UNIVERSIDAD NACIONAL DE

REA AGROPECUARIA Y DE
RECURSOS NATURALES
RENOVABLES LOJA

INGENIERA
AGRONMICA

bioqumica
Prctica de laboratorio
Nombre:
Arianna Aponte V.

Ciclo:
Tercero

Docente:
Ing. ngel Robles

Fecha:
2016-07-06

Prctica N 2
Tema: Observacin de clulas procariotas y eucariotas
Objetivo:
o Identificar la morfologa de la bacteria.
o Diferenciar/reconocer las bacterias gram-positivas de las gram-negativas.
Introduccin:
Las bacterias constituyen un grupo heterogneo de organismos desde el punto de vista
morfolgico. Difieren de las eucariotas, adems de por su pequeo tamao, por carecer
de ncleo diferenciado; contienen un solo cromosoma, formado por un DNA circular en
doble helicoide, sin protenas asociadas; carecen de microtbulos y estructuras
relacionadas (centriolos, huso acromtico, etc.). Los ribosomas bacterianos son distintos
de los eucariticos, carecen tambin las bacterias de retculo endoplasmtico, aparato de
Golgi y mitocondrias.
Las estructuras comunes a todas o a la mayora de las bacterias son: pared celular,
membrana plasmtica y citoplasma. En el citoplasma se halla un DNA circular y
numerosos ribosomas. La pared bacteriana da rigidez y forma a la clula; su estructura
molecular bsica es e peptidoglucano. La pared puede contener algunos otros
componentes, adems del peptidoglucano, como los lipopolisacridos en las bacterias
gram-negativas y los cidos teicocos en las bacterias gram-positivas.
Tincin de Gram:
Esta tincin fue desarrollada por el Dr. Christian Gram n 1884, es hoy la ms utilizada
en los laboratorios de bacteriologa y permite, de acuerdo con la estructura y grosor de
la pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y en Gram negativas. Las
gram positivas poseen una capa gruesa de peptidoglucn y carecen de membrana
externa, mientras que las Gran negativas tienen una capa ms delgada de peptidoglucn
y poseen una membrana externa.
Algunas bacterias se clasifican como Gram variables, pues presentan simultneamente
tincin de Gram positivas y de Gram negativas, an bajo condiciones ptimas de
cultivo. Sin embargo, en su estructura estas bacterias poseen una pared de Gram
positivas, aunque la capa de peptidoglucn es ms delgada que la mayora de las
bacterias Gram positivas.
Esta tincin adems, correlaciona con otras propiedades como endotoxinas,
susceptibilidad a antibiticos, sensibilidad o resistencia a sales biliares, punto
isoelctrico y tensin superficial.
Existen variaciones en esta tcnica, pero en trminos generales, la tincin de Gram
involucra varios pasos:

1. Tincin inicial. Las clulas se tien con cristal violeta, el cual es el colorante
primario. En este paso todas las clulas se tien de morado.
2. Mordente. Se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal violeta y
forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas las clulas
continan de color morado.
3. Decoloracin. Se adiciona un solvente no polar, el cual acta lavando el
complejo cristal violeta-yoduro de las clulas Gram negtivas. De esta manera las
bacterias Gram positivas continan moradas y las Gram negativas quedan
incoloras. Este es el paso crtico de esta tincin, pues si se exagera, decolora las
Gram positivas y se hace muy dbil no decolora a las Gram negativas.
4. Contratincin. Se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera que las
bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se tien de rosado a
fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las bacterias Gram positivas no se
afectan con la contratincin y permanecen moradas debido a lo intenso de esta
coloracin.
Adems de una excesiva decoloracin, otro factor que puede influir en que laas
bacterias Gram positivas se observen parcial o completamente rosadas, es la
edad del cultivo; las clulas viejas tienden a perder su capacidad de retener el
complejo cristal violeta-yoduro.
Aunque esta tcnica parece simple, su realizacin con alto grado de
confiabilidad requiere prctica y experiencia.
Bacterias Gram-positivas y Gram-negativas:
Al tratar las bacterias as teidas con alcohol, las Gram-positivas no se decoloran
porque su pared de peptidoglucano es gruesa, contiene pocos lpidos, y dificulta la
penetracin del alcohol que pudiera extraer el colorante.
Por el contrario, las Gram-negativas tienen una pared de peptidoglucano ms delgada,
recubierta por una envoltura fundamentalmente lipdica. Debido a esto, el alcohol o
acetona, al disolver los lpidos, incrementa la porosidad de la pared celular y arrastra el
colorante del interior de la clula teida, por lo que la bacteria se decolora.
Posteriormente puede teirse con un colorante de contraste como Safranina o
Fucsina bsica.

Materiales:

Materiales y equipos
tomate
portaobjetos
hisopo
mechero
cerillos
microscopio
Geranio

Sustancias para Gram

Agua
safranina
Lugol
Cristal violeta
Alcohol cetona

Desarrollo:
Bacterias:

Del medio de cultivo con bacterias Pseudomonas, se extrae una pequea

proporcin con la ayuda de un hisopo y se coloca sobre un portaobjetos de
vidrio, limpio, que se va a teir y se hace rodar el hisopo con que se tom la
muestra. Una vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos el
material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse
con facilidad, se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero de
Bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no queme,
es decir se realiza un frotis.
Luego se coloca las sustancias para la tincin Gram, se lava con agua despus de
cada sustancia: cristal violeta (1min), lugol (1min), alcohol cetona (30seg) y
safranina (1min), siendo esta ltima sustancia la que diferencie entre gramnegativo y gram-positivo.
Se lleva al microscopio para realizar la observacin.

Hongos:

Se utiliz una planta de geranio infectada con Roya.

Preparada la muestra, se procedi a la observacin.

Conclusiones:

Las bacterias gram-positivas se tien de color azul y en cambio las

bacterias gram-negativas de color rosado o rojo.
El hongo Roya se presenta en el envs en depstulas de color naranja y
en el haz manchas amarillentas.
La forma de estas bacterias fue de un bacilo.

Bibliografa:
Rodrguez E., Gamboa M., Hernndez F., Garca J.2005.Bacteriologa General.
Principios y prcticas de laboratorio. Editorial de la Universidad de Costa Rica.San
Jos. Costa Rica. 475p.
Macarulla J., Goi F.1994. Bioqumica Humana. Curso Bsico.Editorial
Reverte.Barcelona.530p.

http://www.biologia.edu.ar/bacterias/micro4.htm