Qumica Analtica III

Gua de Estudio I Parcial

Dr. Edgar F. Morn Palacio

Macromolculas que participan en la matriz estructural

Son estructuras inmensas que se mantiene unidas por enlaces COVALENTES fuertes. Los
enlaces covalentes, son fuerzas que mantienen tomos unidos como molculas. Por
ejemplo, los dos enlaces O-H en las molculas de agua son enlaces covalentes.
Existen interacciones ms dbiles que son las responsables de la arquitectura celular:
Interacciones no covalentes, llamadas enlaces o fuerzas no covalentes, que se producen
entre iones, molculas o partes de las molculas. Son de 10 a 100 veces ms dbiles
Energa de enlace (kJ/mol)

Importancia y naturaleza de las interacciones NC

Son enlaces dbiles que permiten romperse y volverse a formar continuamente en la
interaccin molecular dinmica que es la vida. La interaccin depende de los rpidos
intercambios de parejas moleculares. Son interacciones de varios tipos, sin embargo todas
estas interacciones son fundamentalmente de naturaleza electrosttica

Tipos de interacciones NC

Enlaces covalentes
1. Comparticin de electrones en orbitales moleculares
2. Estado slido, lquido y gas
3. Fuertes (>50 kcal/mol)
4. Tantos como orbitales con electrones desapareados
Enlaces inicos
tomo o molcula cargada elctricamente, debido a que ha ganado o perdido electrones.
Los iones cargados negativamente, producidos por la ganancia de electrones, se conocen
como aniones y los cargados positivamente, consecuencia de una prdida de electrones, se
conocen como cationes.

A + B

A+ + :B-

1. Fuertes (>50 kcal/mol)

2. Propios del estado cristalino
3. Elementos extremos en la Tabla Peridica
2

Enlaces de coordinacin
Orbital molecular formado por: Un orbital vaco y un par electrnico.

Dador: tomos con pares electrnicos: N, O

Aceptor: orbital vaco (tomos metlicos)

..
.N .
.

..
.O .

Puentes de Hidrgeno

Comparticin de un protn entre dos pares electrnicos

Dador: Grupo X-H con cierto momento dipolar
Aceptor: Grupo Y: con un par electrnico
Dbil (mucho ms fuerte que int. de van der Waals)
Rotas por urea 6M, guanidina 8M
Nota: Checar porque se dice que el puente de H2 es pseudocovalente
Sustancias puras
Son aquellas formadas por uno o varios componentes y que presentan un aspecto
homogneo. Existen dos tipos:
1. Elementos qumicos: si existe un componente de manera exclusiva, ej. carbono, oro,
nitrgeno, calcio, azufre, etc.
2. Compuestos qumicos: si existen varios componentes
Ejemplo:
Agua, sustancia pura formada por dos elementos: H2 y O2
Diamante, compuesto exclusivamente de un elemento: carbono
Mezclas
La materia usualmente se encuentra en forma de mezclas; casi todos los gases, lquidos y
slidos de los cuales esta formado el mundo son mezclas de dos o ms sustancias juntas,
mezcladas de forma fsica y no qumicamente combinadas.
Tipos de mezclas:
1. Sintticas, contienen pocos componentes
2. Naturales, contienen ms de 50 sustancias diferentes
3. Vivientes, son las ms complejas. Una bacteria sencilla contiene ms de 5000
compuestos diferentes
3

