CROMATOGRAFA LQUIDA HPLC

Laboratorio 1: Introduccin al trabajo en HPLC

Contenido

Conocimiento y operaciones fundamentales de un cromatgrafo lquido de alta presin. Determinacin

del tiempo muerto.

Separacin e identificacin de xantinas, mediante el uso de patrones y estudio de precisin para los
tiempos de retencin y las reas.

Elaboracin de curva de calibracin para teofilina, utilizando un patrn interno, usando como ordenada
la razn de las reas y determinacin de una muestra problema.

Estudio del tiempo de retencin y separacin para las xantinas en funcin de distintos flujos de fase
mvil.
Instrumentos

Cromatgrafo HPLC Waters, equipado con bomba isocrtica Waters modelo 510

Detector UV-vis, de longitud de onda variable, Waters modelo 486

Inscriptor integrador Waters modelo 746 data module

Columna cromatogrfica C18, Waters Bondapak, 3,9 x 150 mm.

Equipo de filtracin y desgasificacin de solventes.

Reactivos
Patrones de teobromina, teofilina y cafena.
Metanol calidad HPLC
Agua purificada a travs de columna Milli-Q
Desarrollo
1.
Trabajando con una fase mvil (30:70 = metanol:agua) a un flujo de 1 mL/min y utilizando una longitud
de onda de 260 nm, se realizan las siguientes determinaciones:

Orden de elusin para cafena, teobromina y teofilina, utilizando las soluciones descritas en la
tabla 1

Tiempo muerto (to), realizando una inyeccin de metanol puro.

Precisin para teofilina y cafena para los tiempos de retencin, utilizando las soluciones descritas en la
tabla 1.
Utilizando las soluciones descritas en la tabla 1, determinar: a) La sensibilidad de la curva de calibracin
obtenida con esas soluciones, b) Los parmetros estadsticos de regresin, c) El lmite de deteccin y
de cuantificacin y d) La concentracin de una muestra problema.
Tabla 1. Soluciones de xantinas para la curva de calibracin
N del tubo
Teofilina (ppm)
1
3.0
2
9.0
3
18.0
4
27.0
5
36.0
6
45.0

Cafena (ppm)
15.0
15.0
15.0
15.0
15.0
15.0

2. Trabajando con la solucin rotulada Q1+Q2+Q3, con la fase mvil (30:70 = metanol:agua), utilizando la
longitud de onda de 260 nm, trabajar a diferentes flujos de fase mvil, entre 0,7 y 1,2 mL/min.
Analice como influyen los flujos de fase mvil sobre los tiempos de retencin, la resolucin y la varianza de
las seales cromatogrficas.
Laboratorio 2: Determinacin de Cafena en caf, t o bebidas
Contenido
Elaboracin de curva de calibracin para cafena

Determinacin de cafena en una muestra problema.

Desarrollo
1. Trabajando con una fase mvil (30:70 = metanol:agua) a un flujo de 1 mL/min y utilizando una longitud de
onda de 254 nm, se realizan las siguientes determinaciones:
a) Construccin de curva de calibracin entre 3 y 30 ppm, a partir de solucin estndar ( todas las
soluciones se diluyen en fase mvil).
b) Tratamiento de la muestra (en triplicado)
- Desgasifique 10 mL de bebida, utilizando un sonicador
- Si la muestra es slida, pese la muestra, disulvala en agua caliente, enfrela y transfirala
cuantitativamente a matraz de 100 mL.
- Filtre la solucin o bebida
- Realice dilucin de la muestra, utilizando fase mvil
c) Encienda el equipo y seleccione las condiciones cromatogrficas
d) Inyecte las soluciones de cafena preparadas y confeccione una curva de calibracin
e) Inyecte las muestras reales

f)

Determine la concentracin de cafena en las muestras reales.

CROMATOGRAFA EN FASE GASEOSA

Objetivos, sesin 1 (cromatgrafo N1)

Explicacin del cromatgrafo de gases y su funcionamiento

Determinacin del tiempo muerto (uso de metano)
Determinacin del orden de elusin de tres steres y su identificacin mediante los tiempos de
retencin.
Estudio del efecto de la temperatura de anlisis en la varianza de la seal cromatogrfica, el tiempo de
retencin y la resolucin de dos seales adyacentes.
Clculo de la concentracin del undecanoato de metilo y pentadecanoato de metilo a travs del mtodo
del patrn interno (tridecanoato de metilo).
Condiciones de trabajo: Temperatura de trabajo 160C (isotrmico), inyector y detector 250 C. Inyectar
aproximadamente 2 L para todos los casos. Los solventes para todas las soluciones son: n-hexano y
n-pentano. Analitos usados: undecanoato de metilo, tridecanoato de metilo y pentadecanoato de metilo.

