Absorcion y Transporte de Nutrientes

Mster de Nutricin Vegetal
en Cultivos Hortcolas Intensivos
Mdulo II: Absorcin y transporte de nutrientes
MDULO 2: ABSORCIN Y TRANSPORTE DE

NUTRIENTES MINERALES
M ngeles Ferrer Ayala
Dpto. Ciencia y Tecnologa Agraria. rea Fisiologa Vegetal
ETSIA. Universidad Politcnica de Cartagena
Mangeles.Ferrer@upct.es
ndice del mdulo segundo:
1.-
Introduccin......................................................................................................... 1
2.-
Las races como superficies absorbentes ............................................................ 2
3.-
las membranas biolgicas ................................................................................... 8
4.-
Transporte pasivo y activo ................................................................................. 10
5.-
Transporte de solutos a travs de la membrana ............................................... 16
6.-
Protenas transportadoras de membrana.......................................................... 27
7.-
Transporte de iones en la raz ........................................................................... 48
8.-
Absorcin foliar de nutrientes........................................................................... 56
9.-
Resumen............................................................................................................. 57
10.-
APNDICES ..................................................................................................... 58
11.-
Bibliografa ........................................................................................................ 68
1.-
INTRODUCCIN
A excepcin del carbono, las plantas terrestres toman los componentes esenciales de sus
tejidos del suelo. Los elementos minerales entran en la biosfera sobre todo a travs del
sistema radicular y, en este sentido, las plantas actan como verdaderos mineros de la
corteza terrestre. La absorcin mineral de las plantas es un proceso muy efectivo. sto
se debe a la capacidad de stas para absorber iones inorgnicos que se encuentran a
bajas concentraciones y al gran rea superficial de las races. Despus de su absorcin,
los elementos minerales son almacenados, metabolizados o transportados va xilema al
resto de la planta. Otros organismos, como bacterias y hongos tambin participan, junto
con las races, en la adquisicin de nutrientes.
Una caracterstica que comparten todas las clulas vivas es su capacidad para
mantener en su interior iones y molculas notablemente fuera de equilibrio. En gran
medida, esta propiedad se debe a las caractersticas estructurales y funcionales de la
membrana plasmtica1. El plasmalema es algo ms que una doble capa lipdica
compuesta por distintos fosfolpidos y esteroles: contiene distintos tipos de protenas,
algunas de ellas con una marcada actividad enzimtica, a travs de las cuales existe un
continuo trfico de iones que permite a las clulas incorporar y acumular nutrientes,
En las clulas vegetales la membrana plasmtica recibe el nombre de plasmalema

excluir iones o sustancias txicas, o intervenir en distintas respuestas a estmulos

hormonales o medioambientales.
No todos los iones se transportan a travs del plasmalema de la misma forma o a
travs del mismo tipo de protena. Algunos son transportados y acumulados en
condiciones cercanas al equilibrio, otros se transportan y se acumulan muy por encima o
muy por debajo de su potencial electroqumico.
En este mdulo, hablaremos de las propiedades de las races que les permiten
absorber los nutrientes minerales de manera eficaz. A continuacin, describiremos las
propiedades de las membranas, los tipos de protenas transportadoras presentes en el
plasmalema y tonoplasto y, finalmente analizaremos varios aspectos de la absorcin
foliar de nutrientes.
2.-
LAS RACES COMO SUPERFICIES ABSORBENTES
El sistema radical tiene que cumplir normalmente una doble misin: la fijacin de la
planta al suelo y la absorcin de agua y sustancias minerales nutritivas.
Aunque la capacidad de captar nutrientes viene determinada genticamente, sta viene
limitada fundamentalmente por la disponibilidad de nutrientes en el suelo. No obstante,
el potencial de las plantas para obtener agua y nutrientes depende tambin de su
capacidad para desarrollar el sistema radicular, de forma que la raz en desarrollo
busque agua y nutrientes all donde estn.
El contenido de races en el suelo alcanza valores sorprendentes; as p. ej., en 1
m2 de suelo de un prado de Lolium perenne, a una profundidad de 70 cm, la masa
radicular es de 35 kg, la longitud total de la raz de 55.5 km y la superficie radicular de
50 m2. Hay que tener en cuenta adems, que la raz crece continuamente y su
proliferacin depende de la disponibilidad de agua y minerales (sobre todo N y P; ver
Fig. 2.1.A) en el microentorno que rodea a la raz, la rizosfera. Si existe abundante agua
y nutrientes minerales, la planta desarrolla un sistema radicular pequeo (la raz
representa en estas condiciones el 20-50% de la biomasa total de la planta). Si escasea el
agua y falta N, el sistema radical que se desarrolla puede representar el 90 % de la
biomasa vegetal (Bloom et al., 1993). Para estudiar las races en crecimiento bajo el
suelo se emplean tcnicas especiales (ver Apndice A: Rizotrones).
La forma cilndrica y filamentosa de las races tiene una importancia
determinantes para la absorcin de agua y solutos del suelo. Un cilindro posee una
mayor resistencia por unidad de rea transversal que otras formas. Esta configuracin
junto con la cofa (tambin denominada caliptra) ayuda a las races en crecimiento a
desplazar a un lado las partculas del suelo sin que la raz se rompa. La forma
filamentosa de las races les posibilita explorar un volumen de suelo mucho mayor por
unidad de volumen radical que si fuesen esfricas o discoidales.
Para que la absorcin de agua y nutrientes sea mxima las races incrementan su
superficie de absorcin por mediacin de los pelos absorbentes tambin denominados
radicales. Un pelo radical es una clula epidrmica modificada que posee una
prolongacin filamentosa que puede llegar a alcanzar unos 1.5 mm de longitud (ver
Fig. 2.3). Los pelos radiculares son poco longevos (3-9 das) y la zona donde se ubican
los pelos radicales mide slo 1-2 cm de longitud. A pesar de ello se ha calculado que
una planta desarrollada de centeno presenta ms de diez millones de pelos radicales,
cuya longitud total alanza los 10.000 km y cuya superficie total corresponde a un
cuadrado de 20 m de lado. Esto equivale a unas 50 veces la superficie de todo el sistema
caulinar, incluidas las hojas.

2.1.- LOS SISTEMAS RADICULARES DIFIEREN EN FORMA PERO ESTN

BASADOS EN ESTRUCTURAS COMUNES
La forma de los sistemas radicales, al igual que el sistema caulinar, difiere mucho entre
las distintas especies vegetales y depende del hbitat de stas. En las monocotiledneas,
el desarrollo de la raz comienza con la emergencia de tres a seis races primarias. A
continuacin, aparecen las races adventicias, denominadas nodales. Ms tarde, las
races primarias y nodales se alargan y se ramifican extensivamente formando un
complejo sistema radicular fasciculado (Fig. 2.1.B y C). En el sistema radicular
fasciculado, todas las races tienen el mismo dimetro (excepto cuando las condiciones
ambientales o las interacciones con patgenos modifican la estructura radicular), por lo
que es difcil distinguir la raz primaria. Por el contrario, en dicotiledneas, el sistema
radicular consta de una raz principal que puede crecer en grosor como resultado de la
actividad del cambium secundario. De esta raz principal se desarrollan races laterales
que dan lugar a un sistema radicular ramificado (raz axonomorfa, ver Fig. 2.2).
B. Suelo seco
Control
Fosfato
amonio
C. Suelo irrigado
Nitrato
potasio
Figura 2.1. A) Proliferacin de races de cebada en zonas limitadas de arena fertilizada

con fosfato, nitrato, amonio y potasio. Las porciones delimitadas por barras de los
sistemas radiculares se cultivaron durante 21 das en compartimentos de arena
separados con cera, a travs de la cual las races pueden crecer pero la solucin de
nutrientes no fluye. Las distintas zonas se fertilizaron con una solucin de nutrientes
que contena niveles altos (H) o bajos (L) del nutriente indicado. El control recibi
niveles altos de los elementos en las tres zonas. Malcolm Drew llev a cabo estos
experimentos en 1975. Este investigador mostr que las races crecen preferentemente
en regiones que contienen mayores niveles de nutrientes. De esta forma, se optimizan
los recursos ya que, para la planta desarrollar tanto en zonas de suelo ricas como pobres
en nutrientes un sistema radicular uniforme supondra un gasto de recursos
innecesario. B y C) Sistema radicular fasciculado en trigo (monocotilednea). (A)
Sistema radicular de una planta de trigo adulta (3 meses de edad) crecida en suelo seco.
(B) Sistema radicular de una planta de trigo crecida en suelo irrigado. En el sistema
radicular fasciculado, el eje de la raz primaria no es distinguible. Obsrvese que la
morfologa de la raz se ve afectada por la cantidad de agua presente en el suelo.
Tomado de Taiz y Zeiger (1998).

El desarrollo del sistema radicular tanto de monocotiledneas como de dicotiledneas

depende de la actividad del meristemo apical radicular. En la Figura 2.3 se muestra un
esquema general de la regin apical de una raz. En la zona meristemtica, las clulas se
dividen tanto en direccin basal, para formar clulas que se diferenciarn en tejidos
funcionales de la raz como en direccin apical, para formar la caliptra. La caliptra
protege a las delicadas clulas meristemticas durante el movimiento de la raz por el
suelo. Adems, segrega una substancia gelatinosa denominada mucigel, que rodea
normalmente al pice radicular. La funcin precisa del mucigel se desconoce aunque, se
ha sugerido que podra estar implicada en 1) lubricar la regin que va a penetrar la raz,
2) proteger el pice de la desecacin, 3) promover la transferencia de nutrientes hacia la
raz, y 4) favorecer la interaccin entre la raz y los microorganismos del suelo. La
caliptra es primordial en la percepcin de la gravedad, que es la seal que dirige el
crecimiento de la raz, proceso denominado respuesta gravitrpica.
Figura 2.2. Sistema radicular de dos dicotiledneas: remolacha azucarera (A) y alfalfa
(B). El sistema radicular de la remolacha azucarera representado corresponde al de una
planta de 5 meses, y el sistema radicular de la alfalfa es el tpico de una planta de 2
aos. En los dos sistemas, se observa una raz principal y, en el caso de la remolacha, se
observa que la porcin superior de la raz principal est engrosada ya que acta como
tejido de almacenamiento. Ambas plantas han recibido un suministro adecuado de agua.
4

Tomado de Taiz y Zeiger, (1998).

La divisin celular en el verdadero pice de la raz es relativamente lenta y,
por ello, esta regin se conoce como centro quiescente. Despus de unas pocas
divisiones celulares lentas, las clulas de la raz que se encuentran a unos 0.1 mm del
pice empiezan a dividirse a mayor velocidad. La divisin celular disminuye otra vez a
unos 0.4 mm del pice, y las clulas se expanden por igual en todas las direcciones.
La zona de elongacin empieza a unos 0.7-1.5 mm del pice. En esta zona, las
clulas se elongan rpidamente y sufren una serie final de divisiones para producir un
anillo central de clulas que se denomina endodermis. Las paredes celulares de esta
capa de clulas endodrmicas se van a engrosar y, la deposicin de suberina en las
paredes celulares radiales forma la denominada banda de Caspari, una estructura
hidrofbica que impide el movimiento apoplstico del agua o de solutos hacia el interior
de la raz. La endodermis divide a la raz en dos regiones: el crtex hacia el exterior y la
estela hacia el interior. La estela contiene los elementos vaculares de la raz: el floema,
el cual transporta metabolitos del tallo a la raz, y el xilema, que transporta agua y
solutos hacia el tallo.
periciclo
Primordio
radicular
lateral
Clulas corticales
epidermis
emergencia de una raz lateral
Pelo
radicular
Zona de
maduracin
Vaso maduro
Clulas endodrmicas diferenciadas
Diferenciacin de los primeros vasos del xilema
Mxima velocidad de elongacin celular
Zona de elongacin
Diferenciacin de los primeros vasos del floema

Cese de la divisin celular en la mayora de los tejidos
Meristemo apical
Divisin celular mxima
Centro quiescente
Cofia o caliptra
Figura 2.3. Seccin longitudinal de la regin apical de una raz. Las clulas
meristemticas se localizan cerca del extremo de la raz. Estas clulas generan la cofa o
caliptra y los tejidos superiores de la raz. En la zona de elongacin, las clulas
diferenciadas producen xilema, floema y crtex. Los pelos radiculares, formados en las
clulas epidrmicas, aparecen en la zona de maduracin. Tomado de Taiz y Zeiger,
1998.
5

El floema se desarrolla antes que el xilema [ver Fig. 2.3, diferenciacin de los vasos del
floema (rojo) y xilema (azul)], lo que corrobora que la funcin de ste es crtica cerca
del pice radicular. De hecho, son necesarias grandes cantidades de carbohidratos para
poder mantener las divisiones y las elongaciones celulares en las zonas de crecimiento
apical. Los carbohidratos permiten un rpido crecimiento de las clulas proporcionando
energa y los esqueletos carbonados necesarios para la sntesis de compuestos
orgnicos. Los carbohidratos de 6 tomos de carbono (hexosas) funcionan adems como
compuestos osmticamente activos en los tejidos de la raz. En el pice de la raz, donde
el floema no se ha desarrollado, el movimiento de los carbohidratos depende de la
difusin por el simplasto y, este proceso es relativamente lento (Bret-Harte y Silk,
1994). Se piensa que la baja velocidad de divisin celular en el centro quiescente puede
deberse a un aporte insuficiente de carbohidratos en esta regin. Los pelos radiculares,
con su gran superficie para la absorcin de agua y solutos, aparecen en la zona de
maduracin, y es aqu donde el xilema desarrolla la capacidad de transportar grandes
cantidades de agua y solutos hacia el tallo.
2.2.- DIFERENTES ZONAS DE LA RAZ ABSORBEN DIFERENTES IONES

MINERALES
Adems del tamao y ramificacin de las races, conviene determinar la zona de

entrada de los iones al sistema radicular. Algunos investigadores sostienen que los
nutrientes se absorben slo en las regiones apicales de las races principales y laterales
(Bar-Yosef et al., 1972), mientras que otros afirman que los nutrientes se absorben a lo
largo de toda la superficie radicular (Nye y Tinker, 1977; Greenwood, 1982). En los
ltimos aos se han llevado a cabo diversos estudios experimentales que apoyan ambas
hiptesis dependiendo del ion y de la especie analizados. As, por ejemplo
La absorcin radicular del calcio en cebada parece estar restringida solamente
a la regin apical.
El hierro puede incorporarse bien por la regin apical como en cebada
(Clarkson y Sanderson 1978), o bien a lo largo de toda la superficie, como

ocurre en maz (Karhirad et al., 1973).
El potasio, nitrato, amonio y fosfato pueden ser absorbidos libremente en
cualquier zona de la superficie de la raz (Clarkson y Sanderson, 1978), pero
en maz es en la zona de elongacin donde se observan las mayores
velocidades para la acumulacin del potasio (Sharp et al., 1990) y para la
absorcin del nitrato (Colmer y Bloom, 1998).
En maz y en arroz, el pice radicular absorbe ms rpidamente el amonio que
en la zona de elongacin (Colmer y Bloom, 1998).
En varias especies, los pelos radiculares son los ms activos para la absorcin
del fosfato (Fohse et al., 1991).
Las elevadas velocidades en la absorcin de nutrientes en las zonas apicales de la raz se
deben a la fuerte demanda de nutrientes en esos tejidos y a la relativamente elevada
disponibilidad de nutrientes en el suelo que rodea a estas zonas. Por ejemplo, la
elongacin celular depende de la acumulacin de solutos, como el potasio y el nitrato,
6

para incrementar la presin osmtica dentro de la clula. El amonio es la fuente de

nitrgeno preferida para mantener la divisin celular en el meristemo debido a que los
tejidos meristemticos sus reservas de carbohidratos son a menudo limitadas y la
asimilacin de amonio consume menos energa que la de nitrato. El pice de la raz y
los pelos radiculares crecen en suelo no explorado y, en esta zona, la concentracin de
nutrientes es relativamente elevada.
En el suelo, los nutrientes pueden moverse hacia la superficie de la raz bien por
flujo masivo o por difusin. En el flujo masivo, los nutrientes son transportados por el
movimiento del agua del suelo hacia la raz. La cantidad de nutrientes que llega a la raz
por el flujo masivo depende de la velocidad del flujo del agua del suelo a la planta, la
cual depende de la velocidad de transpiracin, y de la cantidad de nutrientes presentes
en la solucin del suelo. Cuando la velocidad del flujo del agua y la concentracin de
nutrientes en el suelo son elevadas, el flujo masivo juega un papel importante en el
proceso de absorcin de nutrientes. En la difusin, los nutrientes minerales se mueven
de una regin de alta concentracin de nutrientes a otra regin en la que la
concentracin es menor. La concentracin de nutrientes en la superficie de la raz es
muy baja, lo que genera un gradiente de concentracin entre la solucin del suelo y la
raz. La difusin de nutrientes, a favor del gradiente de concentracin, y el flujo masivo
pueden incrementar la disponibilidad de nutrientes en la superficie de la raz.
Cuando la absorcin de nutrientes por las races es elevada y la concentracin de
los nutrientes en el suelo baja, el flujo masivo proporciona slo una pequea fraccin
del total de los nutrientes minerales necesarios para el correcto crecimiento y desarrollo
de las plantas (Mengel y Kirkby, 1987). Bajo estas condiciones, va a ser la velocidad de
difusin la que limita el movimiento de los nutrientes hacia la superficie de la raz.
Cuando la difusin es demasiado lenta (para mantener cerca de la raz una zona de alta
concentracin de nutrientes) se forma una zona de reduccin de nutrientes (del ingls,
nutrient depletion zone). Como se observa en la Figura 2.4, la reduccin de los
nutrientes disminuye conforme nos acercamos a la superficie de la raz. Conviene tener
en cuenta que la toma de un nutriente va a depender tanto de la afinidad de los
transportadores que facilitan su incorporacin a la planta, como de la concentracin de
dicho nutriente en la superficie prxima a la raz.