Mtodos de separacin
Nos sirven para separar y purificar una sustancia de inters de una mezcla, disolucin o
suspensin, determinada.
Se clasifican segn sus caractersticas en:
a) Mtodos de separacin qumica: destruyen las sustancias originales
b) Mtodos de separacin fsica: no destruyen las sustancias originales
Mtodos de separacin qumica
Son procesos en los que los compuestos qumicos se separan en elementos ms sencillos.
Estos mtodos qumicos se caracterizan por la necesidad de efectuar una reaccin qumica
previa a la separacin.
Hay muchos mtodos qumicos de separacin pero los ms importantes y conocidos son:
Electrlisis. Es la produccin de una reaccin redox no espontnea, mediante el paso de
una corriente elctrica. Es el proceso inverso al que ocurre en una pila elctrica y se lleva a
cabo en un contenedor llamado cuba electroltica. Un ejemplo sencillo es el de la
electrlisis del agua, en la que el paso de corriente descompone este lquido en sus
elementos constituyentes, hidrgeno y oxgeno.
Su principal ventaja es que no es necesario aumentar la temperatura para que la reaccin
tenga lugar, evitndose prdidas energticas y reacciones secundarias.
Industrialmente es uno de los procesos ms empleados en diferentes reas, como la
obtencin de elementos a partir de compuestos (cloro, hidrgeno, oxgeno), la purificacin
de metales (el mineral metlico se disuelve en cido, obtenindose por electrlisis el metal
puro) o la realizacin de recubrimientos metlicos protectores y/o embellecedores
(niquelado, cromado, etc.).
Gravimetras. Es la separacin de un componente de una disolucin lquida mediante su
precipitacin. La sustancia que se desea obtener reacciona con otra sustancia qumica, de
forma que el resultado de la reaccin es un producto slido que precipita por gravedad en el
fondo de la disolucin y puede ser separado de ella por mtodos fsicos.
Ejemplo:
Separacin de Ag+ de una disolucin de AgNO3, se somete esta sustancia a reaccin con
HCl, obtenindose un precipitado blanco de AgCl insoluble.
Mtodos de separacin fsicos
Estn basados en las diferencias entre las propiedades fsicas de los componentes de una
mezcla:

Punto de ebullicin

Filtracin

Densidad

Destilacin (fraccionada)

Presin de vapor

Cristalizacin

Punto de fusin

Centrifugacin

Solubilidad, etc.

Cromatografa
Filtracin
4

En la filtracin, se hace pasar la mezcla por filtros de distintos tamaos, en los que quedan
retenidas las partculas de mayor tamao que los poros del filtro. Es un mtodo sencillo y
barato; slo es til en algunas situaciones
Es uno de los mtodos ms simples de separacin fsica, que no altera las propiedades de
las sustancias que intervienen. Se puede realizar de dos formas: Por gravedad y al vaco.
Destilacin y destilacin fraccionada
La destilacin y la destilacin fraccionada es el mtodo utilizado cuando se quieren separar
dos lquidos y uno de ellos es ms voltil que el otro. Es tambin til cuando ambos
lquidos tengan temperaturas de ebullicin parecidas.
Cuando calentamos la mezcla el vapor que aparece est compuesto en mayor porcentaje por
el lquido ms voltil. Se recoge el vapor y se enfra, obtenindose un lquido de
concentracin distinta al original. La mezcla inicial ha cambiado tambin de composicin y
por tanto tambin de punto de ebullicin.
Cristalizacin
Una Solucin consta de dos componentes: El disolvente y el soluto. Las soluciones pueden
ser no-saturadas, saturadas y sobre-saturadas.
Las soluciones no-saturadas: tienen una concentracin de soluto menor que las soluciones
saturadas, y stas a su vez tienen una concentracin de soluto menor que una solucin
sobresaturada.
Para efectuar la cristalizacin de un slido hay que partir de una solucin sobre-saturada.
Existen varias formas de sobre-saturar una solucin, una de ellas es el enfriamiento de la
solucin, otra consiste en eliminar parte del disolvente (Por ejemplo: por evaporacin) a fin
de aumentar la concentracin del soluto, otra forma consiste en aadir un tercer
componente que tenga una mayor solubilidad que el componente que se desea cristalizar.
La rapidez del Enfriamiento definir el tamao de los cristales resultantes. Un enfriamiento
rpido producir cristales pequeos, mientras que un enfriamiento lento producir cristales
grandes. Para acelerar la Cristalizacin puede hacerse una "siembra" raspando las paredes
del recipiente.