Modo de proceder, significados, anlisis de resultados, otros aspectos varios y conclusiones sern
discutidos con el Profesor.

Objetivos, sesin 2 (cromatgrafo N1)

Determinacin de existencia o no existencia de inversin en las elusiones de undecanoato de metilo,

tridecanoato de metilo y pentadecanoato de metilo versus las temperaturas de trabajo. Estudio de log t r
vs. 1/T. Significado de las pendientes de las funciones y sus posibles puntos comunes. Trabajar en un
rango de temperatura entre 160C y 210C con incrementos de 5C.

Objetivos, sesin 2 (cromatgrafo N2)

Determinacin en una curva de calibracin la posible presencia de errores sistemticos tanto en los
valores del intercepto como en la pendiente. Se utilizar una curva de calibracin consistente en nheptano en n-hexano como solvente. Determinacin del lmite de deteccin y cuantificacin. El anlisis
se realizar a 32C.

Determinacin de n-heptano como analito contaminante en n-hexano. Uso del mtodo de adiciones
estndares. El anlisis se realizar a 32C.

Dada una muestra de n-pentano, n-hexano y tolueno disear un programa de temperatura con el cual
se obtengan las mximas separaciones de las seales en un menor tiempo posible.

Modo de proceder, significados, anlisis de resultados, otros aspectos varios y conclusiones sern
discutidos con el Profesor.

ESPECTROFOTOMETRA DE ABSORCIN Y EMISIN ATMICA

Demuestra la aplicacin de la espectrofotometra de absorcin atmica (E.A.A.) y de emisin atmica

determinaciones cuantitativas.

en

Contenido
Se examinan los componentes de un espectrofotmetro de absorcin atmica en su modalidad absorcin, su
puesta a punto y los factores que afectan los resultados analticos.
Se preparar una curva de calibracin para cobre y se analizarn los criterios de eleccin de la lnea espectral de
trabajo, tipo de llamas, relacin combustible-oxidante, basado en el libro de mtodos del instrumento
Se compara con las caractersticas de un fotmetro de llama de filtro sencillo mediante el cual se efectan
mediciones de K+
Instrumentos y Materiales

Espectrofotmetro de Absorcin Atmica Perkin-Elmer serie 3110.

Lmpara de ctodo hueco de Cu, Aire comprimido libre de aceite, acetileno, con sus vlvulas reguladoras
respectivas
Fotmetro de llamas JENWAY modelo PFP7, equipado con compresor de aire y baln de gas licuado
Matraces aforados de 100 mL.
Pipetas, buretas, frascos plsticos

vasos pp 250 mL, 100 ml, embudos, papel filtro.

Reactivos

Agua destilada
Soluciones patrn de Cu (1000 mg/mL, 100 mg/mL),

Soluciones patrn de K+ de 500 mg/L

DESARROLLO PARTE ABSORCIN ATMICA

Calibracin y optimizacin del instrumento con una solucin de Cu 4.0 mg/L (sensitivity check)
Realizacin de una curva de calibracin para Cu. (registro manual de valores de absorcin, clculo de la curva
de calibracin).
Calibracin directa mediante software del equipo,
Determinacin de la concentracin de una muestra conocida por ambas vas, determinacin de parmetros de
calidad analticos.

Ajustes del Instrumento

I)
II)
III)
IV)

Ingreso de los parmetros de trabajo al instrumento: [PARAM ENTRY]

Instalacin, encendido alineacin lmpara de ctodo hueco para Cu, ajuste de slit y longitud de onda.
Encendido y optimizacin de la llama
Chequeo de la optimizacin mediante la concentracin caracterstica (sensitity check):
Con una solucin de Cu de 4 mg/L optimice la calibracin del instrumento (posicin de mechero, flujo de
aspiracin, tipo de llama) Con esta solucin (Sensitivity Check) se espera una seal aproximada a 0.2 unidades
de absorbancia a 324.8 nm en condiciones ptimas. El operador puede determinar de esta manera si los
parmetros instrumentales se han optimizado y si el instrumento est funcionando de acuerdo a las
especificaciones.

