El uso de cromatografa de intercambio inico para separar y cuantificar

Iones complejos
Brian J. Johnson *
Departamento de Qumica de la Universidad de San Benito y la Universidad de St. John, St.
Joseph, Minnesota 56374, Estados Unidos
* S informacin de apoyo

RESUMEN: cromatografa de intercambio inico es una tcnica importante en la

separacin de especies cargadas, en particular en biolgico, inorgnico, y muestras
ambientales. En este experimento, los estudiantes se suministran con una mezcla de dos
iones complejos de sustitucin inerte. Se separan los complejos mediante cromatografa
de intercambio inico utilizando una tcnica de "flash". Despus de tomar un espectro
visible de los complejos eluidas, las incgnitas son identificados por comparacin con
una tabla de valores max suministrados y cuantificarse usando la ley de Beer. Este
experimento se puede completar en menos de 4 h y es adecuado para estudiantes de
qumica de introduccin y de intermedios.
PALABRAS CLAVE: En primer curso de la diplomatura / General, Segundo Ao-Licenciatura,
Instruccin Laboratorio, Qumica Inorgnica, Aprendizaje prctico / Manipulativos, UV-Vis,
Cromatografa, los compuestos de coordinacin, intercambio inico, Anlisis cuantitativo
Cromatografa de intercambio inico permite la separacin de especies inicas a travs de la
interaccin diferencial de iones con una fase estacionaria cargada. Por ejemplo, una resina de
intercambio catinico cido fuerte consiste en una fase estacionaria aninico completamente
ionizado tales como iones sulfonato (RSO3 -). Complejos metlicos catinicos o iones metlicos
son atrados a la misma y se retienen en la columna. Aquellos con elevada carga positiva son
retenidos ms fuertemente y requieren concentraciones de cationes ms altos en el disolvente
de elucin con el fin de desplazar las especies de metales de la columna. Este es el principio de
funcionamiento detrs de ablandamiento de agua y desionizacin de agua, y la cromatografa
de iones se puede utilizar para analizar muestras de agua para los iones metlicos traza. Varios
experimentos de cromatografa de intercambio inico han encontrado su lugar en los manuales
de laboratorio comerciales o experimentos de laboratorio informados en esta revista,
incluyendo la separacin o purificacin de molecules3-6 o el anlisis de trazas de iones
inorgnicos bioqumica. En el anlisis nontrace de iones inorgnicos lbiles, los que tienen la
misma carga (por ejemplo, acuosa Ni2 + y Cu2 +) puede ser separado por elucin con
concentraciones variables de HCl u otras fuentes de cloruro; Sin embargo, en este caso la
identidad qumica y carga de la especie de metal depende de la fuerza con la que el in metlico
se une iones cloruro. En algunos otros experimentos, intercambio de ligandos lento en un
complejo genera una mezcla a separar o una mezcla de estados de oxidacin de un metal, se
genera y se separ. Hay pocos ejemplos de separacin de complejos de coordinacin estables
mediante cromatografa inica. En algunos casos, un compuesto diana sinttico se separa de
una impureza debido a la diferencia en la carga de los iones complejos presentes en la mezcla,
mientras que en otros, los estudiantes separar una mezcla de complejos suministrados por el
instructor. En todos estos casos, los estudiantes estn trabajando con muestras idnticas o los
que slo difieren en las cantidades relativas de dos o tres componentes. Un documento ms
antiguo publicado en la revista describe un experimento en el que incgnitas que contienen dos
complejos de Co (III) (seleccionados de un grupo) con +2 y +3 cargos fueron separados por
cromatografa de intercambio inico y se precipitaron con perclorato de sodio. No se suministr
la lista de incgnitas. En este trabajo, se presenta un experimento de intercambio inico que se
diferencia en que se lleva a cabo en la microescala, contiene una lista completa de las incgnitas,

consiste en una introduccin a cromatografa rpida, utiliza la ley de Beer para cuantificar los
componentes eluidos, y puede ser completado en menos de 4 h
OBJETIVOS EDUCATIVOS