Centrifugacin
Se habla de centrifugacin cuando tenemos partculas de distinto tamao en un medio
acuoso, stas sedimentan hacia el fondo a una velocidad que depende de su peso. Este
efecto podra utilizarse para separar componentes de distinto peso, sin embargo las
velocidades de sedimentacin son pequesimas, por lo que el sistema no es til. Se dice
que es centrifugacin cuando se utilizan velocidades 16,000 rpm. Ultracentrifugacin, es
cuando utilizamos altas velocidades que van desde los 20,000 hasta velocidades de
400,000. La centrifugacin se puede dar con o sin gradiente, la centrifugacin con gradiente
nos ayuda a separar compuestos de diferente densidad.
Cromatografa
Se utiliza con los fluidos, que pueden ser gases o lquidos, se empuja a circular la mezcla
por un slido o un lquido que permanece estacionario (fase estacionaria). Los distintos
5

componentes de la mezcla circulan a velocidades diferentes por la fase estacionaria, y por

lo tanto unos componentes estn ms tiempo retenidos en ella que otros, emergiendo
despus.
Existen varios tipos de cromatografa que son:
1.
2.
3.
4.
5.

Cromatografa en columna
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en papel
Cromatografa de lquidos de alta eficiencia (HPLC)
Cromatografa de gases (CG)

Los Mtodos Cromatogrficos

Principios bsicos
La cromatografa es una tcnica analtica y cuantitativa que ha alcanzado un alto grado de
desarrollo y modalidades en los laboratorios de qumica y bioqumica. En sus diversas
aplicaciones, la cromatografa sirve para separar compuestos qumicos y molculas
diferentes a partir de mezclas multicomponentes, las cuales pueden contener varios
centenares de sustancias diferentes. Por ejemplo, es capaz de identificar y separar los 350
compuestos que dan su sabor y bouquet caractersticos al caf. Es el mtodo ms comn
para realizar separaciones analticas y tiene aplicacin a todas las ramas de la ciencia. La
importancia de la cromatografa en la ciencia ha hecho que se hayan otorgado 12 premios
Nobel entre 1937 y 1972, a trabajos donde esta tcnica fue vital.
El botnico ruso Mikhail S. Tswett formaliz el uso de la cromatografa en los estudios
cientficos por el ao 1910, dio ese nombre a la tcnica y la aplic a la separacin de los
pigmentos naturales que se encuentran en las plantas (conocidos como carotenoides y
clorofilas). Tswett empac una columna de vidrio vertical (de unos cuantos centmetros de
dimetro) con material adsorbente. Luego, por la columna vertical verti una solucin que
contena la mezcla de pigmentos provenientes de las hojas molidas de una planta. Pasados
unos minutos, el material empacado en la columna haba adquirido una coloracin diferente
por segmentos. Es decir, haba logrado la separacin de los pigmentos naturales de la
planta. En cada segmento de color definido haba un pigmento diferente.
En general, la cromatografa consiste en hacer pasar una fase mvil con un determinado
disolvente (o eluyente), en este caso una mezcla de agua y etanol -misma que contiene
disuelta la mezcla de molculas que se desea separar-, a travs de una fase fija que actuar
como tamiz o filtro selectivo, en este caso algodn. A su paso, la separacin de molculas
se produce debido a sus diferencias de tamao, geometra y distribucin de carga elctrica.
En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se disuelve en una fase mvil, que
puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico (Sustancia que se encuentre en
condiciones de presin y temperatura superiores a su punto crtico. Es un cuasi estado con
propiedades intermedias entre lquidos y gases). Esta fase mvil se hace pasar por una fase
estacionaria inmiscible, la cual se mantiene fija en la columna o sobre una superficie slida.
Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de
modo distinto entre la fase mvil y estacionaria. Los elementos que son retenidos con
fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase mvil; por el
6