Utilice la pginas de Condiciones Estndar para los diferentes elementos y que se encuentran en el "Libro de
Cocina", para establecer las condiciones de trabajo para cada elemento en particular (longitudes de onda, slit,
sensibilidad, sensitivity check, rango lineal, otros).
Curva de calibracin ordinaria

A partir de la solucin stock de 100 mg/L de Cu prepare soluciones que contienen 1.0, 4.0, 5.0, 10,0 y 15
ppm Cu, por dilucin en matraces aforados de 100mL.
Almacene todas las soluciones en frasquitos plsticos para evitar contaminacin.
Ingrese los parmetros para la curva de calibracin digitando las concentraciones de los estndares en el
men de calibracin.
Genere una curva de calibracin, leyendo secuencialmente los patrones preparados, paralelamente
registre los valores de absorbancia para generar una curva de calibracin manualmente.
Lea las muestras, obtenga la concentracin de la muestra por ambas curvas
Repita la medicin de muestra, calcule la concentracin y estadgrafos.
Considere las diluciones efectuadas para su informe

DESARROLLO PARTE EMISIN ATOMICA

Familiarizacin con el equipo, similitudes y diferencias con EAA

Preparacin de una curva de calibracin de K o Na y sus limitaciones
Anlisis y medicin de una solucin de concentracin conocida, clculo de parmetros de calidad analtica.

Se puede efectuar una medida de la radiacin emitida mediante el mismo equipo de Absorcin Atmica (se apaga
la lmpara de ctodo hueco), sin embargo se utilizar el equipo de filtro Jenway para mediciones de emisin.
I)

Curva de calibracin ordinaria:

A partir de la solucin stock de 100 mg/L de K + prepare 6 soluciones que contengan entre 10 a 100 ppm de Na+
o K+ , por dilucin en matraces aforados de 100mL.
Almacene todas las soluciones en frasquitos plsticos para evitar contaminacin.
II) Encendido y optimizacin de la llamas segn instrucciones, seleccin del elemento a medir
III) Calibracin (escala arbitraria), ajuste del 0 aspirando blanco y 100 para la solucin patrn mas concentrada con
el control de sensibilidad. Grafique los datos intensidad emisin vs concentracin.
Mida una solucin de concentracin conocida y calcule su concentracin interpolando en la curva
Determine los estadgrafos de calidad analtica.
Considere las diluciones efectuadas para su informe
INFORME
Breve descripcin del principio de la absorcin y emisin atmica
Condiciones de trabajo para los elemento seleccionados
Tabulacin de Soluciones patrn utilizadas y mediciones
curvas de calibracin, tratamiento de muestra
Resultados muestra, clculos de la concentracin final
Comentarios
Cuestionario

Explique la perdida de linealidad en la curva de calibracin de K+ para concentraciones mayores de K+

Que tipos de interferencia se pueden presentar en estas tcnicas analticas?
Que efecto tendr la presencia de alcohol o glicerina en la matriz de la muestra?

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION MOLECULAR VISIBLE

En un espectrofotmetro tpico la luz blanca que emana una lmpara de tungsteno pasa por una ranura y
es dispersada por una rejilla de difraccin. De este haz dispersado se selecciona una angosta banda de
longitud de onda similar (idealmente monocromtica), pasa a travs de una segunda ranura y la solucin de
muestra. La intensidad de radiacin que no es absorbida por la muestra es medida electrnicamente. (%T)
Objetivos
conocimiento de la instrumentacin y manejo de un espectrofotmetro.
obtencin de la informacin de un espectro y clculo del rango de concentraciones de trabajo
uso de mtodos de cuantificacin por curva de calibracin y adicin estndar
determinacin de parmetros de calidad analtica.
Equipos Y Materiales
Espectrofotmetro de doble haz UV-vis. UNICAM UV-2, para obtencin de espectros y medidas
puntuales.
Espectrofotmetro monohaz , Vis. METERTEK
Cubetas plsticas 1 cm paso ptico
Matraces aforados 100 y 50 mL
Bureta 25 mL
Pipetas aforadas de 10 mL
Propipetas
Piseta
Vaso pp 400 mL
Pauelos desechables o papel tissue
Calculadora cientfica (alumno)
SESION 1
A) ESPECTROS DE ABSORCION DE UNA SOLUCION COMPLEJO Cu-AMONIACAL Cu(NH3)4++
Se disponen las siguientes soluciones en el laboratorio:
solucin de CuSO4 0,079 M = 5000 mg/L Cu++
solucin de amonaco 2,6 M (en dispensador)
1) Prepare una solucin de complejo amoniacal de Cu ++ de 500 mg/L por dilucin de una solucin de Cu++
de 5000 mg/L y con adicin de amonaco para obtener una concentracin final de 0,26 M.
2) Registro del espectro de absorcin
Haga un barrido manual de longitudes de onda entre 400-800 nm para el complejo (instrumento
monohaz, Metertek). Use una solucin respectiva de amonaco como referencia. Cada vez que
modifique la longitud de onda, recalibre el instrumento a 100%T con la solucin de referencia. Registre
A o el % T para cada longitud de onda y grafique los resultados obtenidos.
Establezca la longitud de onda de mxima absorbancia en su equipo y la A de la solucin de 500 mg/L
3) Con los datos obtenidos de A para la solucin de 500 mg/L calcule los rangos de concentracin para
preparar una curva de calibracin en la zona de menor error (20 y 70 % T)
4) Disee un esquema de dilucin para preparar 6 puntos para la curva de calibracin.
B) LEY DE BEER, CURVA DE CALIBRACION
Se comprueba si la sustancia a analizar obedece la ley de Beer al graficar Absorbancia vs concentracin,
para una serie de soluciones con diferente concentracin conocida. El ancho de la cubeta (1 cm) y la
longitud de onda se mantienen constantes.
Ajuste el 0 de absorbancia colocando solucin blanco en el haz de medicin.
Mida A (%T) para cada una de las soluciones preparadas anteriormente, grafique y calcule la
ecuacin de la recta por ajuste de mnimos cuadrados.
Registre la tabla de datos A vs C en su cuaderno.
Determine la ecuacin de la recta de calibracin y el coeficiente de correlacin.
Prepare la muestra problema que se le asignar en el laboratorio de manera similar a las
soluciones estndares.
Interpole su muestra en la curva de calibracin, mnimo 4 repeticiones.
Calcule la concentracin de la muestra recibida, considerando la dilucin efectuada.
Discuta los resultados obtenidos

