Metodología para La Validación Del Llenado Aséptico en Un Proceso de Liofilización

18/9/2016
Metodologaparalavalidacindelllenadoaspticoenunprocesodeliofilizacin
RevistaCubanadeFarmacia
versinOnlineISSN15612988
RevCubanaFarmv.41n.1CiudaddelaHabanaene.abr.2007
MiSciELO
Serviciospersonalizados
PontificiaUniversidadJaveriana
Metodologaparalavalidacindelllenadoasptico
enunprocesodeliofilizacin
CindyMarleneFernndezLpez,1DianaMarcelaMorenoMora,1Janeth
AriasPalacios2yJosManuelGranados3
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Resumen
Indicadores
Se present la metodologa propuesta para la validacin de un llenado

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asptico en un proceso de liofilizacin. Para esto se realizaron 3 pruebas
en las cuales se envasaron 3 lotes de 15 000 viales cada uno, con caldo
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casoy que se incubaron a 22,5 2,5 C y 32,5 2,5 C por 14 das
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respectivamente, con el fin de detectar la posibilidad de contaminacin
microbiana en la realizacin del proceso. Durante las 3 pruebas se realiz
Otros
el monitoreo microbiolgico de ambientes, superficies y operarios en el
muestreo se utiliz Petrifilm para deteccin de mesfilos aerobios y
Otros
levaduras, procedimiento ejecutado en condiciones de reposo y operacin.
As mismo, se efectu el conteo de partculas en el rea y pruebas de
Permalink
esterilidad para los materiales de envase (tapones y viales) finalmente,
sediselametodologadevalidacinparalaesterilizacindelliofilizador
yseemplecomomicroorganismoindicadoraBacillusstearothermophilus.
EldiseodelapruebaserealizteniendoencuentalasrecomendacionesdelaFoodDrugAdministration(FDA)
y la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) para productos de administracin parenteral. Estas son las
organizaciones de referencia para la produccin y control de calidad que utiliza la empresa de productos
veterinarios en las que se hizo la prueba. Los viales envasados se leyeron por turbidez (presencia de
contaminacin) y los criterios de aceptacin se establecieron por las 2 entidades nombradas anteriormente.
Finalmente,seindicunplandemonitoreomicrobiolgicoparaelreaevaluadaenelcualseincluyeronpuntos
de muestreo estratgicos as como la realizacin de procedimientos operativos estndar especficos para esta
rea.
Palabrasclave:Validacin,envaseasptico,FoodDrugAdministration(FDA),OrganizacinMundialdela
Salud(OMS),Bacillusstearothermophilus.
Dentrodelconceptodegarantadelacalidad,lasBuenasPrcticasdeManufactura(BPM)constituyenelfactor
que asegura que los productos se fabriquen en forma uniforme y controlada, de acuerdo con las normas de
calidad adecuadas al uso que se pretende dar a los productos, y conforme a las condiciones exigidas para su
comercializacin. Las reglamentaciones que rigen las BPM tienen por objeto principal disminuir los riesgos
inherentes a toda produccin farmacutica que no pueden prevenirse completamente mediante el control
definitivodelosproductos.Esencialmente,talesriesgossondedostipos:contaminacincruzadayconfusiones.
As, la buena calidad se debe construir desde adentro, durante el proceso de fabricacin pues las pruebas de
control de calidad de los productos despus de que se hayan fabricado no son suficiente garanta. Las BPM's
previenenloserroresquenosepuedendetectarporelcontroldecalidaddelproductoterminado.SinBPM'ses
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S003475152007000100004
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imposible asegurar que cada unidad de un lote de medicamento posea la misma calidad que la encontrada en
lasmuestrasensayadasenelLaboratoriodeControldeCalidad.
Ahora bien, la fabricacin de productos estriles es realizada conforme a requisitos especiales para reducir al
mnimo los riesgos de contaminacin microbiolgica, contaminacin por partculas y contaminacin por
pirgenos y depende no solo del diseo y construccin de las instalaciones o facilidades fsicas, sino de los
sistemas de apoyo crtico y de la habilidad, entrenamiento y actitudes del personal implicado. La garanta de
calidad se vuelve un factor de importancia preponderante, porque este tipo de fabricacin sigue mtodos de
preparacinyprocedimientoscuidadosamenteestablecidosyvalidados.
As pues, uno de los procesos ms complejos de la industria farmacutica es la produccin de medicamentos
estriles por procesos aspticos. La gran mayora de este tipo de medicamentos es de administracin
parenteral, lo cual los clasifica dentro del grupo de tecnologas especializadas de la produccin farmacutica.
Sin embargo, dentro de esta clasificacin, hay algunos medicamentos en los que se utiliza una tecnologa de
produccin mucho ms compleja, debido a los riesgos de manufactura al que es sometido el producto por una
etapaadicionaldefabricacinintermediadenominada:liofilizacin.
Porlotanto,esdevitalimportanciavalidarlosprocesosqueserealizanenunreadeproduccinyenvasees
decir, establecer una prueba que se pueda utilizar como un mtodo de la determinacin de la probabilidad de
contaminacinmicrobianaenunprocesoasptico.
En este caso, se realiz la validacin del llenado asptico en un liofilizador adquirido recientemente por la
empresa,teniendoencuentaqueesnecesarioestableceryasegurarlaesterilidaddelproceso,antesdeiniciar
laproduccindevacunas,propsitoparaelcualhasidodiseadaestamquina.
De hecho, uno de los mejores indicadores para demostrar que este proceso se lleve a cabo bajo condiciones
estriles,eslarealizacindelavalidacindellenadoasptico,procesoquepermitedeterminarlaprobabilidad
de alcanzar la esterilidad bajo condiciones normales de manufactura. Este proceso se ejecut en diferentes
etapas: 1. Validacin de la esterilizacin del liofilizador, mediante el uso de Bacillus stearothermophilus como
microorganismo indicador. 2. Calificacin del estado microbiolgico del proceso mediante la simulacin de un
envaseaspticoconmediocasoy,elcualserealizportriplicadosegnUSP XXVIII.13.Controlmicrobiolgicoy
particulado del rea durante los envases aspticos mediante la cuantificacin de microorganismos viables, en
ambientes,superficiesyequiposascomodelpersonalenelrea.
Despusdehaberrealizadoelllenadoaspticoseesperaqueestapruebapermitareproducirysistematizarel
procesodellenado,yaqueestemtodorequiereunaltoniveldeexigenciaenelproceso,loqueconllevaraa
la obtencin de un producto estril que cumpla todas especificaciones (dentro de las cuales se encuentra FDA,
BPM,ICA,INVIMA,ydemsnormasqueapliquenalproductoterminado).
