Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
1 - Teoria:
Os glicdios que possuem em sua estrutura um grupamento hemiacetal, identificado pela
presena da hidroxila heterosdica ligada ao carbono anomrico, apresentam poder redutor.
Metais como Cu2+, Ag+, Bi3+ e Hg2+ e ainda substncias orgnicas como o cido dinitrossaliclico
(DNS) so reduzidos em meio alcalino por glicdios. O poder redutor uma propriedade muito
utilizada para determinao qualitativa e quantitativa de glicdios.
2 - Objetivo:
Avaliar o poder redutor dos seguintes glicdios: glicose, frutose, sacarose, maltose e
lactose.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes: Reativos de Benedict, de Fehling, de Tollens e soluo de DNS.
-Solues aquosas: 1% de glicose (G), 1% de frutose (F), 2% de sacarose (S), 2% de
maltose (M) e 2% de lactose (L).
4 - Procedimento:
- Para cada reagente separar seis tubos de ensaio. Marcar cada um dos tubos com a inicial
de um dos glicdios a ser testado e mais um que ser o branco (B). Cada conjunto de seis tubos de
reagente corresponde a uma srie.
- Adicionar aos tubos da 1 srie 1mL de reativo de Benedict, ao da 2 srie 1mL do
reativo de Fehling, aos da 3 srie 1mL de reativo de Tollens e aos da 4 srie 1mL de DNS.
- Adicionar cada tubo 1 mL da respectiva soluo de glicdio. Aos tubos marcados com
B adicionar 1mL de gua destilada.
- Aos tubos contendo o reagente de Tollens, deve ser acrescida uma gota de soluo de
hidrxido de amnio.
- Aquecer a mistura em banho-maria por 10 min.
-Verificar a formao de precipitado, mudana de cor ou formao de espelho prata.
5 - Resultados:
Elaborar uma tabela indicando os glicdios que apresentam poder redutor frente aos
diferentes reagentes:
+ = reao positiva
- = reao negativa
Anotar todas as alteraes ocorridas.
6 - Relatrio:
-Apresentar as reaes ocorridas no experimento.
-Explicar porque nem todos os glicdios avaliados apresentaram poder redutor.
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
O mtodo de Nelson um mtodo espectrofotomtrico que tem como base a reduo do
cobre em meio alcalino (reativo de Fehling), seguido da formao de um complexo azul de Cu+
com molibdato de amnio (tcnica colorimtrica de Somogyi). um mtodo bastante sensvel,
sendo a intensidade da colorao azul diretamente proporcional quantidade de glicdio redutor.
2 - Objetivo:
- Elaborar uma curva padro para determinao da concentrao de glicdios redutores
presentes numa amostra.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes: Solues Nelson A, Nelson B e Nelson C.
-Soluo padro de glicose 18mg/100mL (1 mmol/L).
4 - Procedimento:
4.1- Preparo da curva padro
a-Adicionar a 6 tubos de Folin-Wu 0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1,0 mL da soluo padro de
glicose e completar cada um deles para 1mL com gua destilada.
OBS: Iniciar o item 4.2.
b-Adicionar em cada tubo 1mL da mistura dos reagentes Nelson A e Nelson B (24 mL de
Nelson A + 1,0 mL de Nelson B).
c-Aquecer em banho-maria em ebulio por 20 minutos.
d-Resfriar os tubos em gua corrente.
e-Adicionar 1,0 mL do reagente Nelson C e agitar at parar de espumar.
f-Completar o volume para 25 mL com gua destilada (usar a marcao do tubo) e
homogeneizar.
g-Ler as absorvncias das solues em espectrofotmetro a 540nm, zerando o aparelho
com o branco (aquele que contm 0 mL da soluo padro de glicose).
4.2- Determinao da concentrao de glicose em amostra desconhecida
a-Adicionar a um tubo de Folin-Wu 1 mL de soluo da amostra desconhecida.
b-Repetir os procedimentos dos itens 4.1.b a 4.1.g.
5 Relatrio:
-Elaborar uma tabela com as concentraes de glicose (g/L) e as respectivas absorvncias.