Exprese la constante de Beer en diferentes unidades: a , , 1cm1%

Calcule el error en la concentracin para mediciones de 5 y 95 % T

SESION 2
A) Repita las experiencias efectuadas en la sesin 1, pero utilizando el Espectrofotmetro UV-VIS de doble
haz UNICAM UV-2.
Las instrucciones de uso de este instrumento sern sealadas en el laboratorio.
En el espectrofotmetro UNICAM es posible determinar la curva de calibracin usando el men Medicin
Cuantitativa e interpolar la concentracin de las muestras inmediatamente.
B) Cuantificacin por el METODO DE ADICION ESTANDAR
Prepare una batera de 4 matraces aforados (100 ml) y a cada uno de ellos agrguele un volumen igual de
solucin muestra. El primero lo afora directamente despus de agregar amoniaco para obtener una
concentracin de 0,26 M.
A los siguientes le agrega volmenes crecientes de solucin estndar de cobre 5000 mg/L (1, 2, 3 mL) y
despus de agregar amoniaco en cantidad suficiente para alcanzar una concentracin de 0,26 M, enrase
con agua destilada.
Con los valores de A obtenidos, (cuide que la absorbancia se mantenga dentro del rango de menor error)
calcule la ecuacin lineal A vs mL de estndar agregados, donde el intercepto lo denominaremos y la
pendiente .
La concentracin buscada para la muestra es:
Cx

Cst
Vx

Haga su muestra en triplicado, de modo de poder calcular la media, la desviacin estndar, el

coeficiente de variacin de la muestra.
En el caso de una muestra con concentracin conocida calcule el error relativo para cada caso
(mtodo de la curva de calibracin y adicin estndar).

ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION MOLECULAR UV

SESION 3
Se utilizar la espectrofotometra en el rango UV para cuantificar la concentracin de cido acetil-saliclico
(AAS) en un preparado farmacutico.
El espectrofotmetro de doble haz UNICAM UV-2 posee la capacidad de medir en el rango UV y visible del
espectro (200- 360 nm y 360-800 nm, respectivamente)
En el rango UV se requieren cubetas de cuarzo ya que otros materiales absorben la radiacin UV.