Figura 2.4. Formacin de una zona de reduccin de nutrientes en la regin adyacente a

la raz. Esta zona de reduccin se forma cuando la velocidad de incorporacin de un
nutriente supera la velocidad con la que ste es reemplazado en la solucin del suelo.
Esta reduccin provoca una disminucin localizada de la concentracin del nutriente en
el rea adyacente a la superficie radicular. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
La formacin de esta zona de reduccin de nutrientes revela un aspecto muy importante

sobre la nutricin mineral. Debido a que las races agotan los minerales de la rizosfera,
su efectividad en la obtencin de los minerales del suelo viene determinada no slo por
la velocidad de extraccin de los minerales de la solucin del suelo sino de su continuo
crecimiento. Sin crecimiento, las races rpidamente agotaran los minerales del suelo
adyacente a su superficie radicular. Una adquisicin ptima de nutrientes depende tanto
de la capacidad para incorporar los nutrientes minerales del suelo como de la capacidad
del sistema radicular para crecer en suelo no explorado.
3.-
LAS MEMBRANAS BIOLGICAS
Las clulas vegetales estn separadas del medio que las rodea por una membrana
plasmtica, que en las clulas vegetales recibe el nombre de plasmalema. El
plasmalema separa un medio interno, de composicin relativamente constante de un
medio externo con una composicin extremadamente variable. Adems, la membrana
debe facilitar y promover el continuo trfico de iones y molculas a su travs, como el
que tiene lugar cuando la clula ingiere nutrientes esenciales, o cuando excreta los
productos residuales. Como es el nico contacto con el medio externo, la membrana
debe tambin actuar como transmisor de las condiciones fsicas del entorno, de la
presencia de un patgeno, y tambin de las seales procedentes de clulas vecinas. Para
llevar a cabo estas tareas, la membrana plasmtica debe disponer de un control continuo
de la velocidad de movimiento de cada uno los distintos solutos (que son muchos) que
la atraviesan. Esto mismo es vlido para las membranas internas que delimitan los
diferentes compartimentos celulares presentes en el interior de la clula eucariota. A
continuacin, vamos a describir brevemente la naturaleza de las membranas biolgicas.
3.1.- NATURALEZA DE LA MEMBRANA
Como hemos comentado en el apartado anterior, la clula est rodeada por una
membrana que delimita su extensin y mantiene las diferencias esenciales entre el
contenido de la clula y su entorno y permite la existencia de determinados
compartimentos en su interior. Todas las membranas biolgicas tienen una estructura
bsica comn: una doble capa (bicapa) bien de fosfolpidos o, en el caso de los
cloroplastos de glicosilglicridos, en la cual se encuentran embebidas protenas. La
composicin de los lpidos y de las protenas vara en las diferentes membranas, lo cual
confiere a cada tipo de membranas unas caractersticas funcionales nicas.
Los fosfolpidos son una clase de lpidos formados por dos cadenas de cidos grasos
esterificados a dos de los grupos hidroxilo del glicerol. El tercer grupo hidroxilo est
ligado covalentemente a un grupo fosfato. Unido a este grupo fosfato, se encuentra una

componente variable, denominada cabeza polar, que puede ser un residuo de serina,
colina, etanolamina, o inositol.
Los fosfolpidos son molculas anfipticas es decir, tienen un extremo
hidroflico, la cabeza polar, y un extremo hidrofbico, las dos colas hidrocarbonadas.
Las cadenas de cidos grasos de los fosfolpidos y de los glicosilglicridos pueden tener
diferente longitud (normalmente contienen de 14 a 24 carbonos). Normalmente, una de
las colas presenta uno o ms dobles enlaces cis (es decir, est insaturada). La presencia
de un doble enlace cis genera una suave curvatura en la cadena que impide que las
molculas de lpido puedan empaquetarse una contra otra y, por lo tanto, afectan a la
fluidez de la misma (aumenta la fluidez). La fluidez de la membrana juega un papel
crucial en la funcin de sta. La fluidez tambin depende de la temperatura. Las plantas
como organismos poiquilotrmicos (organismos que no pueden regular la temperatura
de su cuerpo) mantienen la fluidez de sus membranas en condiciones de bajas
temperaturas aumentando el porcentaje de cidos grasos insaturados, como el cido
oleico (un doble enlace, 18:1), cido linoleico (dos dobles enlaces, 18:2) y -linolnico
(tres dobles enlaces, 18:3). Este proceso est catalizado por enzimas denominadas
desaturasas. Los esteroides, como el sitosterol, estigmasterol, colesterol, etc., y los
glicolpidos aunque, menos abundantes, tambin son componentes de las membranas
vegetales.

Figura 2.5. (A) La membrana plasmtica, del retculo y otras endomembranas de las
clulas vegetales estn constituidas por una bicapa de fosfolpidos en la que se
encuentran embebidas protenas. (B) Micrografa electrnica en la que se observa la
membrana plasmtica de clulas meristemticas de la raz de Lepidium sativum. Al
microscopio electrnico el plasmalema aparece como dos densas lneas separadas por
un espacio claro de un grosor total de 8 nm. (C) Estructura qumica de un fosfolpido
tpico, la fosfatidilcolina. Tomado de Taiz y Zeiger (1998).
Las protenas asociadas a la bicapa lipdica son de dos tipos, integrales y

perifricas, tambin denominadas intrnsecas y extrnsecas, respectivamente. Las
protenas integrales se encuentran embebidas en la bicapa lipdica. La mayora de estas
protenas atraviesan la bicapa lipdica de forma que parte de la protena interacta con el
exterior de la clula, otra parte con la regin hidrofbica de la membrana y una tercera
parte con el interior de la clula, el citosol. Las protenas que forman canales inicos
son siempre protenas integrales de membrana. Las protenas perifricas se unen a la
superficie de la membrana mediante enlaces no covalentes, tales como puentes de
hidrgeno y enlaces inicos. Las protenas perifricas desempean diversas funciones
en la membrana. Por ejemplo, algunas estn involucradas en las interacciones entre el
plasmalema y los componentes del citoesqueleto, como los microtbulos y los
microfilamentos de actina.
Las membranas presentan asimetra, esto es, existen diferencias entres sus dos
mitades, externa e interna. Esta asimetra no slo se refiere a las protenas, sino tambin
a los lpidos, lo que refleja las diferentes funciones de las dos caras de la membrana
celular. Adems, la mayora de las protenas que quedan al descubierto sobre la
superficie celular y algunas de las molculas lipdicas de la monocapa externa tienen
cadenas de oligosacridos unidos covalentemente. Esta cubierta de azcares,
denominada glicocliz, ayuda a proteger la superficie celular del dao mecnico y
qumico, y algunas de estas cadenas son reconocidas por protenas (lectinas) que
intervienen en procesos especficos de adhesin clula-clula.
4.-
TRANSPORTE PASIVO Y ACTIVO
Las substancias para desplazarse necesitan energa, decimos que una substancia difunde,
es decir, se mueve de forma pasiva si lo hace a favor de la fuerza fsica que acta sobre
ella y, de forma activa cuando lo hace en contra de dicha fuerza, para lo cual se requiere
energa metablica.
De acuerdo con la ley de Fick la velocidad de transporte o la densidad de flujo
(Js), esto es, la cantidad de soluto, s, que pasa a travs de una unidad de rea por unidad
de tiempo es igual al gradiente de concentracin multiplicado por una constante de
proporcionalidad llamada coeficiente de difusin de la substancia s, Ds:
Js= - Ds (cs/x)
donde el flujo difusivo Js viene expresado en mol m-2 s-1, la concentracin, cs, en mol m, la distancia, x, en m y el coeficiente de difusin en m2s-1. El coeficiente de difusin es
caracterstico de cada substancia (ver Tabla 2.1; las molculas grandes tienen un
10

coeficiente de difusin bajo), depende del medio (por ejemplo, la difusin en el aire es
ms rpida que en medio lquido) y no es una constante ya que vara con la
concentracin y con la temperatura. El gradiente de concentracin (cs/x) es
aproximadamente cs/x es decir, la diferencia de concentracin de la substancia s (cs)
entre dos puntos separados por la distancia x. El signo negativo indica que la difusin
se realiza desde la zona de alta concentracin hacia la zona de menor concentracin.
Si expresamos la diferencia de concentraciones como cs (que es la fuerza impulsora de
la difusin) y, la distancia (x) la combinamos con el coeficiente de difusin en un
trmino denominado resistencia (r), entonces la ecuacin anterior puede expresarse
como:
Js= cs/r
As, de esta forma se puede visualizar fcilmente que el flujo difusivo es proporcional a
la magnitud de la fuerza impulsora cs e inversamente proporcional a la resistencia, r.
Las unidades de la resistencia son unidades de tiempo por unidad de distancia (s m-1).
Esta ecuacin es anloga a la ley de Ohm, la cual establece que el flujo de una
corriente elctrica en un conductor es proporcional a la fuerza impulsora, el voltaje, e
inversamente proporcional a la resistencia opuesta por el conductor. Ambos son
ejemplos de una ley general que puede enunciarse como: El movimiento (flujo) de una
substancia es igual a la fuerza impulsora dividida por la resistencia.
En lugar de la resistencia podemos encontrar en la bibliografa la permeabilidad
(Ps). La permeabilidad es el recproco de la resistencia (Ps= 1/r) y sus unidades son
unidades de distancia por unidad de tiempo, m s-1:
Js= Ps cs
Tabla 2.1. Coeficientes de difusin en soluciones acuosas y en aire
Pequeos solutos en aguaa
Substancia
Dj (m2 s-1)
Alanina
Citrato
Glucosa
Glicina
Sacarosa
Ca2+ (con Cl-)
K+ (con Cl-)
Na+ (con Cl-)
CO2
0.92 x 10-9
0.66 x 10-9
0.67 x 10-9
1.10 x 10-9
0.52 x 10-9
1.2 x 10-9
1.9 x 10-9
1.5 x 10-9
1.7 x 10-9
Protenas globulares en aguaa

Masa
(kDa)
15
1000
molecular Dj (m2 s-1)

1 x 1010
1 x 1011
Gases en aireb
Gas
CO2
H2O
O2
Dj (m2 s-1)
1.51 x 105
2.42 x 105
1.95 x 105
Datos tomados de Nobel (1999)

a
b
Valores calculados para soluciones diluidas a 25C.

Valores calculados a 20C y una presin de 1 atmsfera
11

A partir de la ley de Fick se obtiene una expresin que nos permite calcular el
tiempo necesario para que una proporcin de molculas difundan a una cierta distancia
a partir de su posicin de origen. Por ejemplo, el tiempo para que difunda la mitad de
una poblacin inicial de molculas (tc = ) a una distancia concreta viene dado por la
siguiente ecuacin:
tc= = (distancia)2 K
Ds
donde K es una constante que depende de la forma del sistema (para facilitar los
clculos posteriores utilizaremos un valor de K= 1) y Ds es el coeficiente de difusin.
Esta ecuacin muestra que el tiempo requerido para que una substancia difunda una
cierta distancia aumenta en relacin con el cuadrado de la distancia.
Para determinar el significado de esta expresin vamos a considerar dos ejemplos
numricos. Primero, cunto tiempo tarda una pequea substancia en difundir la
distancia equivalente al eje mayor de una clula eucariota tpica? El coeficiente de
difusin de un soluto pequeo, como la glucosa, es aproximadamente 10-9 m2 s-1, y el
tamao de una clula unos 50 m. As, tendramos:
tc= = (50 x 10-6 m)2 = 2.5 s
10-9 m2 s-1
Este clculo muestra que una pequea molcula difunde rpidamente distancias de
dimensiones celulares. Pero, qu ocurre con la difusin a mayores distancias? Podemos
calcular el tiempo necesario para que esa misma molcula se mueva una distancia de 1
m (que es por ejemplo, la longitud de una hoja de maz), y obtendramos:
tc= = (1 m)2 = 109s 32 aos
10-9 m2 s-1
un valor que excede en varios rdenes de magnitud la vida media de una planta de maz,
que es solo de unos pocos meses.
Estos ejemplos numricos ponen de manifiesto que el proceso de difusin puede
ser efectivo dentro de las dimensiones celulares pero, es demasiado lento para el
transporte de sustancias a largas distancias.
Conviene tener en cuenta que el movimiento de molculas por difusin es
siempre espontneo, a favor de un gradiente de concentracin o de un gradiente
electroqumico hasta que se alcance el equilibrio. El movimiento de molculas a favor
de gradiente se denomina transporte pasivo. En el equilibrio, no se produce
movimiento neto de solutos, a menos que se le aplique una fuerza. El movimiento de
substancias en contra de su gradiente electroqumico se denomina transporte activo. El
transporte activo no es espontneo y requiere energa metablica y una forma de
llevarlo a cabo es acoplndolo a la hidrlisis del ATP.
Para calcular la fuerza que determina el movimiento pasivo de una substancia o
la energa necesaria para mover una substancia en contra de gradiente es necesario
medir el gradiente de energa que, a menudo, es funcin de la diferencia de
concentracin. En el transporte en sistemas biolgicos puede intervenir adems otras
fuerzas como la presin hidrosttica, los campos elctricos y la gravedad, aunque esta
ltima rara vez contribuye al transporte.
12

La suma de estos componentes se denomina potencial qumico y cuantifica la

capacidad de trabajo que un soluto posee. El potencial qumico se define como la suma
de los potenciales de concentracin, elctrico e hidrosttico , y el potencial qumico en
condiciones estndar:
j
Potencial
qumico
para un soluto
dado, j
j*
RT ln Cj +
Potencial
Concentracin
qumico de
(actividad)
j bajo condiciones
estndar
zj FE +
Vj P
Componente
potencial
elctrico
Componente
presin
hidrosttica
Donde:
j es el potencial qumico del soluto j en julios por mol (J mol 1),
j* es el potencial qumico en condiciones estndar (C=1 y E= 0; es un factor de
correccin que eliminaremos en las futuras ecuaciones y puede por tanto ignorarse),
R es la constante universal de los gases (8.314 J mol 1 K 1),
T es la temperatura absoluta en grados kelvins,
Cj es la concentracin (sera ms apropiado utilizar en la ecuacin la actividad del
soluto; en soluciones muy diluidas la actividad es aproximadamente igual a la
concentracin (mol vol-1) de j,
zj FE , la componente elctrica que se aplica slo a iones en disolucin;
z es la carga electrosttica del ion (+1 para cationes monovalentes, -1 para
aniones monovalentes, +2 para cationes divalentes, etc.),
F es la constante de Faraday (96.5 J mol 1 mV 1) y
E es el potencial elctrico del sistema, y el ltimo trmino,
VjP, expresa la contribucin del volumen molar parcial de j (Vj) y la presin (P) al
potencial qumico de j. (El volumen parcial molal de j es el cambio en volumen por mol
de substancia j aadida al sistema, para una adicin infinitesimal). Este trmino
contribuye en menor medida al potencial qumico que los trminos relacionados con la
concentracin y con la componente elctrica, excepto en el movimiento del agua por
smosis. El potencial qumico del agua (es decir, el potencial hdrico) depende de la
concentracin de solutos disueltos y de la presin hidrosttica del sistema.
13

Membrana
Semipermeable
Potencial
qumico en el
compartimento
A
Potencial
qumico
en el
compartimento
B
j
Descripcin
Transporte pasivo (difusin) ocurre

espontneamente a favor del gradiente de
potencial qumico
jA > jB
En el equilibrio no hay movimiento neto

jA = jB
Transporte activo tiene lugar en contra del
gradiente qumico
jA < jB
G para el movimiento de j de A a B es igual al
jB - jA. Para que el conjunto tenga un G
negativo, la reaccin debe estar acoplada con
un proceso que disminuya su energa libre y
que sea ms negativo que (jB - jA )
Figura 2.6. Relacin entre el potencial qumico, , y el transporte de molculas a travs

de una barrera semipermeable. El movimiento neto del soluto j entre los
compartimentos A y B depende de la magnitud relativa del potencial qumico de j en
cada compartimento, representado aqu por la altura de las barras. El movimiento a
favor del gradiente de potencial qumico ocurre espontneamente; el movimiento en
contra de dicho gradiente requiere energa y se denomina transporte activo.
El escribir la ecuacin en trminos de potencial qumico, j, permite considerar
la contribucin de una substancia individual (en nuestro caso j) a la energa libre del
sistema. El trmino puede describirse como la energa libre parcial molal de un soluto
j: representa el aumento en energa libre por mol de j aadido, para una adicin
infinitesimal en condiciones constantes, y j es la contribucin de un soluto j al total
del cambio de la energa libre (G) al sistema. La importancia del concepto de potencial
qumico es que incluye la suma todas las fuerzas que pueden actuar sobre una molcula
para dirigir el transporte neto. En general, la difusin (transporte pasivo) siempre
provoca el desplazamiento de substancias desde zonas de mayor potencial qumico a
14

zonas de menor potencial. El movimiento en contra del gradiente qumico es indicativo

de un transporte activo (Fig. 2.6).
Si tomamos como ejemplo la difusin a travs de la membrana de un soluto no
cargado como la sacarosa, el potencial qumico de la sacarosa en un sistema presenta
slo una componente: la debida a la concentracin. As, el potencial qumico de la
sacarosa por ejemplo dentro de la clula (compartimento i) se puede expresar:
si
Potencial qumico
de la sacarosa
dentro de la clula
s*
Potencial qumico
de la sacarosa
en condiciones estndar
RT ln C si
Concentracin
(actividad)
El potencial qumico de la sacarosa fuera de la clula (compartimento e) sera:

se = s* + RT ln C se
La fuerza que determina el movimiento de la sacarosa entre los dos compartimentos
viene dada por el gradiente de potencial qumico,
s
= si - se
= (s* + RT ln C si ) - (s* + RT ln C se)
= RT (ln Csi- ln Cse)
= RT ln Csi/Cse
Si la diferencia en el potencial qumico es negativa, indica que el proceso puede ocurrir

espontneamente (la membrana presenta una permeabilidad finita al soluto). La fuerza
impulsora para la difusin del soluto est relacionada con la magnitud del gradiente de
concentracin.
Es frecuente encontrar la ecuacin escrita con logaritmos decimales para facilitar
los clculos. As, para determinar el gradiente de potencial qumico necesario para
transportar 1 mol de sacarosa de un compartimento en que se encuentra a una
concentracin de 10-1 M a otro de concentracin diez veces menor, a 25C, sera:
s
s
= RT ln Csi/Cse
= RT x 2.303 log 10 Csi/Cse
= 8.314 (J mol 1 K 1) x 298 (K) x 2.303 log 10 (0.01/0.1)= - 5.706 kJ mol 1
Pero, si la molcula que queremos transportar posee carga elctrica, hay que
tener en cuenta, adems, la componente del potencial elctrico. Tomemos a modo de
ejemplo una sal, el cloruro potsico y supongamos que tanto K+ y Cl- son permeables.
Como estos iones difunden independientemente, cada uno tiene su propio potencial
qumico. As para la difusin del potasio tendremos que:
K+ = K+i - K+e
15

= RT ln (C K+i /C K+e) + z K+ F(Ei- Ee)

y como la carga electrosttica del K+ es +1, z=+1 tendremos,
K+ = RT ln (C K+i /C K+e) + F(Ei- Ee)
La magnitud y el signo de esa expresin determinan la fuerza motora de la difusin del
K+ a travs de la membrana y su sentio. Una expresin similar se puede obtener para el
anin Cl- pero, en este caso recordemos que zCl- = -1.
Esta ecuacin pone de manifiesto que los iones, como el potasio, difunde tanto en
respuesta a su gradiente de concentracin (C K+i /C K+e) como a la diferencia de
potencial elctrico entre los dos compartimentos (Ei- Ee). Esto implica que los iones
pueden ser conducidos pasivamente en contra se su gradiente de concentracin si se
aplica el voltaje adecuado (campo elctrico) entre los dos compartimentos. Debido a la
importancia del campo elctrico en el transporte en el transporte biolgico, con
frecuencia se denomina potencial electroqumico y es la diferencia de potencial
electroqumico entre dos compartimentos.
5.-
TRANSPORTE DE IONES A TRAVS DE LA MEMBRANA
En el movimiento de K+ Cl- entre dos compartimentos hay que tener en cuanta que
estn separados por una membrana biolgica, que aade un factor al movimiento de
iones. La membrana puede permitir o restringir el movimiento de una substancia a su
travs. Esta propiedad se conoce como permeabilidad de la membrana. La
permeabilidad, como analizaremos, depende de la composicin de la membrana y de la
naturaleza qumica del soluto. En un sentido amplio, la permeabilidad se puede expresar
en trminos de coeficiente de difusin del soluto en la membrana. Sin embargo, la
permeabilidad depende de otros factores adicionales, como la capacidad de un soluto
para penetrar en la membrana, que son difciles de medir.
A pesar de la complejidad terica, la permeabilidad puede ser medida
determinado la velocidad a la que un soluto atraviesa una membrana bajo unas
condiciones especficas (las unidades de la permeabilidad son unidades de distancia por
unidad de tiempo por ejemplo, m s-1). Generalmente la membrana retrasar la difusin y
reducir la velocidad a la que se alcanza el equilibrio. La permeabilidad o resistencia de
la membrana por s misma, sin embargo, no puede alterar las condiciones finales de
equilibrio. El equilibrio se produce cuando j =0. Como hemos dicho, el valor de la
permeabilidad (Ps) puede determinarse empricamente siempre que el flujo de una
substancia pueda medirse y las concentraciones interna y externa sean conocidas.
El principal problema en la estimacin de la permeabilidad es la obtencin de los
valores de concentracin en las proximidades de la membrana, ya que, slo es posible
medirlos en la solucin de cualquiera de los dos lados de la misma. Cerca de la
membrana, habr una capa lmite en la cual la concentracin vara con la distancia a la
membrana (Fig. 2.7), de modo que las concentraciones en las proximidades de la
membrana son inciertas. Esta capa lmite no puede eliminarse mediante una agitacin de
la solucin sobre todo cuando se trabaja con clulas vegetales, ya que la capa estar
localizada dentro de la pared celular, donde la agitacin no es posible.
16

