientos separados (p. ej., fig. 8-6, b),
281
Luz
Granulos
Complejo de Golgi
Retculo
endoplsmico
Ncleo
Mitocondria
40 min
20 min
5 min
(c)
(b)
(d)
100 r
20 -
3 10
20
40
60
282
O
Homogeneizacin
El hqmogenado
contiene varios
tipos de
vesculas
membranosas
Clulas completas
Sobrenadante
posnuclear
0
Centrifugar
a 20 000 g
durante 20 minutos
Clulas completas,
ncleos, mitocondrias,
peroxisomas
Homogenado
/ Transferir el
L/ sobrenadante
posnuclear
.*.:/*;!
Centrifugar
a 50 000 g
durante dos horas
. .*"* . '
'"**" A
******
Sobrenadante
posmcrosmico
,**.* **
.v****
iXMhfli
Microsomas
0.3 Hm
FIGURA 8-4. Aislamiento de una fraccin microsmica por centrifugacin diferencial, a) Cuando se fragmenta una clula por
homogeneizacin mecnica (paso 1), los diferentes organelos membranosos se rompen y forman vesculas membranosas esfricas. Las vesculas
derivadas de diferentes organelos pueden separarse por distintas tcnicas de centrifugacin. En el procedimiento que aqu se muestra, 51
homogeneizado celular primero se someti a centrifugacin a baja velocidad para formar esferas de las partculas ms densas y de mayor tamafi0,
dejando las vesculas ms pequeas (microsomas) en el sobrenadante (paso 2). Los microsomas se pueden quitar del sobrenadante por cp^trifugacin a mayor velocidad durante periodos ms prolongados (paso 3). Una fraccin microsmica cruda de este tipo se puede fraccioi-)a- e n
diferentes tipos de vesculas en pasos subsecuentes, b) Micrografa electrnica de una fraccin microsmica lisa en el cual las vesculas membranosas carecen de ribosomas. c) Micrografa electrnica de una fraccin microsmica rugosa que contiene membranas tachonadas de ribosomas. (b-c: cortesa de ].A. Higgins y R.J. Barnett.)
283
Retculo
endoplsmico
liso
Retculo
endoplsmico
rugoso
ma. En tanto el azcar permanezca en estado fosforilado, no puede dejar la clula heptica; la membrana plasmtica es impermeable a los azcares fosfato. La glucosa 6-fosfatasa de las membranas REL elimina el grupo
fosfato y genera molculas de glucosa que finalmente
se desplazan hacia la corriente sangunea, donde se
transportan a los tejidos del cuerpo.
Secuestro de iones calcio dentro del espacio cisternal.
La liberacin regulada de Ca2+ de las membranas REL
desencadena respuestas celulares especficas, incluyendo contraccin de clulas musculares esquelticas (fig.
9-63).
Retculo endoplsmico rugoso
Las primeras investigaciones acerca de la funcin del RER
se efectuaron en clulas que secretan gran cantidad de protenas, como las clulas acinares del pncreas (fig. 8-3) o las
clulas secretorias de moco del revestimiento del conducto
digestivo (g. 8-8). A partir del esquema y la micrografa de
la figura 8-8 es evidente que los organelos internos de estas
clulas tienen marcada polaridad sobre el eje longitudinal
de la clula, o sea, de su extremo basal al apical. El ncleo
y la extensa regin de cisternas RER se localizan cerca de la
superficie basal de la clula que se enfrenta al riego sanguneo. El complejo de Golgi se localiza en la regin central de
la clula. El extremo apical de la misma, que se enfrenta a la
luz del conducto, contiene materiales secretorios envueltos
en membranas cuyo contenido se libera con facilidad en el
284
Ribosoma
Cisternas del
retculo
endoplsmico
(a)
0.3/m
5/m
FIGURA 8-6. Retculo endoplsmico rugoso (RER). a) Diagrama que muestra las pilas de cisternas aplanadas que constituyen el retculo
endoplsmico rugoso. La superficie citoslica de ia membrana contiene ribosomas enlazados, que confieren a la cisterna su aspecto rugoso, b)
Micrograia electrnica por transmisin de una porcin del RER de una clula acinar pancretica. Es evidente la divisin del RER en espacio
cisternal (desprovisto de ribosomas) y espacio citoplsmico. c) Gammagrafa electrnica del RER en una clula acinar pancretica, d) Visualizaron del RE mediante gammagrafa confocal en una clula tota! cultivada. El RE (colores naranja y blanco) se concentra en la regin que rodea
el ncleo (N). (b: Cortesa de S. lio; c: segn K. Tanaka, Int. Rev. Cytol. 68:W, 1980; d: segn Ayynppan K. Rnjiseknnm y coh. }. Cell Biol. 105:342,
1993; con permiso de The Company of Biologists Ltd.)
285
fl-7. Retculo endoplsmko liso (REL). a) Micrografa electrnica de una clula de Leydig de los testculos que muestra el RE liso
extenso donde se sintetizan hormonas esteroides. b) Micrografa electrnica de una clula heptica de rata mostrando la continuidad entre las
membranas del RE rugoso y del liso (flechas grandes), y tambin la estrecha relacin de los granulos de glucgeno con el RE liso, (a: Segn Don
W. Faivcett; b: segn Albert L. Jones y Douglas L. Schmucker, Gastroenterology 73:847, 1977.)
286
Lisosorna
RE rugoso
Granulos mucgenos
Complejo de Golgi
(b)
RER
\.5]im
FIGURA 8-8. Estructura polarizada de una clula secretoria, a) Dibujo de una clula
caliciforme secretoria de moco del colon de rata, b) Micrografa electrnica de baja resolucin de una clula secretoria de moco de la glndula de Brunner del intestino delgado
del ratn. Ambos tipos de clula muestran polarizacin distinta de los organelos, que
refleja su papel en la secrecin de grandes cantidades de mucoprotena. El extremo basa!
de las clulas contiene el ncleo y el RE rugoso. Las protenas sintetizadas en el RE rugoso
se desplazan hacia el complejo de Golgi ntimamente relacionado y desde all al interior
de las vesculas, en las cuales se concentra el producto secretorio final. Las regiones
apicales de las clulas estn llenas de granulos secretorios que contienen mucoprotenas
listas para ser liberadas, (a: Segn Moran Neutra y C.P. Leblond }. Cell Biol. 30:119, 3966,
con permiso de Rockcfeller University Press; b: segn Alaiti Rambourg e Yves Clcrmont, Eur. J.
Cell Biol. 51:196, 1990.)
(a)
Pptido de
seal del
polipptido
naciente
Citoplasma
287
RNAt
o
Receptor
Ribosoma receptor
de la
PRS
Membrana del RE
Luz del RE
Translocador de protena
FIGURA 8-9. Modelo para la sntesis de protenas secretorias (o una enzima lisosmica) en un rbosoma enlazado a la membrana del RE
rugoso. La sntesis del polipptido se inicia en un ribosoma libre. Conforme la secuencia seal (mostrada en rojo) emerge del ribosoma, se enlaza
a la partcula para reconocimiento de seales (1), que detiene la traduccin en tanto se pone en contacto con la membrana del RE rugoso. La
fijacin del ribosoma a la membrana del retculo endoplsmico (2) es mediada por un receptor para la partcula para reconocimiento de seales
y un receptor separado del ribosoma. En los pasos subsecuentes (3 y 4), la PRS se libera del pptido de seal y luego del receptor de la PRS (pasos
que requieren GTP y protena enlazada a GTP), el pptido de seal se une a un componente de la membrana RE (indicada aqu donde se une
a la superficie interna de! conducto) y el resto del polipptido se transloca a travs del conducto. Luego que el polipptido naciente pasa al interior
de la luz del RE, una protena de membrana (la peptidasa de seal) separa la seal del pptido. Una vez en la luz, el polipptido interacta
con las protenas que garantizan un plegamiento apropiado (pg. 73) y promueven la formacin de enlaces disulfuro.
citoplasma o dentro del citoplasma. El asilamiento de protenas recin sintetizadas en las cisternas del RE prcticamente las elimina del citoplasma y permite enviarlas a su
destino final. Este proceso es un claro ejemplo del papel de
las membranas en la compartamentalzacin del espacio
dentro de la clula de modo que puedan separarse los diferentes tipos de actividades.