Mtodos
A)Envaseasptico
Paralarealizacindelenvaseaspticosetuvoencuentaelcumplimientodealgunosprerrequisitossin
los cuales no se pudo dar inicio al proceso de validacin del llenado asptico. Dichos prerrequisitos
fueron realizados por el rea de Ingeniera de la Empresa de Productos Veterinarios, entre ellos, se
encuentran:
Validacindelhorno,utilizadoparalaesterilizacindelosviales.
Validacin de autoclave, utilizado para la esterilizacin de uniformes, mangueras y dems
elementosquesenecesitenenelreadeenvase.
Pruebadeintegridaddefiltrosusados.
Calificacindelsistemadeventilacindelrea,delainstalacindelliofilizador(CI)ydeOperacin
(CO)delliofilizador.
Alistamientodelmaterial
Antesdeiniciarelprocesodeenvase(aproximadamente5dasantes)los15000viales(porenvase)
fueronllevadosaesterilizarjuntoconlostapones,agrafes,uniformesydemselementosutilizados,a
cargodelDepartamentodeProduccin.
SeutilizaronvialesdevidriotipoIIconunacapacidadde15mLelvolumendellenadofuede3,1mLy
lostaponesempleadosdecolorgrisreferencia4406.
Asmismo,15dasantesdelarealizacindelapruebaseprepararon240Ldecaldocasoy,2volumen
necesarioparallenarlosviales.Despusdepreparadoelmediodecultivo,estefueesterilizadoporla
tcnicadefiltracinpormembrana0,22m.Posteriormente,elmediodecultivosellevaautocontrol
por14das32,52,5C,paraverificarsuesterilidad,acargodelDepartamentodeProduccin.De
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igualmaneraserealizlapreparacindelagarPlateCount2utilizadoparaelmuestreodeambientes,
estemediotambinfuedejadoenautocontrolpor14das32,52,5C.Cincodasantesdeliniciodel
envase,serealizelalistamientoylapreparacindelcaldoletheenydelosPetrifilmdemesfilos,3
hongoslevaduras,4loscualesfueroncolocadosenautocontrola32,52,5C.
Realizacindelenvase
Eneliniciodelprocesodevalidacindelllenadoasptico,serealizunmonitoreo.Estemuestreose
realizdespusdequeelequipofueesterilizadoconperxidodehidrgenosanitizantesugeridoporel
fabricanteyantesdeiniciaralenvaseasptico.
Asimismo,semuestrearonlospuntosmsimportantesdelaenvasadora(cuadros1y2)yelrea,enreposo y
enoperacin.
Cuadro1.PuntosdemuestreoparalavalidacinenelreadeliofilizadorCriofarma
Nmero
Puntoamuestrear
PetrifilmACYYM
Formato
Bandatrasportadora
Debajobandatrasportadora
Bordesdelasventanas
Vidrioizquierdo(agujas)
Vidriofrente
Vidrioderecho(taponadora)
Vidriopordentro(puertas)
Tolvatapones
10
Tornamesadeentrada
11
Tornamesadesalida
12
Cortinasaladodecontrolesdeliofilizador
13
Cortinastornamesadeentrada
14
Cortinasaladodelaventana
15
Pisoflujolaminar
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Ventana1
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Ventana2
18
Pisoventanasexterior
19
Vidriojuntoacontrolesdelliofilizador
20
Paredaladodeloscontrolesdelliofilizador
21
Pisoaladocontrolesdelliofilizador
Hisopos
22
Manijas
23
Agujas
24
Taponadora
25
Suministroairepiso
26
Extraccinaladodelapared1
27
Extraccinaire2
28
Suministroairecolumna
29
Extraccinairejuntoacontrolesdelliofilizador1
30
Extraccinairejuntoacontrolesdelliofilizador2
Cuadro2.PuntosdemuestreoparaelmonitoreodevalidacindelliofilizadorCriofarma
Nmero
Puntoamuestrear
1A
Bandeja1A
2A
Bandeja2A
1B
Bandeja1B
2B
Bandeja2B
1C
Bandeja1C
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2C
Bandeja2C
1D
Bandeja1D
2D
Bandeja2D
1E
Bandeja1E
2E
Bandeja2E
1F
Bandeja1F
2F
Bandeja2F
1G
Bandeja1G
2G
Bandeja2G
1H
Bandeja1H
2H
Bandeja2H
Crculofondo
Detectordehumedad
reafondo
Techoabajo
Techoarriba
Izquierdaarriba
Izquierdaabajo
10
Mangueraizquierda
11
Derechaarriba
12
Derechaabajo
13
Mangueraderecha
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Puertaarriba(interior)
15
Puertaabajo(interior)
16
Crculospuerta(interior)
17
Manija.
18
Visagra1
19
Visagra2
20
Marcoderecha
21
Marcoizquierda
22
Marcoizquierda
23
Puertaarriba(exterior)
24
Puertaabajo(exterior)
25
Crculopuerta(exterior)
Muestrastomadasconhisopo
Ahora bien, en condiciones de operacin se envasaron 15 000 viales (por lote) con 3,1 mL de caldo casoy, los
cualesfueronselladoscontaponesdecauchoyagrafesdealuminio.Alinicioyalfinaldelenvasesetomaron1
500 viales (en total 3 000), los cuales fueron tapados y sellados con agrafe inmediatamente despus de ser
llenados. Por otra parte, los 12 000 viales restantes fueron sometidos a la simulacin del proceso de
liofilizacin.
Es decir, una vez llenos los viales, el liofilizador fue cargado haciendo un recorrido desde la tornamesa de
salida hasta colocar las bandejas dentro de la cmara de liofilizacin, este recorrido se realiza a travs de un
mdulo de filtracin clase 100. Una vez el liofilizador se carga totalmente, los viales parcialmente taponados
fueron expuestos al ambiente por el tiempo que dura un ciclo en condiciones verdaderas de liofilizacin es
decir, 21 h aproximadamente. No se realizaron los ciclos de congelacin ni el ciclo de secado porque podra
afectar el eventual crecimiento de microorganismos aerobios. Completado este intervalo de tiempo, los viales
fueronenvasadosygrafados,llevndolosluegoaincubara32,52,5Cya22,52,5C,por14dasacada
temperatura, iniciando con la de 22,5 2,5 C segn OMS5 y FDA.6 Despus de terminar la simulacin se
realiz el muestreo de superficies dentro del liofilizador, para comprobar la calidad microbiolgica de este
despusdeltiempodeoperacin.
Luego de cumplido este tiempo de incubacin, los viales fueron analizados por turbidez (fig.1), en donde se
descartaron aquellos que presentaron daos fsicos. Los resultados fueron registrados en el formato de
inspeccindeenvases.
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Fig.1.Lecturadevialesporturbidez.
Alosvialesquepresentaroncontaminacinselesrealizaronlaspruebassiguientes:
ColoracindeGram.
AislamientoenagarTSA(4cajas)incubando2cajasa32,52,5Cpor48hylas2restantesa20,5
2,5Cdurante5das.