El experimento descrito en este trabajo se lleva a cabo por los estudiantes en el segundo
curso de laboratorio fundacin. Todos los experimentos en este curso implican
cromatografa, con ejemplos que abarcan orgnico, inorgnico, y la bioqumica. Sin
embargo, tambin es adecuado para un curso de laboratorio en el que una introduccin
a cromatografa, complejos de metales de transicin, o cuantificacin por la ley de Beer
se desea. Nuestro objetivo es an ms para aumentar la independencia de los
estudiantes en el laboratorio. Cada estudiante selecciona el orden en que se van a llevar
a cabo sus experimentos. Esto requiere que vengan preparados porque no pueden
simplemente imitar lo que los otros estudiantes estn haciendo-que pueden ser el nico
que realizar un experimento especial ese da. Tambin existe la ventaja adicional de que
la demanda de estudiantes para la instrumentacin y el equipo se extendi a cabo de
manera ms uniforme a lo largo del semestre. Por ltimo, para cada experimento, los
estudiantes se benefician de incgnitas por lo que deben analizar sus propios datos. Esto
es a la vez un experimento de la tcnica y la resolucin de rompecabezas que puede
servir como una alternativa al libro de cocina al estilo de los laboratorios. Hay una serie
de objetivos especficos de aprendizaje para este experimento de intercambio inico.
Adems de ensear los principios generales de este tipo de cromatografa, los
estudiantes obtienen una introduccin a cromatografa de desarrollo, utilizar la
espectroscopia visible para identificar las incgnitas, preparar soluciones con cristalera
volumtrica, y el uso de la ley de Beer para cuantificar sus incgnitas.
DESCRIPCIN GENERAL DE EXPERIMENTAL
A detalladas notas Hoja del estudiante y el instructor de preparacin se proporcionan en la
informacin de apoyo. Los estudiantes reciben aproximadamente 60 mg de una muestra que
contiene una mezcla 50/50 de dos complejos de coordinacin diferentes. El desconocido se
disuelve en un pequeo volumen de agua y se carg en una columna de microescala corto
(aproximadamente 3 cm) que contiene resina de intercambio catinico DOWEX 50Wx4 (malla
100-200) en su forma Na +. Los estudiantes a continuacin, aaden agua, 0,1 M NaCl, 0,5 M
NaCl, 2 M NaCl, y 5 M NaCl a su vez hasta que ambos componentes eluyen de la columna, como
se evidencia por el movimiento de bandas de colores debido a los iones complejos. Para
identificar su desconocida, obtienen un espectro de 400-700 nm de cada banda para comparar
los espectros contra los valores max dados de las posibles incgnitas. Aunque los estudiantes
recogen la totalidad de cada fraccin de color, se les aconseja para recoger por separado
aproximadamente 3 ml de la parte ms concentrada de la banda de cromatografa para el
anlisis espectroscpico, ya que produce la absorcin ms fuerte y por lo tanto permite la
diferenciacin de compuestos que absorben a longitudes de onda similares. Los estudiantes
combinan las fracciones del mismo componente en el matraz aforado ms pequeo que llevar
a cabo ellos (10, 25, o 50 ml) y enrasar con agua desionizada. A continuacin, obtener el espectro
visible de cada una de estas soluciones. A partir de las absorbancias medidas y absortividades
molares dadas para las incgnitas, que son capaces de calcular la concentracin de cada
desconocida a partir de la ley de Beer. Usando el volumen de la solucin medido y la masa molar
de su desconocido, pueden calcular la masa de cada componente presente. Debido a que
nuestro nfasis est en la introduccin de las tcnicas, los estudiantes slo se ejecutan un
ensayo de cada mezcla desconocida. De esta manera, obtengan informacin semicuantitativa
sobre su composicin desconocida, adems de la identificacin de cada componente.