contrario, los componentes que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez. Debido a estas diferencias los componentes se separan de manera discriminada de
manera que pueden ser analizados cualitativa y cuantitativamente.
La cromatografa lquida la podemos diferenciar en cuatro grupos:
1. de reparto: separa los solutos basndose en la solubilidad
2. de adsorcin: se basa en la afinidad de adsorcin
3. de exclusin: separa solutos segn el peso molecular
4. de intercambio inico: separa solutos segn la carga inica
Fase mvil
En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se disuelve en una fase mvil:
1. Gas
2. Lquido
3. Fluido supercrtico (Sustancia que se encuentre en condiciones de presin y
temperatura superiores a su punto crtico. Es un cuasi estado con propiedades
intermedias entre lquidos y gases)
La fase mvil se hace pasar por una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantiene fija en
la columna o sobre una superficie slida.
Fase estacionaria
Las dos fases se eligen de tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de
modo distinto entre la fase mvil y estacionaria
a) Elementos que son retenidos con fuerza por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase mvil
b) Elementos que se unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez
Debido a estas diferencias los componentes se separan de manera discriminada de manera
que pueden ser analizados cualitativa y cuantitativamente
Tipos de cromatografa
Segn el estado fsico del eluyente
cromatografa de gases
cromatografa de lquidos
Segn el estado fsico del lecho
lquido-lquido
slido-lquido
Segn las caractersticas del lecho cromatogrfico
abierto: en papel, en capa fina
cerrado: en columna
Segn la presin del eluyente
Baja presin
Alta presin
Segn la composicin del eluyente
Isocrtica
De gradiente
Segn la polaridad de la fase estacionaria
Fase normal
Fase reversa
Segn el mecanismo de retencin
7

 De reparto
De filtracin en gel o de exclusin molecular
De adsorcin
De intercambio inico
De afinidad
Cromatografa en Papel
Pertenece al tipo Cromatografa de particin se fundamenta en que las sustancia
problema, puedan tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de
inmisibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel fase estacionaria. Es
la ms sencilla de las cromatogrficas, y a la vez muy similar a la cromatografa en capa
fina o Thin Layer Chromatography (TLC). Se utiliza solamente con un propsito analtico,
en situaciones donde los compuestos a ser identificados son fcilmente adsorbidos en papel
y no en slica gel de la TLC.
En este tipo de experimento puede se aplicado para diferenciar muestras y componentes de
una mezcla caracterizada. Se controlan tres variables durante esta tcnica:
1. El solvente
2. El papel
3. Distancia recorrida por el solvente
El ultimo es difcil de controlar y comparar los radios de los experimentos, llamados
fraccin representativa (Rf = representative fraction).
El Rf, es definida por la ecuacin:
Rf = Distancia del centro de la muestra al punto inicial
Distancia final del solvente al punto de inicio

El Rf para un compuesto es una constante de un experimento a otro solamente si las

siguientes condiciones de la cromatografa son tambin constantes: Sistema de solventes,
adsorbente, grosor del adsorbente, cantidad de muestra y temperatura. Al comparar dos
compuestos bajo condiciones cromatogrficas idnticas, el compuesto con el Rf ms grande
es menos polar porque interacciona con menos fuerza con el adsorbente polar en la placa
del TLC.
Una vez corrido el disolvente se retira el papel y se deja secar, se trata con un reactivo
qumico con el fin de poder revelar las manchas. Esta cromatografa se usa para una
identificacin cualitativa. En un papel filtro se coloca un poco de muestra y despus se
revela y se miden las distintas velocidades.
Existen dos tipos de cromatografa de papel:
1. Descendente: Se trata de una caja saturada de vapor de agua, atravesada por una
cajetn semicilndrico lleno con el solvente orgnico. En el se deposita, como
muestra la figura el papel con la banda de muestra justo al salir el papel del cajetn.
Para sujetar el papel introducimos una varilla a lo largo de la caja. El solvente
comenzar ascendiendo por el papel por capilaridad y continuar bajando al salir de
la cajetilla, pasando por la zona de muestra y arrastrndola, consiguindose as la
separacin.