A continuacin describiremos los factores que influyen en la distribucin de

iones a travs de la membrana. Estos parmetros pueden utilizarse para predecir la
relacin entre el gradiente elctrico y el gradiente de concentracin de un ion.
Figura 2.7. Capas lmite. La presencia de capas no agitadas cerca de las membranas
impide determinar la concentracin de los solutos en la superficie de la membrana, la
concentracin real de solutos es inferior a la medida, por tanto, los verdaderos
gradientes a travs de la membrana no pueden calcularse. En las clulas vegetales, las
capas no agitadas son particularmente importantes, ya que su espesor aumenta debido
a la presencia de la pared celular. Tomado de Flowers y Yeo, 1997.
5.1.- EL POTENCIAL DE DIFUSIN SE DESARROLLA CUANDO IONES DE
DISTINTA CARGA SE MUEVEN A TRAVS DE LA MEMBRANA A
DIFERENTE VELOCIDAD
Cuando las sales difunden a travs de una membrana, pueden generar un potencial
elctrico de membrana (voltaje). Consideremos que las dos disoluciones de KCl estn
separadas por una membrana como ocurre en la Figura 2.8. Los iones K+ y Clatravesarn la membrana de forma independiente (por separado), difundiendo a favor de
sus respectivos gradientes de potencial electroqumico. Y, a menos que la membrana sea
muy porosa, las permeabilidades de los dos iones sern diferentes.
Como consecuencia de estas permeabilidades diferentes, el K+ y el Cl- difundirn
inicialmente a travs de la membrana en proporciones diferentes (de hecho, las
membranas biolgicas son ms permeables al K+ que al Cl-). El resultado ser una ligera
separacin de cargas, que generarn un potencial electroqumico a travs de la
membrana (ver Fig. 2.8). As, pues el K+ difundir desde la clula (compartimento A
fig. 2.8) ms rpidamente que el Cl-, provocando la aparicin de un potencial elctrico
negativo con respecto al medio. El potencial de membrana que aparece como resultado
de la difusin se denomina potencial de difusin.
17

Condiciones iniciales
[KCl]A>[KCl]B
El potencial de difusin
persiste hasta que se alcance
equilibrio
Condiciones de equilibrio:
[KCl]A = [KCl]B
En el equilibrio, el potencial
de difusin es
igual a cero
Figura 2.8. Desarrollo del potencial de difusin y separacin de cargas entre dos
compartimentos separados por una membrana que presenta mayor permeabilidad para
los cationes. Si la concentracin de cloruro potsico es mayor en el compartimento A
([KCl]A > [KCl]B), los iones potasio y cloro difundirn a mayor velocidad hacia el
compartimento B y, se establecer un potencial de difusin. Como las membranas son
ms permeables al potasio que al cloro, los iones potasio difundirn ms rpidamente
que los iones de cloro y tendr lugar una separacin de cargas (+ y -). Tomado de Taiz y
Zeiger, 1998.
Un principio importante que debemos tener presente cuando estudiamos el

movimiento de iones a travs de la membrana es el principio de la neutralidad elctrica.
Las soluciones siempre contienen el mismo nmero de aniones que de cationes. La
existencia de un potencial de membrana implica que hay una distribucin desigual de
cargas a travs de la membrana; no obstante el nmero real de iones desequilibrados es
despreciable en trminos qumicos. Por ejemplo, un potencial de membrana de 100
18

mV (milivoltios), como el que se encuentra en membranas de muchas clulas vegetales,

es debido a la presencia de un nico anin extra en el exterior de la clula por cada
100.000 en el interior de la clula, es decir, una diferencia de concentracin de slo el
0,001%.
Como se observa en la Figura 2.8, todos estos aniones extra se encuentran

inmediatamente adyacentes a la superficie de la membrana; no hay ningn
desequilibrio de cargas en toda la masa celular. En nuestro ejemplo de difusin del KCl,
la neutralidad elctrica se mantiene porque, como el K+ se mueve ms rpidamente que
el Cl- a travs de la membrana, el potencial de difusin resultante retarda el movimiento
del K+ y acelera el del Cl-. Finalmente, ambos iones difunden en la misma proporcin,
pero el potencial de difusin se mantiene y puede medirse. Cuando el sistema se
aproxime al equilibrio, el gradiente de concentracin desaparece y el potencial de
difusin tambin.
5.2.- LA ECUACIN DE NERNST RELACIONA EL POTENCIAL DE MEMBRANA Y
LA DISTRIBUCIN DE UN ION EN EL EQUILIBRIO
Como la membrana es permeable tanto a los iones K+ como a los iones Cl-, en el
ejemplo anterior no se alcanzar el equilibrio para ningn ion hasta que los gradientes
de concentraciones se reduzcan a cero. Sin embargo, si la membrana fuera permeable
slo a los iones K+ , la difusin de los iones K+ transportara cargas a travs de la
membrana hasta que el potencial de membrana equilibrara el gradiente de
concentracin. Dado que para producirse un cambio en el potencial se requieren muy
pocos iones, este equilibrio se alcanza casi instantneamente. El transporte estara
entonces en equilibrio, incluso aunque el gradiente de concentraciones no hubiera
cambiado.
Cuando la distribucin de cualquier soluto a travs de la membrana alcanza el
equilibrio, el flujo pasivo, J (por ejemplo, la cantidad de soluto que atraviesa una unidad
de rea de membrana por unidad de tiempo), es el mismo en ambas direcciones, desde
el exterior al interior y desde el interior al exterior:
Jei = J ie
Los flujos estn relacionados con ; as en el equilibrio tambin sern iguales los
potenciales electroqumicos del interior y el exterior de la clula:
ji = je
y para cualquier ion (simbolizado por el subndice j):
j* + RT ln Cje + zj FEe = j* + RT ln Cji + zj FEi
Agrupando los trminos, se obtiene que la diferencia en el potencial elctrico entre los
dos compartimentos en el equilibrio es:
Ei- Ee = RT (ln Cje/ Cji)
19

z jF
Esta diferencia en el potencial elctrico se conoce como potencial de Nernst (En) para
un ion:
En = Ei Ee
y
En = RT (ln Cje/ Cji)
z jF
o
En = 2.3 RT (log Cje/ Cji)
z jF
Esta relacin, conocida como ecuacin de Nernst, pone de manifiesto que en el
equilibrio la diferencia de concentraciones de un ion entre dos compartimentos est
equilibrada por la diferencia de voltaje entre los dos compartimentos. La ecuacin de
Nernst puede simplificarse a 25C y para un catin monovalente de la siguiente forma:
RT/zF vale 25.7 mV y, multiplicado por 2.303 nos da 59 mV, luego tendramos:
En = 59 (log Cje/ Cji)
donde En viene expresado en mV.
Hay que destacar que una diferencia en las concentraciones de 10 veces para un catin
monovalente corresponde a un potencial de Nersnt de -59 mV (Ce/ Ci = 1/10, log 10 1=
-1). Es decir, que un potencial de membrana de -59 mV mantendra un gradiente de
concentracin de diez veces de un ion que fuera transportado por difusin pasiva (es
decir, que mediante un transporte pasivo la concentracin de un ion monovalente en el
interior de la clula es 10 veces superior a la concentracin de ese mismo ion en el
exterior; Cji = 10 x Cje). De la misma forma, esta ecuacin permite, a partir de una
simetra en la concentracin, calcular el potencial con el cual el ion estar en equilibrio.
Todas las clulas muestran un potencial de membrana que es debido a la
distribucin asimtrica de los iones entre el interior y el exterior de la clula. Conviene
recordar que el interior de la clula es negativo con respecto al exterior. El citosol
contiene un gran nmero de cargas fijas, que no difunden, como los grupos amino (NH4+) y carboxilo (-COO-) de macromolculas como protenas, cidos nucleicos, etc.
Adems, las clulas bombean de forma activa diversos cationes como H+, Ca2+ y Na+ al
apoplasto. Todo esto hace que en el citosol predominen las cargas negativas y que en las
paredes celulares se acumulen cationes.
20

El potencial de membrana de puede determinar insertando un microelectrodo en

la clula y midiendo la diferencia de voltaje entre el interior de la clula y una solucin
estndar externa (Fig. 2.9).
Figura 2.9. Diagrama de un par de microelectrodos usados para determinar el potencial

de membrana. Uno de los microelectrodos se inserta en la clula (normalmente en la
vacuola o en el citoplasma) a estudiar, y el otro se mantienen en una solucin estndar
de electrolito que sirve de referencia. El microelectrodo se conecta a un voltmetro, que
registra la diferencia de potencial elctrico entre el compartimento celular y la solucin
de referencia. Los potenciales de membrana de las clulas vegetales estn comprendidos
entre 60 y 240 mV. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
5.3.- LA ECUACIN DE NERNST PUEDE USARSE PARA DISTINGUIR ENTRE

TRANSPORTE ACTIVO Y PASIVO
La ecuacin de Nernst puede utilizarse en todo momento para calcular si un ion

dado se encuentra en equilibrio y, se utiliza para determinar si un ion ha sido
transportado, o excretado, mediante transporte activo o pasivo. Para ello, se determina
experimentalmente las concentraciones interna y externa del ion en cuestin y con estos
valores se calcula el potencial de Nernst para ese ion. A continuacin, se compara ese
valor con el potencial de membrana medido experimentalmente. La desigualdad entre
las dos magnitudes demuestra la presencia de procesos de absorcin activa de iones,
veamos a continuacin un ejemplo.
En la Tabla 2.2 se muestra una comparacin de los valores de concentracin terica,
obtenidos mediante la ecuacin de Nernst, y los valores reales, determinados
experimentalmente, realizada en races de guisante por Higinbotham et al. (1967).
Todos los iones se encuentran en el interior de las clulas a mayor concentracin que en
el medio externo. Se aprecia adems que slo en el caso del K+ la concentracin terica
y la experimental son similares, lo cual indica que este ion est en equilibrio pasivo.
Por el contrario, las concentraciones de los dems cationes es inferior a la de equilibrio,
21

por lo que debe existir algn mecanismo que secrete estos iones al exterior, impidiendo
de este modo que alcancen la concentracin de equilibrio. Los aniones presentaron unas
concentraciones internas mayores que las tericas, indicando que su toma se debe a un
transporte activo (en el equilibrio se obtiene que > 0, luego ha tenido que aplicarse
energa para acumular el ion en la clula).
Estos equilibrios pueden calcularse a partir de la expresin del potencial
electroqumico de los iones. El trabajo necesario para incorporar un mol de un ion a la
clula es igual a la diferencia del potencial electroqumico de ese ion entre el interior y
el exterior de la misma:
j = ji -je = (j* + RT ln Cji + zj FEi )- (j* + RT ln Cje + zj FEe)
agrupando los trminos elctricos y los de concentracin, resulta
j =[zj F (Ei Ee)] [RT ln (Cje/ Cji)]
Mediante la ecuacin de Nernst podemos expresar un cociente de concentraciones como
un potencial elctrico es decir, RT ln (Cje/ Cji) = EN zF y tendramos que:
j = [zj F (Ei Ee)] (EN zjF)
el trmino (Ei Ee) corresponde al potencial de membrana Em y, finalmente
j /F = zj (Em EN)
j /F, es el gradiente de potencial electroqumico para un ion j, expresado en mV
y, se obtiene multiplicando la carga del ion j por la diferencia entre el potencial de
membrana y el potencial de Nernst para ese ion. Si j/F es positivo, el ion est
sometido a una fuerza fsica que tiende a sacarlo del interior de la clula y cuando tiene
valor negativo, el ion se ve empujado a entrar al interior de la clula.
Los resultados descritos en la Tabla 2.2 pueden considerarse representativos del
comportamiento de buen nmero de especies: los aniones se acumulan activamente,
mientras que los cationes entran de forma pasiva e incluso existen mecanismos para su
secrecin. Sin embargo, el comportamiento no es uniforme, algunas plantas son capaces
de acumular K+ activamente, otras presentan una acumulacin activa de Na+, etc.
22

Tabla 2.2. Comparacin de las concentraciones inicas determinadas

experimentalmente con las del equilibrio pasivo en tejidos de races de guisante. El
potencial de membrana calculado fue de -110 mV. Tomado de Higinbotham et al.
(1967).
Concentracin
Direccin
Concentracin interna (mM)
Ion
en el medio
fuerzas
c
a
b
externo (mM) Tericos
Experimentales pasivas
K+
74
75
Na+
74
interior
Mg2+
0.25
1,340
interior
Ca2+
5,360
interior
NO3-
0.0272
28
exterior
Cl-
0.0136
exterior
H2PO4-
0.0136
21
exterior
SO42-
0.25
0.00005
19
exterior
equilibrio
Calculada para cada ion a partir del potencial de membrana y su concentracin en el

medio externo, aplicando la ecuacin de Nernst. Como T = 298K, RT/F= 58,9 y la
expresin queda por tanto: Ci= Ce x exp [- (n)(-110)/(58,9)]. As, para el ion Mg2+,
Ce= 0.25 y n= + 2; Ci= 0.25 x exp [-(+2)(-110)/(58,9)]= 1 340
b
Las races se equilibraron frente a un medio de la concentracin indicada en la
columna 2, a una temperatura de 25 C hasta que su concentracin no vari con el
tiempo.
c
Aquellos iones que se encuentran en la raz a mayor concentracin que la predicha por
la ecuacin de Nernst, son impulsados hacia el exterior por las diferencias de potencial
electroqumico; su acumulacin se ha producido contra estas diferencias de potencial
utilizando energa metablica (acumulacin activa). Por el contrario, la mayor parte de
los cationes estn a menor concentracin de la predicha por el equilibrio pasivo, por lo
que un mecanismo de secrecin es necesario para impedir su acumulacin pasiva.
Solamente el potasio se encuentra en equilibrio pasivo.
El ejemplo presentado en la Tabla 2.2 es una simplificacin. Las clulas
vegetales presentan gran cantidad de compartimentos internos cada uno de ellos con una
composicin inica diferente, siendo el citosol y la vacuola los compartimentos
celulares ms importantes. En una clula vegetal madura, la vacuola ocupa el 90 % o
ms del volumen celular, por lo que el citosol queda restringido a una delgada capa
entre el tonoplasto (la membrana de la vacuola) y el plasmalema. Debido al volumen
relativamente pequeo del citosol de la mayora de las clulas de las angiospermas es
difcil efectuar mediciones de este tipo. Por ello, los primeros estudios que se efectuaron
para determinar las relaciones inicas en plantas se llevaron a cabo en algas como
23

Nitella o Chara, cuyas clulas internodales poseen varios centmetros de longitud, casi
un milmetro de dimetro y un volumen de citosol apreciable. En la Figura 2.10 se
representan a modo de resumen las conclusiones de estos estudios y los llevados a cabo
con plantas superiores.
Figura 2.10. Las concentraciones inicas en el citosol y en la vacuola estn controladas

por procesos de transporte pasivo (fechas discontinuas) y activo (flechas continuas). En
la mayora de las clulas vegetales la vacuola ocupa ms del 90 % del volumen celular y
contiene la mayor parte de los solutos celulares. El control de la concentracin de iones
en el citosol es importante para la regulacin de las enzimas metablicas. La pared
celular que rodea al plasmalema no representa una barrera de permeabilidad y por tanto
no afecta al transporte de solutos. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
En general, en las clulas vegetales el K+ se acumula dentro del citosol y de la
vacuola de forma pasiva excepto, cuando la concentracin extracelular de ste es muy
baja y, en este caso su absorcin se realiza de forma activa. El Na+ y el Ca2+ se eliminan
activamente del citosol hacia el espacio extracelular y hacia la vacuola, y lo mismo
ocurre con el exceso de protones. Esta eliminacin de H+ permite mantener el pH del
citosol constante y prximo a la neutralidad (pH 7.2), mientras que el pH de la
vacuola y del apoplasto son generalmente ms cidos (pH 5-6). Todos los aniones se
acumulan activamente en el citosol.
5.4.- LA ECUACIN DE GOLDMAN RELACIONA EL POTENCIAL DE DIFUSIN Y
EL GRADIENTE DE IONES
Hay muchos iones que atraviesan las membranas de las clulas vegetales de forma
simultnea. Por ello, el potencial de Nernst de una sola especie inica rara vez puede
describir el potencial de difusin real de la membrana. La contribucin de todos los
iones al potencial de difusin de la membrana viene dado por la ecuacin de Goldman:
24