Materiales

Reactivos: solucin patrn de AAS de 250 mg/L

HCl 0,5 M
Dispensador, pipetas volumtricas de 1, 2, 5, 10, 15 mL
Matraces aforados de 250, 100 y 50 mL
Balanza analtica
Mortero
Centrfuga

Procedimiento

Prepare una disolucin de 25 mg/L de AAS en medio cido 0,05 M (HCl) y determine el espectro de
absorcin de esta solucin en el rango entre 200 y 320 nm (Men barrido).
Seleccione la longitud de onda de trabajo y calcule la absortividad y concentraciones necesarias para
los extremos de una curva de calibracin (entre A = 0,15 y 0,7)

Preparacin de la muestra
Se recibir una muestra en polvo o comprimido. En el caso de un comprimido deber ser pesado, molido en un
mortero y pesada una cantidad determinada (300 mg por triplicado) que se disolver en agua destilada. Para
ayudar la solubilizacin se agregar un poco de etanol (3-5 ml) inicialmente y se aplicar ultrasonido durante
5 -10 min agregando agua destilada gradualmente. Una vez logrado esto, (los excipientes permanecen en
suspensin) se enrasa a 250 mL.
Se toma una porcin (aproximadamente 60 mL) que se centrifugar o filtrar para eliminar la turbidez.
Cuantificar la concentracin de AAS en la muestra a travs de los mtodos curva de calibracin y adicin
estndar. Expresar los resultados como mg AAS/g muestra o mg AAS / comprimido. Utilizar al menos tres
repeticiones para determinar la precisin de cada mtodo.

"Laboratorio II Quimica Analtica e Instrumental " - 2009

POTENCIOMETRA
Determinacin potenciomtrica de pH
El concepto de pH fue definido originalmente por Srensen en 1909 en trminos de la concentracin de iones hidrgeno,
pero en la actualidad es aceptado definirlo en trminos de la actividad relativa de los iones hidrgeno en solucin.
pH = -log aH+ = -log (mH H )
(1)
+
donde aH es la actividad , mH es la molalidad, H es el coeficiente de actividad molal.
La ecuacin (1) es una definicin notacional cuyos trminos no pueden ser medidos por un mtodo termodinmicamente
vlido
Es internacionalmente aceptado definir el pH operacionalmente, a partir de la Fuerza Electro-Motriz (fem) de una
celda de medicin especfica.
Se utiliza normalmente la siguiente celda:
Electrodo de referencia /KCL (sat) //solucin pH(s) o pH(x) /electrodo indicador de vidrio
cuya fem esta dada por : Ecelda = Evidrio-Eref + Ej
El potencial del electrodo de vidrio obedece a una expresin del tipo:
Evidrio = k - 2,3RT/F pH
(2)
El trmino k es una combinacin de trminos constantes , el factor 2,3RT/F tiene un valor terico de 0,0592 V a 25C , pero
en la realidad los electrodos de vidrio pueden exhibir valores menores dependiendo de la condicin del electrodo de vidrio.
La expresin (2) predice que al graficar la fem medida con respecto al pH se obtiene una recta de intercepto ( k-E ref +EJ )
( = K` ) y una pendiente que es funcin de la temperatura .(2,3RT/F)
La respuesta de un electrodo de vidrio difiere ligeramente entre uno y otro electrodo y puede variar en el tiempo, por lo que
se requiere de un procedimiento de calibracin con disoluciones patrones de pH. Esta calibracin se basa en establecer la
ecuacin de respuesta lineal E vs pH .
Internacionalmente se han definido (ref1) patrones primarios y secundarios de pH que definen la escala de pH entre 0 y 14
.(Tabla 1 ) Tambin existen comercialmente disoluciones tampn de calidad tcnica con mayor incertidumbre de pH.
TABLA 1

Soluciones estndar de pH primarias y secundarias NIST (ref1)