2. Ascendente: El solvente se encuentra en la parte inferior de la cubeta y asciende por

el papel haciendo que se separe la muestra. La resolucin de la cromatografa en
papel descendente es mayor.
Cromatografa en Capa Fina
Ismailov y Scraiber utilizaron lminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de
almina y luego aplicaron extractos vegetales, dando as la primera forma de Cromatografa
de Capa Fina. Egon Stahl (1956) di el nombre de Cromatografa de Capa Fina.
Estandariz los procedimientos, equipos y adsorbentes dando un auge a la tcnica simple, a
bajo costo y eficiente.
Proceso de adsorcin
La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de
fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrgeno, efectos
inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia
una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el
solvente. Algunos adsorbentes utilizados son: Silica gel (se utiliza en el 80% de las
separaciones), xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica), Tierra Silcea
Kieselguhr, Celulosa (Nativa o micro-cristalina) y Poliamidas.
Preparacin
Se deben tomar las siguientes consideraciones: Tamao de Partcula, Volumen de Poro,
Dimetro de Poro, rea Superficial, Homogeneidad y Pureza.
Se usan como soporte del adsorbente, lminas de: Vidrio, Plstico Metlicos. Los
tamaos de la placa para TLC convencional son: 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2
cm. Hay placas que contienen un indicador de Fluorescencia: F254 F366. El nmero que
aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del indicador
utilizado.
Desarrollo y revelado de la placa
Es un proceso mediante el cual son transportados a travs de la fase estacionaria por la
fase mvil. Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de mtodos que nos
permitan visualizar el(los) componente(s) presentes. Tambin se conoce este procedimiento
como Revelado.
Mtodos de revelado:
Qumicos (por inmersin o rociado). Se obtienen derivados coloreados o fluorescentes
Fsicos (pticos). Generalmente se utiliza radiacin UV
Evaluacin de un Cromatograma de Capa Fina
Anlisis Cualitativo
Medida de Rf
Comparacin Visual de Color/Intensidad
Propiedades UV/IR/MS/NMR
Anlisis Cuantitativo
Semi-cuantitativo: Comparacin visual del dimetro y la intensidad del color de la mancha
contra una serie de manchas patrones de concentracin conocida.
Cuantitativo
Indirecta
Directa:
Densitometra
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Medida de Transmisin. Medida de luz transmitida a travs de la sustancia