Biosntesis de membranas en el retculo endoplsmico
Las membranas no se originan de novo, o sea, entidades
nuevas procedentes de las reservas de protenas y lpidos;
ms bien, slo se originan a partir de membranas preexistentes. Las protenas y lpidos recin sintetizados se introducen continuamente a las membranas ya existentes, proceso
que en su mayor parte ocurre en el retculo endoplsmico.
Como veremos a continuacin, los elementos de la membrana se desplazan del RE a casi todos los otros compartimientos de la clula. Conforme la membrana se desplaza a
travs de la clula, las enzimas que residen en los diferentes
compartimientos de la clula modifican su composicin de
diferente manera. Por lo tanto/ aunque la membrana puede fluir por medio de vesculas desde el RE a travs del
complejo de Golgi hacia la membrana plasmtica, las membranas que constituyen cada uno de estos compartimientos
tienen su propia composicin nica y mantienen su identidad propia distintiva (cuadro 4-1).
Recordemos que las membranas celulares son asimtricas; las dos superficies de una membrana tienen una estructura muy diferente (pg. 125). Esta asimetra se establece
inicialmente en el retculo endoplsmico conforme lpidos y
protenas se incorporan a la bicapa, y se mantiene a medida
que la membrana pasa por los procesos de gemacin y fu-
288
Exterior
Secuencia
para detener
la transferenci
Citoplasma
Luz del RE
FIGURA f-11. Modelo de la sntesis de una protena integral de membrana que contiene un solo segmento transmembrana y una secuencia
de seales cerca del N terminal del polipptido naciente. La PRS y los diferentes componentes de la membrana mostrados en la figura 8-9 tambin
participan en la sntesis de protenas integrales, pero se omiten para mayor sencillez. El polipptido naciente se transloca al canal revestido de
protena, igual que si fuera una protena secretoria (1-3), pero la entrada de la secuencia que detiene la transferencia hidrfoba al interior del
poro (4) abre el canal lateralmente y la hlice hidrfoba se introduce en la bicapa (5-6). Se asume que en este momento el ribosoma se libera
de la membrana y la sntesis de la porcin restante del polipptido (la porcin C terminal) ocurre conforme el ribosoma se libera en el citoplasma
(como en el paso 5). Los polipptidos que tienen ms de un segmento transmembrana poseen una secuencia hidrfoba adicional que ayuda a
introducirlos en la bicapa.
PC
PS
289
SM
tu 50% -
RE
CG
MP
RE
CG
MP
RE = retcul endoplsmico
CG = ccmpl o de Golgi
MP = memb rara plasmtica del eritrocito
,il
RE
CG
MP
PC - fcsfatidilcolina
PS - osfatidilserina
SM = esfingomielina
(a)
290
CH,OH
CrLOH
/V-acetilglucosamina
transferasa
O. H
O
OPOPO
NH
=0
o-
O
CH
H
Q-
<;H2OH
/ H
O (Enlace j31, 2)
CH,
OH
/V-acetilglucosamina
OH
Difosfato de uridina
UDP-A/-acetlglucosamina
FIGURA 8-13. Ejemplos de una reaccin catalizada por una glucosiltransferasa. Esta gran familia de enzimas transfiere azcares desde un
portador de azcar nucletido (en este caso UDP-N-acetilglucosamina) al extremo en crecimiento de una cadena de oligosacridos (que en este
caso contiene un residuo maosa en su extremo). Aqu se muestra la reaccin particular segn ocurre en el complejo de Golgi.
H2C=CC=CH2
H
Isopreno
integrada a la bicapa de lpidos de la membrana. Los azcares se aaden a la molcula de dolicol fosfato, una a la vez,
en el orden apropiado que indican las glucostransferasas
enlazadas a la membrana. Esta parte del proceso de N glucosilacin es prcticamente invariable; en las clulas de
mamferos se inicia con la transferencia de N-acetglucosamina 1-fosfato seguida por la transferencia de otra Nacetglucosamina y a continuacin de nueve unidades
maosa y tres de glucosa en el patrn preciso indicado en la
figura 8-14. A continuacin, la enzima oligosacariltransferasa
del portador lpido transfiere este bloque de azcares al
polipptido naciente conforme dicho polipptido se transloca
a la luz del retculo endoplsmco.
Aunque algunos polisacridos, particularmente de
eucariotes inferiores, permanecen prcticamente como se
muestra en la figura 8-14, la evolucin de organismos ms
complejos se acompa de la diversificacin de grupos carbohidrato unidos a las protenas. La modificacin del ncleo oligosacrido se inicia en el RE al eliminar los residuos
terminales de glucosa mediante glucosidasas. Los pasos restantes ocurren en la ruta hacia el complejo de Golgi y dentro del mismo como una etapa subsecuente en la va
biosinttica (pg. 299).
Primer paso en el transporte vesicular
En condiciones tpicas, las cisternas RER son cavidades
amplias y aplanadas que actan como conductos de transporte para desplazar protenas de membrana y luminales
desde su sitio de sntesis a los extremos apicales del RER. La
superficie del borde apical de las cisternas RER de ordinario
es lisa, o sea, desprovista de ribosomas (fig. 8-7, b). Estas
partes del RE se conocen como elementos de transicin, los
cuales son sitios para formar el primer grupo de vesculas
de transporte en la va biosinttica, vesculas que son dirigidas hacia el complejo de Golgi.
3UDP-
291
Polipptido
naciente
Ribosoma
mRNA
4GDP
Membrana
del retculo
endoplsmico
Citoplasma
13
CDP
1 UDP
1UMP
= Glucosa
= A/-acetilglucosamna (NAG)
UDP-
CTP
Dolicol
= Maosa
AVW P = Dolicol fosfato
FIGURA 8-4. Pasos en la sntesis de la porcin central de un oligosacrido N unido en el RE rugoso. Los primeros siete azcares (cinco
residuos de maosa y dos de NAG) se transfieren uno cada vez al dolicol-PP sobre el lado citoplsmico de la membrana del RE (pasos 1 y 2).
En esta etapa, el dolicol con su oligosacrido unido al parecer pasa a travs de la membrana (paso 3), y los azcares restantes (cuatro residuos
de maosa y tres de glucosa) se unen en el lado luminal de la membrana. Estos ltimos azcares se fijan, uno a la vez, al lado citoplsmico de
la membrana, al extremo de la molcula dolicol fosfato (como en los pasos 4 y 7), que entonces viaja a travs de la membrana (pasos 5 y 8) y
dona su azcar al extremo en crecimiento de la cadena de oligosacrido (pasos 6 y 9). Una vez que el oligosacrido est completamente
ensamblado, se transfiere a un residuo asparagina del polipptido naciente (paso 10). El dolico-PP regresa a travs de la membrana (paso 11)
y est listo para iniciar la aceptacin de azcares una vez ms (pasos 12 y 13).
red, que posteriormente se identific en otros tipos de clulas, se denomin complejo de Golgi y ayud a su descubridor a que se le otorgara el premio Nobel en 1906. Durante
decenios, el complejo de Golgi fue motivo de controversia
entre quienes crean que el organelo realmente exista en las
clulas vivientes y aquellos que pensaban que era un artefacto, estructura artificialmente formada durante la preparacin del tejido para la observacin con microscopio. Slo
cuando se identific claramente el complejo de Golgi en
muestras no fijadas obtenidas mediante fractura por congelacin se comprob su existencia dentro de la clula viviente
ms all de toda duda razonable.
El complejo de Golgi tiene morfologa caracterstica que
consiste en cisternas aplanadas, discoides, con rebordes
292
Retculo endoplsrnico
con ribosomas
(a)
trans
Vesculas de Golgi
Cisternas de Golgi
(b)
RTG
Cisterna
trans
Cisterna
media
Cisterna
cis
F I G U R A 8-16. D i b u j o
de una parte del complejo de
Golgi de una clula epitelial
del conducto reproductor de
la rata macho. Los elementos
cis estn interrumpidos para
poder visualizar el compartimiento medio. Los elementos
del compartimiento trans con
frecuencia son discontinuos y
aparecen como redes tubulares. (Segn A. Rambourg y Y.