Estndar

Frmula

mol kg-1

gdm-1

pH
15C

pH
20 C

pH
25C

PH
30C

Tartrato acido de potasio

KHC4H4O6

0,0341

Sat a 25C

3,557

3,552

Citrato de potasio

KH2C6H5O7

0.05

11,41

3,802

3,788

3,776

3,759

Ftalato acido de potasio

KH8H4O4

0.05

10,12

3,998

4,000

4,005

4,011

Fosfato disodico
Fosfato monopotasico

Na2HPO4
KH2PO4

0.025
0.025

3,5379
3,3912

6,900

6,881

6,865

6,865

Fosfato disodico
Fosfato monopotasico

Na2HPO4
KH2PO4

0.03043
0.00869

4,302
1,179

7,448

7,429

7,413

7,400

Tetraborato de sodio *
(borax)
Bicarbonato de sodio
Carbonato de sodio

Na2B4O7 10H2O 0.01

3,806

9,276

9,225

9,180

9,139

NaHCO3
Na2CO3

2,092
2,640

10,118

10,062

10,012

9,966

0.025
0.025

* estndares secundarios
(Ref1) . The measurement of pH - Definitions, Standards and Procedures
IUPAC . Report of the working party on pH
R.P Buck, S.Rondini , A.K. Covington, F.G.K. Baucke, C.M.A. Brett, M.F.Camoes,M.J.T. Milton, T.Mussini, R. Naumann,
K.W. Pratt, P.Spitzer, G.S. Wilson
http://www.iupac.org/publications/pac/2002/pdf/7411x2169.pdf
Preguntas : En qu consiste la calibracin del medidor de pH? R: El instrumento mide el potencial de la pila constituida por el
electrodo de referencia y el electrodo indicador ( en este caso el electrodo de vidrio) y esta calibrado desde fabrica para medir los
milivoltios de esta pila . La calibracin consiste en traducir estos milivoltios en unidades de pH para que podamos leer
directamente el pH en la pantalla del instrumento y se realiza de acuerdo a una funcin ( como indicado mas arriba ) que es ligeramente
diferente para cada electrodo en particular ( por esto no puede venir calibrado de antemano ) . Se utilizan al menos 2 soluciones Patrn
de pH ( ver tabla ) para efectuar la calibracin.
Qu se entiende por sensibilidad del electrodo de pH? Cual es la eficiencia de un determinado electrodo indicador?
Que es el potencial de asimetra?
Que es el potencial de unin liquida? (Ej)
Qu es un puente salino? ; Poque el electrodo de vidrio debe estar hidratado?

Parte experimental (1 sesin)

Instrumentos:
Medidor de pH Fisher Accumet 40 o WTW .3000 equipados con electrodo combinado de vidrio- refrencia
( Ag/AgCl) y sensor de temperatura.
Agitador magntico , barrita magntica y extractor de imanes
Reactivos:
Sales de alta pureza indicadas en la Tabla 1. Las sales deben estar secas y se debe emplear agua bidestilada o de baja
conductividad (Mili-Q) .Para los tampones alcalinos el agua debe estar libre de CO2.
Se dispondrn en el laboratorio soluciones tampon NIST preparadas segn esta norma para efectuar la calibracin del
instrumento.
Materiales:
- vasos precipitado pequeos (50 ml) o vasos plsticos desechables pequeos
- Vaso de pp de 250 ml
- bureta de 25 ml
- pipetas aforadads 5y 10 ml
Procedimiento:
- Efectuar una calibracin del instrumento y comprobar su validez

Generalmente esto se efecta utilizando 2 o 3 patrones de pH., (se disponen preparados) se selecciona en el
instrumento la escala pH y se procede a calibrar segn instructivo del instrumento. Los medidores de pH modernos
vienen con microprocesadores que reconocen automticamente el tampn utilizado y relacionan el potencial
medido con el valor del pH del tampn ( tomando en cuenta la temperatura )
Primero se sumergen los electrodos en un tampn fosfato ,(o pH 7) , una vez registrado e ingresado el potencial
se lavan y se sumergen en tampn pH 4 (calibracin con 2 puntos en el rango 7-4 ) o se secciona la opcin con 3
puntos donde se agrega un tampn en el rango alcalino. ( calibracin en un rango amplio ).
Para comprobar la efectividad de la calibracin se mide el pH de los tampones usados o de otros de la tabla 1.
Registre los pH medidos de los tampones preparados compare los valores con los tericos . (de la tabla)

Establezca la respuesta E vs pH de los electrodos utilizados:

Conecte el medidor de pH en el modo de medicin de potencial (mV) con la mayor sensibilidad del instrumento (0,1
mV) y registre el potencial de equilibrio (valor estable) para cada una de las disoluciones preparadas. Registre tambin
la temperatura. Para mayor facilidad complete la tabla que se le ha entregado.
-

Al cambiar de solucin, enjuague los electrodos con agua destilada, cuide no contaminar o diluir las soluciones
tampn.
- Calcule la ecuacin E (medido, eje y) versus pH (teorico) (eje x)
- Analice los valores de intercepto, pendiente y coeficiente de correlacin. La relacin es lineal?, Como se compara
la pendiente con el valor terico esperado?
Finalmente determine el pH de una disolucin muestra (vinagre , coca-cola)
-