Esta ecuacin nos proporciona un valor bastante aproximado del valor real del
potencial de difusin de una membrana. En dicha ecuacin se asume que la difusin de
los iones es independiente y a favor del gradiente de potencial qumico y que para
determinar el valor del potencial de difusin de la membrana basta con conocer las
concentraciones (C) y las permeabilidades (P) de los tres iones ms relevantes de la
clula es decir el K+, Na+ y Cl-, a ambos lados de la membrana. Los valores as
calculados son muy similares a los valores experimentales ya que estos tres iones son
los que presentan una mayores concentraciones y coeficientes de permeabilidad en las
clulas vegetales y por tanto, dominan la ecuacin.
La relacin entre la ecuacin de Goldman y la ecuacin de Nernst puede verse
fcilmente si se considera una membrana que slo es permeable a un ion por ejemplo el
K+, luego el coeficiente de permeabilidad para el Na+ y para Cl- son nulos. En estas
condiciones, la ecuacin de Goldman se reduce a la ecuacin de Nernst para el K+.
5.5.- EL TRANSPORTE DE PROTONES ES EL PRINCIPAL DETERMINANTE DEL
POTENCIAL DE MEMBRANA
Cuando se conocen las permeabilidades y los gradientes de los iones, es posible calcular
el potencial de difusin de la membrana mediante la ecuacin de Goldman. Sin
embargo, en plantas y en hongos, los valores experimentales del potencial de membrana
son mucho ms negativos que los obtenidos a partir de la ecuacin de Goldman. Por
ejemplo, el potencial de membrana medido en clulas del tallo y de races de plntulas
est comprendido entre 130 a 110 mV, mientras que el calculado (a partir de la
ecuacin de Goldman) oscila entre 80 a 50 mV. Estos resultados ponen de manifiesto
que el potencial de difusin no es el nico componente que contribuye al potencial de
membrana y, por tanto, debe existir otro mecanismo. Pues bien, este exceso de voltaje
se debe a la accin de una bomba electrognica, es decir una enzima que bombea de
forma activa (utiliza energa metablica, ATP) protones al exterior (es decir saca
protones del interior de la clula y los vierte al exterior) y que se denomina ATP
foforilasa de protones o H+-ATPasa del plasmalema.
Siempre que un ion entra o sale fuera de la clula sin ser equilibrado con el
movimiento de un contrain de carga opuesta, se crea un voltaje a travs de la
membrana. Cualquier mecanismo de transporte activo que provoque el movimiento de
una carga elctrica neta, modificar el valor de potencial de membrana respecto al
predicho por la ecuacin de Goldman. Este tipo de transporte se denomina bomba
electrognica, y es comn en las clulas de todos los organismos.
La energa metablica necesaria para llevar a cabo este tipo de transporte casi
siempre es proporcionada por la hidrlisis del ATP. En las plantas se ha demostrado la
dependencia del potencial de membrana del ATP observando el efecto del cianuro (CN-)
en el potencial de membrana (Fig. 2.11). El cianuro inhibe la sntesis de ATP y, en
estas condiciones el potencial de membrana se encuentra cercano al potencial de
25

difusin de Goldman, el cual corresponde al movimiento pasivo de K+, Na+ y Cl-. Por
consiguiente, el potencial de membrana de las clulas vegetales tienen dos
componentes: el potencial de difusin y otra componente debida al transporte
electrognico de iones. En presencia de cianuro, se inhibe este transporte, y el pH del
medio externo aumenta mientras que, el pH citoslico se acidifica. Esto pone de
manifiesto que el transporte activo de protones al exterior de la clula es electrognico.
Figura 2.11. El potencial de membrana de clulas de guisante se colapsa cuando se

aade cianuro (CN-) al medio. El cianuro bloquea la produccin de ATP en las clulas.
El colapso del potencial de membrana tras la adicin de cianuro indica que el ATP es
necesario para el mantenimiento del potencial. Si se elimina el cianuro del medio, la
produccin de ATP se reestablece y se restaura el potencial de membrana. Tomado de
Taiz y Zeiger, 1998.
Como analizamos anteriormente, un cambio en el potencial de la membrana

causado por una bomba electrognica cambiar las fuerzas de difusin de todos los
iones a travs de la membrana. Por ejemplo, el transporte de H+ al exterior de la clula
puede generar la fuerza motora necesaria para la difusin pasiva de K+ al interior de la
celula. El H+ es transportado electrognicamente a travs de la membrana plasmtica
no slo en plantas, sino tambin en bacterias, algas, hongos y algunas clulas animales
como las epiteliales del rin.
La sntesis de ATP en mitocondrias y cloroplastos tambin depende de una H+ATPasa. En estos orgnulos, esta protena de transporte se denomina ATP sintasa
debido a que forma ATP en lugar de hidrolizarlo.
A continuacin vamos a describir la estructura y funcin de las protenas de
membrana implicadas en el transporte activo y pasivo en las clulas vegetales.
26

6.-
PROTENAS TRANSPORTADORAS DE MEMBRANA
Como hemos visto en el apartado 3.1 la membrana celular es una barrera que separa
dos medios acuosos de distinta composicin, el extracelular y el intracelular, lo que les
permite regular el trfico de sustancias y por ende la composicin inica del interior de
la clula. Hemos comentado que los iones son molculas hidroflicas inmiscibles en los
lpidos de la membrana y que para atravesarla requieren de mecanismos especficos de
transporte. Normalmente, en los estudios de permeabilidad se utilizan membranas
artificiales constituidas por un solo tipo de fosfolpidos (bicapas lipdicas que carecen
de protenas).
Debido a la naturaleza hidrofbica del interior de la membrana, las membranas
sintticas puras son altamente impermeables a los iones. En la Figura 2.12 se muestran
los valores de permeabilidad de las bicapas artificiales para varias substancias. Las
molculas no polares como el O2 (32 daltons) atraviesan la membrana rpidamente,
incluso pequeas molculas polares (agua, 18 daltons; CO2, 44 daltons; glicerol, 92
daltons) tambin difunden rpidamente aunque, su permeabilidad es ligeramente
menor. Entre las molculas polares el agua presenta una elevada permeabilidad,
probablemente debido a las fuertes interacciones con los extremos polares de los lpidos
y por su pequeo tamao. En general, cuando una molcula aumenta en tamao y
polaridad su permeabilidad disminuye. Por el contrario, las bicapas lipdicas son
altamente impermeables a los iones por muy pequeos que stos sean.
Cuando se comparan los valores de permeabilidad de las bicapas artificiales con
los de las membranas biolgicas se pueden encontrar importantes similitudes y
diferencias (Fig. 2.12). Las molculas no polares y muchas pequeas substancias
polares, presentan unos valores de permeabilidad similares en ambos tipos de
membrana. Por otro lado, para iones y molculas polares grandes (glucosa, 180 daltons)
las membranas biolgicas son mucho ms permeables que las artificiales. Esto se debe a
la presencia de protenas transportadoras que facilitan la entrada de iones y de otras
molculas polares. Las molculas que presentan valores de permeabilidad similares en
ambos tipos de membranas difunden directamente a travs de la fase lipdica de la
membrana. Sin embargo, la mayora de las substancias importantes en la nutricin y en
el metabolismo celular no pueden atravesar la bicapa lipdica directamente por lo que
deben ser transportadas mediante protenas de membrana. Estas protenas
transportadoras se clasifican en tres grupos: canales, transportadores (carriers) y
bombas.
Las protenas transportadoras presentan especificidad en el transporte de solutos,
de ah su gran diversidad. Aunque generalmente, una protena transportadora transporta
especficamente un tipo de solutos tambin pude transportar otras substancias
relacionadas. Por ejemplo, en plantas el transportador de K+ de la membrana plasmtica
puede tambin transportar otros cationes monovalentes Rb+ y Na+ aunque, es el K+ el
ion que se transporta preferentemente. Adems, el transportador de K+ no es efectivo en
el transporte de aniones como el Cl- o de solutos no cargados como la sacarosa. De la
misma forma, una protena involucrada en el transporte de aminocidos neutros puede
transportar glicina, alanina o valina pero no cido asprtico, que posee carga negativa,
o lisina, el cual posee carga positiva.
27

Figura 2.12. Coeficientes de permeabilidad, P, en centmetros por segundo, para el

paso de diversas molculas a travs de membranas sintticas y biolgicas. Los valores
de P para las molculas no polares y algunas substancias no cargadas como el agua, son
similares en ambos sistemas pero, para la mayora de las molculas polares los valores
de P son mucho mayores en las membranas biolgicas, lo que pone de manifiesto del
papel de las protenas transportadoras. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
En primer lugar, vamos a describir el papel de los canales inicos y de los

transportadores en el transporte de solutos a travs de las membranas. Distinguiremos,
a continuacin, entre el transporte primario y el transporte activo secundario.
Terminaremos examinado la estructura y dominios funcionales de varios
transportadores presentes en el plasmalema y el tonoplasto.
6.1.- LOS CANALES INICOS Y LOS TRANSPORTADORES FACILITAN EL
TRANSPORTE DE SOLUTOS A TRAVS DE LAS MEMBRANAS
Existen dos tipos de protenas transportadoras que facilitan la entrada de solutos a travs
de la membrana: los canales inicos y los transportadores (carriers) (Fig.2.13).
6.1.1.- Canales inicos
Los canales inicos, en general son protenas transmembrana que funcionan como
poros selectivos en la membrana. El transporte a travs de un canal es siempre pasivo,
sin embargo, los canales inicos no son simples poros acuosos conductores, sino que
desarrollan tres funciones fundamentales:
a) Permiten el flujo de iones a su travs a una velocidad muy superior a la de
cualquier sistema biolgico (108 iones s-1 frente a 103 iones s-1 que mueve un
transportador o una ATPasa-H+)
b) Son capaces de discriminar qu iones pasan a su travs, es decir presentan
selectividad inica. La especificidad del transporte viene dada por el tamao del
poro y la densidad de la superficie cargada en su interior. La regin del canal
que determina la especificidad se denomina filtro selectivo (ver Fig. 2.14). El
28

transporte a travs de los canales puede o no implicar una unin transitoria del
soluto con la protena canal
c) En respuesta a un estmulo, las protenas del canal son capaces de adoptar
diversos estados conformacionales. En general, existe un estado conductor
(estado abierto, que permite el paso de iones a su travs cuando las puertas estn
abiertas; ver Fig. 2.14) y dos no conductores (estados inactivo y de reposo). A
nivel del potencial de reposo celular, la probabilidad de apertura de algunos
canales es mnima, es decir, que slo un reducido nmero de canales puede
abrirse al azar, pero s pueden abrirse en respuesta a un estmulo adecuado. La
despolarizacin celular (es decir, los cambios en el potencial de membrana)
aumenta la probabilidad de apertura de los canales, pero si la despolarizacin se
mantiene, la probabilidad de apertura disminuye como consecuencia del proceso
de inactivacin iniciado simultneamente por el de activacin; as el canal pasa
al estado inactivo-cerrado desde el cual no puede volver a abrirse. Para que el
canal vuelve a abrirse es necesario que el canal inactivado pase al estado de
reposo, proceso al que denominamos reactivacin del canal. Por tanto, la
magnitud de la corriente que cruza la membrana depende de la densidad de
canales, de la conductancia del canal abierto y de cunto tiempo el canal
permanece en dicho estado.
Figura 2.13. Los tres tipos de protenas transportadoras: canales, transportadores

(carriers) y bombas. Los canales y los transportadores pueden mediar el transporte
pasivo de solutos a travs de las membranas (por simple difusin o difusin facilitada),
a favor del gradiente de potencial electroqumico. Las protenas canal actan como
poros en la membrana, y su especificidad viene determinada principalmente, por las
propiedades biofsicas del canal. Los transportadores se unen a la molcula que
transportan en un lado de la membrana y la liberan en la cara opuesta. El transporte
activo primario se lleva a cabo mediante bombas que transforman la energa metablica
(ATP) en energa til para el transporte de solutos en contra de su gradiente de
potencial electroqumico.
Atendiendo a sus propiedades cinticas (activacin-inactivacin), al estmulo que
determina el cambio conformacional se pueden clasificar los canales inicos en a)
activados por cambios en el voltaje (canales voltaje-dependientes), b) activados tras la
interaccin de un antagonista con su receptor especfico localizado en la superficie de la
membrana celular (canales receptor-dependientes), c) activados por mediadores
intracelulares (calcio, ATP, nucletidos cclicos, proten quinasas). Sin embargo, esta
29

divisin es muchas veces artificial, ya que la despolarizacin de la membrana puede

inducir la liberacin de molculas seal y activar canales activados por
receptores/mediadores, mientras que muchos ligandos endgenos pueden tambin
modificar el potencial de membrana celular y activar canales voltaje-dependientes.
Figura 2.14. Modelo de un canal regulado por voltaje (canal de K+) de una clula
vegetal. El canal est compuesto por un tetrmero de la subunidad principal () que
contiene un filtro selectivo y una puerta regulada por voltaje. La secuencia de esta
puerta consiste en una serie de aminocidos bsicos que proporcionan carga positiva y
que, en respuesta al potencial de membrana producen la apertura o cierre del canal. Las
subunidades reguladoras tambin pueden estar presentes. Tomado de Taiz y Zeiger,
1998.
As mismo y mediante la tcnica de patch clamp (ver Apndice B) se han podido

distinguir dos tipos de puertas en los canales, en funcin del tiempo que permanecen
abiertas en respuesta a un estmulo prolongado. As, se han caracterizado los canales
que se activan rpidamente (denominados tipo R, rapidly activated) y los que se activan
lentamente (tipo S, slowly activated). La diferencia entre ambos canales, como su
propio nombre indica es que los canales tipo R se abren y se cierran rpidamente en
respuesta a un estmulo [por ejemplo un cambio en el voltaje (los cambios en el voltaje,
es decir los cambios en el potencial de membrana, son los principales estmulos que
promueven la apertura de los canales)] mientras que los canales tipo S permanecen
abiertos mientras dure el estmulo. Ambos tipos de canales tambin se han identificado
en el tonoplasto y, se denominan como canales vacuolares rpidos (FV, fast vacuolar
channels) o canales vacuolares lentos (SV, slow vacuolar channels).
De lo anteriormente expuesto se puede deducir que en las clulas vegetales
existen importantes tipos de canales que facilitan el transporte de ciertos iones, como
los canales de K+ y Cl- (la actividad de estos canales es de gran importancia para la
regulacin de importantes procesos fisiolgicos como el mantenimiento de la turgencia
celular, el control de la apertura y el cierre de los estomas, la regulacin de la
elongacin celular, entre otros) pero tambin permiten el transporte de pequeas
30

molculas como el agua. Los canales que facilitan el transporte de molculas de agua se
denominan acuaporinas2. El descubrimiento de las acuaporinas fue bastante
sorprendente para la comunidad cientfica ya que, hasta entonces se pensaba que la
bicapa lipdica era suficientemente permeable al agua y que, simplemente cambiando la
composicin de lpidos se controlaba el flujo de agua. Hoy en da, desde el aislamiento
de la primera acuaporina en 1991 en eritrocitos humanos, estas protenas se han
identificado en todos los seres vivos. No cabe duda que su identificacin en clulas
vegetales ha revolucionado la visin de las relaciones hdricas de las plantas. As, la
existencia de las acuaporinas proporciona a la planta a) una ruta de baja resistencia al
flujo de agua en condiciones de elevada transpiracin, b) facilita el paso del agua por la
endodermis radicular y c) permite controlar el flujo del agua en la planta. Dicho control
se llevara a cabo regulando la actividad y la expresin de los genes que codifican para
acuaporinas y, de esta forma, la clula es capaz de modificar la permeabilidad al agua
de sus membranas segn se requiera.
6.1.2.- Transportadores o carriers
En el transporte mediado por un transportador o carrier la substancia a
transportar se une a una regin especfica de la protena. La unin provoca un cambio
conformacional reversible que, de forma alternada expone en primer lugar la zona de
unin al soluto en una cara de la membrana y luego en la otra. El transporte finaliza
cuando la substancia se disocia del lugar de unin del transportador (ver Fig. 2.15).
Figura 2.15. Los dos modelos de difusin facilitada. Los solutos pueden transportarse a
favor de su gradiente electroqumico mediante canales inicos (a) y protenas
transportadoras (b). Los canales inicos permiten la comunicacin directa del interior y
el exterior de la clula y facilitan el paso de un elevado nmero de iones en cada
apertura. Esta apertura puede estar regulada por un ligando o por el valor del potencial
de membrana. Los transportadores o carriers se unen selectivamente a los iones en una
de las superficies y sufren cambios conformacionales que permiten al ion atravesar la
membrana. Tomado de Campbell & Reece (2002).
La Real Academia Sueca de las Ciencias concedi el premio Nobel de Qumica 2003 a los profesores
Meter Agre por el descubrimiento de las acuaporinas, y Roderick Mackinnon por el estudio de la
estructura de los canales inicos
31

Debido al cambio conformacional necesario para llevar a cabo este tipo de

transporte, la velocidad del transporte es de varios rdenes de magnitud ms lenta que la
llevada a cabo a travs de un canal. Normalmente, los transportadores pueden
transportar entre 100 a 1000 iones o molculas por segundo, esto es 106 veces ms lento
que el transporte mediando por un canal. La unin y la liberacin de las molculas de
las protenas transportadoras son similares a la unin y liberacin de las molculas de
una enzima en una reaccin. De hecho, como veremos ms tarde, se utiliza la cintica
enzimtica para caracterizar el transporte mediado por transportadores.
El transporte mediado por transportadores, a diferencia del transporte mediado a
travs de un canal inico, puede ser pasivo o activo, y puede transportar una mayor
variedad de substancias. El transporte pasivo mediado por protenas, canales o carriers,
se denomina difusin facilitada, y es semejante a la difusin (la que se realiza a travs
de la bicapa) es decir, se transporta una substancia a favor de su gradiente
electroqumico, sin gasto de energa metablica.
6.2.- EL TRANSPORTE PRIMARIO EST MEDIADO POR BOMBAS Y EST

ACOPLADO A UNA FUENTE DE ENERGA METABLICA
Hasta ahora hemos visto el transporte pasivo de solutos es decir, aquel que tiene lugar a
favor de un gradiente de potencial electroqumico, como por ejemplo el proceso de
acumulacin de cationes en la clula. Por el contrario, la acumulacin de aniones y la
secrecin de cationes, procesos que tienen lugar en contra del potencial electroqumico
de los iones, precisan de un aporte de energa. La energa metablica se transforma en
energa til para el transporte de iones en las membranas a travs de la actividad de las
bombas primarias (ver Fig. 2.16). Estas bombas son protenas de membrana que
mueven iones (masa y carga) en contra de su gradiente de potencial electroqumico,
utilizando energa metablica y generando gradientes tanto de concentracin como
elctricos. El transporte de iones que tiene lugar a travs de las bombas primarias se
denomina transporte primario.
Las bombas inicas se han caracterizado como electrognicas o electroneutras.
En general, el transporte electrognico hace referencia al transporte de un ion en el cual
se produce un movimiento neto de carga a travs de la membrana. Por el contrario, un
transporte electroneutro, como su propio nombre indica, no implica un movimiento neto
de carga. La bomba primaria de las clulas animales es la bomba ATPasa de Na+-K+.
sta es una bomba electrognica ya que impulsa la salida de tres iones Na+ y la entrada
de dos iones K+ consumiendo ATP. Por el contrario, la bomba ATPasa H+-K+ de la
mucosa gstrica es electroneutra: por cada H+ que bombea al exterior toma un K+.
Las clulas vegetales no tienen bombas de Na+-K+. La bomba primaria del
plasmalema es una bomba de protones que los saca del citosol y los excreta hacia el
apoplasto. Esta bomba se encuentra en la membrana plasmtica de las clulas vegetales,
de hongos y de bacterias, en el tonoplasto y en varios sistemas de endomembranas tanto
de clulas animales como vegetales.
La ATPasa de H+ de la membrana crea un gradiente de potencial electoqumico
de H+ en la membrana plasmtica mientras que la ATPasa de H+ vacuolar (V-ATPasa) y
32

la pirofosfatasa de H+ (H+-PPasa; utiliza la energa contenida en la molcula de

pirofosfato para excretar protones) bombean electrognicamente protones dentro del
lumen de la vacuola y de las cisternas del aparato de Golgi.
Son muchos los estudios que sugieren que, en clulas vegetales slo el H+ y el
Ca2+ se transportan mediante bombas primarias. Por tanto, son necesarios otros
mecanismos que permitan el transporte activo del resto de solutos imprescindibles para
el desarrollo vegetal. Un modo de transportar estos compuestos sera mediante
cotransporte es decir, acoplar la energa liberada por el transporte de un soluto que se
mueve a favor de su potencial electroqumico con la incorporacin de otro ion que se
desplaza en contra de su potencial. Este mecanismo, por el que el transporte de una
sustancia proporciona la energa necesaria para la acumulacin de otra en contra de su
potencial electroqumico, se denomina transporte secundario activo, para
diferenciarlo de aquellas situaciones en que el transporte est acoplado directamente a
una reaccin metablica, como la hidrlisis del ATP.
Figura 2.16. La bomba primaria que energetiza al plasmalema es una ATPasa de

protones. Esta enzima hidroliza ATP para bombear H+ al exterior de la clula. Como se
observa, no existe un flujo asociado de otro ion que compense el dficit de carga
positiva del citoplasma. Esto hace que el potencial de membrana de las clulas vegetales
sea muy negativo, entre -160 y -250 mV. Tomado de Campbell & Reece (2002).
6.2.1.- La bomba primaria que energetiza al plasmalema es una ATPasa de

protones
Cuando los protones son expulsados del citosol por las ATPasas de H+ electrognicas se
crea un potencial de membrana y un gradiente de pH a expensas de la hidrlisis del
ATP. La energa acumulada asociada a H+ puede expresarse por tanto, como el
gradiente de potencial electroqumico para el H+, o fuerza protn motriz o p, que
consta de dos componentes: una asociada a la asimetra de concentracin de H+ y como
diferencia de potencial elctrico (ver Apndice C: Teora Quimiosmtica):
33

