OBTENCIN DE UN CULTIVO PURO DE BACTERIAS

lvarez Elizabeth; Mercado Mara; Meza Yesenia; Narvez Rafael; Velilla

Merlys
Universidad de sucre
Resumen
En los ambientes naturales los microorganismos se encuentran usualmente como
poblaciones mixtas, pero si queremos estudiarlos, caracterizarlos e identificarlos,
necesitamos tenerlos como cultivos puros. Un cultivo puro es aquel en el que
todos los microorganismos provienen de una sola clula. El modo de obtener
estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola
clula. Estos cultivos se caracterizan porque las colonias deben ser iguales en
forma, tamao y color y al observase en el microscopio deben tener un aspecto
comn. Esta prctica se realiz con el propsito de aprender tcnicas de siembra
de bacterias como siembra en estras y siembra a partir de diluciones, con el fin
de obtener colonias de bacterias de un cultivo puro. Para esto tomaron 2 medios
de cultivos de bacterias madre, que se encontraban en liquido (agua) y en solido
(agar), en total se hicieron 3 siembras de las cuales 2 fueron realizadas con la
tcnica de estra en T y la otra con la tcnica de siembra a partir de diluciones. Se
observ pasadas una 24 hrs aprox. la presencia de bacterias lo cual nos indica
que el procedimiento realiz de manera correcta, cabe destacar que las tcnicas
de asepsia fueron importantes para realizar este ensayo y as los cultivos no se
contaminaran.
La obtencin de un cultivo puro, a partir
de una poblacin mixta, se lleva a cabo
en dos etapas:
INTRODUCCION
1. La muestra debe diseminarse de
Los cultivos axnicos son muy extraos
manera tal que los diferentes
en la naturaleza. En los medios
microorganismos
queden
lo
naturales como por ejemplo, en el
suficientemente separados sobre la
suelo, agua, o en el cuerpo humano
superficie de un medio de cultivo
existen cultivos mixtos, en estos
slido, de manera que luego de la
existen muchas y diferentes especies
incubacin ellos formen colonias
de forma conjunta. Si queremos
visibles aisladas.
Este proceso se conoce como
estudiarlos,
caracterizarlos
e
aislamiento. En esta placa tendremos
identificarlos, necesitamos tenerlos
diferentes
tipos
de
colonias
como cultivos puros. (1).
correspondientes a los diferentes
Un cultivo puro es aquel en el que
microorganismos presentes en la
todos los microorganismos provienen
poblacin original.
de una sola clula.
2. Luego de tener las colonias aisladas,
stas deben transferirse con el

filamento a un tubo que contenga agar

nutritivo estril para cultivar esa colonia
aislada; este procedimiento se conoce
como trasplante.
Para garantizar la pureza del cultivo
obtenido, es conveniente, a partir de
cada tipo de colonia aislada, repetir el
proceso de aislamiento antes descrito.
Se considerar que se ha obtenido un
cultivo puro, cuando al realizar este
proceso, todas las colonias obtenidas
presenten las mismas caractersticas.
El medio de cultivo utilizado en el
proceso de aislamiento depender,
entre
otros
factores,
de
los
requerimientos nutricionales de los
microorganismos que se espera aislar y
de la presencia de microorganismos
que, por sus caractersticas y/o por la
cantidad en que se encuentren en la
muestra, dificulten la obtencin del
microorganismo
en
objeto
de
aislamiento. En este ltimo caso, se
deben
utilizar
medios
de
enriquecimiento y medios selectivos
que inhiban el desarrollo de grmenes
contaminantes. (2).
La temperatura y otras condiciones de
incubacin,
variarn
segn
los
microorganismos,
usualmente
la
temperatura
ptima
de
los
microorganismos patgenos para el
hombre oscila entre 30 y 40C. Cuando
el microorganismo que se intenta aislar
es anaerbico, deben tomarse las
precauciones necesarias a fin de
eliminar la presencia de oxgeno en el
ambiente donde se desarrollar el
mismo.
Basndose en el origen y naturaleza de
la muestra se pueden inferir los
posibles microorganismos que se
encuentran presentes en la misma, y
ese conocimiento ayudar en la
seleccin del medio y las condiciones
de cultivo adecuadas. (3)

Objetivos

Obtener colonias de bacterias de

un cultivo puro mediante la
tcnica de estriado.
Entrenar a los estudiantes en
tcnicas de trabajo asptico.
Aprender
a
manipular
adecuadamente microrganismos.