Titulacin potenciomtrica cido-base

El electrodo de vidrio , sensible a la actividad de H+, permite seguir el curso de una titulacin cido- base . Se proceder a
titular la muestra anterior utilizando una disolucin de NaOH 0,1 M valorada como titulante.
-Procedimiento
Tome una alcuota de la muestra y colquela en un vaso pp de 250 ml. (inicialmente tome 10 ml , pero tendr que
modificarlo si el gasto de titulante es muy pequeo o muy grande).
Agregue unos 100 ml de agua destilada de modo que se pueda sumergir el electrodo combinado, utilice un agitador
magntico y barrita para agitar eficientemente, pero cuidando que no golpee el electrodo que es muy frgil y no esta
protegido !
Comience la titulacin (la primera es slo de orientacin ) agregando alcuotas de 1 ml de la base (NaOH) desde la bureta
y registre el pH o el potencial despus de cada adicin una vez que se estabiliza la lectura. Determine el salto de potencial o
pH y el volumen del titulante gastado mediante el metodo de la primera y segunda derivada.
Repita una nueva titulacin , considerando la misma alcuota de muestra o diferente, segn el resultado anterior. Haga
adiciones gruesas hasta la cercana del punto de equivalencia estimado (1 ml antes del punto de equivalencia) y contine
con adiciones pequeas ( 0,2ml) hasta pasar el punto de equivalencia ( conviene pasarse 2 puntos). Repita 2 veces en las
mismas condiciones , determine el volumen del punto de equivalencia exactamente utilizando el mtodo de la primera y
segunda derivada. Calcule la concentracin del cido y su desviacin estndar . Calcule el coeficiente de variacin.
Analice el resultado , compare con lo obtenido mediante la medicin de pH . Hay diferencias?,, si es as , a que se deben
estas?
Porqu se puede realizar la titulacin utilizando indistintamente la escala del instrumento de medicin de pH o de
potencial?
Almacenamiento del electrodo de vidrio
Para obtener los mejores resultados debe mantenerse mojado el bulbo del electrodo de vidrio, preferentemente en un tampn de pH
4,00 con un agregado de KCl sat. 1 : 100 . Solamente es aceptable el uso de tampones o agua de la llave como medio de
almacenamiento, nunca agua destilada. La botellita de almacenamiento proporciona una cmara de almacenamiento para perodos
prolongados.

Prepare un informe sealando:

en forma de tabla : tampn, temperatura , pH terico, potencial E.
- Grfico E vs pH (terico), ecuacin ( analice esta ecuacin en cuanto a linealidad y pendiente )
- E de la muestra, y pH interpolado, pH medido directamente despus de la calibracin del instrumento( sealar tampones
utilizados para la calibracin)

- Titulacin: tabla de valores ml vs pH , 1 y 2 derivada, punto de equivalencia y concentracin calculada

repeticiones , desviacin estndar, CV.
Anexo:
Clculo del punto de equivalencia mediante el primera y segunda derivada (ref: ejemplo 19-2 , Skoog, West Holler Crouch,
Quimica Analtica ,7 edicion Pag 521)
Datos de valoracin potencionetrica de 2.433 mmol de cloruro con 0.100 M de
nitrato de plata
AgNO3 ml
E medido V
E/V,
2F/2V
5.00
0.062
0.002
15.00
0.085
0.004
20.00
0.107
0.008
22.00
0.123
0.015
23.00
0.138
0.036
24.00
0.174
0.09
24.10
0.183
0.11
24.20
0.194
2.8
0.39
24.30
0.194
4.4
0.83
24.40
0.233
-5.9
0.24
24.50
0.316
-1.3
0.11
24.60
0.340
-0.4
0.07
24.70
0.351
0.050
25.00
0.358
0.024
25.50
0.373

Ntese que los valores de la 1 derivada deben escribirse desplazados entre las lineas , lo mismo para la segunda derivada
para identificar correctamente el volumen del punto antes del salto.
El punto de equivalencia se encuentra entre los volmenes donde la primera derivada tiene un valor mximo. (0.83)
La segunda derivada presenta un cambio de signo en este mismo punto.
Para calcular el punto de equivalencia se aplica la siguiente interpolacin:

2 derivada antes del salto

V peq. Vantes del salto V

2 derivada antes del salto 2 derivada despues del salto

4,4

V peq . 24.30 0,1

4,4 5,9
Los valores de la segunda derivada se toman en valor absoluto (sin signos)
El V antes del salto corresponde al punto antes que se produzca el salto de potencial (24.3 ml en el ejemplo)
v es el incremento de titulante entre punto y punto, convenientemente debe ser constante en la zona del salto
Volumen punto equivalencia terico = 24.33 ml ,
Volumen p. eq. calculado = 24.34 ml
En la siguiente direccin Web Uds podrn bajar gratuitamente un programa de clculo de curvas de titulacin (Curtipot):
http:// www2.iq.usp.br/docente/gutz/Curtipot.html
Preguntas: Puedo utilizar la escala de pH para determinar el punto de equivalencia ? R: Se puede utilizar indistintamente cualquiera de
las escalas utilizando el procedimiento de las derivadas sealado, ya que la medicin de pH est directamente relacionada con el
potencial . No se requiere una calibracin de la escala de pH del instrumento ya que los clculos se basan en las derivadas
( diferencias) y no en valores absolutos.
Investigue otras formas de determinar el punto de equivalencia en una curva de titulacin