H+/F= Em ENH+
En clulas vegetales, el componente elctrico es mucho ms importante que la asimetra
de concentracin por dos razones. En primer lugar, en el funcionamiento de la ATPasas
de H+ no existe un flujo asociado de otro ion que compense, ni siquiera parcialmente
como en clulas animales con la bomba Na+-K+, el dficit de carga positiva del citosol.
En segundo lugar, la asimetra de protones que genera la bomba se disipa parcialmente
debido a la capacidad amortiguadora del medio externo, por un lado, y a los
mecanismos de homeostasis del pH del citoplasma, por otro.
En la literatura bioqumica, las ATPasas de H+ del plasmalema se denominan de tipo P
porque forman una unin covalente con el fosfato (Pi), proveniente del ATP, durante
cada ciclo de bombeo de H+ al exterior. Debido a la particular unin con el Pi durante la
catlisis, las ATPasas de H+ del plasmalema son sensibles a la presencia de
ortovanadato (HVO42-), un anlogo del fosfato (HPO42-), que compite con el fosfato del
ATP por la unin al sitio activo de la enzima (ver Tabla 2.4). En vesculas aisladas del
plasmalema, la presencia de concentraciones de ortovanadato del orden de micromolar
inhibe la actividad de la bomba, si bien la inhibicin in vivo es mucho ms pequea
debido, probablemente, a la escasa permeabilidad de las membranas a este ion. Por esta
razn, cuando se pretende una inhibicin de la bomba se usan inhibidores de la
respiracin (i.e., cianuro o azida) que cortan el suministro de ATP. Es importante
destacar que la actividad de ATPasas de H+ del plasmalema y, en consecuencia, el Em de
las clulas vegetales, sean fotosintticas o no, se mantiene en oscuridad; por tanto, el
ATP que usan proviene mayoritariamente del metabolismo respiratorio.
Las ATPasas de H+ estn codificadas por una familia multignica, constituida por al
menos 10 miembros y, cada gen codifica una isoforma diferente de la enzima. La
Figura 2.17 muestra el modelo funcional propuesto para una ATPasas de H+ de
levaduras, enzima que es muy similar a la presente en el plasmalema de las clulas
vegetales. La protena consta de 10 dominios transmembrana y varios dominios
hidroflicos presentes tanto en la cara citoplsmica como en la apoplstica. Algunos de
los dominios transmembrana forman un poro que permite el transporte de H+. El
dominio cataltico se encuentra en la cara citoslica de la membrana. En dicho dominio
se encuentra el residuo asprtico que se fosforila durante el ciclo cataltico y al que
puede unirse el ortovanadato. La actividad de las ATPasas-H+ del plasmalema se regula
por la concentracin de sustrato (ATP), pH, temperatura (como cualquier otra enzima) y
por seales especficas, como luz, fitohormonas, y por el ataque por patgenos
(Palmgren, 2001).
La regulacin de la actividad de la ATPasas-H+ mediada por seales especficas est
controlada por un dominio especializado autoinhibidor presente en el extremo Cterminal de la protena. Este dominio autoinhibidor permite regular la actividad de la
misma y si se elimina, por ej. mediante una proteasa, la enzima se activa de forma
irreversible. El efecto autoinhibidor del dominio C-terminal puede tambin regularse
mediante la accin de proten quinasas y fosfatasas, estas enzimas aaden (las quinasas)
o eliminan residuos fosfato a residuos serina o treonina del dominio autoinhibidor. Por
ej., uno de los mecanismo de respuesta a patgenos en tomate es la activacin de
34

fosfatasas que eliminan residuos fosfato del dominio autoinhibidor de las ATPasas-H+
del plasmalema. De esta forma, activan estas enzimas que forman parte de la cascada
de respuestas que activan los mecanismos de defensa de las plantas.
Tabla 2.4. Caractersticas de las tres clases de enzimas que bombean protones.
Propiedad
Tipo F
(tipo F0F1)
Localizacin
celular
Procariotas
Eucariotas
ATPasas
Tipo P
(tipo E1E2)
Membrana
Plasmtica
Membrana
Plasmtica
Mitocondria
Cloroplasto
Membrana
Plasmtica, RE
Velocidad
(ion/segundo)
H+
Iones
Transportados
Pirofosfatasa
Tipo V
(tipo Tp)
Endomembranas
60 (variable)
38 a 82
H+, Na+, K+, Ca2+
H+
H+
Azida
Ortovanadato
Bafilomicina A1
Nitrato
Intermediario
Covalente
Ninguno
Aspartil fosfato
Ninguno
Funcin
N subunidades
diferentes
Perifricas
Intrnsecas
2a 3
Sntesis de ATP
5 (F1)
3-8 (F0)
N genes
(Arabidopsis)
Masa molecular
500 kDa
Tonoplasto
60 (variable)
Inhibidores
Estequiometra
H+ : ATP
Membrana
Plasmtica?
1,1-Difosfato
Ninguno
2a3
1H+ : 1 PPi
Hidrlisis de ATP
Hidrlisis de
PPi
0
1
2 (plantas)
1 (plantas)
>10
4 (16 kD, subunidad c)

1 (subunidad C)
100 kDa
750 kDa (complejo)

8 a 10 subunidades
diferentes
81 kDa
Hidrlisis de ATP
Nota: Los nombres antiguos aparecen entre parntesis. Adaptado de Azcn-Bieto y Taln, 1993 y Sze et
al., 1999.
35

Adems de las ATPasas de H+, las plantas poseen en el plasmalema un segundo tipo de
bomba primaria que tambin pertenece a las ATPasas de tipo P: una Ca2+-H+ ATPasa.
Esta enzima excreta Ca2+ del citosol al tiempo que incorpora H+ en un proceso
dependiente de ATP. Esta bomba es tambin de tipo P ya que el bombeo de Ca2+
requiere la formacin de un intermediario fosfatado durante la catlisis. La contribucin
de esta bomba a la acumulacin de energa en el plasmalema es muy pequea ya que,
adems de ser menos electrognica que la ATPasas de H+, es mucho menos activa que
sta. Su funcin es evacuar el Ca2+ del citoplasma, para mantener su concentracin en
torno a 0.1 M es este compartimento celular.
Conviene recordar que el calcio es un ion muy importante y su concentracin debe
regularse de forma muy estricta. La pared celular y el espacio apoplstico son ricos en
calcio pero la concentracin del Ca2+ en el citosol se mantiene a niveles muy bajos a
pesar del fuerte gradiente electroqumico para la difusin del Ca2+ hacia el interior de la
clula. Pequeas fluctuaciones en la concentracin de Ca2+ citoslico alteran
drsticamente la actividad de muchas enzimas (muchas enzimas se inhiben a
concentraciones de calcio superiores a 1 M).
La regulacin de los niveles de calcio intracelulares se llevan a cabo controlando la
apertura de los canales inicos de Ca2+ que permiten su difusin a la vacuola y al
retculo endoplsmico; que son los principales reservorios de este ion en el protoplasma
y modulando la actividad de las bombas Ca2+-H+ ATPasa, que conducen el Ca2+ del
citosol al espacio apoplstico.
Membrana
plasmtica
Dominios
transmembrana
Espacio extracelular
Dominio
regulador
Citoplasma
Figura 2.17. Representacin bidimensional de la bomba ATPasa H+ del plasmalema.

Esta enzima posee diez dominios transmembrana (representados en color verde) y un
dominio autoinhibidor en el extremo C-terminal. Tomado de Taiz & Zeiger, 2002.
36

6.2.2.- Las bombas primarias del tonoplasto: la ATPasa de protones y la

pirofosfatasa
Aunque se sabe desde hace mucho tiempo que la vacuola es el compartimento celular
donde las clulas vegetales almacenan agua y solutos, hace relativamente poco tiempo
que se conocen los mecanismos responsables, asociados al tonoplasto, de esta funcin.
La fuerza que impulsa la acumulacin de agua y que permite la generacin de la
turgencia en las clulas es osmtica3. A su vez, el origen del potencial osmtico es la
acumulacin de iones, principalmente el K+, en la vacuola. El tonoplasto, que es la
membrana que delimita la vacuola, regula el trfico de iones y de otros metabolitos
entre el citosol y la vacuola, como el plasmalema regula la entrada y salida de solutos de
la clula. Sin embargo, el transporte del tonoplasto ha permanecido relativamente
inaccesible hasta que no se han desarrollado los mtodos adecuados para la obtencin
de vacuolas intactas y vesculas de tonoplasto.
La energa que se emplea en el tonoplasto para mover iones est asociada a la actividad
de bombas primarias. En el tonoplasto existen dos tipos de bombas primarias y ambas
bombean protones hacia el interior de la vacuola. Por esta razn, el lumen vacuolar es
tpicamente cido y positivo. Medidas directas con microelectrodos indican que el pH
vacuolar se encuentra alrededor de 5, aunque el pH de las vacuolas de algunas especies
es muy bajo, y pueden tener un pH de 1. Este fenmeno se conoce como
hiperacidificacin (ver Tabla 2.5).
La hiperacidificacin vacuolar es la responsable del sabor agrio de ciertos frutos (limn)
y vegetales (ruibarbo). Estudios bioqumicos recientes realizados en frutos de limn
sugieren que el bajo pH de las vacuolas de estos frutos se debe al efecto combinado de
dos factores: (1) la baja permeabilidad del tonoplasto a los protones, que permite la
generacin de un gradiente de pH acentuado; (2) la presencia de bombas primarias
especializadas, concretamente V-ATPasa-H+, capaces de bombear protones al interior
de la vacuola de forma muy efectiva. Otro factor importante que contribuye al sabor
agrio de estos frutos y vegetales es la acumulacin de cidos orgnicos como el ctrico,
mlico, y oxlico, los cuales contribuyen a mantener un pH bajo en la vacuola ya que
estos compuestos actan como tampones.
Este proceso es de gran relevancia ya que la elongacin de las clulas vegetales

depende de la entrada de agua a las vacuolas, por tanto, el potencial osmtico de stas
debe mantenerse en unos valores adecuados para permitir la entrada de agua desde el
citoplasma. El valor del potencial osmtico (s) para la soluciones diluidas ideales es
s= -RT Ci, donde Ci es la concentracin de solutos del sistema. El valor del potencial
osmtico es idntico al de presin osmtica (), pero poseen signo opuesto es decir:
s= -. En otras palabras, la presin osmtica es siempre positiva y el potencial
osmtico siempre posee valores negativos.
37

La actividad de las bombas electrognicas de protones presentes en el

tonoplasto hace que el potencial de membrana que soporta el tonoplasto sea mucho
menor que el soportado por el plasmalema y ste oscila, segn la especie considerada,
entre 5-20 mV (dentro de la vacuola positivo). Otro aspecto a tener en cuenta es el
mantenimiento de la electroneutralidad. Para ello, debido a la entrada masiva de H+, se
transportan hacia el lumen vacuolar aniones como el Cl- o el malato2- procedentes del
citosol a travs de canales inicos. La existencia de este transporte de aniones permite
no slo mantener la electroneutralidad sino que, adems, se genere un gradiente de
potencial electroqumico de protones muy marcado (tngase en cuenta el valor de pH en
la vacuola, pH 5, y en el citoplasma, pH entre 7.0-7.5). La componente elctrica de la
fuerza ion motriz, generada por estas bombas, impulsa la entrada de aniones a la
vacuola y, el gradiente de pH (es decir, la asimetra en la concentracin de H+) se va a
aprovechar para incorporar cationes y azcares dentro de la vacuola, en contra de su
gradiente electroqumico, mediante un sistema de transporte activo secundario. Este tipo
de transporte se estudiar en detalle en el siguiente apartado.
Tabla 2.5. pH vacuolar de varias especies hiperacidificantes
Tejido
Especie
pH
Frutos
Lima (Citrus aurantifolia)

Limn (Citrus limonia)
Cereza (Prunus cerasus)
Pomelo (Citrus paradisi)
1.7
2.5
2.5
3.0
Hojas
Oxalis deppei
Begonia semperflorens
Begonia lucerna
Oxalis sp.
Rumex sp.
Opuntia phaeacantha*
1.3
1.5
0.9-1.4
1.9-2.6
2.6
1.4 (6:45 a.m.)
5.5 (4:00 p.m.)
* El pH vacuolar de Opuntia flucta a lo largo del da. Esta planta, como muchas suculentas, presenta un
tipo especial de fotosntesis denominada metabolismo cido de las crasulaceas (CAM), que provoca un
descenso del pH vacuolar durante la noche.
6.2.2.1.-
La ATPasa de protones vacuolar
La identificacin de los dos tipos de bombas presentes en el tonoplasto ha sido

posible gracias al desarrollo de tcnicas que permiten el aislamiento de vacuolas
purificadas. Gracias a estos trabajos se descubri la presencia en el tonoplasto de un
nuevo tipo de bomba ATPasa-H+, que como hemos comentado transporta protones
hacia el interior de la vacuola. La ATPasa de protones vacuolar (V-ATPasa) difiere de
la ATPasa de protones del plasmalema (P-ATPasa) en su estructura, mecanismo de
reaccin y tipo de inhibidores (ver Tabla 2.4). La ATPasa de protones vacuolar se
38

denomina de tipo V y se parece mucho ms a otras bombas de protones - las bombas FATPasas- presentes en mitocondrias y cloroplastos4. Mientras que las ATPasa-H+ de
tipo P, presentes en el plasmalema, estn constituidas por un solo pptido de 100 kDa,
las ATPasa-H+ de tipo V son complejos enzimticos de gran tamao, aproximadamente
de 750 kDa, compuestos por al menos 10 subunidades diferentes. Al igual que las FATPasas, las subunidades de las V-ATPasas se organizan en un complejo cataltico
perifrico, de apariencia lobulada muy caracterstica, V1, y un complejo canal integrado
en la membrana, Vo que facilita el transporte de protones (ver Fig. 2.18). Por la
similitud existente entre las F-ATPasas y las V-ATPasas se ha asumido que operan
como pequeos motores giratorios.
Adems, las V-ATPasas durante su accin no se forma un intermediario
fosforilado, y por tanto, no son sensibles a ortovanadato, un inhibidor de las PATPasas. Sin embargo, las V-ATPasas se inhiben especficamente con el antibitico
bafilomicina y por nitrato, compuestos que no afectan a las P-ATPasas (ver Tabla 2.4).
Figura 2.18. Modelo del motor rotatorio de una V-ATPasa. Como se aprecia en la
figura este complejo est constituido por varios polipptidos. El complejo cataltico V1
se puede disociar fcilmente del tonoplasto. Los distintos componentes estructurales de
este complejo cataltico se nombran con letras maysculas (A-H). El complejo V0,
forma un poro que permite el transporte de H+ hacia el interior del lumen vacuolar. Los
4
Es recomendable visitar la pgina web del profesor W. Junge. En ella se ilustra entre otros aspectos la
rotacin del complejo ATP sintasa del cloroplasto en la seccin titulada From light to ATP.
http://www.biologie.uni-osnabrueck.de/Biophysik/Junge/overheads.html
39

distintos polipptidos que forman el complejo V0 se designan con letras minsculas. Se

ha propuesto que la hidrlisis del ATP se cataliza en cada una de las subunidades A del
complejo cataltico V1. stas actan de forma secuencial y permiten la rotacin del eje
D y de las 6 subunidades c. Tomado de la pgina web del Dr. Forgac (Tufts University)
http://www.tufts.edu/sackler/physiology/faculty/forgac/
6.2.2.2.-
La pirofosfatasa de H+
En el tonoplasto, se encuentra otro tipo de bomba primaria de protones, la

pirofosfatasa de H+ (H+-PPasa), que participa junto con la V-ATPasa en la generacin
del gradiente de protones a travs del tonoplasto. Esta enzima consta de un nico
pptido que tiene un peso molecular de unos 80 kDa. La H+-PPasa utiliza la energa
resultante de la hidrlisis del pirofosfato inorgnico (PPi) para bombar protones al
interior de la vacuola. Conviene destacar que las plantas, al ser organismos ssiles,
tienen un metabolismo ms verstil que el de los animales. As, las clulas vegetales
pueden usar la energa de la hidrlisis del pirofosfato en algunas reacciones glicolticas
al igual que en el transporte de protones en el tonoplasto.
La H+-PPasa y otras enzimas que utilizan PPi son inducidas en algunas plantas
cuando los niveles de oxgeno son bajos (hipoxia) o por fro (chilling). En estas
situaciones, los niveles de ATP son muy reducidos por lo que se cree que estas enzimas
representan un sistema de reserva para mantener las actividades celulares esenciales en
situaciones de estrs.
Aunque la energa libre liberada por la hidrlisis del PPi es menor que la
liberada tras la hidrlisis del ATP, esta falta es compensada por el hecho de que la H+PPasa vacuolar slo transporta un protn por cada molcula de PPi hidrolizada, mientras
que la V-ATPasa parece transportar dos protones por molcula de ATP hidrolizada. As,
la energa disponible por ion de H+ transportado es aproximadamente la misma, y cada
enzima puede, de esta forma, generar el mismo gradiente de potencial electroqumico de
H+.
6.2.2.3.Los transportadores ABC
Otra familia de transportadores activos presentes en el tonoplasto y que obtienen
su energa de la hidrlisis del ATP son los transportadores denominados
transportadores ABC (del ingls, ATP-binding cassette) (ver Fig. 2.22). Estos
transportadores utilizan la energa procedente de la hidrlisis del ATP para transportar
molculas orgnicas, de tamao molecular elevado, a travs de la membrana,
independientemente del gradiente de H+ o del potencial electroqumico. Como las H+ATPasas de tipo P, los transportadores ABC forman un intermediario fosforilado
durante la catlisis, y por tanto se inhiben con ortovanadato.
6.3.- EL TRANSPORTE SECUNDARIO ACTIVO UTILIZA LA ENERGA

