INFORME DE LABORATORIO N 1

MICROBIOLOGIA
OBJETIVOS
1. Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.
2. Aprender y utilizar los mtodos de esterilizacin disponibles en el
laboratorio.
3. Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio de
microbiologa.
5. Aplicar criterios disciplinares para la intervencin segura en ambientes de
laboratorio.

Cuestionario de entrada
1. Que es bioseguridad? Las normas de bioseguridad son un conjunto de
medidas preventivas destinadas a proteger la salud y seguridad de las
personas que realizan actividades en el laboratorio frente a riesgos
procedentes del manejo de agentes biolgicos, fsicos o qumicos, estas
normas de bioseguridad estn destinadas a reducir el riesgo de transmisin de
microorganismos de fuentes reconocidas o no reconocidas de infeccin en
Servicios de Salud vinculadas a accidentes por exposicin a sangre y fluidos
corporales.
2. Cules seran para usted las normas bsicas de bioseguridad en el
laboratorio de microbiologa?
Uso adecuado de materiales.
Uso de dotacin: bata, cofia y gafas.
No ingerir alimentos, bebidas, no fumar en el rea de laboratorio.
Mantener el rea de trabajo organizada
3. Cmo puede usted evitar en el laboratorio daos a su salud?

Tener cuidado con los materiales inflamables como alcohol etlico

evitando contacto con mechero.
Manipular correctamente el mechero para evitar quemaduras
Manipular cuidadosamente las sustancias qumicas evitando el contacto
con los ojos, se recomienda el uso de gafas.

Lavar muy bien las manos para evitar irritaciones por sustancias, en
caso de sufrir de alergias utilizar guantes quirrgicos.
Evitar distracciones puesto que en un descuido, se nos puede partir
algn elemento ocasionando cortaduras.

4. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de

esterilizacin con ms uso en el laboratorio; en que consiste cada uno de ellos
y para qu materiales se utilizan.
1. Calor seco: se efecta en estufas de aire seco u hornos Pasteur y se manejan
temperaturas entre 160 180C, por un espacio de dos horas
aproximadamente. Este mtodo se utiliza para esterilizar el material de vidrio
generalmente: tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers. No se debe
emplear para esterilizar medios de cultivo o agua pues se evaporan hasta
secarse. Previo al horneado el material de vidrio se recubre con papel Kraf y se
sella con cinta indicadora de esterilidad, una vez realizado el proceso de
esterilizacin se revisa la cinta la cual debe tornarse de color caf oscuro lo que
indica una correcta esterilizacin. El calor seco tambin se utiliza para secar
material de vidrio como tubos y pipetas, este material se deja en el horno por
dos horas a 60C. Las lminas y laminillas se secan con un trapo suave. Los
dems materiales se secan a temperatura ambiente.
2. Calor hmedo en autoclave: se utiliza para esterilizar medios de cultivo
preparados, escobillones, gasas entre otros. Adicionalmente se tiene otra
autoclave para descontaminar cultivos antes de ser desechados. La autoclave
es un recipiente en el que se consigue exponer el material a esterilizar a
temperaturas superiores a la de ebullicin del agua, gracias al aumento de la
presin. El autoclave se opera a presin de 15 lb. Y a 121C. El tiempo de
exposicin depende del material y volumen que se esterilice, pero en general
esta comprendido entre 15 y 30 minutos.
3. Flameado: usado principalmente para asas, es otro mtodo de esterilizacin
comn usado en el laboratorio. Consiste en poner el asa con la cual se va a
hacer el cultivo, durante unos minutos en la llama del mechero.
4. Radiaciones
Ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos
nuclecos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la
viabilidad de los microorganismos.
Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos.
Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la
esterilizacin en quirfanos.

Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa

atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales
termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos vacunas y alimentos
5. Filtracin: Se usan membranas filtrantes con poros de un tamao
determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter las
muestras.
Los filtros que se utilizan no retienen virus ni micoplasmas, estos ltimos estn
en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin
se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para
esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones
intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos
celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Existen tres tipos bsicos de
filtros:
-Filtros profundos o Filtros de profundidad:
-Membranas filtrantes:
-Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo)
5. Establezca las diferencias entre esterilizacin y desinfeccin. La
esterilizacin implica la destruccin de todos los microorganismos, incluyendo
los esporos. La desinfeccin supone la destruccin de los microorganismos
vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de las
industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfeccin
no mata necesariamente a los esporos.
Tabla 1. Caractersticas tipo de Esterilizacin.
Tipo de Esterilizacin Agente de esterilizacin
Temperatura de uso (si se aplica)
Equipo utilizado Material que se puede esterilizar por este mtodo.
Esterilizacin con calor seco.
Calor 160- 180 C Estufas de aire seco u horno Pasteur
Tubos, cajas de Petri, pipetas y erlenmeyers.
Esterilizacin con calor hmedo.
Calor 121C Autoclave Cultivos preparados
Radiaciones Energa(ondas magnticas) 110 a 115 C Diafragnometro