Clermont, Eur. J. Cell Biol. 52:
195, 1990.)
fe)
293
0.15 jim
FIGURA 8-17. Diferencias regionales en la composicin de la membrana a travs de las pilas de Golgi. a) El tetrxido de osmio reducido
impregna de manera preferencial las cisternas cis del complejo de Golgi. b) La enzima manosidasa II, que participa en la nivelacin de los residuos
maosa de la parte central del oligosacrido, segn se describe en el texto, se localiza de preferencia en las cisternas medias, c) La enzima
nuclesido difosfatasa, que procesa azcares nucletidos, se localiza de preferencia en las cisternas trans. (a y c: Segn Robert S. Decker, ]. Cell
Biol. 61:603, 1974; b: segn ngel Velasco y cois. }. Cell Biol. 122:41, 1993; todas con permiso de Rockefeler Unversity Press.)
294
Compartimiento donador
Protena
VSV-G
COOH
COOH
COOH
COOH
Una fraccin ("fraccin donadora") se obtuvo de clulas infectadas con virus de la estomatitis vesicular, patgeno cuya informacin gentica codifica una protena integral de membrana (VSV-G) sintetizada en el RER
y glucosilada en el complejo de Golgi de las clulas
infectadas. Las clulas infectadas que suministraron la
fraccin donadora eran mutantes genticos que carecan
de la enzima que transfiere el azcar N-acetilglucosamina transferasa, normalmente residente en la cisterna
media del complejo de Golgi que cataliza la reaccin
mostrada en la figura 8-13.
La otra fraccin ("fraccin aceptora") se obtuvo de clulas tipo nativo no infectadas que s contenan la enzima que transfiere el azcar.
Cuando las dos fracciones se mezclaron con todos los factores solubles y tambin N-acetilglucosamina marcada con
istopos radiactivos en las condiciones requeridas para la
formacin y transferencia de vesculas, se observ aparicin de radiactividad en el dominio luminal de la protena
VSV-G por adicin progresiva de N-acetilglucosamina. Esto
slo puede ocurrir si las membranas donadoras que contienen VSV-G son transportadas a membranas aceptoras que
contienen N-acetilglucosamina transferasa (fig 8-18). Consideraremos ahora con mayor detalle el mecanismo de transporte de vesculas.
295
aisladas de organismos tan diversos como mamferos y levaduras. Las vesculas recubiertas con protenas de revestimiento se conocen como vesculas no recubiertas con clatrina,
para distinguirlas de otro tipo de vesculas recubiertas que
estudiaremos con detalle posteriormente. Las vesculas revestidas con protenas de revestimiento al parecer no son
selectivas porque incluyen cualquier protena en su membrana y transportan cualquier carga soluble que no tenga
restricciones especficas para abandonar el compartimiento
donador. Muchas pruebas indirectas sugieren que las vesculas con protenas de revestimiento (u otras vesculas no
revestidas con clatrina) participan en un proceso de flujo
en masa, en el cual las vesculas desplazan continuamente
membrana, materiales y lquidos de un compartimiento a
otro, desde el RE a travs del complejo de Golgi y finalmente a la membrana plasmtica (fig. 8-20, a). En la figura 8-20,
b, se muestra el ensamblado de la vescula recubierta con
protenas de revestimiento.
Segn este punto de vista del transporte de vesculas,
una protena localizada en la membrana, en la luz del RE o
en el complejo de Golgi "automticamente" ser transportada de un compartimiento al siguiente y con el tiempo a la
superficie de la clula, a menos que contenga informacin
X*^"
(a)
COPs
GTP
FAR
(b)
Yema revestida
Vescula revestida
296
Receptor KDEL
cin dentro del organelo. Cada compartimiento de membrana en la va biosinttica puede tener seales propias de
retencin, lo que ayuda a explicar cmo cada compartimiento puede mantener su dotacin de protenas nicas
frente al movimiento continuo de vesculas hacia adentro y
afuera de esa regin.
Los datos sugieren que las protenas residentes en el
retculo endoplsmico que "accidentalmente" escapan del
RE no se alejan mucho de la va biosinttica, sino que son
recicladas a partir de la cisterna d$ de Golgi de regreso al
RE (fig. 8-21). Esta observacin indica que el trfico de membrana ocurre no slo del RE al complejo de Golgi (la llamada va antergrado), sino tambin en la direccin opuesta
(retrgrada). A partir del tratamiento de las clulas con
brefeldin A (BFA), frmaco obtenido de clulas de hongos, se
derivaron datos adicionales para el transporte retrgrado.
El tratamiento con BFA conduce a la desaparicin del complejo de Golgi y desplazamiento de las protenas de Golgi
residentes al interior del retculo endoplsmico. El brefeldin
A acta al impedir la formacin de vesculas revestidas, al
bloquear el trfico de membrana del RE al de Golgi, pero no
a la inversa. En ausencia de trfico antergrado, se puede
esperar que el movimiento retrgrado de las vesculas genere transporte de la membrana de Golgi hacia la membrana del retculo endoplsmico.
Orientacin de las vesculas hacia
un compartimiento particular
297
= v-SNARE para
el RE cis de Golgi
fr = t-SNARE para
el RE ds de Golgi
^ = v-SNARE para la membrana
plasmtica rrans de Golgi
^ = t-SNARE para la membrana
plasmtica trans de Golgi
Retculo endoplsmico
(O)
Cisterna B
Sin
revestimiento
Sin
revestimiento X
Cisterna A
,.
298
Clatrina
^ Receptor con ligando
A Adaptador
t
vescula con protenas
de revestimiento que
contiene material
inespecfico
de la RTG
\n de la
Formacin de la
vescula revestida
de clatrina que
contiene material
seleccionado
de la RTG
Clatrina
Dominio
transmembrana
del receptor
de membrana
Material
seleccionado para
ser transportado
Adaptador
(consta de dos
sublimidades
de adaptina)
Dominio
citoplsmco
del receptor
de membrana
(W
FIGURA 8-23. Formacin en la RTG de fosillas que contienen adaptina y estn recubiertas de clatrina. a) Se pueden observar cuando menos
dos tipos distintos de vesculas recubiertas en gemacin sobre la membrana de la red trans de Golgi. Las vesculas recubiertas por protena no
clatrina no muestran selectividad respecto de la carga que transportan, en
tanto que las vesculas recubiertas de clatrina transportan materiales capaces de enlazarse a receptores especficos de membrana. Los receptores
de membrana se incorporan selectivamente en las vesculas recubiertas de
clatrina como consecuencia de una unin especfica entre los extremos de
las protenas de membrana y la capa ce adaptadores que los rodean
(mostrada en el recuadro). Los adaptadores, a su vez, poseen sitios de
enlace para la red ms externa de molculas de clatrina. b) Como se analiza posteriormente en el captulo, se pueden distinguir dos tipos de vesculas recubiertas de clatrina, un tipo formado por gemacin de la red
trans de Golgi de ias pilas de Golgi, y el otro que se forma por gemacin
a partir de la membrana plasmtica. Estos dos tipos de vescula se distinguen por los tipos de molculas de adaptina que componen los
adaptadores. Las vesculas formadas por gemacin de la RTG contienen
y-adaptina, cuya localizadn en estas clulas se revela por anticuerpos
fluorescentes rojos. Las vesculas formadas por gemacin de la membrana
plasmtica contienen er-adaptina, cuya localizacin se revela por anticuerpos fluorescentes verdes, (b: Segn Margaret S. Robinson, Trends in Cell
Biol. 2:294, 1992.)
Clasificacin de las protenas lisosmicas. La clasificacin de las protenas lisosmicas ilustra la manera de
operar de algunos componentes de una vescula recubierta
de clatrina. Las protenas lisosmicas se ensamblan a ribosomas enlazados a la membrana del RE y se transportan a
la cisterna as de Golgi junto con otros tipos de protenas.