-Construir a curva padro: absorvncia versus concentrao de glicose (g/L), incluindo a
equao da curva e o coeficiente de determinao (R2).
-Determinar a concentrao de glicose na amostra desconhecida.
-Apresentar a reao qumica que ocorreu, explicando a funo dos componentes dos
reagentes de Nelson.
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
O principal componente do caldo de cana-de-acar a sacarose, glicdio que no possui
redutor. Na determinao dos glicdios totais (GRT) presentes no caldo de cana, inicialmente a
sacarose presente deve ser hidrolisada, de acordo com a seguinte equao qumica:
sacarose + gua
glicose + frutose
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
Os aminocidos apresentam-se na forma dipolar inica, com propriedades anfotricas em
funo dos seus grupamentos amino NH2 (NH3+) e carboxila COOH (COO-).
A adio de quantidade equivalente de um cido forte (HCl) ao aminocido far com que
ele se apresente na forma protonada. A titulao potenciomtrica utilizando uma base forte
(NaOH) permite determinar os pKs dos grupamentos COOH e NH2 e o ponto isoeltrico (P.I.).
2 - Objetivo:
-Construir a curva de titulao do aminocido alanina.
-Determinar os pKs dos grupamentos COOH e NH2, e o ponto isoeltrico (P.I.) da
alanina.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes: Alanina, NaOH 0,1 mol/L e HCl 0,1 mol/L.
4 - Procedimento:
-Pesar 2 mmol de alanina em um becher de forma alta de 100 mL.
-Adicionar quantidade equivalente de HCl 0,1 mol/L.
-Proceder titulao potenciomtrica da alanina utilizando 40 mL NaOH 0,1 mol/L.
-Adicionar 1 mL de NaOH 0,1 mol/L de cada vez e anotar o pH aps estabilizar a leitura.
5 - Relatrio:
- Elaborar uma tabela com os resultados da titulao (volume de base adicionado, nmero
de mmols equivalente e valor do pH).
- Construir a curva de titulao da alanina (mmol de base x pH).
- Determinar graficamente os valores de pk1 e do pk2 e calcular o ponto isoeltrico (P.I.).
- Calcular os valores de pk1, pk2 e P.I. a partir da estequiometria da reao;
- Comparar os valores dos pKs e P.I. obtidos nos itens anteriores com os valores indicados
na literatura: pK1 = 2,35 e pK2 = 9,87.
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
As protenas tm sua solubilidade altamente influenciada pelo pH. Isto se deve ao carter
anfotrico desses compostos, apresentando em sua estrutura resduos de aminocidos com cargas
eltrica distintas. O pH de menor solubilidade de uma protena localiza-se no seu ponto
isoeltrico (P.I.), uma vez que a fora de repulso entre as molculas menor. A solubilidade
aumenta quando o pH desloca-se para valores inferiores ou superiores ao P.I. da protena.
2 - Objetivo:
-Verificar a influncia do pH na solubilidade de uma protena.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes: Soluo de casena 0,3g/100 mL em acetato de sdio 0,1 mol/L
cido actico 0,1 mol/L
cido actico mol/L
4 - Procedimento:
- Numerar 8 tubos de ensaio e proceder seu preenchimento de acordo com o quadro:
Tubo
gua (mL)
5,0
4,4
4,3
4,0
3,5
2,5
0,5
3,9
0,1
0,2
0,5
1,0
2,0
4,0
0,6
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
A influncia do tempo sobre a velocidade de uma reao enzimtica ser verificada com a
utilizao da enzima invertase, que catalisa a converso (hidrlise) da sacarose (glicdio no
redutor) em quantidades idnticas de glicose e frutose (glicdios com poder redutor). Atravs do
emprego do mtodo de dosagem de glicdios redutores pelo DNS (cido 3,5 dinitro saliclico)
possvel quantificar os acares formados no hidrolisado.
2 - Objetivo:
-Determinar a velocidade de reao e calcular a atividade da preparao enzimtica.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes/solues:
Soluo de sacarose 0,5 mol/L em soluo tampo de acetato 0,05 mol/L, pH 4,7.
Soluo de enzima obtida por extrao com NaCl de fermento biolgico.