Solicituddeidentificacindelosmicroorganismoscontaminantesenunlaboratoriodereferencia.
Despusderealizadasestaspruebasseestablecielgneroyespeciedelosmicroorganismoscontaminantes,
ysedeterminlasposiblescausasdedichacontaminacin.
Muestreodeambientes
Para realizar el muestreo de aire, se utiliz el muestreador de aire MAS100, el cual se program para
muestrear un volumen determinado de acuerdo con el rea. El volumen de aire a muestrear, se determin
teniendoencuentalafrmulasiguiente:
VOLUMEN(m3)=LargoxAltoxAncho
Finalmente,seestablecieron5puntosdemuestreodeambientesenelreadeenvase.
ParaestemonitoreoseutilizaroncajasdePetridesechablesde90mmconagarPlateCountprocedimientoque
serealizporduplicadoparamesfilosyhongoslevaduras.
Elprocedimientoparacadapuntodemuestreofueelsiguiente:
a.Sedesinfectelequipoempleadoutilizandounagasaimpregnadaconalcoholetlicocomercialal70%
procedimientorealizadoantesdeentraralazonaestril.
b.Ya calculado el volumen a muestrear se limpi la cabeza y succionador de aire con alcohol etlico
comercialal70%.
c.Se ubic el muestreador de aire en una superficie plana y se program el volumen a muestrear
siguiendolasindicacionesdeltablerodecontrol.
d.Se retir la cabeza del equipo y se coloc una caja de Petri de 90 mm con agar Plate Count, luego se
ajustdenuevolacabeza.
e.El muestreo se inici recorriendo toda el rea (dependiendo el punto de muestreo) sin realizar
movimientosbruscos.
f.Unavezterminadodemuestrearelvolumentotal,seprocediaquitarlacabezayaremoverlacajade
Petritapndolainmediatamente.Esteprocedimientoserealizporduplicadoparacadarea(1cajapara
mesfilosy1cajaparahongoslevaduras).
g.Seincubaronlascajasmuestreadasa2temperaturasdiferentes:
Mesfilos:temperaturade32,52,5Cpor48h.
Hongoslevaduras:temperaturade22,52,5Cpor5das.
Cumplido el tiempo de incubacin se realiz el recuento en un contador de colonias, resultado obtenido en
UFC/m3,teniendoencuantalalecturaparamesfilosuhongoslevadurasrespectivamente.
Muestreodesuperficies
Para el muestreo de superficies se establecieron puntos de muestreo tanto en el rea 100 como en el rea 10
000,dichospuntosfueronmuestreadosmedianteelusodePetrifilm.
Unavezreconstituidosseprocediarealizarelmuestreodesuperficiesdelamanerasiguiente:
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a.Para mesfilos: se levant la pelcula superior (la cual tiene el medio letheen) y se coloc en contacto
conlasuperficieamuestrearpresionandosuavemente,luegosecolocestapelculaencontactoconla
placa.Sellevaincubara32,525Cpor48h.Posteriormenteserealizlalecturaenuncontador
decoloniasyseinformUFC/placa(fig.2).
b.Para hongoslevaduras: se levant la pelcula superior (la cual tiene el medio letheen) y se coloco en
contacto con la superficie a muestrear presionando suavemente, luego se coloc esta pelcula en
contactoconlaplaca.Sellevaincubara20C2por5das.Posteriormenteserealizlalecturaen
uncontadordecoloniasyseinformUFC/placa.
Fig.2.MuestreodesuperficiesconPetrifilm.
Paraelmuestreodealgunospuntoscomo:lasagujasllenadoras,lamquinataponadora,lossuministrosylas
extracciones de aire, se emplearon 2 hisopos Quick Swab (3M), (debido a que no es posible muestrear estos
puntosconPetrifilm)delamanerasiguiente:
Muestreodeoperarios
Se muestrearon los guantes de los operarios que se encontraban trabajando en el rea de envase asptico.
Teniendoencuentalosparmetrosmencionadosanteriormente.
Para ello se emple Petrifilm de mesfilos y hongoslevaduras con los cuales se realiz muestreo en la palma
de las manos, especialmente en las huellas dactilares. Despus de realizado este procedimiento, se
desinfectaronlosguantesdelosoperariosconalcoholetlicocomercialal70%.
Cumplidoeltiempodeincubacin,serealizelrecuentoyseinformenUFC/placasisonmesfilosuhongos
levadurasrespectivamente.
Asimismo, se realiz el muestreo del uniforme de los operarios, para lo cual tambin se emplearon Petrifilm
(mesfilosyhongoslevaduras)despusdehabersidoreconstituidosysemuestrearonlasmangas(derechae
izquierda),elpechodelosuniformes,tapabocasylaspolainasdelosoperarios(derechaeizquierda).
TodoslosPetrifilmdespusdehabersidoutilizadossellevaronaincubardelamanerasiguiente:
Mesfilos:seincubaronaunatemperaturade352Cpor48h.
Hongoslevaduras:seincubaronaunatemperaturade202,5Cpor5das.
CumplidoeltiempodeincubacinserealizelrecuentoyseinformaronUFC/100120cm2,sisonmesfilos
uhongoslevadurasrespectivamente.
Ahorabien,duranteelprocesodeenvaseserealizelmonitoreodeambienteypersonalalinicio,mitadyfinal
delenvase.Asmismosemuestrearonlassuperficiesyequiposalinicioyfinaldelllenadoasptico.
Despus de tener los resultados de las pruebas anteriores se determinaron las posibles causas de
contaminacinysetomaronlasaccionescorrectivasnecesarias.
Pruebadeesterilidad
Filtracinparamuestrasacuosas:
Enlacabinaestrilsecolocaronlosvialesdecaldocasoyysehizounpooldelmediodecultivoen
unfrascoestril.
Seagitfuertemente.
Searmelsistemadefiltracindentrodelacabinadeflujolaminar.
Sefiltraron100mLdecaldocasoy.
Selav3veceslamembranacon100mLdediluyente.
Setomlamembranaconpinzasestriles.
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Secortlamembranacontijerasestrilesen3partesiguales,unadeellassecolocsobreelagar
sangreylasotrasdosencadaunodelosmediosdecultivo(1frascodecaldotioglicolatoy1frascode
caldoCasoy).6
Laincubacindelosmediosserealiza32,5oC2,5C(caldotioglicolatoyagarsangre)y22,5
25C(caldocasoy)durante14das.
Paralosvialesvacos:
Secolocencadaunodelosvialesmuestreados5mLdesolucinsalinapeptonadaestril.
Luegoseprocediagrafarloscontaponesyagrafesestriles.
Losvialesgrafadossedividieronen2grupos.
