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AMILASA VEGETAL
La -amilasa es una enzima proteica que se encuentra en la saliva humana y
cataliza la degradacin del almidn, que es un polisacrido de reserva vegetal.
El almidn est formado por dos tipos de molculas: la amilosa y la
amilopectina, ambos polisacridos de glucosa. La amilosa se conforma por
cadenas lineales de glucosas unidas por enlaces - C1-C4, mientras que la
amilopectina tiene, adems de estos ltimos enlaces, uniones C1 con C6,
formando cadenas ramificadas. La -amilasa rompe uniones C1-C4, tanto en la
amilasa como en la amilopectina, dejando dextrinas lineales y ramificadas
(oligosacridos) como productos.
Cataliza la hidrlisis al azar de los enlaces-1,4 glucosdicos de la regin central
de la cadena de amilosa y amilopeptina exceptuando las molculascercanas a
la ramificacin, obteniendo como resultado maltosa y oligosacridos de varios
tamaos. La actividad de la enzima se determinacualitativamente mediante la
disminucin de la capacidad de la solucin dealmidn para formar el color azul
caractersticos con el yodo o midiendo ladisminucin de la viscosidad de la
suspensin de almidn.
La alfa-amilasa cataliza la hidrlisis de la cadena lineal (amilosa) y laramificada
(amilopectina) del almidn, rompiendo enlaces 1,4 interiores(endoamilasa) para
formar una mezcla de dextrinas; por ello se la conocecomo enzima
dextrinognica (mezcla de amilodextrina, eritrodextrina,acrodextrina y
maltodextrina) con poca produccin de maltosa.
El almidn es un polmero semicristalino de glucosa de gran abundancia enla
naturaleza. La cantidad de almidn contenido en el grano de cereal varia,pero
generalmente oscila entre el 60 y 75 % del peso del grano. El almidnpresente
en los granos es el ms importante de los carbohidratos para finesindustriales
resultando preciso degradarlo enzimticamente con unagelatinizacin previa
por accin de calor o sometindolo a un intensotrabajo mecnico. El almidn
consta de dos fracciones: amilosa yamilopectina
El objetivo de esta prctica fue determinar la activad especfica de la amilasa
vegetal y la actividad enzimtica de una amilasa, extrada de trigo perminado,
luego dosandolo almidn residual.
III. RESULTADOS:
6.1. PARA LA DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Se cogieron 4 tubos de ensayo y se prepar el sistema con las enzimas y los
reactivos como se muestra en la tabla N 01.
TABLA N1: Se arm el siguiente sistema.
N TUBOS
SUSTRATO
II
III
IV
1
incubador
a
30
0.1
51'
0.2
0.3
incubador
a
30
15'
1
Reparar
9.9
0.5
1
5'
9.8
0.5
9.7
0,5
9.6
0.5
Enzimas
cido
clorhdrico
H20
Lugol
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
ABSROBANCIA
TRIGO
0.277
0.018
0.020
0.019
0.0835
ABSORBANCIA
CEBADA
0.237
0.018
0.040
0.069
0.091
TABLA B
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
Unidad
enzimtica
(mg/mn)
TRIGO
Unidad
enzimtica
(mg/mn)
CEBADA
0.185
0.012
0.013
0.0127
0.055675
0.158
0.012
0.027
0.046
0.06075
TABLA C
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
Protena
(mg/mn)
TRIGO
Protena
(mg/mn)
CEBADA
2.77
0.18
0.2
0.19
0.835
2.37
0.18
0.4
0.69
0.91
TABLA D
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
Actividad
Actividad
Especfica (AE) Especfica (AE
TRIGO
CEBADA
0.066787
0.06666667
0.065
0.06684211
0.06632394
0.06666667
0.06666667
0.0675
0.06666667
0.066875
N TUBOS (ml)
Preparado
enzimtico
Agua destilada
Reactivo de
biuret
II
III
IV
0.2
0.1
0.05
0.8
0.9
0.95
4
4
4
4
Luego se llev a la incubadora del espectrofotmetro a 540 nm, obteniendo los
resultados como se muestra en la tabla N04.
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
espectrofotmetro a 540 nm
ABSORBANCIA
ABSORBANCIA
TRIGO
CEBADA
0.049
0.074
0.057
0.056
0.059
0.044
0.080
0.058
0.050
0.043
TABLA B
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
Unidad
enzimtica
(mg/mn)
TRIGO
Unidad
enzimtica
(mg/mn)
CEBADA
0.327
0.0493
0.038
0.0373
0.1129
0.293
0.053
0.039
0.033
0.1045
TABLA D
N TUBO
I
II
III
IV
Promedio
Actividad
Especfica
(AE)
TRIGO
Actividad
Especfica
(AE)
CEBADA
0.66734694
0.06662162
0.06666667
0.06660714
0.21681059
0.66590909
0.06625
0.06724138
0.066
0.21635012
IV. CONCLUSION
V. DISCUSION
La amilasa es una de las enzimas ms estudiadas debido a su rol de
degradacin del almidn, ya que permite una germinacin de las semillas, el
cual es degradado por los enlaces 1-4 del interior (endoamilasa) en diferentes
dextrinas, que debido a su disminucin en tamao puede ser hidrolizada por la
B-amilasa, sin embargo la -amilasa es una enzima que se encuentra regulada
tanto por hormonas, o diferentes factores, tales como la temperatura y el pH,
adems posee un peso molecular de 50 Kda aproximadamente .La
germinacin se lleva con la hidratacin y posterior liberacin de giberelinas, las
cuales inducen la sntesis de las enzimas hidrolticas, que hidrolizan el almidn
que se encuentra el endosperma, produciendo glucosa que es transportada por
difusin, para generar energa.
El alfa-amilasa se encuentra ampliamente distribuida en el reino vegetal,
particularmente en las semillas con reservas de hidratos de carbono como el
trigo, la cebada, de donde ha sido posible aislarla en forma pura. Su peso
molecular es alrededor de 60.000, esta se secreta al endospermo amilceo de
las semillas de cereales por dos tejidos, el cotiledn y la capa de aleurona,
degradando las macromolculas de amilosa y amilopectina en pequeos
fragmentos de 6 a 7 unidades de glucosa.
La amilosa se colorea de azul en presencia de yodo, debido a la absorcin o
fijacin del yodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual solo ocurre
en frio. Es conveniente aclarar que este proceso no es una reaccin qumica,
ya que no se producen sustancias nuevas, como reactivo para identificar el
almidn se usa una solucin denominad lugol.
La prueba del Lugol se realiza para identificar la presencia de polisacridos, si
despus de aadir los digeridos a los tubos de lugol se observa que tiene un
color azul, eso significa que hay presencia de almidn por lo tanto la reaccin
no tuvo lugar, por otro lado si la reaccin da un color amarillo intenso, eso
quiere decir que no hay presencia de almidn por lo tanto, hay si tuvo lugar la
actividad de la enzima