Sin embargo, ya en la cisterna de Golgi, las enzimas que
aaden un grupo fosfato a los azcares maosa de las cadenas de carbohidrato unidas por enlaces N reconocen a las
protenas lisosmicas (fig. 8-24, u). Por lo tanto, a diferencia
de otras glucoprotenas clasificadas en la red trans de Golgi,
las enzimas lisosmicas poseen residuos maosa fosforilados
que actan como seales de reconocimiento. Las enzimas
lisosmicas que llevan esta seal son reconocidas y "capturadas" por los receptores maosa 6-fosfato, los cuales son
protenas integrales de membrana de la red trans de Golgi
(fig. 8-24, b). Este aspecto del mecanismo de clasificacin
est bien establecido, pero la demostracin para el resto del
cuadro es ms circunstancial.
:'J - 3 c c 1 1 1 g I u c o s a m i n a
[osfotransferasa
299
F o sf odi es terglucosidasa
i t i
A los
i \ lisosomas
2UMP
- Maosa
- GIcNAc
(e)
Exocitosis
O
<\a de
<] clasificacin
Disociacin de la enzima
lisosmica del receptor
6-fosfato de maosa
^
Vescula del
transporte 0
Reciclamiento
del receptor
6-fosfato
para maosa
Receptor
maosa
6-fosfato
Fosforilacin de la
enzima lisosmica
Protena
secretoria
Enzima
lisosmica
(b)
300
Luz del
intestino
FIGURA 8-25. Sntesis de poiisacridos complejos en el complejo de Golgi. Diagrama de una clula caliciforme del colon de rata
mostrando la ubicacin de los granos plateados (rojo) en autorradiografas de clulas fijadas inmediatamente despus de incubacin con
3H-glucosa. El complejo de Golgi se muestra intensamente radiactivo,
lo que indica su papel en la incorporacin de residuos de azcar a las
cadenas de carbohidrato que constituyen la masa de la secrecin
mucosa. La incorporacin de azcares en el complejo de Golgi contrasta con la incorporacin de aminocidos en el RE rugoso. (Basado
en el trabajo realizado por Manan Neutra y C.P. LeUond.)
8-5 Lisosomas
Los lisosomas actan como organelos digestivos de la clula. Dentro de un lisosoma tpico se encuentra confinado un
grupo de casi 50 enzimas hidrolticas diferentes (cuadro
8-1) sintetizadas en el RE rugoso y enviadas a esos organelos. En conjunto, las enzimas lisosmicas son capaces de
cis de Golgi
media de Golgi
cis de Golgi
/V-acetilglucosamina
V Maosa
media de Golgi
Galactosa
meda de Golgi
media de Golgi
trans de Golgi
trans de Golgi
301
frans de Golgi
FIGURA 8-26. Etapas en la glucosilacin de oligosacridos de mamfero N enlazados en el complejo de Gogi. Luego de eliminar los tres
residuos de glucosa, a continuacin se quitan varios residuos maosa, en tanto que algunos azcares (N-acetilglucosamina, galactosa, fucosa
y cido silico) se aaden al oligosacrido mediante la accin de glucosiltransferasas especficas. En la luz de las cisternas de Golgi y los dominios
luminales de las protenas integrales de las membranas de Golgi se aaden cadenas similares de azcares a ambas protenas solubles.
(a)
FIGURA 8-27. Exocitosis. a) Micrografa electrnica que muestra un granulo secretorio luego de concluir la fusin con la membrana, b)
Modelo de un poro de fusin formado durante la exocitosis por interaccin de una protena integral multimrica de la vescula y la membrana
plasmtica. 1) Las protenas de las dos membranas entran en contacto; 2) las protenas forman un poro cerrado que abraza las dos bicapas, y
3) el poro se dilata conforme las molculas de lpido difunden a lo largo de las superficies hidrfobas dispuestas entre las subunidades de fusin
de los poros, (a: Cortesa de Susan o Bunven.)
302
Sustrato
Fosfatasas
fosfatasa acida
fosfodiesterasa acida
diante un transportador de protones (una H+-ATPasa) presente en la membrana que limita al organelo. Las membranas lisosmicas contienen dos grupos de protenas acidas
integrales altamente glucosiladas llamadas Igp-A y Igp-B,
fosfomonosteres
fosfodisteres
Nudeasas
RNA
DNA
ribonucleasa acida
desoxirribonucleasa acida
Proteasas
protenas
colgena
catepsna
colagenasa
dermatansulfato
queratansulfato
heparansulfato
heparansulfato
Polisacaridasas y oligosacaridasas
a-glucosidasa
fucosidasa
a-manosidasa
sialidasa
glucgeno
fucosil oligosacridos
manosil oligosacridos
sialil oligosacridos
Enzimas que hidrolizan esfingolpidos
ceramidasa
glucocerebrosidasa
/?-hexosaminidasa
arilsulfatasa A
ceramida
glucosilceramida
ganglisido C-M2
galactosilsulftido
(a)
triacilgliceroles
fosfolpidos
(b)
0.3 fjm
303
Acrosoma
(a)
de los lisosomas oscila desde estructuras relativamente grandes (mayores de 1 fim de dimetro) hasta vesculas muy
pequeas (25 a 50 nm de dimetro). La variacin en la
morfologa lisosmica es ms evidente en los macrfagos,
clulas especializadas en ingerir partculas extraas mediante un proceso de fagocitosis, que se estudia a profundidad
en la seccin 8-7. Cuando se diferencian macrfagos en cultivo, sus lisosomas inicalmente son organelos tubulares
interconectados que forman una red reticular (fig. 8-28, a).
Una vez que el macrfago cultivado comienza a fagocitar
materiales, sus lisosomas se transforman en vesculas ms
tpicas. La figura 8-28, b, muestra una pequea porcin de:
un clula de Kupffer, una clula fagocitaria del hgado encargada de ingerir eritrocitos envejecidos. Los lisosomas
mostrados en la figura 8-28, b, tienen forma irregular y densidad electrnica variable, lo que ilustra la dificultad para
identificar estos organelos con base slo en su morfologa.
De ordinario, para identificar un organelo como lisosoma
hay que demostrar la presencia de la enzima fosfatasa acida
(fig. 8-30). Esto se efecta por mtodos citoqumicos incubando cortes de tejido con un sustrato adecuado para la
enzima en presencia de una sal soluble de plomo, como el
citrato de plomo. Cuando la fosfatasa acida separa el fosfato inorgnico del sustrato se forma un precipitado insoluble
de fosfato de plomo en el sitio, el cual puede identificarse
directamente en el microscopio electrnico. Aunque es evidente que los lisosomas aparecen estticos en una micrografa electrnica, se ha demostrado que son organelos dinmicos capaces de efectuar fusin y fisin con rapidez.
La presencia dentro de una clula de esta verdadera
bolsa de enzimas destructoras sugiere algunas posibles funciones. La funcin mejor estudiada de los lisosomas es el
desdoblamiento de materiales que llegan a las clulas procedentes del ambiente extracelular. Muchos organismos
unicelulares ingieren partculas nutrientes que son desensambladas en el lisosoma por las enzimas. Los nutrientes
pasan al interior del citoplasma a travs de la membrana
lisosmica. En mamferos, las clulas fagocitarias, como los
macrfagos y los neutrfilos, funcionan como carroeros
304
que ingieren desperdicios o microorganismos potencialmene peligrosos. En general, estos materiales se inactivan al
pH bajo del lisosoma y luego son digeridos por las enzimas.
Se estima que un macrfago participa intensamente en la
fagocitosis y puede contener ms de mil lisosomas.
No todas las bacterias ingeridas por clulas f agocitarias
son destruidas. Algunas especies, como Mycobacterium tuberculosis, agente causal de la tuberculosis, penetran al citoplasma de un macrfago mediante fagocitosis, pero la vescula (fagosoma) donde quedan encerrados no se fusiona
con un lisosoma. De alguna manera, el microorganismo
inhibe la fusin que conducira a su destruccin, y en lugar
de eso se multiplica dentro de la clula. En contraste, la
bacteria causante de la fiebre Q, Coxiella burnet, queda incluida en un fagosoma que se funde con un lisosoma, pero
ni el ambiente cido ni las enzimas del lisosoma son capaces de destruir al patgeno. Un tercer paso es el que toma
Listeria monocytogenes, bacteria capaz de causar meningitis.