Ungruposeincubaunatemperaturade3252,5Cyelotrogruposellevaincubara27,52,5
Cdurante14das.6
Paralostapones:
Setomunacantidadrepresentativadetaponesysecolocaronenunfrascoschootde1L(este
procedimientoserealizporduplicado).
Seadicionsolucinsalinapeptonadaestril,tapandofuertementeelfrascoconlostapones.
Semezclobien.
Sellevoaincubara27,52.5Cya2752,5Cdurante14das.
Pruebadepromocindecrecimiento
El caldo casoy utilizado en los envases fue sometido a la prueba de promocin de crecimiento en cada uno de
los envases, esto para saber si contena todos los nutrientes necesarios para promover el crecimiento de
microorganismos. Despus de tomar una muestra representativa del lote, se realiz el procedimiento
siguiente.6
a.Con anterioridad se sembraron por aislamiento en cajas de agar TSA los microorganismos siguientes:
Candidaalbicans,Staphylococusaureus,Bacillussubtilis,Pseudomonasaeruginosa,Aspergillusniger.
b.Serealizunasuspensindecadamicroorganismo,segnelpatrnNo.1deMacFarland,elcualdebe
tenerde10100UFCparapoderrealizarlaprueba.
c.Sehicieron4dilucionesbase10.
d.Delaltimadilucinsetom01mLparainocularenelmediocasoy.
e.LasmuestrasfueroninoculadasconStaphylococusaureus,BacillussubtilisyPseudomonasaeruginosa,
yluegoincubadasa 32,5 2,5 C por 48 h mientras que aquellas que contenan Candida albicans y
Aspergillusnigerfueronincubadasa22,525Cdurante5das.
f.Lalecturaserealizporturbidez.
g.SeconfirmcontincindeGramparalasbacteriasyazuldelactofenolparahongos.
B)ValidacindelaesterilizacindelliofilizadorCriofarma
Pararealizarlavalidacindelprocesodeesterilizacindelacmaradelliofilizadorconperxidodehidrgeno,
seutilizaronlasesporasdeunmicroorganismoindicadorparadeterminarlaefectividaddelostiemposdelciclo
deesterilizacin.
EnestecasosesometielmicroorganismoBacillusstearothermophilus7aunciclodeesterilizacinnormaldel
liofilizador.Esimportantedecirquelapreparacindelasesporasdelmicroorganismovienencontenidasenun
sobreTyveck/Mylar,elcualcontieneensuinteriorundiscoportadordelasesporasdelmicroorganismo.
Aspues,pararealizarlapruebasecolocarondiferentessobresenlugaresespecficosdentrodelacmarade
liofilizacinyseprocediadarinicioalciclodeesterilizacin.
Una vez terminado el ciclo de esterilizacin con perxido de hidrgeno, los sobres que contenan el
microorganismo indicador fueron retirados del liofilizador y transportados de inmediato al laboratorio para su
procesamiento.
As,serealizelsiguienteprocedimientoencabinadeflujolaminar:8
1.SeabrielsobreTyveck/Mylarcortandoenunextremoconunastijerasestriles.
2.Setrasfirieldiscoconlasesporasauntubocon10mLdecaldocasoyparaelloseretireldiscodel
sobreTyveck/Mylarconunaspinzasestrilesysedepositoenelcaldo.
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3.Seagiteltubovigorosamente.
4.Seprocediarealizarcontrolespositivos,paraloscualessecoloceldiscodelmicroorganismoindicador
enelcaldocasoysinsometerloalaesterilizacin.
5.Seprocediahacerunapruebaesterilidadalmediodecultivocasoyqueseutilizparacadaprueba.
6.Seincubaronlostubosconlosdiscosaunatemperaturade5560Cpor7das.
Interpretacinderesultados:8
a.Seobservaronlostubos,incluyendoloscontroles,diariamentedurantelos7dasdeincubacin.
b.Seanalizqueeltuboquecontenaeldiscodelcontrolpositivo(eldiscoquenosesometialproceso
de esterilizacin con perxido) apareciera turbio, a medida que transcurran los das, pues esto indica
crecimientomicrobiano.
c.Losotrostubosfueronevaluadosporausenciadeturbidez
d.Elcontroldelmediocasoy,evaluadoantesdelapruebaseevaluporturbidez.
Resultados
Monitoreodeambientes
Paraelprimerenvaseenelmuestreomicrobiolgicodeambientesenreposo,sepudoestablecerquetodoslos
puntosevaluadosseencontrabandentrodeloslmitesestablecidosporlaUSPCap.1116nicamentelaesclusa
de salida present crecimiento de bacterias y hongoslevaduras, identificadas como cocos grampositivos, y
levaduras respectivamente, de acuerdo con la coloracin de Gram. En el segundo envase el muestreo en el
estado en reposo, present resultados de esterilidad en las reas muestreadas pues no se detect crecimiento
deningntipodemicroorganismo.Sinembargo,aliniciodelenvaseseobservlapresenciadebacteriasenel
reacircundante(1UFC/m3),identificadaenlacoloracindeGramcomobacilogrampositivoenlaesclusade
salida (bacterias: 3 UFC/m3 y hongos: 2 UFC/m3) se identific las bacterias contaminantes como cocos
grampositivosyenlaesclusadeentrada(hongos:1UFC/m3).
Resultadosconteodepartculas
Encuantoalconteodepartculasdelprimerenvaseenclase100,delos9puntosmuestreados(Tornamesade
entradaoccidente,tornamesadeentradaoriente,Iniciobandatrasportadora,finalbandatrasportadora,modulo
de llenado, controles modulo de llenado, pretornamesa de salida, tornamesa de salida oriente y frente a la
puertadelliofilizador),elnicoquepresentunrecuentoelevadofueelpunto9,frenteapuertadelliofilizador.
Ahorabien,tantoenelsegundocomoeneltercerllenadoseobtuvieronresultadossatisfactoriosenestarea
enreposoyenoperacin,pueselnmerodepartculasnoexcedide100partculas/pie3.1
Enelultimoenvaselas2extraccionesdelreaevaluadas,presentarondesviacionesenelconteotantoen
reposocon57260y39670partculas/pie3respectivamente,mientrasqueenoperacinlosconteosfueronde
17655partculas/pie3y17150partculas/pie3.
Monitoreodesuperficies
Para el primer envase, en condiciones de reposo los puntos muestreados dentro del rea 100 mostraron
recuentos de microorganismos dentro de los rangos permitidos (de acuerdo con USP XXVIII, 2005) sin
embargo, en condiciones de operacin al inicio y final del envase, en el punto 18 (piso del flujo laminar) se
encontrunrecuentode5UFC/placaenamboscasos.
En el liofilizador Criofarma bajo condiciones de simulacin se obtuvo un recuento elevado de microorganismos
en dos de las bandejas del liofilizador los 2 puntos muestreados en la bandeja F para microorganismos
mesfilos presentaron un recuento de MNPC (muy nmeroso para contar) y en la bandeja G se presentaron
recuentosde33y18UFC/placa.