Medida de Emisin. Medida de luz reflejada desde la sustancia
Espectrofotometra
Fluorescencia
Fluorescencia con "quenching"
Proceso en pasos
Primera etapa: Aplicacin de las muestras a analizar
La primera precaucin que hay que tener en el manejo de la placa es la de procurar no tocar
con los dedos la capa de celulosa. La placa fina se coge siempre por los bordes de la misma.
Se coloca la placa encima de la mesa, y con un lpiz se traza una lnea muy dbil a unos 1,5
cm del borde inferior de la placa, procurando daar lo mnimo posible la capa. En la lnea
se sealan dbilmente cinco puntos, distribuidos equitativamente a lo ancho de la placa. En
cada punto de ellos se aplica cada uno de los patrones y la muestra problema. La segunda
precaucin a considerar es la de no contaminar las disoluciones de los patrones y la muestra
problema. Se aplica en la placa una gota de la muestra, procurando que se extienda lo
menos posible y no dae la capa. Se seca a continuacin con el secador de aire. Se aplica
una segunda gota y se vuelve a secar. Esta operacin se repite para cada unas de las
muestras. Una vez realizada la aplicacin de cada muestra es importante anotar en el
cuaderno de laboratorio las posiciones en las que se ha colocado cada patrn y el problema.
Segunda etapa: Elucin de las muestras
La cromatografa se realiza en la cubeta o cmara de desarrollo. La cubeta contiene un
volumen de fase mvil, cuya altura de lquido debe de estar siempre por debajo de la lnea
de aplicacin de las muestras. La placa que contiene las muestras se introduce en la cubeta.
Se coloca la tapa de la cubeta y se espera que la fase mvil ascienda por la capa hasta que
alcance una altura de hasta unos 2-3 cm del extremo opuesto a la parte sumergida. Una vez
realizada la elusin, se abre la tapa de la cubeta y se saca la placa.
Tercera etapa: Secado y visualizacin de la muestra
Inmediatamente que se ha sacado la placa, con el lpiz se marca en un borde el nivel
alcanzado. Se introduce en la estufa durante unos 5 min para que se seque. A continuacin,
mediante unas pinzas de madera se sumerge en la cubeta que contiene la solucin de
ninhidrina. Una vez que toda la placa se ha impregnado, se saca inmediatamente de la
cubeta, dejando que escurra el exceso de solucin de ninhidrina, y se vuelve a introducir en
la estufa durante 3 min para que se realice la reaccin de color.
En la cromatografa de capa fina, la fase estacionaria es una delgada capa de un soporte
slido granulado, la fase estacionaria est hidratada, por lo que se le considera como la fase
polar. La placa seca se sumerge en un pequeo volumen de fase mvil (mezcla de
solventes). La polaridad de la mezcla de solventes se elige de acuerdo a la mezcla de
compuestos que se desea separar. Como slo la base de la placa queda sumergida, el
solvente comienza a mojar la fase estacionaria y asciende por capilaridad. Al recorrer la
placa la fase mvil va arrastrando a las substancias apolares y aquellas ms polares son
retenidas por la fase estacionario dando lugar a la separacin.

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Revelado en 1 dimensin y 2 dimensiones. Migracin segn el solvente

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TLC cuantitativa
Para poder utilizar la TLC como un mtodo cuantitativo de anlisis, hace falta poder
cuantificar las manchas (figura 5.1 y 5.5). En este caso, la placa a examinar se desplaza
bajo la luz de un densitmetro (o escner) que mide la absorcin o la fluorescencia, a una o
varias longitudes de onda. Este aparato realiza un diagrama que es un pseudo
cromatograma con picos donde es posible medir reas. Se trata, de hecho, de una imagen
isocrnica de la separacin en el instante final.
Cuando se deben revelar compuestos marcados por un radioistopo -, se dispone entonces
de densitometros particulares equipados de una cmara de vdeo que da una imagen de la
distribucin radioactiva de la placa. El antiguo procedimiento de la radiografa por contacto
sobre una placa fotogrfica tiene el defecto de ser lento (pueden superarse las 48 h de
exposicin) y muy poco sensible. Estos nuevos aparatos, conocidos bajo el nombre de
mquinas de Charpak son utilizados igualmente en electroforesis en gel. La sensibilidad es
suficiente como para descubrir actividades de algunos Becquerel por mm2.

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Tabla de Solventes de Mayor Uso en Orden de Polaridad

Disolvente

(g/ml)

Peb
C

Mezcla de hidrocarburos

35-60

CH3-CH2- CH2- CH2CH2-CH3

69

2.0

0.655

Tolueno

110

2.4

0.865

Benceno

80

2.3

0.874

35

4.3

0.706

ter de petrleo

Hexano

Aumento en la Polaridad

Frmula

ter dietlico

CH3-CH2-O-CH2-CH3

0.640

Tetracloruro de
carbono

CCl4

77

2.2

1.604

Cloroformo

CHCl3

61

4.8

1.492

Diclorometano

CH2Cl2

40

9.1

1.325

Acetato de etilo

77

6.0

0.902

Acetona

56

21

0.791

CH3-CH2-OH

78

24

0.785

CH3-OH

65

33

0.791

100

80

1.000

Etanol

Metanol

Agua

H2O

Peb= Punto de ebullicin

= Constante dielctrica
= Densidad

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