 CONSIDERACIONES EXPERIMENTALES
Incgnitas
Una lista completa de las incgnitas empleadas aparece en las Notas para el instructor
suministrados como informacin de apoyo. Los compuestos de coordinacin utilizados como
muestras fueron seleccionados en base a una serie de consideraciones. En primer lugar, deben
ser inertes a la sustitucin o isomerizacin en concentraciones de agua o de cloruro, al menos
durante el perodo de tiempo de un perodo normal de laboratorio. De esta manera, los
estudiantes pueden hacer predicciones de la orden de elucin de diferentes incgnitas. En
segundo lugar, con el fin de tener mltiples combinaciones desconocidas, no debera haber
varios ejemplos de complejos de coordinacin con diferentes cargas positivas, ya que la columna
es una resina de intercambio catinico. Adems, algunos complejos se incluyen en el que el
complejo de coordinacin es un anin y no retenido en la columna en absoluto. En tercer lugar,
para la mxima comodidad, complejos deben estar disponibles comercialmente o fcilmente
sintetizados por los asistentes de enseanza (TA) o trabajadores de almacn. Alternativamente,
los complejos preparados en los laboratorios de qumica inorgnicos o generales avanzados
tambin pueden ser una fuente de incgnitas. Siete compuestos cumplen con estos criterios,
incluyendo K3 [Cr (ox) 3] 3H2O, [Co (NH3) 6] Cl3, K [Co (EDTA] 2H2O, trans- [Co (en) 2Cl2] Cl,
[Co (NH3) 4CO3] NO3, [Co (NH3) 5NO2] Cl2, y [Co (en) 3] I3. (El material para alumnos tambin
enumera algunos complejos adicionales que sirven como "distractores".) A medida que cada
desconocido contiene dos complejos, combinaciones se eliminan en el que ambos iones
complejos tienen la misma carga, ya que no son separables en la columna. No hay
combinaciones desconocidos se dan en el que los dos componentes tienen colores similares.
Aunque tales complejos en realidad se pueden separar, es un experimento mucho ms difcil
para una cromatografa de intercambio inico haciendo estudiante por primera vez. Esto deja
17 combinaciones, por lo que es poco probable que dos estudiantes en una seccin de
laboratorio de 16 personas estn trabajando en las mismas incgnitas.
Columnas
La elucin de la columna es generalmente sencillo. Si uno de los componentes desconocidos es
un ion complejo aninico, no se retiene en la resina de intercambio catinico y se eluyen con el
agua utilizada para cargar la columna. Los iones complejos catinicos eluyen con las soluciones
de NaCl de concentraciones variables. En las concentraciones de NaCl empleadas, los iones
complejos o bien tienden a moverse con relativa rapidez o no moverse en absoluto, por lo que
es bastante fcil para los estudiantes para decidir si desean aadir ms de la solucin de NaCl
que estn utilizando o para ir a la siguiente rea ms grande .
No hay problemas con bandas superpuestas o dos soluciones de componentes.
Tambin utilizamos este experimento como una manera de ensear a cromatografa flash
utilizando una configuracin similar a la descrita por Horowitz. Un trozo corto de tubo Tygon se
utiliza para unir un tubo de plstico Y a la parte superior de una columna de microescala, y un
lado de la Y est unido a la casa de N2. Un dedo o el pulgar se pueden utilizar para bloquear la
otra rama de la Y para crear presin. Otra ventaja de este sistema es que disolvente de elucin
adicional se puede aadir directamente a travs de la rama abierta de la casa de Y. Si el nitrgeno
no est disponible, el aire comprimido tambin debera funcionar, y otros medios para crear
presin para la cromatografa de resolucin rpida se pueden adaptar. Alternativamente,
adjuntando un trozo de tubo de la llave de paso en la parte inferior de la columna y el uso de
una jeringa grande para tirar de disolventes, aunque la columna tambin tiene xito. Cualquiera
de estos mtodos disminuye significativamente el tiempo de elucin en comparacin con una
columna de flujo por gravedad.