Porotraparte,enelrea10000seobtuvounrecuentoelevadodemicroorganismosmesfilosenelpunto22
(suministrodelaireenelpiso)con22UFC/placayenelpunto28(suministrodeairecolumna)68UFC/placa
estosresultadossugierenlaposibilidaddequeelairequeestentrandoalrea10000noestesiendofiltrado
adecuadamente.
Enelsegundoenvaseasptico,elmuestreoenreposofuesatisfactorioparalospuntoscontempladosenelrea
10 000 y aquellos que se muestrearon en la envasadora sin embargo, en el liofilizador la bandeja D y F
presentaron un crecimiento de hongoslevaduras (15 UFC/placa respectivamente). En el rea 10 000 el punto
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No. 22 (suministro aire piso) present recuentos elevados tanto al inicio (20 UFC/placa) y al final (25
UFC/placa).
En el tercer envase en el muestreo en reposo de la clase 100 la nica contaminacin presentada se relaciona
con el piso de flujo laminar, en la cual se identificaron 14 UFC/placa de bacterias y 4 UFC/placa de hongos, y
tambinelpuntodeextraccindeaireunopresentunrecuentode8UFC/placadebacteriassinembargo,al
final del envase tan solo hubo presencia de 5 UFC/placa en el piso de flujo laminar. En el muestreo del
liofilizador en el tercer envase se obtuvo resultados fuera de especificaciones en las bandejas D (19 y 6
UFC/placaparamesfilos)yG(20y4UFC/placaparamesfilos).Finalmente,enlalineadellenadoalfinalizar
elenvaseseobtuvounrecuentode19UFC/placaenlatornamesadesalida.
Monitoreodepersonal
Losresultadosmsimportantesseencuentraneneliniciodelprimerenvase,enesteeloperariodeclase100
presentrecuentosensuuniformequeseencontrabandentrodeloexigidoporlanormasinembargo,enla
mitad del envase las polainas del operario presentaron 7 UFC/placa. En el segundo envase, en la mitad el
operarioclase100nocumpliconlasespecificacinen4delos5puntosevaluadosestosfueron:escafandra
(5 UFC/placa), tapaboca (16 UFC/placa), pecho (17 UFC/placa) y guantes (6 UFC/placa) as pues, con estos
resultadosenelmuestreofinallaescafandrapresentunrecuentodeMNPC.
Porotraparte,losoperariosdeclase10000presentaronrecuentoselevadosdelosguantes(12UFC/placa)en
la mitad del envase. La misma situacin del operario clase 100 se present en el tercer envase con recuentos
enlamitaddepecho(19UFC/placa),tapabocas(4UFC/placa),pecho(13UFC/placa)yguantes(17UFC/placa),
recuentosquesobrepasanloslmitesestablecidosporlaUSPparaeloperarioclase100.
Pruebadepromocindecrecimiento
En las 3 pruebas de promocin de crecimiento realizadas para este caldo se obtuvo un resultado positivo, lo
cual indica que el medio utilizado tiene todos los nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de
diferentesmicroorganismos:bacilosgrampositivos,gramnegativos,levaduras,cocosyhongos(Bacillus subtilis,
Pseudomonasaeruginosa,Candidaalbicans,StaphylococusaureusyAspergillusniger).
Lecturadevialesdelllenadoasptico
Deacuerdoconlosresultadosobtenidos,sepuedeestablecerqueelnmerodevialescontaminadosexcedeen
los 3 envases al nmero permitido segn FDA. En la prueba de 12 000 viales (sometidos a la simulacin del
ciclodeliofilizacin),enelprimerenvaseseidentificaron85vialescontaminados,resultadoquedisminuyen
elsegundoenvase(24vialescontaminados),peroaumentnotablementeenlaterceraprueba,conunresultado
muy similar al primer envase (86 viales). Por otra parte, en la prueba de 3 000 viales (sin hacer parte de la
simulacin del ciclo de liofilizacin) los resultados tampoco fueron satisfactorios para el primer (18 viales),
segundo (2 viales) y tercer envase (18 viales) no obstante, el mejor resultado se obtuvo en el segundo
llenado pues a pesar de que no cumpli las especificaciones de la FDA, solo se obtuvieron 2 unidades
contaminadas,acercndoseallmitepermitidoporestaorganizacin.
Pruebasdeesterilidad
Dentrodelaspruebasrealizadascomocontroldelprocesosellevacabolapruebadelaesterilidaddelcaldo
casoyencadacorrida,pormediodelatcnicadefiltracindemembrana(0,22m)ysiembraenagarsangre,
caldo casoy y tioglicolato, por 14 das. Es importante resaltar que dichas muestras fueron tomadas al inicio,
mitad y al final del envase as como despus de la simulacin de la liofilizacin. Las pruebas realizadas al
inicio, mitad y final de los 3 lotes dieron como resultado: APROBADO. Sin embargo, despus del ciclo de
simulacin, las muestras tomadas del primer lote, evidenciaron una contaminacin con bacilos grampositivos
despus de haber realizado la coloracin de Gram al caldo casoy, dando como resultado RECHAZADO. No
obstanteenelsegundoytercerenvaselasmuestrastomadasdespusdelasimulacindieroncomoresultado:
APROBADO.
Losvialesdieroncomoresultado:APROBADO,enlasmuestrastomadasenelinicio,mitadyfinal.Encuantoa
los tapones en el caso de la muestra tomada en la mitad del proceso dio como resultado: RECHAZADO esto
debido a que se encontr contaminacin por bacilos grampositivos segn coloracin de Gram. Las otras
muestras tomadas en este mismo envase (inicio y final) y en la del primer y tercer envase dieron como
resultado:APROBADO.
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Validacindelprocesodeesterilizacin
En las 3 pruebas realizadas para la validacin se determin como resultado de esta VALIDADA, pues no hubo
crecimientodelmicroorganismoindicadordespusdehabersidosometidoalciclodeesterilizacinpor4hcada
uno,enningunodelospuntosevaluados.Sinembargo,2controlespositivosporcadapruebafueronanalizados
estosnofueronsometidosalciclodeesterilizacin,peroseprocesaronenellaboratoriocomoaquellosques
estuvieron en contacto con el perxido de hidrgeno. Por lo tanto, y como era de esperarse los controles
positivos presentaron crecimiento propio de Bacillus stearothermophilus confirmado a nivel microscpico, lo
cualenlas3pruebasconfirmlaviabilidaddelasesporasdelmicroorganismo.
Discusin
Realizacindelos3envasesaspticos
Una vez establecidos los puntos de muestreo se procedi a la realizacin de los envases aspticos y sus
respectivos muestreos, esto con el fin de establecer las condiciones reales de operacin en el rea y los
factorescrticosacontrolarenelprocesodeproduccin,ademsdeevaluarlascondicionesdeesterilidadbajo
lascualeselprocesoesllevadoacabo.