ALMACENADA EN LA FUERZA ION MOTRIZ
La fuerza protn motriz generada por el transporte electrognico de H+ por las

bombas primarias se puede utilizar para llevar a cabo el transporte de otras substancias
en contra de su gradiente de potencial electroqumico. En la Figura 2.19 se muestra
40

cmo podra operar este tipo de transporte. El transportador es una protena

transmembrana con un lugar de unin para los protones accesible desde el exterior de la
membrana. La unin con el protn hace accesible otro lugar de unin. Este lugar se une
al ion o molcula que se va a transportar activamente. Cuando las dos molculas estn
ligadas al transportador, ste sufre un cambio conformacional quedando los lugares de
unin expuestos en el otro extremo de la membrana. El ciclo se completa con la
difusin del protn y de la otra molcula ligada de sus lugares de unin, provocando
que el transportador vuelva a su conformacin original.
Figura 2.19. Modelo hipottico del transporte secundario activo. La energa conductora
del proceso puede acumularse como fuerza protn motriz (representado por un tringulo
en la derecha de A) y puede emplearse para incorporar un substrato (S) en contra de su
gradiente de concentracin (tringulo de la izquierda). (A) En la conformacin inicial,
los lugares de unin a la protena estn expuestos hacia la cara externa y pueden captar
un protn. (B) Esta unin provoca un cambio conformacional que permite la unin a la
protena del substrato, S. (C) La unin con S da lugar a otro cambio conformacional de
forma que quedan expuestos los lugares de unin y sus substratos en el interior de la
clula. (D) La liberacin del protn y de S en el interior de la clula restaura la
41

conformacin original del transportador y permite que ste inicie un nuevo ciclo.
Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
El ejemplo representado en la Figura 2.19 se denomina transporte

unidireccional o simporte (symport) porque las dos substancias se mueven en la
misma direccin a travs de la membrana. En el transporte de intercambio o
antiporte (antiport) la entrada de protones a la clula cuesta abajo favorece la salida
de un soluto en contra de su gradiente electroqumico (cuesta arriba) (ver Fig.2.20).
En ambos tipos de transporte secundario, el ion o el soluto que se transporta junto con
los protones lo hace en contra de su gradiente electroqumico, por lo que es un
transporte activo. Sin embargo, la energa conductora de este transporte proviene de la
fuerza ion motriz, y no de la hidrlisis del ATP. En el transporte secundario la entrada
de protones disipa la fuerza ion motriz generada por las bombas primarias y despolariza
la membrana. A diferencia del transporte primario, que genera una diferencia de
potencial elctrico y es, por tanto, electrognico, el transporte secundario disipa la
diferencia de potencial acumulada en la membrana y es electrofortico. Teniendo esto
en cuenta podemos afirmar que una clula depende de un sistema de transporte activo
primario acoplado a la hidrlisis del ATP para establecer un gradiente de potencial
electroqumico de un ion, por ejemplo, en el caso de las clulas vegetales de H+. Y,
utilizando este gradiente, otros muchos iones o compuestos orgnicos pueden
transportarse junto con uno o dos protones en contra de su gradiente. As, los H+
circulan a travs de la membrana, hacia el exterior mediante las bombas primarias y
regresan a la clula mediante los transportadores activos secundarios.
Figura 2.20. Dos ejemplos de transporte activo secundario acoplados a un gradiente de

protones. (A) Simporte, la energa disipada por la entrada de los protones a la clula es
acoplada a la incorporacin de una molcula a la clula, por ejemplo un azcar. (B)
Antiporte, la energa disipada por el regreso de los protones a la clula es acoplada con
la salida de una molcula de la clula, por ejemplo el ion sodio. En ambos casos, el
substrato en cuestin se mueve en contra de su potencial electroqumico. Tanto
substratos neutros como cargados puede ser transportados por este proceso. Tomado de
Taiz y Zeiger (1998).
42

En las plantas y en los hongos, los azcares y los aminocidos se toman

mediante transportadores de tipo simporte. Por consiguiente, cuando se aade glucosa a
clulas vegetales sumergidas en un medio salino simple, se observa simultneamente
una reduccin en el potencial de membrana, un aumento del pH externo y la toma de
glucosa (Fig.2.21). La disminucin del potencial de membrana se debe a la carga
positiva (H+) que entra en la clula junto con la glucosa. Esta despolarizacin de la
membrana es transitoria, sin embargo, debido a la reduccin del voltaje de la membrana,
la bomba de protones trabaja ms deprisa para restablecer el voltaje inicial y el
gradiente de pH mientras se produce la toma de glucosa.
Se piensa que la mayora de los gradientes inicos a ambos lados de la

membrana en las clulas vegetales superiores se generan y se mantienen por el gradiente
de potencial electroqumico de H+. Y este gradiente de H+ se genera por la accin de las
bombas de protones electrognicas. Se cree que el Na+ se transporta fuera de la clula
mediante un transportador tipo antiporte Na+-H+ y que el Cl-, NO3-, H2PO4-, sacarosa,
aminocidos y otras substancias entran en la clula mediante transportadores tipo
simporte especficos. El potasio cuando se encuentra a muy bajas concentraciones en el
exterior se incorpora a la clula mediante un transportador tipo simporte activo, pero a
altas concentraciones el K+ puede entrar por difusin mediante canales especficos de
K+. Sin embargo, hay que tener en cuenta que incluso el transporte a travs de un canal
est mediado por una ATPasa de H+, ya que la difusin del K+ viene dada por el
potencial de membrana, el cual se mantiene en valores ms negativos que los del
potencial de equilibrio para el K+ por la accin de la bomba electrognica. En la Figura
2.22 se representan varios procesos de transporte localizados en el plasmalema y en el
tonoplasto.
Figura 2.21. Efecto de la incorporacin de glucosa sobre el potencial de membrana y el

pH externo de la planta acutica Lemma gibba. La incorporacin de glucosa a la clula
se lleva a cabo mediante cotransporte con protones (ver figura de la izquierda). En la
43

figura de la derecha se observa que antes de la adicin de glucosa el pH del medio

externo es de 5.7 y el potencial de membrana de -250 mV. Cuando se aade 50 mM de
glucosa al medio, se observa un aumento del pH, lo que indica que los protones
desaparecen del medio externo, y al mismo tiempo se observa que el potencial de
membrana disminuye, debido a la entrada de H+ a la clula. Estas observaciones son las
esperadas durante el cotransporte de glucosa y protones. Con el tiempo, un aumento en
la actividad de la bomba restablece los valores de pH y de potencial de membrana
iniciales. Tomado de Taiz y Zeiger (1998) y Campbell & Reece (2002).
44

Figura 2.22. Esquema general con el que se pretende dar una visin general de los
distintos canales inicos y carriers presentes en el tonoplasto y plasmalema de las
clulas vegetales. Tomado de Taiz y Zeiger (2002)
45

6.4.- ANLISIS CINTICOS PERMITEN ELUCIDAR LOS MECANISMOS DE

TRANSPORTE
Hasta ahora hemos descrito el transporte celular en trminos energticos. Sin embargo,
el transporte celular puede estudiarse mediante el empleo de la cintica enzimtica ya
que, como hemos visto, el transporte mediado por protenas transportadoras o carriers
implica una unin y una disociacin de los solutos al sitio activo de las protenas. Una
ventaja de las aproximaciones cinticas es que abre nuevas perspectivas a la hora de
analizar la regulacin del transporte. As, en la difusin la velocidad de incorporacin
de una molcula es directamente proporcional a la concentracin externa de la molcula
transportada. Por el contrario, en el transporte mediado por un carriers el transporte se
satura, es decir tiende a una velocidad mxima (Vmax) que no puede excederse y que es
independiente de la concentracin del soluto. Vmax hace referencia a que el lugar de
unin del transportador est siempre ocupado, ligado al soluto (ver Fig. 2.23A) y es la
concentracin del transportador, y no la concentracin del soluto, la que se convierte en
el factor limitante del proceso. La constante Km, que equivale a la concentracin de
soluto que determina una velocidad de incorporacin igual a la mitad de la velocidad
mxima de transporte, refleja las propiedades de un lugar de unin dado. Es decir, la
velocidad de transporte, v, se ajusta a una curva de Michaelis-Menten:
v= Vmax S/ (Km +S)
donde S sera la concentracin del ion, o soluto, en el medio externo.
En general conviene tener en cuenta que el transporte de un ion puede ser tanto
activo como pasivo cuando se analiza un amplio rango de concentraciones para un
soluto dado. En la Figura 2.23B se muestra la incorporacin de sacarosa por los
protoplastos de soja en funcin de la concentracin externa de sacarosa. La
incorporacin aumenta bruscamente con la concentracin y comienza a saturarse a una
concentracin de 10 mM. A concentraciones superiores a sta, la toma de glucosa sigue
una cintica lineal y no saturable. La inhibicin de la sntesis de ATP bloquea el
transporte saturable pero no afecta al lineal. Estos resultados parecen indicar que la
toma de glucosa a bajas concentraciones se realiza mediante un transportador activo
(transportador tipo simporte sacarosa-H+) y a concentraciones mayores, la sacarosa
penetra en la clula a favor de su gradiente de concentracin y, por tanto, su
incorporacin no se ve afectada por la presencia de inhibidores de la sntesis del ATP y,
parece ser que el transporte no saturable se podra llevar a cabo mediante un
transportador de baja afinidad.
Algunos estudios cinticos del transporte de iones a travs de la raz muestran varias
componentes saturables para un mismo soluto (ver Fig. 2.24). Estos resultados se han
interpretado asumiendo la presencia de diferentes transportadores para un mismo soluto
en el mismo tejido, cada uno de ellos con un valor de Km diferente para el soluto
transportado (Epstein, 1972). En el caso del K+, recientemente, se ha caracterizado el
canal de la entrada de K+ y se han secuenciado y clonado los genes de los canales
moduladores de la entrada de K+ (inward-rectifying K+ channels) y de los
transportadores de tipo simporte. El sistema de transporte de alta afinidad responsable
de la toma de K+ a bajas concentraciones parece estar mediado por un transportador
secundario activo tipo simporte que incorporara K+ junto con H+ y que tambin
46

Velocidad
Carriers
Difusin
Concentracin externa del

soluto a transportar
Velocidad de incorporacin de sacarosa

(nmol x 106 clulas x h)
permite la entrada Na+ en lugar de H+. Recientemente, se ha aislado un gen en trigo

denominado HKT1, que codifica un transportador de alta afinidad por el K+ y que
incorpora K+ en cotransporte con Na+. La importancia fisiolgica de este sistema de
transporte que utiliza el gradiente de potencial electroqumico favorable a la entrada de
Na+ para impulsar la incorporacin de determinados nutrientes esenciales est an por
determinar. Por otra parte, anlisis cinticos detallados del sistema de transporte de baja
afinidad (toma de K+ a altas concentraciones de K+) revela que la velocidad de
incorporacin de K+ no es saturable, como inicialmente se pensaba, luego, el transporte
de baja afinidad del K+ se explicara de forma ms adecuada si se considera que la toma
de K+ se realiza a travs de un canal inico.
Observada
Predicha por la cintica de

Michaelis-Menten
Concentracin sacarosa (mM)
Figura 2.23. El transporte mediado por un transportador muestra cinticas de

saturacin, debido a la unin del soluto a transportar con el carriers. Sin embargo, la
difusin a travs de un canal inico es directamente proporcional a la concentracin del
soluto transportado (izquierda). El tipo de transporte de un soluto puede cambiar en
funcin de la concentracin de ste en el medio (derecha). Por ejemplo, a bajas
concentraciones (1 a 10 mM), la velocidad de incorporacin de la sacarosa por las
clulas de soja muestra una cintica saturable, tpica de un transportador o carriers. A
concentraciones de sacarosa superiores, si el transporte de sacarosa se llevara a cabo con
este transportador la velocidad mxima sera de 57 mol por 106 clulas por hora pero, lo
que se observa es una velocidad de incorporacin mayor y que sta aumenta de forma
lineal durante un amplio rango de concentraciones (50 mM), lo que sugiere la existencia
de otro tipo de transportador de sacarosa, probablemente un transportador de baja
afinidad por el substrato. Tomado de Taiz y Zeiger (2002).
47

Figura 2.24. El transporte de potasio en las races de cebada muestra dos fases
diferenciadas. Este tipo de cintica de incorporacin se denomina cintica bifsica y
sugiere la existencia de dos mecanismos para el transporte de potasio. El primero, sera
un sistema de transporte de alta afinidad, activo, de tipo simporte y con un valor de Km
para el potasio entre 0.02 a 0.03 mM y, el segundo, sera un sistema de baja afinidad
(que puede o no mostrar cinticas de saturacin) debido a la difusin del potasio a
travs de un canal. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
Se han observado cinticas de absorcin parecidas a las mostradas en la Fig. 2.24 para
otros cationes y aniones. As por ej., cuando la raz dispone de gran cantidad de sulfato,
el sistema de absorcin es de baja afinidad y constitutivo (se expresa siempre y por
tanto, continuamente disponible). Si el contenido de sulfato en el medio desciende hasta
valores inferiores al umbral crtico (que causan deficiencia), entonces se induce la
formacin de un segundo transportador de sulfato de elevada afinidad capaz de
trabajar de forma efectiva aun a concentraciones de sulfato micromolares.
7.-
TRANSPORTE DE IONES EN LA RAZ
Los nutrientes minerales absorbidos por la raz son transportados a la parte area
arrastrados por la corriente transpiratoria a travs del xilema. No slo la toma inicial de
nutrientes es un proceso muy regulado y altamente especfico, tambin lo es el
movimiento posterior de los iones minerales desde la superficie de la raz al crtex y, a
continuacin, al xilema. El transporte inico a travs de los distintos tejidos que
constituyen la raz obedece las mismas leyes biofsicas que gobiernan el transporte
celular. Sin embargo, la anatoma de las races impone ciertas restricciones especiales al
movimiento de los iones. A continuacin, vamos a discutir las rutas y los mecanismos
48

involucrados en el movimiento radial de los iones desde la superficie de la raz a los

vasos conductores del xilema.
7.1.- LOS SOLUTOS SE MUEVEN TANTO POR EL APOPLASTO COMO POR EL
SIMPLASTO
Hasta ahora, en nuestra discusin del transporte celular de iones no hemos incluido a la
pared celular. Cuando hablamos del transporte de pequeas molculas, la pared celular
podemos considerarla como un entramado de polisacridos y protenas abierto a travs
del cual los nutrientes minerales pueden difundir fcilmente (ver Apndice D: La pared
celular).
Compartimentos: clula
Pared celular
citosol
vacuola
plasmodesmos
Simplasto: espacio
constituido por el
citoplasma de las distintas
clulas que presenta
continuidad a travs de los
plasmodesmos
Ruta Transmembrana.
Los solutos y el agua se
mueven atravesando de
forma reiterada el
plasmalema y las paredes
celulares. Tambin pueden
penetrar al interior de la
vacuola.
Tonoplasto
Plasmalema
Compartimentos: tejidos
Simplasto
Apoplasto
Rutas de transporte lateral
Apoplasto: espacio
extraprotoplasmtico
constituido por las paredes
celulares y los espacios
areos y que puede
presentar continuidad en el
seno de un tejido
apoplasto
simplasto
Ruta Simplstica: las sustancias que entran al citoplasma, una

vez que han atravesado el plasmalema, pueden desplazarse
clula a clula va plasmodesmos. La compleja estructura de los
plasmodesmos probablemente regula esta va de transporte.
(Recordad que por esta va se desplazan ciertas protenas,
ARNm y otras molculas grandes como los virus)
Ruta Apoplstica. El agua y los

solutos disueltos en sta difunden a
travs de las paredes celulares y de
los espacios areos
Figura 2.25. Principales compartimentos presentes en las clulas vegetales y rutas de

transporte. A) La pared celular, el citosol y las vacuolas son los principales
compartimentos presentes en la mayora de clulas vegetales. El trfico de sustancias
entre estos compartimentos est regulado por protenas transportadoras especficas
(canales y carriers) presentes en el plasmalema y en el tonoplasto. B) A nivel tisular
existen dos compartimentos: el apoplasto y el simplasto. Esto va a proporcionar a los
tejidos u rganos de las plantas tres rutas para el movimiento radial de solutos,
transmembrana, simplstica y apoplstica. Conviene tener en cuenta que un soluto
puede pasar de una ruta de transporte a otra.
Debido a que todas las clulas vegetales estn rodeadas por la pared celular, los iones
pueden desplazarse a lo largo de un tejido a travs de las paredes celulares sin entrar en
49

el interior de clula (ver figura 2.25). Este espacio continuo constituido por todas las
paredes celulares se denomina espacio libre o apoplasto.5 Podemos determinar el
volumen del apoplasto de un tejido simplemente comparando la toma de agua marcada
con 3H y de manitol marcado con 14C. El manitol es un azcar-alcohol no permeable
que se equilibra en el espacio libre pero que no puede entrar a la clula. El agua, por el
contrario, permea libremente tanto en la clula como en la pared celular. Las medidas de
este tipo normalmente muestran que entre el 5 y el 20 % del volumen de un tejido
vegetal est ocupado por las paredes celulares.
Lmina media
plasmalema
Partculas proteicas adheridas a

la membrana externa del RE
Pared
celular
tonoplasto
Retculo
endoplsmico
(RE)
Citoplasma
vacuola
plasmodesmos
Partculas proteicas presentes en la Desmotbulo
cara interna del RE que forman el
denominado central rod y por tanto,
los plasmodesmos carecen de lumen
Partculas proteicas adheridas a

la membrana externa del RE
Partculas proteicas
incrustadas en la
membrana plasmtica que
rodea al plasmodesmo
Central rod
Plasmalema
Partculas proteicas
incrustadas en la
membrana plasmtica
Manga
citoplsmica
Microcanales
Seccin transversal de un plasmodesmo
Figura 2.26. Diagrama ilustrativo de cmo los plasmodesmos conectan el citoplasma de

clulas adyacentes. Los plasmodesmos son conexiones citoplasmticas que atraviesan la
pared celular entre clulas contiguas. Al hallarse unidos entre s los protoplastos de las
clulas vivas por medio de plasmodesmos, constituyen un simplasto nico. El
movimiento de sustancias a travs de los plasmodesmos se denomina transporte
simplstico. Dicho transporte puede controlarse, regulando el tamao de los
microcanales y permitir la entrada de molculas de mayor tamao. Tomado de Taiz y
Zeiger, 2002 y Buchanan et al., 2000.
La membrana plasmtica de las clulas vegetales, junto con dominios especficos del
retculo endoplsmico, forman una estructura denominada plasmodesmos. Los
plasmodesmos son puentes citoplsmicos (rodeados por membrana) que atraviesan las
paredes celulares y que permiten la comunicacin entre clulas adyacentes. Como
resultado de estas uniones, el citoplasma no aparece como un en espacio individualizado
5
Apoplasto. El apoplasto puede definirse como el espacio externo a la membrana plasmtica donde se
encuentra la pared celular y que puede presentar continuidad en el seno de un tejido
50