Materiales
termolbiles
Como jeringas,
sondas.
Antibiticos, vacunas,
alimentos
Filtracin Presin
Aspiracin
Filtros
- Filtros profundos
o Filtros de profundidad
-Membranas filtrantes
-Filtros de huella de
nucleacin(Nucleoporo)
Lquidos y gases
En una primera parte se hizo nfasis
en las normas de bioseguridad que
se deben tener en cuenta en el
laboratorio, estas son:
NORMAS GENERALES:
El acceso al laboratorio estar
limitado solo al personal
autorizado.
No se debe pipetear con la
boca.
El personal que trabaje en el

laboratorio debe cumplir a

cabalidad las normas de
bioseguridad.
Toda rea debe estar marcada
con la respectiva seal de
riesgo biolgico y su nivel de
contencin.
Al ingresar al laboratorio se
debe tener en cuenta el debido
porte de la bata manga larga,
abotonada y limpia, as mismo
una vez se ingrese se debe
colocar los abrigos libros y
dems objetos, en sitios
adecuados para evitar un
posible accidente y NUNCA
sobre los bancos o mesones.
Las puertas y ventanas deben
permanecer cerradas durante
la sesin de laboratorio para
evitar la contaminacin por
corrientes de aire.
Al inicio y trmino de una
prctica se debe limpiar la
superficie de trabajo con una
solucin desinfectante.

El laboratorio debe
permanecer limpio y ordenado,
durante el trabajo o el trmino
del mismo.
Lvese las manos a la hora de
entrar y al trmino de cada
sesin de trabajo, secndolos
con toallas de papel.
El personal con cabello largo
deber recogerlo para trabajar
dentro del laboratorio. As
como usar todos los
implementos necesarios para
la proteccin segn el nivel de
riesgo biolgico.
Durante la prctica no se
deben guardar ni consumir
alimentos y bebidas dentro del
laboratorio.
Se debe colocar un calzado
adecuado para las prcticas en
el laboratorio.
Hable en tono bajo y evite al
mximo el movimiento dentro
del laboratorio.
Emplee los equipos segn las

instrucciones o los
procedimientos operativos
estandarizados, al igual que
emplee los protocolos
correspondientes a la practica.
El trasporte de materiales o de
muestras entre los laboratorios
se realizara de manera tal que
en caso de cadas no se
produzca salpicadura.
Todo personal debe poner
especial cuidado en evitar el
contacto con materiales
potencialmente infecciosos sin
la debida proteccin.
Los derrames y accidentes
deben ser informados
inmediatamente el supervisor
de laboratorio.
Se usaran mascaras faciales si
existe el riesgo de
salpicaduras o aerosoles.
Apagar los instrumentos
elctricos antes de manipular
las conexiones.
PASOS LLEVADOS A CABO EN LA

PRCTICA:
Una vez ya preparados, se ingresa al
rea de laboratorio, el tutor nos da las
instrucciones y recomendaciones
necesarias para llevar a cabo la
prctica. Muestra a cada equipo que
elementos se usaran durante la
prctica, a continuacin mostraremos
algunos de los elementos utilizados
en la prctica.
Horno microondas para
hongos.
Se utiliza para esterilizar material de
vidrio, por ejemplo, cajas de Petri,
matraces, tubos de ensayo, pipetas a
travs de circulacin de aire caliente
(calor seco) a temperaturas que
varan entre 120 y 180C por un lapso
de tiempo de 20 minutos a 8 horas.
a) b)
Figura 1.Horno microondas para Hongos.
Horno microondas para
bacterias
Se afirma que el horno microondas es
ideal para esterilizar los implementos
de laboratorio, al igual que el horno

para hongos, solo que este ataca las

bacterias presentes.
a) b)
Figura 2.Hono microondas para Bacterias.
Cuenta colonias:
Se utiliza para observar el nmero
de colonias presentes en la
muestra.
Figura 3.Cuenta Colonias.
Destilador de agua
Permite la obtencin de agua
destilada, es decir, agua a la que se
le han eliminado iones e impurezas.
Mediante el proceso de destilacin el
agua es sometida al calor hasta su
ebullicin para separar sus
componentes lquidos, luego sus
vapores son recogidos y
condensados.
a) b)
Figura 4. Desfibrilador de agua.
Microscopio
El microscopio, de micro- (pequeo)
y scopio (observar), es un
instrumento que permite observar
objetos que son demasiado pequeos