Metodologa
En esta prctica de laboratorio se
realizaron 3 siembras provenientes de
cultivos bacterianos madre, 2 con un
cultivo lquido y 1 con un cultivo slido.
Para ello se desinfecto el rea de trabajo
con alcohol y se utilizaron guantes.
Posteriormente a esto se encendi el
mechero.
Para la siembra de colonias provenientes
del cultivo liquido madre se tomaron 2
cajas de Petri las Cuale contenan un
medio de cultivo en agar, en para realizar
la siembra en estra se marc una de las
cajas de Petri por la parte de afuera con
una T y se dividi en 3 sectores a, b y c.
Se tom un asa, se esteriliz al fuego y se
meti el asa en del cultivo para extraer
una pequea cantidad de este, la cual se
pas a esparcir en la zona a de caja de
forma horizontal, luego en la zona b de
forma vertical y por ltimo en la zona en
forma de zigzag. En la otra siembra se
us
Para extraer el cultivo y este se esparci
haciendo en 2 lneas en zigzag en una caja
de Petri.
Para la siembra en estra del cultivo
bacteriano madre solido se realiz el
mismo
procedimiento
realizado
anteriormente para la siembra en estra
del cultivo bacteriano madre lquido.
Todos estos procedimientos se realizaron

a pocos centmetros del mechero, 12cm

aprox. con el fin de crear un ambiente
esterilizado para que el cultivo no se
contaminara.
Conclusiones

Imagen #2: obtencin de cultivo

proveniente de la muestra ambiente,
slido.

En este experimento se logr la

realizacin de un cultivo de bacterias puro
mediante la tcnica de estriado, utilizando
muestras en caldo y muestras en estado
slido.
Tambin se concluy que se adquiri la
destreza para la realizacin de tcnicas de
trabajo asptico.
En esta prctica se aprendi a manejar
adecuadamente los microorganismos para
asa obtener las muestras libres de
contaminantes.

Imagen # 3: cultivo
proveniente de la muestra
lquida de suelo.

Imagen # 1:
Muestra ambiente
Resultados
y
anlisis
muestra de los
( slido)
cultivos de donde
Al dejar las muestras en la
se iba a hacer la
incubadora y observarlas al da
siembra
siguiente, se pudo notar la
presencia de colonias de bacterias
aisladas para las muestras de medio
lquido, en siembra por estra y
siembra en zig-zag.
.
Muestra liquida de
suelo (agua
estancada).

La
identificacin bacteriana y la
caracterizacin completa solo son
posibles con el aislamiento de la
bacteria y la obtencin de cultivos
puros. Por ello el primer problema al
estudiar
una
bacteria
es
su
aislamiento del resto de los
microorganismos presentes (una
muestra patolgica, de agua, de

suelo, de alimentos, etc.). Una vez

que se ha logrado el aislamiento es
posible obtener la bacteria de
inters
en
cultivo
puro.
El
aislamiento se define como la
separacin de un microorganismo
del resto de microorganismo que le
acompaan. El mtodo ms usado
es la siembra por estras sobre un
medio de cultivo slido adecuado
dispuesto en una caja de Petri [4].
Cada colonia bacteriana que se
obtiene de la siembra de un cultivo
puro tiene unas caractersticas
determinadas en cuanto a su forma,
borde,
elevacin,
tamao,
consistencia, etc. Los tipos de
bacterias presentes en la muestra
original son visibles como tipos
diferentes de colonias. A partir de
colonias separadas suficientemente
es posible obtener un cultivo puro
de cada uno de los tipos de
bacterias presentes en la muestra
original. El xito del aislamiento, de
la separacin sobre el medio de
cultivo, depende de la superficie
sobre la que se ha distribuido la
muestra. Es muy importante realizar
el mayor nmero de estras posible.
En las primeras estras aparecern
colonias confluentes o una masa
continua de microorganismos. En las
estras finales debern aparecer
colonias separadas unas de otras. El
aislamiento requiere un reducido
inculo de partida. [5]
El mtodo de siembra por estra de
ambos medios mostro una buena
distribucin,
diferenciacin
y
aislamiento de las colonias. En
ninguno de los casos se observ
contaminacin.
El
crecimiento
de
microorganismos observados

los
en

cada caja de Petri se debe al

aumento o crecimiento explosivo de
las bacterias, se produce un gran
nmero de ellas a partir de una
nica clula inicial de forma que
tras un periodo de incubacin en las
condiciones ambientales adecuadas
se produce una colonia observable a
simple
vista
y
formada
por
individuos iguales. El desarrollo de
la bacteria aislada que se d
durante el proceso de incubacin se
denomina ciclo celular. Durante este
proceso tiene lugar la replicacin
del material gentico, la sntesis de
componentes
celulares,
la
elongacin de la bacteria para
alcanzar un tamao doble del inicial
y su divisin por biparticin para dar
lugar a dos clulas hijas. La
duracin del ciclo celular coincide
con el tiempo de generacin y
depende, en general, de los mismos
factores de los que depende este.
Por tanto, el crecimiento de una
poblacin resulta de la suma de los
ciclos celulares de todos los
individuos de dicha poblacin [6].
La
sucesiva disminucin del
tamao de la poblacin sobre el asa
(por descarga sobre el medio de
cultivo) al recorrer el medio de
cultivo,
debe
asegurar
que
finalmente algunas clulas queden
suficientemente separadas (aisladas
unas de otras) sobre la superficie. El
aspecto
de
las
colonias,
su
coloracin,
tamao,
etc.
Son
criterios
que
se
usan
para
diferenciar bacterias, aunque son
propiedades
generales
muy
influenciadas por las condiciones de
cultivo. Las colonias pueden ser
opacas,
translucidas
o
transparentes. Algunas producen
pigmentos fluorescentes cuando se

iluminan con luz ultravioleta, otras

aparecen
con
superficie
pulverulenta, otras son lisas, o
rugosas,
o
poseen
anillos
concntricos. En ocasiones el olor es
tambin caracterstico [7].