Este microorganismo produce una fosfolipasa que destruye
la integridad de la membrana lisosmica y permite que la
bacteria escape hacia el interior del citoplasma de la clula.
Durante la fertilizacin se observa una actividad lisosmica poco habitual. La cabeza del espermatozoide con-
tiene un paquete de enzimas lisosmicas denominado acrosoma. Cuando el espermatozoide alcanza la vecindad de un
vulo, la membrana que rodea el acrosoma se fusiona con
la membrana plasmtica suprayacente y libera las enzimas
lisosmicas almacenadas (fig. 8-29). Las enzimas digieren
una va a travs de la cubierta externa del vulo y dejan un
"agujero" por el cual avanza el espermatozoide, que entonces puede alcanzar la membrana plasmtica del vulo.
Los lisosomas no slo estn implicados en la destruccin de materiales que penetran a la clula desde el medio
externo. Tambin desempean un papel clave en el recambio del organelo, o sea, la destruccin y sustitucin de organelos. Durante este proceso, denominado autofagia, un organelo como la mitocondria, mostrado en la figura 8-30, se
rodea de una membrana donada por el retculo endoplsmico. A continuacin, la membrana que rodea al organelo
se fusiona con un lisosoma formando una vacuola autofgica.
Cuando se examina una micrografa electrnica no es raro
observar una mitocondria u otro organelo atrapado en una
vacuola autofgica. Se calcula que en una clula heptica
de mamfero, una mitocondria sufre autofagia cada 10 minutos, aproximadamente. El nmero de vacuolas autofgicas
observadas en una clula puede variar segn el estado -
Fagoctosis
Exocitosis
Vacuola
fagocitaria
(fagosoma)
Granulo de
pigmento de lipofuscina
Vacuola autofgica
(citolisosoma)
Complejo de Golgi
Mitocondria
305
envejecimiento. El papel de los lisosomas en diversas enfermedades se analiza en La perspectiva humana, en este captulo.
(b)
306
LA PERSPECTIVA HUMANA
Enfermedades producidas por defectos
de la funcin lisosmica
Si consideramos que las enzimas hidrolticas de un lisosoma pueden digerir
todo el contenido de una clula, no es
sorprendente que los trastornos de la
funcin lisosmica tengan un profundo efecto sobre la salud humana. Por
ejemplo, la enfermedad de los mineros
conocida como silicosis se debe a la captacin de fibras de slice por las clulas
fagocitarias de los pulmones. Las fibras
quedan encerradas' en los lisosomas,
pero no pueden digerirse; en vez de
esto, provocan fugas en la membrana
lisosmica, derrame del contenido de
enzimas digestivas dentro de la clula
y dao al tejido pulmonar. Ocurre algo
similar cuando las clulas carroeras
captan fibras de asbesto y ocasionan la
enfermedad llamada asbestosis. Ambos
padecimientos pueden ser debilitantes
e incluso causar la muerte. Ciertos tipos de enfermedades inflamatorias,
como la artritis reumatoide, se deben
en parte a la liberacin de enzimas lisosmicas procedentes de clulas inmunolgicas en el espacio extracelular,
daando los materiales intraarticulares.
La comprensin de los mecanismos para enviar protenas hacia organelos particulares se inici con el descubrimiento de que los residuos maosa
6-fosfato de las enzimas lisosmicas
actan como "direccin postal" para
entregar protenas a los lisosomas. El
descubrimiento de la "direccin" del
lisosoma ocurri en estudios de pacientes con una rara enfermedad heriditaria conocida como enfermedad de la
clula I, en la cual muchas clulas del
cuerpo contienen lisosomas inundados
de materiales no degradados. Los materiales se acumulan en los lisosomas
de estos pacientes por la falta de enzimas hidrolticas. Cuando se estudiaron
cultivos de fibroblastos de estos pacientes se observ que las enzimas lisosmicas se sintetizan en concentracin
307
Enfermedad
Deficiencia enzimtica
Principal sustancia
almacenada
Gangliosidosis GMI
jS-galactosidasa GMi
Ganglisido GMI
Enfermedad Tay-Sachs
Hexosaminidasa A
Ganglisido GMI
Enfermedad de Fabry
a-galactosidasa A
Trihexosiceramida
Enfermedad de Sandhoff
Hexosaminidasas A y B
Enfermedad de Gaucher
Glucocerebrsido
Ganglisido G^2
y globsido
Glucocerebrsido
Enfermedad Niemann-Pick
Lipogranulomatosis de Farber
Esfingomielinasa
Ceramidasa
Esfingomielina
Ceramida
Enfermedad de Krabbe
Galactocerebrosidasa
Galactocerebrsido
Sulfatidolipidosis
Arilsulfatasa A
Sulftido
Consecuencias
308
Las vacuolas de las plantas tambin son sitios de digestin intracelular no muy diferentes de los lisosomas de una
clula animal. En realidad, las vacuolas de las plantas poseen algunas hidrolasas acidas iguales a las que se encuentran en los Hsosomas; el pH de la vacuola se mantiene a un
valor bajo mediante una H+-ATPasa dentro del tonoplasto
que bombea protones al interior del lquido vacuolar. Otra
caracterstica que comparten las vacuolas vegetales con los
lisosomas es su participacin como punto final en la va
biosinttca de la clula. Igual que las protenas del lisosoma,
muchas protenas de una vacuola vegetal se sintetizan en
ribosomas enlazados a membranas del RER, son transportadas a travs del complejo de Golgi y clasificadas en la cara
tmns de dicho complejo antes de ser enviadas hacia la vacuola. En algunas clulas, como las del parnquima del
almacn de semillas en desarrollo, ms de 50% de las protenas recin sintetizadas son enviadas a la vacuola para
almacenamiento.
teriales demasiado grandes para penetrar su membrana independientemente de sus propiedades de permeabilidad?
Para satisfacer esta necesidad evolucionaron mecanismos
que captan materiales del medio extracelular dentro de vesculas derivadas de pliegues, o invaginaciones, de la membrana plasmtica. La captacin de materiales extracelulares
en vesculas ctoplsmicas se divide en dos categoras separadas, fagocitosis y endocitosis, que ocurren por mecanismos diferentes. La fagocitosis es la captacin de partculas
materiales y la endocitosis es la captacin de lquidos, solutos disueltos y macromolculas suspendidas.3 Las vesculas
formadas por fagocitosis son tpicamente casi 10 veces ms
grandes (1 a 2 m de dimetro) en comparacin con las
formadas por endocitosis (0.1 a 0.2/m de dimetro).
Seudpodos
Engullimiento
Absorcin
Alimento
Vacuola
con alimento
Alimento
digerido
Alimento
absorbido
(a)
FI<;iJKA -3.'. Fagocitosis, a) Diagrama de las etapas de engullimiento, digestin y absorcin de materiales llevados al interior de una
amiba por fagocitosis, b) Se ilustra el proceso de engullimiento efectuado por un leucocito polimorfo nuclear que ingiere una partcula de
levadura, (b: Segn J. Boy/es y Dorothy F. Bainton, Cell 24:906, 1981; con
permiso de Cell Press.)
15 pm
309
Endocitosis
Endosamos
El material captado por endocitosis de ordinario se descarga
en una red de tbulos y vesculas que en conjunto se conocen como endosomas. Los endosomas adems se dividen
en dos compartimientos, los endosomas tempranos, tpicamente localizados cerca de la regin perifrica de la clula,
y los endosomas tardos, que de ordinario se localizan en
alguna parte ms interior de la clula, ms cerca del ncleo
(fig. 8-34). Los endosomas tempranos y tardos se pueden
distinguir entre s segn sus propiedades, como su densidad flotante (que permite aislarlos en fracciones diferentes
en un gradiente de densidad), pH y contenido enzimtico.