Instrumentos
Cualquier espectrmetro capaz de escanear el rango de 400-700 nm debera ser suficiente para
este experimento. Tpicamente, un Cary 50 Bio UV Vis y una marea roja USB650
espectrofotmetro Ocean Optics o dos instrumentos Ocean Optics estn disponibles por seccin
laboratorio de 16 persona. Cada estudiante requiere cuatro exploraciones de dos de las
fracciones ms concentradas de cada desconocido que se utilizan para identificar las incgnitas
y dos que contienen los volmenes totales de cada fraccin para el trabajo cuantitativo.
PELIGROS
Guantes y gafas deben ser usados durante el transcurso de este experimento. La resina de
intercambio catinico Dowex 50Wx4 (malla 100-200) es una resina de cido sulfnico que se
vende en la forma H +. El MSDS enumera como un cido fuerte de polvo muy peligroso (en
particular, a los ojos). Los estudiantes lo utilizan en forma Na +, por lo que el personal Stockroom
manejan la resina en la campana, lo tratan con NaOH 1 M, y la mezcla resultante se suministra
a los estudiantes. Esta solucin es corrosivo. Los complejos metlicos son nocivo si se inhala, se
ingiere o se absorbe a travs de la piel.
La cromatografa instantnea implica un sistema presurizado; se debe tener cuidado para evitar
la sobre presurizacin de la cristalera
Resultados y discusin
Este experimento se ha utilizado durante cuatro semestres. En la actualidad, los estudiantes
identifican aproximadamente el 75% de los componentes desconocidos correctamente. El uso
de la fraccin ms concentrada (en lugar de la solucin ms diluida con el volumen conocido con
precisin) para obtener el espectro visible ha permitido la determinacin ms precisa de la
longitud de onda y el aumento de este porcentaje de la primera semestre. La mayor parte de
los errores restantes son probablemente debido a los valores medidos max caer en el medio
de los dos incgnitas posibles y seleccionar la equivocada. La amplitud relativa de las
absorbancias, las absortividades molares relativamente bajas para complejos de metales de
transicin, e inexactitudes en cualquiera de los mtodos de pico de picking manuales o
automatizados tambin puede jugar un papel. Es importante que los estudiantes obtengan
datos espectroscpicos en el mismo da, ya que correr la columna, ya que algunos complejos de
isomerizan, se someten a acuacin, o precipitan en las altas concentraciones de sal durante
perodos ms largos de tiempo.
Los estudiantes suelen informar de 70-90% de recuperacin para cada desconocido. Debido
combinaciones desconocidos se preparan en lotes y que no hacen todo lo posible para
asegurarse de que se mezclan uniformemente, la clasificacin se hace hincapi en la precisin
del clculo en lugar de la cantidad real recuperado. Podra ser posible para aumentar tanto la
exactitud de la identificacin desconocido y el porcentaje recuperado mediante el aumento de
la cantidad de desconocido los estudiantes utilizan; Sin embargo, hemos optado por no hacer
esto para reducir al mnimo la cantidad de productos qumicos utilizados. Como la mayora de
los estudiantes que toman este curso de laboratorio estn en su segundo semestre en la
universidad, tambin hemos optado por asignar la mayor parte de los puntos asociados con el
experimento para el suministro de los datos que se renen, anlisis de datos, una seccin
Experimental estilo de ACS, y otros temas (en la rbrica de clasificacin suministrada con el
material para alumnos en la informacin de apoyo).
CONCLUSIN
Este experimento presenta a los estudiantes los conceptos de cromatografa de intercambio
inico y el anlisis cuantitativo a travs de la ley de Beer. Se incluye como uno de un semestre
de experimentos que demuestran la cromatografa como una tcnica relevante para orgnicos,
inorgnicos, y los bioqumicos. Sin embargo, dada la separacin relativamente limpio y la

facilidad de visualizacin de las bandas, que podra ser utilizado en cualquier curso en donde se
desea una introduccin a cromatografa o cuantificacin.
Contenido asociado
Informacin de soporte
Folleto para estudiantes e instructores y Stockroom notas de preparacin. Este material est
disponible a travs de Internet en http://pubs.acs.org.
Informacin sobre el autor
Autor correspondiente * E-mail: bjohnson@csbsju.edu.
Notas Los autores declaran no tener ningn inters financiero en competencia.
AGRADECIMIENTOS
Este experimento se desarroll en conjunto con la Fundacin Nacional de Ciencia mar
subvencin (NSF-DUE 1.043.566). Los colegas gracias autor de sugerencias tiles para mejorar
el experimento y Chris Schaller para la ilustracin de la configuracin de la columna que se
encuentra en el folleto para estudiantes.