e independiente de las clulas contiguas, si no que se origina un compartimento

continuo, interconectado va plasmodesmos, que recibe el nombre de simplasto (Fig.
2.25). En consecuencia no slo las paredes celulares forman un espacio continuo en el
seno de un tejido. En clulas animales por el contrario, cada clula posee su propia
membrana y la comunicacin clula a clula se lleva a cabo mediante puentes proteicos
denominados unin en hendidura o gap que permiten el paso directo de pequeas
molculas entre clulas.
Los plasmodesmos son poros cilndricos de 20-60 nm de dimetro. Si se observa un
plasmodesmo en seccin transversal con el microscopio electrnico de transmisin
(MET), se advierte que estn constituidos por una doble membrana: la externa
corresponde a la membrana plasmtica y, la interna corresponde al desmotbulo, que es
un tbulo del retculo endoplasmtico. Entre ambas membranas hay un espacio
citoplsmico denominado manga citoplasmtica. Los componentes de la cara interna de
la biomembrana que forma el desmotbulo se fusionan entre s, de manera que el
desmotbulo no tiene lumen (Fig. 2.26). El transporte entre clula y clula est limitado
a la "manga citoplasmtica" que rodea al desmotbulo. Estudios con microscopa
electrnica de alta resolucin han demostrado que hay protenas globulares de enlace
("linking proteins") incrustadas en la membrana plasmtica que rodea al plasmodesmo,
y en la cara externa del desmotbulo. Estas protenas dividen la manga citoplasmtica
en microcanales que determinan el tamao mximo de las molculas que pueden
desplazarse por difusin al mismo tiempo que establecen el trfico selectivo de
macromolculas, que parece ocurrir por un proceso anlogo al transporte de molculas
entre el ncleo y citoplasma. As, mediante inyeccin de colorantes y estudios de
resistencia elctrica de las clulas que contienen gran nmero de plasmodesmos, se ha
demostrado que el agua, los iones y los pequeos solutos pueden moverse clula a
clula libremente a travs de los plasmodesmos.
7.2.- LOS IONES SE MUEVEN POR LAS RACES TANTO POR EL SIMPLASTO
COMO POR EL APOPLASTO
Si nos fijamos en la Figura 2.27, en la cual se representan los rasgos ms distintivos de

la estructura primaria de una raz, se puede apreciar que el apoplasto forma una sistema
continuo desde la superficie de la raz hasta el crtex pero, en el lmite entre el el crtex
y el cilindro vascular (la estela) se encuentra una capa de clulas especializadas: la
endodermis.
Las paredes radiales y tangenciales de la endodermis estn impregnadas con lignina y
suberina y estos depsitos hidrofbicos se conocen como banda de Caspari. La
existencia de la banda de Caspari en las clulas de la endodermis supone, dada su
hidrofobicidad, una barrera infranqueable en el camino hacia el xilema: tanto el agua
como los nutrientes deben obligatoriamente atravesar el plasmalema de las clulas que
componen la endodermis. La permeabilidad, selectividad y afinidad de los canales y
transportadores localizados en el plasmalema de las clulas de la endodermis
determinan, en ltima instancia, qu solutos y a qu velocidad se incorporan o se
liberan.
Teniendo en cuenta todo lo anterior, un ion puede desplazarse en direccin radial en la
raz siguiendo la ruta apoplstica , transmembrana o simplstica . Pero,
51

independientemente de la ruta seguida, los iones deben entrar al simplasto antes de

entrar a la estela debido a la presencia de la banda de Caspari. Una vez que el ion ha
entrado a la estela a travs de las conexiones simplsticas de la endodermis, difunde de
clula a clula hasta llegar al xilema. Finalmente, el ion vuelve a entrar al apoplasto y
difunde hacia las traqueidas o los elementos conductores del xilema.
Banda
Endodermis de
Caspari
Rutas
simplstica y
transmembrana
periciclo
xilema
floema
crtex
epidermis
Ruta apoplstica
Figura 2.27. Movimiento radial de iones a travs de la raz. El movimiento radial del
agua y los nutrientes a travs de la raz puede seguir tres rutas: transmembrana,
simplstica y apoplstica. La existencia de la banda de Caspari interrumpe el transporte
va apoplasto y los solutos deben atravesar el plasmalema de la endodermis. Esto
desempea una funcin decisiva, la de barrera selectiva, pues las fases lipdicas de las
membranas biolgicas son barreras efectivas contra la difusin no selectiva de iones
hacia el cilindro central de la raz. (Recordad que las barreras de semipermeabilidad
celular no estn en la pared celular, sino en las membranas y que, las cualidades
transportadoras de una biomembrana se determinan a partir de las protenas
transportadoras que contiene). Tomado de Taiz y Zeiger (2002).
La presencia de la banda de Caspari es de gran importancia ya que a) impide que el ion
pueda regresar mediante difusin hacia el exterior, es decir hacia el suelo, por la ruta
apoplstica y, b) permite que la planta pueda mantener una concentracin inica ms
elevada en el xilema que en la solucin del suelo que rodea a la raz. Es decir, la raz
como un todo, por la diferencia de concentracin osmtica entre el cilindro central y el
cortical y la existencia de una barrera semipermeable de paso obligatorio en el
52

transporte radial (endodermis), acta fsicamente como un osmmetro y puede generar

as una presin hidrosttica o presin radicular 6que puede facilitar la toma de
nutrientes, en condiciones de baja transpiracin, y reducir la cavitacin.
7.3.- LAS CLULAS PARENQUIMTICAS PARTICIPAN EN LA CARGA DEL

XILEMA
Una vez que los iones se encuentran en el simplasto deben pasar, desde la estela a los
elementos conductores del xilema para que puedan ser transportados hacia la parte area
de la planta. Como los elementos conductores del xilema son clulas muertas, los iones
deben salir del simplasto al apoplasto y, atravesar la membrana plasmtica por segunda
vez.
El proceso por el cual los iones salen del simplasto y entran en las clulas
conductoras del xilema se denomina carga del xilema. La carga del xilema es un
proceso que no se conoce todava con exactitud a pesar de haber sido objeto de
numerosos estudios.
Cmo pueden llegar los iones al xilema? Pues, como hemos visto a lo largo de
este mdulo los iones pueden entrar al xilema mediante difusin que, como sabemos
es un proceso pasivo. Aunque en este proceso de carga del xilema pasiva podra haber
alguna etapa (slo una) en la que pudiera haber un requerimiento de energa
metablica. Esta etapa en la que se podra ser necesaria una fuente de energa
metablica sera el paso de los iones a travs de la membrana bien en las clulas
epidrmicas, o del crtex o de las clulas endodrmicas. Segn este modelo de
difusin pasiva, los iones se transportara pasivamente hacia la estela va simplasto a
favor de su gradiente electroqumico, y podran salir de las clulas vivas de la estela
(posiblemente debido al poco oxgeno disponible en el interior de la raz; recordad que
es necesario el ATP para mantener la actividad de las bombas primarias y que un
Otra de las consecuencias de la presencia de la endodermis en la raz es la existencia

de la presin radicular, que se genera en el xilema de la raz y empuja el agua
verticalmente hacia arriba. Cuando la transpiracin es muy reducida o nula, como
ocurre durante la noche, las clulas de la raz pueden an secretar iones dentro del
xilema. Dado que los tejidos vasculares en la raz estn rodeados por la endodermis, los
iones no tienden a salir del xilema. De esta manera, el aumento de concentracin dentro
del xilema causa una disminucin del potencial hdrico del mismo, y el agua se
desplaza hacia dentro del xilema por smosis, desde las clulas circundantes. Se crea as
una presin positiva llamada presin de raz (presin radicular), que fuerza al agua y a
los iones disueltos a subir por el xilema hacia arriba. Las gotas de agua similares al
roco que aparecen a primeras horas de la maana, en plantas de pequeo porte ponen
de manifiesto la existencia de la presin radicular. Estas gotas no son roco sino que
proceden del interior de la hoja, este fenmeno lo conocemos con el nombre de
gutacin (del latn gutta, gota). La presin radicular es menos efectiva durante el da,
cuando el movimiento de agua a travs de la planta es ms rpido, debido a la
transpiracin. Esta presin no es suficiente para llevar el agua hasta la parte ms alta de
un rbol de gran porte, ms an, algunas plantas como las confieras no desarrollan
presin de raz. Por lo que su presencia no est generalizada y su intensidad, variable
segn las especies, suele ser baja.
53

cambio en la actividad de stas provoca un cambio en el potencial de membrana que

puede afectar a la actividad de los canales inicos) a las clulas conductoras del xilema.
Entre los trabajos que apoyan esta hiptesis de difusin pasiva se encuentran los
llevados a cabo por Bowling y colaboradores. Estos investigadores determinaron el
potencial electroqumico de varios iones en diferentes tejidos radiculares de maz
usando microelectrodos selectivos (ver Fig. 2.28). Observaron que algunos iones como
K+, Cl-, Na+, SO42-, y NO3- se toman de forma activa en las clulas epidrmicas y
corticales. Esto provoca un aumento de su potencial electroqumico, lo que facilitara su
transporte pasivo va simplasto a favor del gradiente de potencial desde estos tejidos
hasta el xilema. De hecho, se observa una cada en el potencial electroqumico de los
iones estudiados en el punto de liberacin al xilema (ver Fig.2.28).
alto
Potencial electro qumico
Cloro (Cl-)
Potasio (K+)
bajo
Solucin
exterior
Epidermis
Crtex
Endodermis
Parnquima
xilemtico
Elementos
del xilema
Banda de
Caspari
Tejidos
radiculares
Figura 2.28. Diagrama ilustrativo de los perfiles del potencial electroqumico del
potasio y el cloro en races de maz. Para determinar el potencial electroqumico, las
races se sumergen en una disolucin 1mM de KCl y 0.1 mM de CaCl2. El electrodo de
referencia se coloca en la solucin que baa la raz y el electrodo de medida (especfico
para ion) se introduce en los diferentes tejidos radiculares. En el eje horizontal se
muestran los diferentes tejidos que se encuentran en una seccin transversal de la raz.
El incremento substancial de potencial electroqumico para el K+ y el Cl- entre la
solucin externa y la epidermis indica que los iones son incorporados en la raz
mediante un mecanismo de transporte activo. Por el contrario, el potencial disminuye en
el xilema, lo que indica que los iones son transportados al xilema mediante difusin a
favor del gradiente de potencial electroqumico. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
54

Sin embargo, existen en la literatura otros estudios que indican que la etapa final
de la carga del xilema se lleva a cabo mediante un proceso activo en la estela (Lttge y
Higinbotham, 1979). Con un tipo de dispositivo como el que aparece en la Figura
2.29, es posible realizar medidas simultneas de la toma de iones dentro del citoplasma
de las clulas epidrmicas o corticales y de la carga del xilema. Mediante tratamientos
con inhibidores y hormonas vegetales, se ha visto que la toma de iones en el crtex y los
procesos de carga del xilema operan de forma independiente. As por ejemplo, los
tratamientos con inhibidores de la sntesis proteica, por ej., con cicloheximida, o con
una citoquinina, benziladenina, inhiben el proceso de carga del xilema pero no afectan
a la toma de iones en el crtex. Estos resultados sugieren que la salida de iones de las
clulas de la estela se regula de forma independiente a la toma de stos por las clulas
corticales.
Estudios bioqumicos recientes sugieren que las clulas parenquimticas del
xilema desempean un papel crucial en el proceso de carga del xilema. La membrana
plasmtica de las clulas parenquimticas del xilema contiene bombas primarias de
protones, acuaporinas, y una gran variedad de canales inicos tanto de entrada como de
salida de iones. En cebada, se han identificado dos tipos de canales para la salida de
cationes en las clulas parenquimticas del xilema: canales especficos para la salida de
K+ y canales no selectivos para la salida de cationes. La actividad de estos canales est
regulada tanto por el potencial de membrana como por la concentracin de calcio
citoslico (De Boer y Wegner, 1997). Este descubrimiento sugiere que el flujo de iones
de las clulas parenquimticas del xilema a los elementos conductores, no es un simple
proceso de difusin pasiva, sino que se encuentra bajo un estricto control metablico.
Figura 2.29. Medida de la toma de iones por la raz y de la carga del xilema. Podemos
medir la relacin entre ambos procesos simplemente colocando un segmento de raz
entre dos compartimentos y aadiendo un ion radiactivo en uno de ellos (el
compartimento A en este caso). La velocidad de desaparicin del elemento en el
compartimento A proporciona una medida de la toma de ese ion, y la velocidad de
aparicin en el compartimento B proporciona una medida de la carga del xilema.
Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
55

8.-
ABSORCIN FOLIAR DE NUTRIENTES
La raz es la principal va para la absorcin de nutrientes pero, stos tambin pueden ser
absorbidos por las hojas. En los ltimos aos, sobre todo debido a las altas exigencias
tecnolgicas de los cultivos, lo que implica un manejo ptimo y un estricto control de la
variable nutricional, est adquiriendo gran relevancia la tcnica denominada
fertilizacin foliar.
La nutricin foliar puede reducir el periodo de retardo (lag) entre la aplicacin y la toma
del nutriente por la planta, que puede ser importante durante la etapa de rpido
crecimiento. Puede tambin evitar el problema de toma limitada de nutrientes en el
suelo, muy particularmente para los micronutrientes. Por ejemplo, la aplicacin foliar de
nutrientes minerales como el hierro, manganeso, cobre es ms efectiva y econmica que
la aplicacin a travs del suelo, ya que stos son adsorbidos por las partculas del suelo
y por tanto, estn menos disponibles.
Cutcula
Capa
cuticular
Capa de
pectina
Pared celular
primaria
Pared celular
secundaria
Plasmalema
Citoplasma
ectodesmos
Figura 2.30. Estructura de la pared externa de una clula epidmica mostrando la

ordenacin de los ectodesmos (en rojo) y la influencia de los agentes surfactantes en la
adhesin de las gotas de solucin a la superficie. En la superficie de las paredes de las
clulas epidrmicas se deposita una capa especial compuesta por sustancias lipdicas
denominada cutcula. Es frecuente que en la superficie cuticular aparezcan excrecencias
creas ( C). A, retencin de una gota con surfactante (trazo verde); B, retencin de una
gota sin surfactante (trazo amarillo). Tomado de Guardiola y Garca (1990).
56

La toma de nutrientes por las hojas es ms efectiva cuando la solucin nutritiva

permanece en la hoja como una delgada pelcula. Para conseguir esta capa fina se suele
aadir a las soluciones nutritivas surfactantes qumicos, como el detergente Tween 80,
que reducen la tensin superficial. El movimiento de los nutrientes a la planta se cree
que se realiza mediante difusin a travs de la cutcula y penetracin al apoplasto del
mesfilo de donde, del mismo modo que los nutrientes transportados por el xilema, son
incorporados a las clulas o retransportado a otras partes de la planta. Tambin los
nutrientes pueden incorporase a travs de los ectodesmos, canales hidroflicos de
naturaleza extracitoplsmica que facilitan el intercambio entre el espacio interior de la
hoja y el exterior (Figura 2.30). Aunque la toma a travs de los estomas podra ser una
va de entrada de nutrientes se cree que la arquitectura del poro estomtico impide la
penetracin de lquidos (Fig.2.30).
9.-
RESUMEN
Las plantas intercambian solutos con el medio que las rodea y entre los diferentes
tejidos y rganos que forman el cuerpo de la misma. Tanto el transporte a nivel celular
como el transporte a largas distancias est controlado por las membranas celulares.
Las fuerzas conductoras que permiten el transporte biolgico, entre las que se
incluye el gradiente de concentracin, el gradiente de potencial elctrico y la presin
hidrosttica, se integran en una expresin conocida como potencial electroqumico. El
transporte de solutos a favor del gradiente qumico (i.e., difusin) se conoce como
transporte pasivo. El movimiento de solutos en contra del gradiente de potencial
electroqumico se conoce como transporte activo y requiere energa metablica.
La extensin con la cual las membranas permiten o restringen el movimiento de
una substancia se denomina permeabilidad. La composicin de la membrana y las
propiedades qumicas de los solutos son los principales determinantes de la
permeabilidad de la membrana. Cuando los cationes y los aniones atraviesan la
membrana a diferentes velocidades, se genera un potencial elctrico denominado
potencial de difusin. Para cada ion, la relacin entre la diferencia de voltaje a travs de
la membrana y la distribucin de un ion en el equilibrio se describe mediante la
ecuacin de Nernst. La ecuacin de Nernst muestra que la diferencia de concentracin
de un ion entre dos compartimentos est equilibrada con la diferencia de voltaje
existente entre dichos compartimentos. Esta diferencia de voltaje, o potencial de
membrana, se ha visto en todas las clulas vivas y, se genera por una distribucin
asimtrica de los iones dentro y fuera de las mismas. Todos los potenciales de difusin a
travs de la membrana se recogen en la ecuacin de Goldman. Las bombas
electrognicas, las cuales llevan a cabo el transporte activo y transportan una carga neta,
cambian el potencial de membrana del valor creado mediante difusin.
Las membranas contienen protenas especializadas, canales inicos,
transportadores o carriers y bombas primarias, que facilitan el transporte de solutos.
Los canales inicos son protenas transportadoras que atraviesan la membrana
formando poros por los cuales los solutos difunden a favor de su gradiente de potencial
electroqumico. Los transportadores se unen al soluto en un lado de la membrana y lo
liberan en el otro lado. La especificidad del transporte viene determinada por las
propiedades de los canales y de los transportadores.
57

En las plantas, una familia de bombas de protones, H+-ATPasas proporcionan la

fuerza conductora primaria para el transporte de sustancias a travs del plasmalema.
Otras dos bombas electrognicas de protones actan con este fin en el tonoplasto. Las
clulas vegetales tienen adems ATPasas que bombean Ca2+ y que participan en la
regulacin de la concentracin del calcio intracelular y transportadores ABC (ATPbinding cassette) que usan la energa del ATP para transportar grandes molculas a la
vacuola. El gradiente de potencial electroqumico generado por las bombas
electrognicas de protones es utilizado para transportar otras substancias en un proceso
denominado transporte secundario. Estudios genticos revelan la multitud de genes, y
sus correspondientes protenas transportadoras, que dan cuenta de la versatilidad del
transporte en las plantas. Estudios electrofisiolgicos llevados a cabo con la tcnica del
patch clamp permiten estudiar un nico canal, y por consiguiente, determinar la
permeabilidad y la actividad (gating) de un canal individual.
Los solutos se mueven entre las clulas bien por los espacios
extraprotoplsmicos (apoplasto) o por el citoplasma (va simplasto). Los citoplasmas de
clulas vecinas estn conectados por puentes citoplsmicos denominados
plasmodesmos, que facilitan el transporte por el simplasto. Cuando un ion entra en la
raz, puede entrar al citoplasma de una clula epidrmica o puede difundir por el
apoplasto hasta el crtex donde es incorporado al simplasto (debido a la presencia de la
banda de Caspari en la endodermis) y, desde ese punto, transportado hasta el
parnquima xilemtico del mismo modo que los iones de la ruta simplstica.
10.- APNDICES
10.1.- APNDICE A: RIZOTRONES
Para estudiar las races en el suelo se requiere de un mecanismo que nos permita
observarlas directamente. Ya en 1873, el botnico alemn Julius Sachs estudi el
sistema radicular usando un recipiente que tena una cara de cristal. En la actualidad,
existen grandes laboratorios que disponen de cmaras subterrneas para la observacin
del sistema radicular. Estas cmaras se denominan rizotrones (del Griego rhizos, que
significa raz y tron, que significa instrumento para el estudio) y permiten analizar
el crecimiento radicular mientras la parte area de la planta se encuentra expuesta a las
condiciones naturales.
En un rizotrn, las races crecen en una cmara con paredes de vidrio. Las cuadrculas
en el cristal indican la profundidad del suelo. Los detalles de la morfologa (tipo de raz
y distribucin) bajo condiciones naturales pueden observarse con unos microscopios
especiales, montados cerca de las paredes de cristal de la cmara. Adems, puede
medirse la cintica del crecimiento radicular simplemente tomando fotografas a
diferentes intervalos de tiempo. Los fisilogos vegetales utilizan esta informacin
(velocidad de crecimiento) y la relacionan con los cambios en la composicin de
nutrientes y con los niveles de agua disponible en el suelo para calcular la actividad de
la races a lo largo del perfil del suelo.
58