Los materiales captados por endocitosis en la superficie
de la clula primero se transportan a los compartimientos
endosmicos tempranos, que se cree que actan como una
rea de clasificacin. Algunos materiales que penetran a los
endosomas tempranos son enviados a los endosomas tardos (fig. 8-35), otros retornan a la membrana plasmtica e
incluso algunas sustancias pueden ser enviadas hacia el complejo de Golgi. Se cree que los endosomas tardos reciben
enzimas lisosmicas sintetizadas en el RER y clasificadas en
la RTG, adems de recibir el material de los endosomas
tempranos. Los endosomas tardos pueden imaginarse como
un "compartimiento prelisosmico" que tiene pH cido y
una concentracin baja de enzimas lisosmicas. Los materiales pasan del endosoma tardo al interior de los lisosomas, donde sufren un procesamiento adicional, segn se
analiza en La va experimental, al final del captulo.
Fagocitosis
La fagocitosis ("clulas que comen") es ejecutada extensamente por unos pocos tipos de clulas especializadas en
captar partculas materiales del ambiente y entregarlas al
lisosoma. Los organismos heterotrofos unicelulares, como
amibas y ciliados, se mantienen vivos atrapando partculas
nutrientes y organismos ms pequeos, y aprisionndolos
en pliegues de la membrana plasmtica. Los pliegues se
fusionan para formar una vacuola (ofagosoma) que se desprende de la membrana plasmtica (fig 8-33, a). El fagosoma
se fusiona con un lisosoma y as el material se digiere en el
interior de la clula.
En casi todos los animales evolutivamente desarrollados, la fagocitosis es un mecanismo protector y no una
manera de alimentarse. Los mamferos poseen varias clulas fagocitarias, incluyendo macrfagos y neutrfilos, cuya
funcin es vagar por la sangre y los tejidos fagocitando
organismos invasores, clulas daadas, eritrocitos envejecidos y desperdicios. La actividad contrctil de microfilamentos subyacentes a la membrana plasmtica que contiene actina controla el engullimiento de partculas materiales
por fagocitosis. El proceso de engullimiento de partculas se
ilustra en la figura 8-33, b. Los pasos en la digestin del
material engullido se muestran en la figura 8-31.
310
endocitosis mediada por receptor. Observada desde su superficie citoplsmica (fig. 8-37, b), se nota que la cubierta
velluda contiene una red de polgonos parecida a un panal
de abejas. La construccin geomtrica de la cubierta se deriva de la estructura de sus bloques de construccin de catrina. Cada molcula de clatrina se compone de tres cadenas pesadas y tres cadenas ligeras reunidas para formar un
ensamblado de tres extremidades denominado trisquelion
(fig. 8-38). Un trisquelion constituye un mdulo notablemente adaptable con el cual una clula puede construir rejillas poligonales. Durante la invaginacin, el enrejado relativamente plano de la fosilla revestida se incurva rodeando
la vescula en formacin. La figura 8-37, c, muestra la estructura de una fosilla revestida que sufre invaginacin y se
aproxima a la etapa donde se desprende para formar una
vescula revestida. Una rejilla compuesta de trisqueliones
es una estructura muy adecuada para sufrir el tipo de
redisposicin estructural requerida para transformar una
rejilla plana en una estructura en forma de caja (fig. 8-39, a).
En realidad, los trisqueliones purificados de clatrina se
autoensamblan para formar cajas vacas similares a las encerradas en una vescula revestida. En la figura 8-39, b, se
muestra la disposicin de trisqueliones de tres extremida-
Membrana
plasmtica
Endosomas
perifricos
tempranos
Vescula de J
transporte
(a)
Los receptores
de la membrana
son reciclados
haca la membrana
plasmtica
Lisosoma
(c)
FIGURA 8-34. La va endosmica. a) Diagrama que muestra el desplazamiento de materiales procedentes del espacio extracelular hacia los
endosomas tempranos, donde se cree que tiene lugar la clasificacin. Con frecuencia los receptores de membrana son enviados de regreso hacia
la membrana plasmtica, en tanto que los materiales dentro de la vescula se transfieren a los endosomas tardos y luego al lisosoma. b-c) Se
incubaron clulas cultivadas con transferrina fluorescente marcada y una protena que las clulas captan por endocitosis. b) Poco despus de
la endocitosis se observan los materiales marcados en endosomas tempranos, punteados, ampliamente distribuidos, c) En la etapa final, la
transferrina marcada se libera en el compartimiento endosmico tardo y se concentra ms cerca del ncleo celular, (b-c: Cortesa de Satyajit Mayor,
Kenneth W. Dunn y Fred Maxfield.)
311
(b)
FIGURA 8-35. Demostracin experimental del desplazamiento de materiales del endosoma temprano al endosoma tardo, a) Clula de
cobayo cultivada incubada durante cinco minutos con la enzima peroxidasa de rbano, que la clula lleva a su interior por endocitosis y que
puede localizarse mediante microscopa electrnica cioqumica. El producto de la reaccin con la peroxidasa de rbano ingerida se observa como
precipitado electrnicamente denso de forma y tamao variables, restringido a los endosomas tempranos (flechas), b) Clula incubada con
peroxidasa de rbano durante 25 minutos, tiempo suficiente para que la enzima ingerida se desplace a los endosomas vesiculares de mayor
tamao formados tardamente (flechas ms grandes). En estas clulas particulares, los endosomas tardos de ordinario se muestran llenos de
estructuras vesiculares ms pequeas (P, membrana plasmtica). (Cortesa de G. Griffiths, R. Back y M. Marsh.)
0.1 um
FIGURA 8-36. Endocitosis mediada por receptor. Esta secuencia de micrografas muestra las etapas de captacin de lipoprotenas vitelinas
por el oocito de gallina, a) Las protenas que la clula lleva a su interior se concentran en la superficie externa de una regin indentada de la
membrana plasmtica, llamada fosilla revestida. La superficie interna de la membrana plasmtica de la superficie revestida est cubierta por
una capa de material velloso electrnicamente denso que contiene clatrina. b) La fosilla revestida se hunde para formar un pliegue de membrana
plasmtica todava recubierto en su superficie interna por clatrina. c) La membrana plasmtica a punto de separarse en forma de una vescula
que contiene protena de yema de huevo sobre su superficie uminal y clatrna sobre su superficie citoplsmica. d) Vescula revestida separada
de la membrana plasmtica. El siguiente paso del proceso es liberar la cubierta de clatrina. (Segn M.M, Pernj y A.B, Gilbcrt, }. Cell Science 39:257,
1979, con permiso de Tlie Company of Bidogists Ltd.)
312
Cadena pesada
Cadena ligera
(b)
0.1 nm
Rosilla revestida
de ctatrina
313
Lquido extraceluiar
(a)
FIGURA 8-39. Ensamblado molecular de una vescula revestida, a) Esquema de la incorporacin de triesqueliones en la red externa de
clatrina de una vescula revestida, b) Modelo que muestra el empacamiento propuesto de las subunidades de trisquelion. Dos trisqueliones
aparecen superpuestos dentro de la red. Cada extremidad de un trisquelion se extiende desde un vrtice a lo largo de los bordes de dos polgonos
vecinos y luego retorna al interior con su dominio terminal formando la capa interna observada en esta reconstruccin, (b: Segn G.P.A. Vigers,
R.A. Crowther y B.M.F. Pearse, EMBO J. 5:533, 1986, con permiso de Oxford niversity Press.)
FIGURA 8-40. Las rosillas revestidas facilitan la captacin selectiva de protenas integrales de membrana con sus respectivos ligandos. La captacin de receptores especficos de membrana en la membrana plasmtica ocurre por un mecanismo similar al descrito en la
figura 8-23 para el transporte de materiales en vesculas revestidas de
clatrina de la red trans de Golgi. La clatrina se ensambla sobre la
superficie exterior de la capa de adaptadores que tienen doble funcin: se enlazan a molculas de clatrina sobre la superficie externa y
a los extremos citoplsmicos de receptores especficos de membrana
sobre su superficie interna. Los receptores de membrana, a su vez, se
unen a igandos especficos. Como resultado de estas diferentes
interacciones, los complejos de receptor especfico-ligando se incorporan a una vescula recubierta y son transportados al interior de la
clula, en tanto que otras protenas de membrana incapaces de enlazarse a los adaptadores permanecen en la membrana plasmtica.
revestidas situadas en la superficie apical del epitelio intestinal. En vez de ser transportados a un endosoma, las vesculas revestidas que contienen anticuerpos se transportan a
travs de toda la longitud de la clula epitelial, donde se
Fosilla revestida
Clatrina
^ Receptor con ligando
A Adaptador
314
FIGURA 8-42. Las LDL de colesterol consisten en casi 1 500 molculas de ster colesterilo rodeadas por una recubierta antiptica de
casi 800 fosfolpidos, 500 molculas de colesterol y una sola molcula
de apolipoprotena B (peso molecular, 550 kD) que interacta especficamente con el receptor LDL que se proyecta a partir de la membrana
plasmtica.