Es importante resaltar que los viales que pasaron por la simulacin del proceso de la liofilizacin (12 000 por
cada envase) fueron analizados teniendo en cuenta los criterios establecidos por la FDA pues esta entidad
exige que al llenar ms de 10 000 unidades una unidad contaminada debe dar lugar a una investigacin y dos
unidadescontaminadasseconsiderancausaparalarevalidacin,despusdelainvestigacin.
Asimismo,elnmerodevialesaenvasarsedeterminteniendoencuentalacapacidadmximadelliofilizador
yaqueestapruebadebareflejarlacantidaddeunidadesqueseenvasannormalmente.Sinembargo,unfactor
importanteesqueelnmerodeunidadesaserllenadasporcorridadebensersuficientesparaproveerunaalta
probabilidad de detectar una baja incidencia de contaminacin microbiana. Por ejemplo, con el fin de dar una
confianza del 95 % de detectar una tasa de contaminacin de uno en mil unidades llenadas (0,1 %) con un
medio estril nutritivo, 3 000 unidades necesitan ser llenadas y ninguna unidad contaminada debe ser
encontradacomocontaminadadespusdelperiododeincubacin.
Monitoreosmicrobiolgicos
Teniendo en cuenta que las condiciones del rea en operacin varan considerablemente en relacin con el
estadoenrepososemuestretantoelreacomoelliofilizadorbajoestascondicioneseldaanterioralenvase
para poder comparar los resultados de los mismos puntos ya en operacin. De hecho, en condiciones de
operacin los patrones de la circulacin de aire en zonas limpias pueden ser disturbados fcilmente por
factores como la mquina (es decir, la barrera protectora), diseo del equipo, especificaciones componentes
inadecuadas, o intervenciones necesarias. El efecto de estos problemas se acenta con una interferencia
manualinadecuadaquecontribuyeaunriesgopotencialmsaltodelacontaminacinporaire.9
Aspuesseestableciquealiniciodelenvasehaymayornmerodeunidadesformadorasdecoloniapormetro
cbico (detectadas a travs del muestreador de aire MAS 100), principalmente hongos y levaduras en las 2
esclusas, lo cual probablemente se debe a que en estas reas hubo un mayor movimiento constante del
personalespecialmenteenelinicio,yaqueenesteenvasemuchosdelosmaterialesquedebieronentrarporla
esclusadematerialesfueronentradosporlaesclusaentrada,locualafectlaesterilidaddeestasreas.
Deigualmanera,hayquetenerencuentaqueenestasreasocurreelcambioderopaprovenientedereasno
estriles,porlocualesimportanteafirmarqueelflujodepersonalesmuycrticoparaelmantenimientodeun
ambienteestril.Estoincluyeelcambiodeuniformesytodoslosmovimientosnecesariosatravsdetodaslas
instalaciones del cuarto limpio. Es ideal asegurar que el flujo de personal es en una direccin, del rea de
vestido(esclusadeentrada)alreadeoperacinyporltimoalaesclusadesalidadesdeelreamslimpia
al rea ms sucia.10 En comparacin con los envases anteriores, el tercer llenado se caracteriz por la
presencia de hongos en la esclusa de entrada y en la esclusa de salida este hecho sugiere que algn tipo de
material que haya entrado a las esclusas, se encontraba contaminado con esporas que fueron liberadas al
ambiente la razn de esta afirmacin es que en dicha rea no hay zonas hmedas que puedan propiciar el
crecimientodeestetipodemicroorganismos.
Encuantoalconteodepartculasdebidoalmayormovimientodepersonaldentrodelaclase100,seobtuvieron
conteos elevados, ya que es all en donde las bandejas cargadas con los viales son trasportadas dentro del
liofilizador. Sin embargo, este resultado tambin puede estar relacionado con alguna falla en el sistema de
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aireacindelrea,puesdichoresultadoesalarmanteteniendoencuentaqueelnmeromximodepartculas
segnUSPCap.1116esde100partculas/pie3.
Es importante decir que la razn de medir partculas aerotransportadas dentro de la industria farmacutica es
debidoalaprobabilidaddequealgunasdelaspartculaspuedensermicroorganismos.Estoseextrapoladeque
se asume que la partcula de 0,5 m corresponde al tamao aproximado de un microorganismo y la partcula
del tamao de 5,0 m corresponde a una clula de piel humana o que el nivel de partculas es de cierta
maneraproporcionalaunnmerodadodemicroorganismos.Aunqueestonuncasehadeterminado,larelacin
se considera 105 partculas: 1 microorganismo. La diferencia en el rango de las partculas y los posibles
microorganismos est relacionada con varios factores incluyendo el vertimiento de partculas estriles por la
ropaolageneracindepartculasestrilesdelosaerosolesduranteelllenadodelproducto.11
As pues, en el rea 10 000 el punto que se sali de lmites fue el nmero seis, extraccin del aire junto a
controlesdelliofilizadordosestepuntoescrticodebidoaquequedaalaentradadelaesclusademateriales,
endondesecolocanlascajasdevialesestrilesparaluegosertrasportadasalatornamesadeentrada.
Los resultados obtenidos en el ltimo envase se relacionan con que en rea existe una falla en el sistema de
extraccin de aire que debe ser reevaluada por el Departamento de Ingeniera, pues de acuerdo con los
resultadosdeestospuntosenestadoenreposo nosepuedegarantizaruncomportamientodentrodeloslmites
esperadosenoperacin.
Losresultadosobtenidosenelmonitoreodesuperficiespuedenseratribuidosadiferentesrazones:unadeellas
se relaciona con el hecho de que en estas bandejas se present el rompimiento de algunos viales al momento
desertaponadosdehecho,cuandoserealizelmuestreoseencontraronalgunosremanentesdelosvidriosy
mediodecultivoquehabansidodispersadosalasuperficiedelasbandejas.
No obstante, la cantidad de microorganismos encontrados puede obedecer a una mala sanitizacin en estos 2
puntos, teniendo en cuenta que aunque hacen parte del rea no son vistos como un lugar importante en el
momentoderealizarelprocesodelimpiezaydesinfeccin.
Ahorabien,losrecuentosobtenidosenelpuntodetornamensaenelltimoenvaseaspticoserelacionancon
el hecho de que en este punto hay un movimiento continuo de viales y en algn momento se pudo haber
derramado parte del medio envasado contaminado adems teniendo en cuenta que en esta zona hay una
manipulacinconstanteporpartedeloperariodeclase100quepudohabercontaminadoestasuperficieporuna
desinfeccininadecuadadelosguantes.