Debido al elevado coste que conlleva construir y mantener un rizotrn, stos se han
substituido por minirizotrones o periscopios de races. Los minirizotrones son tubos
transparentes de plstico que se introducen en el suelo con un cierto ngulo de
inclinacin y cerca de la planta que quiere examinarse. Un dispositivo ptico como un
espejo inclinado con una lente de aumento o una pequea videocmara se introduce en
el tubo para observar las races (ver figura). Este dispositivo proporciona informacin
sobre la densidad de races en el suelo, el crecimiento y fenologa de la misma.
10.2.- APNDICE B: TCNICA DEL PATCH CLAMP
El uso de la tcnica denominada patch clamp en el estudio de las membranas vegetales

ha permitido obtener informacin muy til de las propiedades de las membranas que
difcilmente se podra haber obtenido con otras tcnicas. Los estudios
electrofisiolgicos convencionales con electrodos intracelulares son vlidos para la
determinacin, a nivel macroscpico, del potencial de membrana y otras propiedades
elctricas de las clulas vegetales. Hubo que esperar a los aos setenta para que el
examen aislado de los canales de iones se convirtiera en realidad. La tcnica del
pinzamiento de membrana (patch clamp), por cuyo descubrimiento recibieron en Nobel
de Fisiologa en 1991 los profesores Neher y Sakmann, permiti acceder a esos detalles
Esta tcnica consiste en adherir (que no insertar) un electrodo de punta roma a la
superficie de la membrana y se puede registrar la corriente que entra en la pipeta a
travs de la zona de la membrana unida a la clula o separada de sta (Figuras 1 y 2). La
pipeta se llena con una solucin de electrolito y, junto con la membrana, se coloca en
una solucin que contiene un segundo electrodo. Posteriormente se mide el flujo de
corriente que se produce al aplicar una serie de voltajes entre los electrodos.
Obviamente, para aplicar esta tcnica a clulas vegetales es necesario disgregar las
clulas del tejido y eliminar la pared celular mediante un tratamiento enzimtico. Se
59

obtiene de este modo una clula vegetal sin pared celular que se denomina protoplasto.
La adhesin del extremo de la micropipeta (con un dimetro de 1m) con el protoplasto
se denomina sellado y debe tener una resistencia elevada, normalmente se sita
alrededor de 109 ohmios (G), que permite reducir el ruido de fondo (debido a la
ruptura) lo suficiente para obtener una alta resolucin de la corriente asociada al flujo
inico de un solo canal.
Figura 1. Micrografa de una micropipeta empleada en la tcnica del patch clamp unida
a la superficie de un protoplasto de una clula de la aleurona de cebada. Tomado de
Taiz y Zeiger, 1998.
Cuando se consigue un sellado firme se puede seguir succionando y quitar la
porcin de membrana delimitada por la apertura de la micropipeta de forma que, el
interior de la clula se encuentra en contacto con la solucin de la micropipeta (as se
pueden introducir diferentes soluciones dentro de la clula a travs de la micropipeta).
En esta configuracin denominada en clula total (ver Fig. 2), la corriente elctrica
medida refleja la suma total del flujo inico, tanto activo como pasivo, a travs de la
membrana de la clula entera es decir, se puede registrar el comportamiento elctrico de
la clula de forma similar a como se hara con un microelectrodo pero, podemos alterar
la composicin qumica de la clula permitiendo que diferentes compuestos difundan
desde la pipeta al citoplasma.
Si en vez de succionar tiramos del electrodo se consigue una pequea porcin de
membrana, un parche, separada de la clula. Debido a que estas zonas de la membrana
contienen muy pocos canales, esta configuracin (membrane patch configuration, ver
Fig. 2) permite estudiar los cambios bruscos de corriente provocados durante la apertura
y el cierre de unos pocos canales e incluso esta tcnica es lo suficientemente sensible
para detectar los cambios en la conformacin de un solo canal (Figura 3).
Como los protoplastos son esfricos es fcil determinar su volumen y la ausencia
de conexiones elctricas con otras clulas facilita los clculos de flujos inicos por
unidad de rea de membrana. Otra ventaja del mtodo del patch clamp es la capacidad
para distinguir entre un suceso elctrico de la membrana plasmtica y del tonoplasto y la
posibilidad de controlar la composicin tanto del citosol como la de la solucin de
referencia.
60

Figura 2. Esquema de la configuracin de la pipeta y del protoplasto en un experimento

de path clamp. La pipeta debe quedar firmemente adherida al exterior de la clula
(sellado) tras lo cual, succionando o tirando, se puede acceder al interior de la clula
(whole-cell configuration) o retirar una pequea porcin del plasmalema (membrane
patch configuration). En el primer caso se registra la actividad de los sistemas de
transporte de toda la clula y, en el segundo, la actividad de los que se encuentran
incluidos en el pequeo trozo que se retira. Tomado de Taiz y Zeiger, 1998.
Los experimentos de patch clamp revelan que los canales estn abrindose y
cerrndose continuamente a una velocidad altsima (Fig. 3). A esta propiedad de abrirse
y cerrarse se denomina gating y la probabilidad de apertura refleja la actividad del
canal. El flujo de iones que pasa a travs de los canales es, pues, un proceso
discontinuo. La cantidad de iones que fluyen a travs de un canal cuando est abierto,
est determinada por su conductancia y por la magnitud de la fuerza ion motriz (AzcnBieto y Taln, 2000). Cuando el nmero de canales abiertos aumenta en respuesta al
potencial de membrana, los canales se denominan canales regulados por voltaje
(voltage-gated-channels).
La representacin grfica de la intensidad de corriente que atraviesa los canales
en funcin del voltaje que se aplica da lugar a las denominadas curvas I-V
(intensidad/voltaje), cuya pendiente es una medida de la conductancia del canal (Figura
3). Asumiendo que el flujo de iones a travs de la bicapa lipdica de las membranas es
nulo, la permeabilidad de una membrana para un determinado ion es un valor integrado
del nmero de canales, su conductancia y su actividad (gating) (Azcn-Bieto y Taln,
2000).
Los canales ms abundantes en el plasmalema y en el tonoplasto son los canales de K+.
Actualmente, se conoce que la entrada y la salida de K+ estn reguladas por dos tipos de
canales (Maathuis et al., 1997). Los canales que modulan la salida de K+ (outwardrectifying channels) se abren slo cuando el potencial de membrana favorece la salida
mediante difusin de K+ y, los canales moduladores de la entrada de K+ (inwardrectifying channels) se abren slo cuando el potencial de membrana favorece la entrada
mediante difusin del K+. Como cada tipo de canal tiene sus propios mecanismos de
61

regulacin, la clula puede controlar la velocidad de la difusin, tanto la de entrada

como la de salida, de forma independiente. Adems, la actividad de los canales es
sensible a una serie de estmulos ambientales y fisiolgicos como luz, hormonas,
toxinas, etc. Por ejemplo, un aumento de la concentracin de calcio citoslico en el
citoplasma de las clulas oclusivas, en respuesta a la oscuridad o al cido abscsico,
induce el cierre de canales de entrada de K+ y la apertura de canales de salida de K+ y de
canales aninicos, lo que determina la prdida de turgencia de las clulas oclusivas y, en
consecuencia, el cierre del estoma (Azcn-Bieto y Taln, 2000).
Figura 3. Registro continuo de la intensidad de corriente asociada al flujo de K+ a

travs de segmento de plasmalema durante un experimento de pinzamiento de
membrana (patch-clamp). La intensidad de corriente que atraviesa los canales es
proporcional a la diferencia de potencial elctrico aplicado a ambos lados de la
membrana. En este caso, se trata de un canal reversible. La representacin grfica de la
intensidad de corriente que atraviesa los canales, en funcin del voltaje aplicado, da
lugar a las curvas I-V, cuya pendiente es un estimador de la conductancia del canal.
Tomado de Azcn-Bieto y Taln ( 2000).
62

10.3.- APNDICE C: TEORA QUIMIOSMTICA
El trmino quimiosmosis fue introducido por el premio Nobel britnico Peter

Mitchell para explicar el acoplamiento entre el gradiente de potencial electroqumico de
los protones a travs de una membrana selectivamente permeable y la realizacin de
trabajo celular.
En las plantas, el gradiente de protones desempea un papel crucial 1) en el transporte a
travs de las membranas (sobre todo del plasmalema y del tonoplasto) y 2) en la
sntesis de ATP mediante fosforilacin oxidativa y fotofosforilacin (procesos que tiene
lugar en las membranas internas de las mitocondrias y del cloroplasto).
El paso de protones a favor de su gradiente elctrico y qumico puede emplearse para
llevar a cabo un trabajo celular debido a que el cambio en la energa libre es negativo.
Este proceso puede representarse mediante la siguiente ecuacin:
G= H+ = FE + 2.3 RT log ([H+]i/[H+]e)
donde H+ es el gradiente de potencial electroqumico de protones, F es la constante de
Faraday, E es el potencial de membrana, R es la constante de los gases, T es la
temperatura absoluta, y los superndices i y e hacen referencia al interior y al
exterior de la clula respectivamente, o de cualquier otro compartimento.
Mitchell introdujo el trmino fuerza ion motriz(p) para indicar la diferencia
de potencial electroqumico entre los protones dentro y fuera de la clula. Es
conveniente expresar p en unidades de potencial electroqumico, para ello hay que
dividir ambos trminos por la constante de Faraday:
p= H+ = E + 2.3 RT log ([H+]i/[H+]e)
F
F
Como pH=-log [H+], el trmino log([H+]i/[H+]e) se puede simplificar a (pHi-pHe). Si
pH se define como pHi-pHe, la expresin general para la fuerza protn motriz quedara
como:
p= H+ = E - 2.3 RT log pH
F
F
A 25C, 2.3RT/F= 59 mV, y si sustituimos este valor, la expresin resultante
para la fuerza ion motriz sera:
p= E 59 pH
donde p se expresa en milivoltios.
Consideremos el siguiente ejemplo, una clula baada por una solucin de 1 mM
KCl y 1 mM de sacarosa, un potencial de membrana de 120 mV y como resultado del
bombeo de protones por una H+-ATPasa la diferencia de pH entre el interior y el
63

exterior de la clula de dos unidades de pH. As, si empleamos la ecuacin anterior

obtendramos:
p =-120 mV-59(2) mV= - 238 mV
Cunto potasio puede entrar en la clula usando este p? Debido a que el potasio tiene
carga positiva y el potencial de la membrana dentro de la clula es negativo, el potasio
puede entrar a travs de los canales inicos por la componente elctrica de p, que
equivale a -120 mV. Usando la ecuacin de Nernst podemos calcular que en el
equilibrio con una concentracin externa de 1 mM de K+ y un E= -120 mV, la
concentracin de K+ en el interior de la clula ser de 100 mM. Esto es, la componente
elctrica de la fuera protn motriz, p, se ha usado para generar una asimetra de
concentracin de 1/100 para el potasio a ambos lados de la membrana.
La fuerza protn motriz puede usarse tambin para la incorporacin de sacarosa (un
compuesto que no tiene carga) en contra de su gradiente de concentracin. El transporte
de sacarosa en plantas se lleva a cabo mediante un transporte con protones de tipo
simporte. Como la sacarosa se cotransporta junto con los protones, intervendrn en su
transporte las dos componentes del potencial electroqumico (es decir, la componente
elctrica y el gradiente de pH; -238 mV en nuestro ejemplo).
s utilizando las frmulas descritas en la pgina 14 de este mdulo es:
s
= si - se
= 2.3 RT log (Csi/Cse)
En el equilibrio, H+ = Fp= 2.3 RT log (Csi/Cse)

log Csi/Cse = (Fp)/( 2.3 RT)
As, podemos calcular que para una concentracin externa de sacarosa de 1 mM (10-3
M), un p de 238 mV se equilibrar con una concentracin interna de sacarosa de 10
M. Hay que tener en cuenta que este gradiente de concentracin tan elevado no se puede
conseguir en los sistemas biolgicos ya que las clulas cuentan con mecanismos que
regulan la concentracin de solutos y alcanzados ciertos niveles, se bloquean los
transportadores, lo que impide su transporte.
10.4.- APNDICE D. LA PARED CELULAR Y EL POTENCIAL DE DONNAN
La pared celular es una estructura altamente organizada compuesta por una red
tridimensional de microfibrillas de celulosa que se encuentran embebidas en una matriz
constituida por polisacridos (hemicelulosas y pectinas), protenas y fenoles en una
solucin ligeramente cida. La pared celular confiere fuerza mecnica a la clula
vegetal e impide la entrada de organismos potencialmente patgenos. Este entramado de
redes polimricas que constituyen la pared celular acta a modo de filtro, restringiendo
64

la difusin de las molculas en funcin de su tamao. El dimetro de los poros de las

paredes celulares oscila entre 3.5-5 nm. Es obvio que el tamao de los poros no
restringe la difusin de molculas cuya masas molecular sean inferiores a 15 kDa. Pero
la pared posee algunas caractersticas que van a limitar la difusin de pequeas
molculas. Por ejemplo, el camino entre las microfibrillas es muy tortuoso y la difusin
va a ser mucho ms lenta que los procesos de difusin libre. Adems, la pared celular
posee gran cantidad de cargas negativas residuales debidas a la presencia de grupos
carboxlicos disociados (i.e., los cidos galacturnicos de las pectinas y glucurnicos de
los xilanos), que convierten a la pared celular en un intercambiador de iones (un sistema
Donnan), con importantes consecuencias para la concentracin de iones concretos en las
cercanas de la membrana plasmtica: los cationes se acumulan en la pared celular y los
aniones son excluidos (Grignon y Sentenac, 1991).
Figura 1. Estructura del principal componente de las pectinas, el cido D-galacturnico. Los grupos carboxilo libres de los restos galacturosil pueden estar
disociados y dar lugar a la formacin de puentes de calcio.
El apoplasto haciendo referencia a la solucin acuosa que se encuentra en l, se
denomina espacio libre aparente (ingls apparent free space, AFS). La absorcin en
el AFS, al no ser un proceso metablico, no resulta influida de modo considerable por
las bajas temperaturas ni por los inhibidores del metabolismo, o sea que las sustancias
en el AFS pueden ser fcilmente arrastradas de nuevo al exterior. El AFS se subdivide
en dos partes para las partculas cargadas: en el espacio libre acuoso (ingls, water free
space, WFS) los iones difunden en la solucin que se encuentra en el apoplasto; en el
espacio libre de Donnan (Donnan free space, DFS) se fijan por accin de las cargas del
apoplasto: AFS= WFS+DFS (ver figura 2).
Estas cargas netas no pueden difundir a travs de la pared, se encuentran fijas en
la misma, por lo que se genera un potencial conocido como potencial de Donnan. Este
potencial tambin aparece en el plasmalema y en todas aquellas fases capaces de
mantener cargas no difundibles. El potencial de Donnan se define como el potencial de
difusin que ocurre cuando un contrain no puede difundir a travs de la membrana,
bien porque es impermeable o bien porque se encuentre fijo. Los aniones fijados o con
difusin dificultada (por ej., grupos carboxilo disociados) atraen a los cationes
libremente mviles de los alrededores. Si este proceso contina hasta la neutralizacin
de las cargas fijadas, se alcanza la neutralidad elctrica, pero queda un gradiente
65

qumico para los cationes, desde el mbito ms prximo (compartimento 1) al ms

remoto (compartimento 2) respecto a los aniones fijados; es decir que el sistema no est
en equilibrio. As pues, difunden cationes de 1 a 2, hasta que las fuerzas motrices
(gradiente de potencial por un lado, gradiente de concentracin por otro) se equilibran.
El equilibrio resultante se llama equilibrio de Donan. Se caracteriza porque la fase de
Donan que contiene los iones fijados no difundibles presenta una concentracin total de
iones superior a la fase externa y porque se mantiene un gradiente de potencial
(potencial de Donan) cuya direccin viene dada por la carga del ion no difundible; en el
caso que est fijado un anin, la fase de Donan en equilibrio con el entorno est siempre
cargada negativamente. Veamos lo expuesto con un ejemplo numrico. Imaginemos dos
compartimentos separados por una fase de Donnan, en un compartimento, por ejemplo
en el interior, hay cargas negativas no difundibles, por ejemplo P-, mientras que en el
compartimento exterior, e, existen iones difundibles como el K+ y el Cl-. Inicialmente,
debemos suponer que existe equilibrio de cargas es decir, se cumple que:
[K+]e = [Cl-]e
[K+]i = [P-]i
En esta situacin, el Cl- difundir desde el exterior, e, hacia el interior, i, y los iones K+
le acompaarn por el efecto de cargas. Si llamamos Ce a la concentracin inicial de
K+e, que es igual a la de Cl-e, y Ci a la concentracin inicial de K+i y x a la cantidad de
K+ = Cl- que difunde del compartimento e al i, en el equilibrio, los productos de los
iones difundibles debe ser igual
[K+]e [Cl-]e = [K+]i [Cl-]i
o bien
(Ce - x) (Ce - x) = (Ci + x) x
Si consideramos que Ce = 10 y Ci= 5, tendremos
(10 x) (10 x) = (5 + x) x
100 20x + x2= x2 + 5x
x=4
En el equilibrio tendremos que la concentracin del K+ ser Ce= 6 y Ci= 9; es decir, los
iones potasio han penetrado en contra de gradiente de concentracin, mientras que para
el Cl- su Ce= 6 y Ci= 4, por lo que los iones cloruro han penetrado a favor de gradiente.
66

A
2
Espacio
libre de
Donnan
(DFS)
Apoplasto
Espacio
libre
acuoso
Plasmalema
Espacio
libre
aparente
Espacio
libre de
Donnan
(DFS)
Figura 2. Distribucin de Donnan. A. Establecimiento de un potencial de Donnan. Para

los cationes (+), los compartimentos 1 y 2 son permeables; en cambio los aniones (rojo)
son impermeables y se encuentran exclusivamente en el compartimento 1. Los cationes
difunden siguiendo su gradiente de concentracin desde 1 hacia 2 hasta que el potencial
elctrico que se forma compensa al gradiente de concentracin, momento en que se deja
de percibir un flujo neto de cationes. El potencial que se forma en una membrana
selectivamente permeable se llama potencial de Donnan. B. Representacin
esquemtica del espacio libre aparente formado por el espacio libre de Donnan y el
espacio libre acuoso en los apoplastos de las clulas vegetales. El grfico ilustra que en
los apoplastos, los iones disueltos en agua pueden permanecer en el espacio de acceso
libre a la difusin (WFS) pero adems tambin junto a las estructuras superficiales del
plasmalema y junto a los polmeros cargados de la pared celular respectivamente (DFS),
establecindose as distribuciones de donan. Ambos compartimentos forman el espacio
aparentemente permeable a los iones del apoplasto (AFS). Tomado de Sitte et al.
(2004).
67

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