Jcs/2009

Laboratorio II Quimica Analtica e Instrumental 2009

Potenciometra
(segunda sesin)
Determinacin potenciomtrica directa de ion fluoruro con electrodo ISE
El electrodo de fluoruro de estado slido se utiliza ampliamente en la determinacin de fluoruro en diversas
matrices. Se utiliza un amortiguador de fuerza ionica (TISAB) para ajustar la fuerza ionica y el pH ( pH5) de las
muestras y patrones a un mismo valor.
Instrumentos y materiales:
Medidor de pH capacitado para mediciones con electrodos selectivos de iones (Ionometro) , Fisher Accumet 40 o WTW
PMX 3000.
Electrodo especfico de ion fluoruro (WTW)
Electrodo de referencia Ag/AgCl de doble puente salino ( solucin de relleno externa : KNO 3)
Agitador magntico , barrita magntica y extractor
Vasitos plsticos desechables de 50 ml
Pipetas volumtricas: 25, 10, 5 ml
5 Matraces aforados de 50 ml
Reactivos :
-Soluciones stock patrn de F- de 100 ppm ( preparado a partir de NaF p.a. seco ) (Precaucion: NaF es sumamente
toxico)
-Amortiguador de ajuste de fuerza inica ( TISAB ) . Esta solucin se vende comercialmente . Se puede preparar en el
laboratorio mezclando 57 ml de cido actico glacial 58 g de Na Cl , 4 g de CDTA y 500 ml de agua destilada en un vaso
de 1 lt. . Enfriar en un bao de hielo y agregar cuidadosamente NaOH 6 M hasta un pH de 5.0 5.5 y diluir a 1 litro .
Guardar en frasco plstico.
Muestras:
Se analizarn muestras de enjuagatorio bucal, pasta dental , agua potable, infusiones de t.
Procedimiento:
Dependiendo del nivel de la concentracin esperable en la muestra, prepare una curva de calibracin para ion fluoruro
( el tramo de concentraciones puede variar) .
Para la determinacin en un tramo diluido prepare 500 ml de una solucin patrn de F- de 10 ppm por dilucin de la
solucin estndar de 100 ppm y a partir de sta prepare un conjunto de matraces con soluciones patrn que contengan 0.4,
1.0, 2.4 y 5.0 ppm de F- . Utilice matraces aforados de 50 ml a los que se aaden 25 ml de solucin TISAB.
Las muestras tambin deben contener la proporcin correspondiente de TISAB. (50%).
Medicin:
Despus de enjuagar bien introduzca los electrodos en el estndar de 5.0 ppm ( vasito plstico) , agite durante 3-5
minutos hasta alcanzar un valor de equilibrio, registre el potencial . Repita con los estndares restantes y con la muestra.
Trace un grfico de potencial vs log concentracin de los estndares. Determine la ecuacin y el coeficiente de regresin.(
Analice la esta ecuacin )
Utilice esta ecuacin para determinar la concentracin en ppm de F- en la muestra problema ( esta concentracin debera
ser corregida por la dilucin que ha sufrido la muestra por efecto del TISAB)
Haga repeticiones para la determinacin de la muestra ( soluciones diferentes)
Preguntas
Como se podra llevar a cabo una determinacin mediante adicin estndar?
Investigue como podra efectuarse una medicin por lectura directa en el instrumento , ( calibracin del instrumento para la medicin de
F- )
-Escriba la ecuacin que describe la relacin entre potencial y concentracin para un electrodo de F Porqe debemos efectuar las mediciones a una temperatura constante?
La sensibilidad del electrodo de fluoruro es apropiada? , Con que eficiencia trabaja nuestro sistema ?
Porqu el pH del Tisab debe mantenerse en el rango 5- 5.5 ?, Averige los interferentes que pueden afectar a la determinacin de
Fluoruro.
Cmo funciona el control de la fuerza inica? El Tisab aumenta o disminuye la fuerza inica del medio de la muestra?

Como se genera el potencial en un electrodo de membrana Que tipos de electrodos de membrana conoce Ud.?

Ref. Skoog/West/Holler , Quimica Analitica ,Mc Graw Hill, sexta edicion . pags 600-602

JCS -2009