para ser vistos a simple vista. El tipo

ms comn y el primero que se
invent es el microscopio ptico. Se
trata de un instrumento ptico. Que
contiene una o varias lentes que
permiten obtener una imagen
aumentada del objeto y que funciona
por refreccin.
a) b)
Figura 5.Microscopio.
El autoclave u olla de
presin:
La autoclave es un recipiente
utilizado para esterilizar: medios de
cultivo, agua destilada, tierra etc.
mediante calor hmedo.
El material a esterilizar se expone a
temperaturas superiores a la de
ebullicin del agua, gracias al
aumento de la presin. El vapor de
agua difunde por smosis a travs de
las esporas coagulando su
protoplasma. Generalmente se
esteriliza a temperaturas que van
entre 107-126C por un tiempo de 520 minutos con presiones que varan

entre 5 y 20 libras por pulgada

cuadrada (p.s.i).
a) b)
c)
Figura 6. Autoclave y olla de Presin.
Balanza:
Este un instrumento indispensable en
el libatorio para tomar pesos de los
diferentes materiales o elementos
utilizados en el laboratorio.
a) b)
Figura 7.Balanza.
Cocina elctrica:
Esta es muy importante en el
laboratorio puesto que requiere
calentar sustancias en el momento de
cualquier prctica.
a) b)
Figura 8. Cocina Elctrica.
Incubadora:
Permite obtener temperaturas de
incubacin constante, en procesos
como el cultivo de microorganismos y
de tejidos, para determinaciones
microbiolgicas. La limpieza y la
desinfeccin, peridicas y

sistemticas, son recomendables

para reducir los riesgos derivados de
la contaminacin accidental del
personal del laboratorio.
a) b)
c)
Figura 9. Incubadora
Neveras
Es necesario un adecuado
mantenimiento, limpieza y
desinfeccin para reducir los riesgos
asociados a su utilizacin. Sin
embargo, an en estas condiciones,
hay que tener en cuenta lo siguiente:
No deben almacenarse cultivos de
microorganismos patgenos por
inhalacin, en recipientes que no
estn convenientemente cerrados.
No deben almacenarse reactivos
que contengan compuestos voltiles
inflamables (ter etlico, por ejemplo)
en neveras que no posean un
sistema de proteccin anti
deflagracin.
En los aparatos de tipo domstico
que se utilizan en el laboratorio debe

anularse la lmpara de la luz.

a) b)
Figura 10.Nevera.
Cmara de flujo laminar
Es un receptculo con una nica cara
libre (la frontal) que permite el acceso
a su interior, donde se localiza la
superficie de trabajo. Permite realizar,
aislar, manipular cultivos en
condiciones de esterilidad.
La esterilidad de la zona de trabajo se
consigue porque se hace circular a
travs del interior de la cmara una
corriente de aire que previamente ha
sido microfiltrada o tratada con luz
ultravioleta para eliminar todo agente
contaminante.
Figura11. Cmara de flujo Laminar.
Asas bacteriolgicas:
Las asas bacteriolgicas bsicamente
son alambres unidos a un mango que
permite manipularlas. El alambre
puede ser de diferente material, (ferro
nquel, nicromo, platino, etc.) y la
forma (recta, curva, etc.,)
Figura12.ASAS Bacteriolgicas.

Durante la prctica de laboratorio la

tutora nos enseo todos los
implementos que necesitaremos para
las prcticas, como son:
Pipetas
a) b)
Figura 13. Pipetas.
Tubos de ensayo
a) b)
Figura 14.Tubos de Ensayo.
Las cajas de petri
Figura 15.Cajas de Petri.
Asas de Hockey
Asas rectas
Isopos
Una vez familiarizados con los
implementos, procedemos a
desinfectarlos y lavarlos con jabn e
hipoclorito de sodio, teniendo
especial cuidado en no maltratar el
material (partirlo). Despus de lavado
el material se secan con papel
absorbente el exterior de los
implementos. Despus de
desinfectados procedemos a
envolverlos o a empacarlos con papel

kraf, los tubos y los frascos se deben

tapar la boca con tapones de algodn
luego se sella con cinta indicadora de
esterilidad o cinta de enmascarar.
Se debe tener especial cuidado
cuando se envuelven los frascos, los
tubos de ensayo y las pipetas,
dejando indicado con cinta la boca de
estos para cuando sean destapados
se evite contaminar. Las cajas de
petri se empacan en grupos de cinco,
se envuelven con papel kraft y se
amarran con cinta de enmascarar.
Se procede a esterilizarlo en el
Horno a temperatura de 160 - 180 C,
esto se hace con la supervisin de la
tutora marque y rotule
adecuadamente los materiales, estos
deben llevar claramente escrito en un
lugar visible, el nombre o
identificacin del grupo de trabajo, el
ensayo o experiencia realizada, la
fecha.