Asimismo, en el anlisis microbiolgico a operarios se encontraron recuentos elevados en tapabocas, pecho,
guantesypolainaslocualsugierequeelpersonalnorealizadecuadamenteduranteelprocesodeenvaseuna
desinfeccin constante del uniforme con alcohol etlico comercial 70 % desinfectante presente en el rea de
envase. Estos resultados se relacionan con el hecho de que al final de los envases aspticos la contaminacin
del uniforme es un factor constante para todos los operarios, pues la carga microbiana fue elevada en
comparacinconlosresultadosencontradosalinicioymitaddelenvase.
Estatendenciadeobtenerrecuentoselevadosalfinaldelosenvasesobedecealhechoaqueenestaetapade
muestreo los operarios ya haban estado en contacto con muchas superficies del rea y factores como la
transpiracin y la exposicin prolongada del uniforme al ambiente durante aproximadamente de 9 h,
contribuyeron a la obtencin de estos resultados. As mismo, los recuentos elevados en los uniformes de los
operarios se relacionan con una mala postura de este, adems indica un inadecuado lavado de manos en el
momentodelaposturadel,locualocasionalatransferenciademicroorganismosdelapielalasuperficiedel
uniformedelpersonal.
En cuanto a las pruebas de promocin de crecimiento los resultados fueron satisfactorios para los medios
evaluados, estos tienen una gran relevancia teniendo en cuenta que mediante estas pruebas se asegur la
capacidad de todos los medios utilizados en las diferentes pruebas para permitir el crecimiento de los
microorganismosrecuperadosdurantelosenvasesaspticos.
Ahora bien, para los 3 envases aspticos despus de haber ledo los viales por turbidez, el porcentaje de
contaminacinfuedel0,43%,valorqueesindeseableteniendoencuentaqueelvaloresperadoeradel0,1%,
esdecir,mximounidadcontaminada.
Estaaltatasadecontaminacinencontradaenlosvialesenvasadosobedeceavariasrazonesdentrodeestas
se destacan, las malas prcticas de manufactura por parte de los operarios. Uno de los factores ms crticos
que pudo afectar el resultado final de los envases, est relacionado con la contaminacin aportada por el
operarioclase100.Estoteniendoencuentalosaltosrecuentosdemicroorganismosencontradoseneluniforme
y guantes de este operario, hecho mencionado anteriormente. De hecho la contaminacin microbiana en un
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proceso asptico es causada principalmente por el personal. Se estima que ms del 99 % de todos los
microorganismosdetectadosencuartoslimpiossondeorigenhumano.12
Cabe destacar que en dichos resultados se relacionan con una mala postura del uniforme, y un mal lavado de
manos por parte de estos, pues solo as se explica los recuentos elevados que se presentaron en la mitad del
proceso y al final especialmente en la escafandra, tapabocas y pecho teniendo en cuenta que los recuentos
elevados en los guantes mejoraron desde que se sugiri la aplicacin de alcohol peridicamente en el rea
estril.
Otro factor relacionado con la contaminacin generada en los lotes del caldo casoy, se debe a una adecuacin
deficiente del rea en cuanto a la falta de implementos que faciliten la esterilidad dentro del rea. Por otra
parte, como se mencion en los resultados mostrados por el contador de partculas Micro Air Royco 300, el
estado del rea en cuanto a los sistemas de aire (suministros y extracciones) no es adecuado pues tanto en
condiciones en reposo como en operacin varios de los puntos evaluados se salen de los lmites establecidos.
Estefactorescrticoyaquesinosetienenlascondicionesadecuadasaniveldelairequecirculaenelrea,la
garantadeesterilidadtantoenelreacomoenlosproductosfinalessevecomprometidademaneranegativa,
locualsereflejaenlosresultadosdelllenadoasptico.
Ahora,teniendoencuentaqueestafueunapruebaenlacualsesimulelprocesodeenvaseaspticoyquese
realiz por primera vez desde que el rea fue construida, durante las 3 corridas realizadas la mquina
envasadora present varios inconvenientes mecnicos que condujeron a varias paradas de esta durante los
envases.Estehecho,esperjudicial,teniendoencuentaquecadaparadaconstituyeunriesgomicrobiolgicoal
producto,puesenocasionesrequeralaintervencindirectadeunoperarioenelmdulodeenvase,hechoque
aumentalacargamicrobiolgicadentrodedichareacrtica.
As pues, con estos resultados se puede determinar que no fue posible validar el llenado asptico en el
liofilizadorCriofarma,estableciendocomoconceptodevalidacin:NOVALIDADO.Esto,teniendoencuentaque
para validar el proceso de envase asptico por lo menos 2 de 3 corridas deben ser satisfactorias segn
normatividadestablecidaporlaFDAyenestecasoningunadelas3corridasfuesatisfactoriapuesentodos
loslotesmsdeunaunidadcontaminadafueencontrada.
Despus de realizadas las identificaciones (de gnero y especie de los microorganismos aislados partir de los
envases),seidentificaronlossiguientesmicroorganismoscomocontaminantes,entrelasbacteriasidentificadas
se encuentran: Staphylococcus epidermidis, Micrococcus luteus, Micrococcus roseus y Staphylococcus caprae
microorganismosgrampositivosycuyamorfologacorrespondeacocos.
Deacuerdoconestosmicroorganismosidentificadosesposibleafirmarqueestetipodecontaminacinproviene
de los operarios de hecho, los microorganismos mas frecuentemente aislados en reas controladas usadas
parallevaracaboprocesosaspticossonbacteriasdepieldehumanos.
As pues, esto evidencia malas prcticas de manufactura, probablemente por una mala postura del uniforme,
teniendoencuentaqueestosmicroorganismosseencuentranprincipalmenteenalpieldehumanosdehecho,
sepuededeterminarquelosoperariosconstituyenunriesgoimportanteenloqueserefierealmantenimiento
de las condiciones de esterilidad dentro del rea. Es importante resaltar, que l os cocos grampositivos se
encuentranenaltonmeroenpielhumanaysonfcilmentedesprendidos.Sinembargo,lasreascontroladas
son protegidas contra los cocos con el uso de vestidos adecuados para dichas reas, mascaras, guantes,
tcnicasdevestimentaapropiadas,ybuenasprcticasaspticas.13
No obstante, como se haba enfatizado anteriormente, factores como una mala desinfeccin de los elementos
que ingresan al rea puede contribuir de manera importante a la contaminacin, pues tambin se identific la
presencia de microorganismos grampositivos esporulados como Bacillus cereus, cuyas esporas pueden ser
transportadasporelaire.
Por otro lado, con el fin de determinar la efectividad del ciclo de esterilizacin con perxido de hidrgeno, se
utilizunindicadorbiolgico,enestecasodichomicroorganismofueBacillusstearotermophillus.Es importante
establecer que la farmacopea estadounidense ha definido un indicador biolgico como una preparacin
caracterizada de un microorganismo especfico que provee una resistencia estable y definida a un proceso de
esterilizacinespecfico.