Reagente do DNS (cido 3,5 dinitro saliclico em meio alcalino).
Soluo padro de glicose 5,0 mol/mL em soluo tampo de acetato 0,05 mol/L.
4 - Procedimento:
4.1- Obteno da enzima invertase:
a- Pesar 15 g de fermento biolgico e 15 g de NaCl.
b- Misturar os dois slidos por 10 min.
c- Centrifugar a mistura por 20 min ( 2500 rpm).
d- Recolher o sobrenadante e diluir na proporo de 1:250 com gua destilada.
4.2- Curva padro de glicose
a- Adicionar aos tubos de Folin-Wu 0, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mL da soluo padro de
glicose 5,0 mol/mL e completar para 1,0 mL com gua destilada.
b- Adicionar em cada tubo 1,0 mL do reagente do DNS.
c- Aquecer em banho-maria por 5 min.
d- Resfriar os tubos em gua corrente.
e- Completar o volume para 12,5 mL com gua destilada (usar a marcao do tubo) e
homogeneizar.
f- Ler as absorvncias das solues em espectrofotmetro a 540 nm, zerando o aparelho
com o branco (0 mL da soluo padro de glicose 5,0 mol/mL).
4.3-Influncia do tempo de reao (T=ambiente).
a- Marcar 6 tubos de Folin-Wu com os tempos de reao a serem avaliados: 1, 2, 3, 5, 10
e 15 min.
10
11
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES
1 - Teoria:
A temperatura altera a velocidade de uma reao enzimtica exercendo influncia na
constante de velocidade. Entretanto, como a enzima uma protena, a elevao da temperatura
tende a provocar a desnaturao da mesma, com perda de atividade.
2 - Objetivo:
-Verificar a influncia da temperatura sobre a atividade da enzima.
3 - Material:
-Anotar toda vidraria e equipamentos utilizados.
-Reagentes/solues:
Soluo de sacarose 0,45 mol/L em tampo de acetato 0,05 mol/L, pH 4,7.
Soluo de enzima obtida por extrao com NaCl de fermento biolgico.
Reagente do DNS (cido 3,5 dinitro saliclico em meio alcalino).
4 - Procedimento:
a- Marcar 5 tubos de Folin-Wu com as temperaturas a serem avaliados (0oC, ambiente,
50oC e 100oC) e o branco (B).
b- Adicionar em cada tubo 0,5 mL da soluo de sacarose 0,5 mol/L e no branco 1,0 mL
de gua destilada.
c- Em seguida, adicionar 0,5 mL da soluo da enzima (exceto no branco) e,
imediatamente, colocar os tubos nos respectivos banhos: 0oC banho de gelo, temperatura
ambiente medir a temperatura, 50oC banho trmico a 50oC e 100oC gua fervente.
d- Aps exatamente 10 min retirar os tubos dos respectivos banhos e adicionar em cada
tubo 1,0 mL do reagente do DNS, inclusive no branco.
e- Aquecer em banho-maria em ebulio por 5 minutos.
f- Resfriar os tubos em gua corrente.
g- Completar o volume para 12,5 mL com gua destilada e homogeneizar.
h- Ler as absorvncias das solues em espectrofotmetro a 540 nm, zerando o aparelho
com o branco (1,0 mL de gua destilada).
5 - Relatrio:
- Elaborar uma tabela com os dados de temperatura (oC), absorvncia a 540 nm,
concentrao d eproduto formado (mol/mL) e velocidade da reao (mol/mL.min.).
- Construir um grfico de velocidade de reao (mol/mL.min) X temperatura (oC).
Obs.: O clculo do produto formado em mol/mL deve ser feito utilizando a curva padro
obtida na prtica no 8.
- Determinar a temperatura na qual a enzima apresenta maior atividade. Justifique.
- Explicar os fatores que levam a interrupo da reao enzimtica realizada.
- Explicar como a temperatura afeta a velocidade de uma reao enzimtica.
12
INSTITUTO DE QUMICA
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGIA DE PROCESSOS BIOQUMICOS
BIOTECNOLOGIA EXPERIMENTAL - BIOQUMICA
DOCENTES: FABIO MERON E GIZELE CARDOSO FONTES