Usosoma
Endosoma
tardo
FIGURA 8-41. Reciclamiento de receptores de la membrana plasmtica. En el modelo que aqu se muestra, los receptores de la membrana plasmtica se separan de su ligando en un endosoma temprano.
Los receptores se renen dentro de una vescula membranosa y retornan a la membrana plasmtica.
LA VIA E X P E R I M E N T A L
315
Macrfago
=>
Clula endotelial
Lesin al endotelio
Leucocito
FIGURA 8-43. Placa aterosclertica. El proceso causante de la aterosclerosis an no es bien comprendido. En la actualidad se piensa que
la formacin de una placa se inicia con la aparicin de una forma oxidada de LDL que atrae clulas de msculo liso y macrfagos. Al parecer,
estas clulas ingieren LDL y se depositan como clulas espumosas en la pared de la arteria. E depsito adicional de LDL, combinado con el
crecimiento de las clulas de msculo liso en la pared arterial, conduce a la oclusin del vaso.
clatrina se desensambla y los receptores LDL son reciclados de vuelta a la membrana plasmtica (como se muestra
en la figura 8-41). Mientras tanto, las partculas LDL se
liberan en los lisosomas donde se descompone el componente protenico y se libera colesterol para emplear en la
clula en el ensamblado de la membrana o en otros procesos metablicos (p. ej., sntesis de hormonas esteroides). El
nmero de receptores LDL presentes en determinada clula es modulado por las necesidades metablicas de la clula.
Si sta crece activamente y sintetiza grandes cantidades
de membrana o produce hormonas esteroides, la cantidad
de receptores aumenta y es mayor el nmero de partculas
LDL captadas del medio que las rodea. Los pasos que condujeron al descubrimiento de la endocitosis mediada por
receptor y el paso al interior de las LDL se describen con
detalle en La va experimental: Endocitosis mediada por receptores.
La concentracin de LDL (o el contenido de colesterol)
en la sangre guarda estrecha correlacin con el desarrollo
de aterosclerosis, padecimiento caracterizado por reduccin
del calibre de las arterias. La oclusin arterial es consecuencia de un proceso complejo y mal comprendido que incluye
membrana plasmtica estaban cubiertas en su superficie interna por un revestimiento velloso. En una afirmacin proftica,
Roth y Porter sugirieron que las rosillas eran "superficies diferenciadas dedicadas exclusivamente a captar protenas y transportarlas al interior del oocito". Postularon que las protenas
del material vitelino eran adsorbidas especficamente sobre la
superficie externa de la membrana de las fosilfas recubiertas
que a continuacin se invaginan para formar vesculas revestidas . Las vesculas revestidas pierden su cubierta vellosa y se
fusionan entre s para formar los grandes corpsculos vitelinos
enlazados a la membrana caractersticos del oocito maduro.
Las primeras observaciones acerca de la estructura de las
vesculas revestidas fueron obtenidas en 1969 por Toku Kanaseki y Ken Kadota, de la Universidad de Osaka.2 El examen
316
FIGURA VE 8-1. a) Modelo manual de una "canastilla vaca" que forma la red superficial de una vescula
revestida, b) Micrografa de alta resolucin electrnica
de una canastilla vaca. Los nmeros 5 y 6 representan
un pentgono y un hexgono, respectivamente. (Segn
Toku Kanaseki y Ken Kadota, J. Cell Biol. 42:226, 1969, con
permiso de RockefeUer University Press.)
(a)
180 kD
317
I roo I-
10
20
30
.01 .05.1
10
pero se requiere un gen hasta ahora no identificado cuyo producto es necesario para la mediacin del control por retroalimentacin [de reductasa HMG-CoA] por lipoprotenas".
Cmo la presencia de lipoprotenas en el medio puede
afectar la actividad de una enzima en el citoplasma de clulas
cultivadas? Para encontrar la respuesta a esta pregunta, Brown
y Goldstein realizaron estudios para determinar la naturaleza
de la interaccin entre clulas y lipoprotenas. Comenzaron
aadiendo LDL radiactivas a un plato de cultivo que contena
una sola capa de fibroblastos derivados de HF o de sujetos
humanos normales.7 En tanto los fibroblastos normales se enlazaban con afinidad y especificidad elevadas a molculas de
LDL marcadas, las clulas mutantes prcticamente no mostraron capacidad para enlazarse a estas molculas de lipoprotena (fig. VE 8-5). Las pruebas indicaron que las clulas normales poseen un receptor altamente especfico para LDL y que
este receptor era defectuoso en las clulas de pacientes con HF.
El siguiente paso fue determinar qu ocurre a las LDL despus
de enlazarse al receptor.
Algunos datos sugirieron que las partculas de LDL enlazadas al receptor eran introducidas a la clula y entregadas a
los lisosomas, donde las protenas de las LDL se desdoblaban
y se liberaban molculas de colesterol libre para utilizar en el
ensamblado de la membrana. Por ejemplo, la prueba del papel
de los lisosomas en el procesamiento de LDL se obtuvo utilizando fibroblastos de un paciente con un trastorno por almacenamiento lisosmico (pg. 306) caracterizado por acumulacin de esteres colesteril en sus lisosomas.8 La enfermedad
resulta de una deficiencia de la enzima lisosmica lipasa acida,
que normalmente separa las molculas de colesterol de los
cidos grasos con los cuales se esterifican. En la figura 8-42 se
muestra en qu forma se empacan las molculas de colesterol
dentro de las partculas de lipoprotenas de baja densidad. A
diferencia de los fibroblastos normales, las clulas derivadas
M
HORAS
de un paciente con deficiencia de esta enzima no tienen capacidad para utilizar el colesterol presente en las partculas de
LDL aadidas al medio de cultivo (fig. VE 8-6). En consecuencia, las concentraciones de reductasa HMG-CoA se mantuvieron muy elevadas en estas clulas a pesar de la adicin de LDL
al medio de cultivo. Estos datos suministran fuertes pruebas
de que los esteres externos de colesteril que penetran a la clula como parte de las LDL son suministrados a los lisosomas
para liberar colesterol.
Para visualizar el proceso de enlace al receptor y el paso al
interior, Brown y Goldstein colaboraron con Richard Anderson,
quien haba estudiado la estructura celular con el microscopio
electrnico. El grupo incub fibroblastos de sujetos normales y
enfermos de HF con LDL que presentaban uniones covalentes
con la protena ferritina que contiene hierro. Debido a los tomos de hierro, las molculas de ferritina pueden dispersar un
rayo de electrones y por lo tanto visualizarse directamente en
el microscopio electrnico. Cuando se incubaron fibroblastos
normales con LDL y ferritina a 4C, temperatura a la cual los
ligandos se pueden enlazar a la superficie celular, pero no
pueden ser llevados al interior, las partculas de LDL y ferritina aparecieron enlazadas a la superficie celular. Un examen
ms detallado revel que fas partculas de LDL no se distribuyeron al azar sobre la superficie de la clula, sino se localizaron en segmentos cortos (0.5 mm) de la membrana plasmtica,
318
NORMAL
30
HOMOC1GOTO
Hidrlisis del
linoleato colesterilo
25
40
20
I
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l5
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10
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Normal
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Enfermedad por
almacenamiento
de ster colesterilo
_*
150
100
50
D0.oo
HORAS
2
3
HORAS
FIGURA VE 8-5. Tiempo de curso de las LDL radiactivas marcadas con 1251 enlazadas a clulas de un sujeto normal (crculos) y un
homocigoto con HF (tringulos) a 4C y 37C. Las clulas se incubaron en un amortiguador que contena 5/tg/mI de 125I-LDL en presencia (crculos y tringulos claros) y ausencia (crculos y tringulos oscuros) de 250/g/ml de LDL no radiactivas. Es evidente que en ausencia
de LDL no radiactivas, las clulas normales unen cantidades significativas de LDL marcadas, en tanto que las clulas de pacientes HF no
lo hacen. El mismo resultado se observ con ambas temperaturas, lo
que indica que el enlace no depende de energa (puesto que a 4C no
se forma ATP). El enlace de LDL marcadas se reduce mucho en presencia de LDL no radiactivas, lo que indica que las lipoprotenas no
marcadas compiten con las marcadas por los sitios de enlace, y por
tanto el enlace de la lipoprotina a las clulas es especfico (o sea, no
es resultado de un enlace inespecco). (Segn M.S. Broum y ].L.