Es fundamental resaltar la importancia de los resultados de esta prueba, pues permitieron comprobar la
efectividaddelciclodeesterilizacin,alcomprobarlaeliminacindemicroorganismosesporoformadoresypor
endedecualquierotrotipodemicroorganismos,locualaseguralaesterilidaddelacmaradelliofilizadorenel
proceso.
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Definitivamente, a partir de los resultados anteriores es posible afirmar que la causa principal para que la
prueba de llenado asptico no hubiera sido satisfactoria se debe a deficientes prcticas de manufactura por
partedelosoperariosdeficienciatecnolgicaenequipos,porlainexistenciadeunhornodedespirogenizacin
de los viales de vidrio en lnea con el rea de llenado asptico y deficiencias del sistema de ventilacin del
rea,puesconlosresultadosanterioressepuededescartarlacontaminacindelosvialesenvasadosporparte
ladesinfeccindelliofilizador.
Enconclusin:
Serealizyestablecilosprocedimientosdevalidacindelprocesodellenadoaspticoenelliofilizador.
Se generaron los procedimientos de muestreo de ambientes y superficies para el rea de liofilizados,
procedimiento de llenado asptico, procedimiento de muestreo e inspeccin de producto en envase,
validacindelaesterilizacinconperxidodehidrgenoenelliofilizadorCriofarma.Apartesecreuna
planilladecontrolyrevisinantesdelenvaseenelreadeliofilizados(liofilizadorCriofarma)
El protocolo de validacin del llenado asptico en el liofilizador Criofarma fue realizado de acuerdo con
los requerimientos propios del rea y del proceso elaborado para cumplir con las especificaciones
microbiolgicas establecidas por la USP XXVIII y propias de la Empresa Productora de Productos
Veterinarios.
La elaboracin de los procedimientos operativos estndar permitirn tener documentacin referente al
procesoyposteriormenteunregistroquepermitadeterminarposiblesfallasenelproceso.
SeestablecieronlmitesdeaccinparaelreadelliofilizadorCriofarma,dentrodeloscualesseincluyen
lmites microbiolgicos para operarios, superficies y equipos, ambientes. Estas herramientas permitirn
detectar a tiempo posibles desviaciones en los monitoreos microbiolgicos y tomar acciones correctivas
oportunasquepermitancontrolarcualquiertipodecontaminacinindeseableenelrea.
Summary
Methodologyforthevalidationoftheasepticfillinginalyophilizationprocess
The methodology proposed for the validation of an aseptic filling in a lyophilization process was presented. To
thisend,3testsweremadeinwhich3batchesof15000vialseachonewerefilledwithcasoybroth.Theywere
incubated at 22.5 2.5 C y 32.5 2.5 C for 14 days, respectively, in order to detect the possibility of
microbial contamination on carrying out the process. During the first three proceses, the microbiological
monitoring of environments, surfaces and operators took place. Petrifilm was used in the sampling to detect
aerobic mesophiles and yeasts, a procedure accomplished under rest and operation conditions. Likewise, the
counting of particulars was made in the area and sterility tests were done for the packing materials (caps and
vials). Finally, the validation methodology was designed for the sterilization of the lyophilizer, and Bacillus
stearothermophilus was used as an indicator microorganism. The design of the test was made taking into
account the recommendations of the Food and Drug Administration (FDA) and the World Health Organization
(WHO) for products of parenteral administration.These are the reference organizations for the production and
quality control used by the enterprise of veterinary products , where the test was performed. The filled vials
werereadbyturbidity(presenceofcontamination),andtheacceptancecriteriawereestablishedbythe2above
mentionedentities.Toconclude,itwasindicatedaplanofmicrobiologicalmonitoringfortheevaluatedarea,in
whichpointsofstrategicalsamplingwereincluded,aswellastheaccomplishmentofspecificstandardoperative
proceduresforthisarea.
Keywords:Validation,asepticfilling,FDA,WHO.Bacillusstearothermophilus.
Referenciasbibliogrficas
1.Pharmacopea. The United States Phamacopeia. The official compendia of standards. USP XXVIII. USA:
UnitedStatesPhamacopeiaConventionInc2005.
2.Merck.ManualdeMediosdeCultivo.Darmstadt:Merck1994.
3.3M Productos Microbiolgicos. Gua de interpretacin para el recuento de mesfilos aerobios. USA.
Mxico.2005.p249.
4.3MMicrobiolgicos.Guadeinterpretacinparaelrecuentodehongosylevaduras.USA.Mxico.2005.
p.249.
5.Organizacin Mundial de la Salud. Comit de expertos de la OMS en especificaciones para las
preparaciones farmacuticas. Serie de Informes Tcnicos de la OMS. Ginebra: OMS 1992. Serie de
InformesTcnicos:32.
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6.FDA.SterileDrugProductsProducedbyAsepticProcessingDraft.U.S.DepartmentofHealthandHuman
ServicesFoodandDrugAdministration.UnitedStatesofAmerica,Rockville:FDA2004.
7.Rickloff, J. Validation Fundamental Principles of Isolator Decontamination. Advanced Barrier Concepts,
Inc.NorthCarolina,2001.p.14.
8.STERIS.SPORDEXVPH,CulreTest.USA.2006.
9.Ljungqvist B, Reinmller B. The LR Method in Critical Areas Airflow Patterns and the Design of Aseptic
Interventions.PharmaceuticalTechnology.2004.
10.SandleT.ParticleMonitoringandControl.PMPSSterileManufacturing.USA.2003.
11.CundellMA.MicrobialTestinginSupportofAsepticProcessing.PharmaceuticalTechnology.2004.p.56
61.
12.AgallocoJ,AkersJ.AsepticProcessing:AVisionoftheFuture.PharmaceuticalTechnology.2005.
13.Groesbeck M. Apparel System Selection For Phamaceutical Cleanrooms. Controlled Environments
Magazine.2006.
Recibido:11deoctubrede2006.Aprobado:17denoviembrede2006.
Cindy Marlene Fernndez Lpez. Pontificia Universidad Javeriana. Departamento de Microbiologa. Facultad de
Ciencias. Carrera 7 No. 4382. Edificio Carlos Ortiz (51). Bogot, Colombia. Correo electrnico:
cinfi07@yahoo.com
1MicrobilogaIndustrial.
2MasterenCiencias.
3QumicoFarmaceuta.DirectordelDepartamentodeControldeCalidad.EmpresaColombianadeProductos
Veterinarios.
Commons
Todoelcontenidodeestarevista,exceptodndeestidentificado,estbajounaLicenciaCreative
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Metodología para La Validación Del Llenado Aséptico en Un Proceso de Liofilización

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Se present la metodologa propuesta para la validacin de un llenado

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