Una colonia es una agrupacin de

bacterias formada a partir de la
reproduccin de una Unidad
Formadora de Colonia (UFC)
sobre un medio slido; aunque
vara de tamao generalmente es
visible a simple vista. Las
colonias bacterianas tienen una
medida, forma, textura y en
algunos
casos
color
caractersticos,
que
aunque
puede variar de acuerdo al medio
en que se encuentren, es
constante
bajo
condiciones
controladas y depende de la
especie bacteriana que la forme.

CUESTIONARIO
a

Usted tiene un cultivo lquido

mixto y desea obtener cultivo
puro. Cmo procedera?
Para la separacin de un
determinado microorganismo del
resto de microorganismos que le
acompaan, el mtodo ms usual
es la siembra por estra sobre un
medio de cultivo slido adecuado
dispuesta en una placa de Petri.
Para ello se toma una pequea
cantidad de muestra con un asa
de platino y se reparte sobre la
superficie del medio de cultivo.
Sobre
el
medio
quedan
separadas e inmovilizadas las
clulas bacterianas. Tras la
incubacin
en
condiciones
adecuadas, cada clula viable
origina
una
colonia
visible
resultado de sucesivas divisiones
celulares.
Cada
colonia
bacteriana
tiene
unas
caractersticas determinadas en
cuanto a su forma, borde,
elevacin, tamao, consistencia,
etc. A partir de colonias
separadas suficientemente es
posible obtener un cultivo puro de
cada uno de los tipos de bacterias
presentes en la muestra original.

Qu es una colonia?

A qu se le denomina cepa en
microbiologa?
Son microorganismos del tipo
fenotpico que representan una
proporcin derivada de un
organismo mayor, como una
muestra de estudio. Las cepas
contienen informacin biolgica
que es de inters cientfico. Son
obtenidas por lo general a travs
del procedimiento de la clonacin.

Qu es una cepa pura?

Investigue instituciones que se
encarguen de venderlas.
Una cepa pura es aquella que
contiene un solo tipo de
microorganismo. El modo de
obtener estos cultivos consiste en
obtener colonias aisladas, que
provienen de una sola clula.
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Morfolgicamente, qu tipos
de colonias bacterianas
existen?
Morfolgicamente
la
colonia
puede ser circular, puntiforme,
irregular,
rizoide,
fusiforme.
Tambin se pueden encontrar
bordes
enteros,
ondulados,
lobulados y filamentosos.

Qu informacin
proporcionan el desarrollo de
bacterias en medios lquidos y
semislidos?
El desarrollo de bacterias en
estos medios puede brindarnos
diferentes informaciones teniendo
en cuenta la finalidad con el cual
se haga su preparacin, pero a
nivel general la informacin que
puede brindarnos el crecimiento
de bacterias en estos medios la
movilidad de las bacterias, al
igual
que
las
condiciones
adecuadas del medio permiten la
clonacin de las muestras es
decir su rpido desarrollo.

Bibliografa
1.

Cultivos

puros

[Consultado

Disponible

27/09/2016],.

en:
https://es.scribd.com/doc/110903216/
Cultivo-axenico.
2. Cultivos puro de bacterias Vase en:
http://www.unavarra.es/genmic/micro
gral/Tema%2002.%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf.
3.
Microbiologa, cultivos puros
[Consultado
27/09/2016],.Recuperado

de:
http://tecnicasbacteriologicas.blogspot
.com.co/2014/10/obtencion-de-uncultivo-puro.html.
4.

Obtencin de cultivo puro.

[Consultado
27/09/2016]
[En
lnea] Disponible en:
http://www.pomif.com/pages/pra
cticas/bacteriologia/aislamiento?
theme=pdf

5. Tcnicas de cultivo. Aislamiento.

Obtencin de cultivos puros.
[Consultado 27/09/2016] [ En
lnea] Disponible en:
http://www.pomif.com/pages/pra
cticas/bacteriologia/aislamiento

6.

Cultivo de microorganismos.
[ Consultado 27/09/2016] [ En
lnea]
Disponible
en:
http://www.unavarra.es/genmic/
microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de
%20microorganismos.pdf

7.
Pelczar/Reid/Chan,

Microbiologa,
cuarta

edicin, editorial MC.GRAW-HILL,

Capitulo8, Pg. 117