Goldstein, Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A. 71:790, 1974.)
tiene capacidad para entregar su ligando enlazado a los lisosomas celulares, y por lo tanto ser incapaz de afectar la biosntesis de colesterol en la clula. En esa poca se descubri un
receptor de LDL con una mutacin de tipo diferente. Los receptores de LDL que poseen este defecto (conocido como mutacin J.D., por el paciente en quien se observ) pueden enlazarse a cantidades normales de LDL marcadas con istopo
radiactivo, aunque la lipoprotina enlazada al receptor no pase
al interior y por consiguiente no pueda llegar a los lisosomas
citoplsmicos para su procesamiento.11 Anderson y sus colaboradores postularon que el receptor de LDL es una protena
transmembrana que normalmente se localiza en las fosillas
revestidas debido a que su dominio citoplsmico se enlaza
especficamente a un componente de dichas fosillas revestidas, tal vez clatrina (pero ms tarde se identific como adaptina). Debido al defecto en su dominio citoplsmico, el receptor
mutante J.D. no tiene capacidad para ubicarse en las fosillas
revestidas de la clula. Las personas con esta mutacin muestran el mismo fenotipo que los pacientes cuyos receptores son
incapaces de enlazarse a lipoprotenas de baja densidad.
Estudios subsecuentes determinaron que el receptor de
LDL normal es una glucoprotena transmembrana de 839
aminocidos; los 50 aminocidos situados sobre el extremo C
terminal de la protena se extienden al interior de la membrana como un dominio citoplsmico. El anlisis del receptor
mutante J.D. muestra que en esta protena slo hay una sustitucin de aminocido en el dominio citoplsmico; un residuo
tirosina localizado normalmente en la posicin 807 es sustituido por una cistena.12 Esta sola alteracin en la secuencia de
aminocidos oblitera totalmente la capacidad de la protena
para concentrarse en las fosillas revestidas.
319
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320
SINOPSIS
El citoplasma de las clulas eucariotas contiene un sistema
de organelos membranosos, incluyendo retculo endoplasmico, complejo de Golgi y lisosomas que funcional y estructuralmente se relacionan entre s y con la membrana plasmtica. Estos diferentes organelos membranosos son parte de una
red dinmica integrada en la cual se intercambiam materiales
en una y otra direccin como parte de vesculas de transporte
que se forman por gemacin en un compartimiento y se fusionan con otro. Las membranas y los materiales que encierran
se desplazan a travs de la clula en vesculas de transporte a
lo largo de vas definidas. Una va biosinttica secretoria lleva
protenas desde su sitio de sntesis en el RE a travs del complejo de Golgi a su destino final (un organelo, la membrana
plasmtica o el espacio extracelular), en tanto que una va endoctica desplaza material en direccin opuesta desde la membrana plasmtica o el espacio extracelular al interior de la clula. Las vesculas y la carga que encierran son enviadas a su
destino apropiado mediante seales especficas que poseen las
propias protenas (p, 277),
El retculo endoplsmico (RE) es un sistema de tbulos, cisternas y vesculas que dividen el citoplasma en un espacio
luminal dentro de las membranas del RE y un espacio citoplsmico por fuera de ellas. El RE se divide en dos tipos muy
amplios, el RE rugoso (RER), que de ordinario se presenta
como cisternas aplanadas y cuyas membranas tienen ribosomas unidos, y el RE liso (REL), que en condiciones tpicas se
muestra como compartimientos tubulares y cuyas membranas
carecen de ribosomas. Las funciones del REL varan de una
clula a otra e incluyen la sntesis de hormonas esferoides,
destoxicacin de una gran variedad de compuestos orgnicos,
movilizacin de glucosa a partir de glucosa 6-fosfato, y secuestro de iones calcio. Las funciones del RER son similares en
diferentes tipos de clulas; incluyen sntesis de protenas que
sern secretadas, protenas lisosmicas, protenas integrales
de membrana y lpidos de membrana (p. 280).
Las protenas sintetizadas en los ribosomas enlazados a la
membrana del RER pueden reconocerse por una secuencia
de seales hidrfoba que de ordinario se sita cerca del Nterminal del polipptido naciente. Conforme surge la secuencia de seales del ribosoma, se enlaza a una partcula para
reconocimiento de seales (PRS) que detiene la sntesis y acta
como etiqueta para mediar el enlace del complejo a un receptor de la PRS presente slo en la membrana del retculo
endoplsmico rugoso. Luego del enlace, la PRS se libera de la
membrana y el polipptido naciente pasa a travs de un agujero revestido de protena en la membrana del RE hacia el
interior de la luz del retculo endoplsmico. Las protenas lisosmicas y secretorias se translocan al interior de la luz del RE en
su totalidad, en tanto que las protenas de membrana se integran a la bicapa de lpidos gracias a una o ms secuencias que
detienen la transferencia de partculas hidrfobas. Una peptidasa de seal enlazada a la membrana elimina el pptido de
seal del polipptido y la protena sufre plegamiento y formacin de enlaces disulfuro con ayuda de protenas que residen
en la luz del retculo endoplsmico. Las protenas que no se
321
PREGUNTAS DE REPASO
1. Mencionar los organelos que componen la va biosinttica
en comparacin con los que forman parte de la va endoctica.
2. Describir las diferencias en una autorradiografa de clulas pancreticas incubada con aminocidos marcados durante cinco minutos y fijadas de inmediato en comparacin
322
3.
4.
5.
6.
7.
8.
PREGUNTAS ANALTICAS
1. Cul de los siguientes polipptidos, si es que alguno, sera
de esperar que careciera de una seal pptida: anticuerpos (IgG, pg. 63), fosfatasa acida, hemoglobina, protenas
ribosmicas, glucoforina, protenas del tonoplasto.
2. Supongamos que usted sospecha que un paciente puede
sufrir la enfermedad de clula I. Cmo podra decidir si
este diagnstico es correcto empleando clulas cultivadas
del paciente?
3. En qu compartimiento celular se esperara que una
glucoprotena tuviera su mayor contenido de maosa? Es
mayor el contenido de N-acetilglucosamina? Es mayor el
contenido de cido silico?
4. El sulfato de condroitina es un glucosaminoglicano. Esperara usted encontrar este material en la luz del RER? Por
qu si o por qu no?
5. Cules son las tres protenas que se esperara encontrar
como componentes integrales de la membrana RER y que
estaran ausentes de la REL? Cules son las dos protenas
del REL que no estn presentes en el retculo endoplsmico
rugoso?
6. Supongamos que se quiere estudiar el proceso de secrecin
regulada en una clula que carece de granulos secretorios
maduros, o sea, vesculas que contienen material secretorio listo para ser descargado. Cmo se obtendra una clula que careciera de dichos granulos?
7. Qu tipo de anticuerpo se podra emplear para distinguir
entre vesculas recubiertas aisladas formadas en la RTG de
aqullas formadas en la membrana plasmtica?
8. La autorradiografa depende de partculas emitidas por
tomos radiactivos que inciden sobre una emulsin fotogrfica situada en la parte superior de un corte de tejido.
323
16. No todos los receptores que contienen endocitosis mediada por receptores se localizan en las fosilas recubiertas
antes de enlazarse al ligando, pero se concentran en las
fosilas recubiertas antes de ser llevadas al interior. Cmo
se supone que el enlace de un ligando al receptor provocara su concentracin en una fosilla recubierta?
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