Divisin: Cromatografa de reparto

Actualmente se utilizan como fase estacionaria compuestos ligados

qumicamente a un soporte slido de slice. Se puede subdividir en
cromatografa en fase normal y en fase inversa (usualmente mal
llamada reversa por traduccin de reversed).
FASE NORMAL
La fase estacionaria presenta puntos activos de alta polaridad y las
interacciones que se producen con el soluto son especficas del grupo
activo. La fase estacionaria puede ser un slido absorbente (slice o
almina) o bien, un soporte al que se unen qumicamente molculas
orgnicas que presentan grupos funcionales de alta polaridad (ciano,
amino, etc.)
El mecanismo de separacin, mas admitido, para el caso de la
cromatografa de fase normal, vuelve a ser la adsorcin del soluto sobre
la fase estacionaria. La adsorcin tiene lugar por interaccin del soluto
con el grupo funcional de la molcula orgnica ligada al soporte, siento
el comportamiento del soluto en estas fases, del todo semejante al que
muestra en la cromatografa slido-lquido, es decir, el aumento de
polaridad de la fase mvil implica un descenso en la retencin del soluto.
FASE INVERSA
La fase estacionaria tiene una naturaleza no polar (cadenas
hidrocarbonatadas, grupos fenilo) y las interacciones que se producen
son inespecficas.
El mecanismo por el que se produce la retencin en la cromatografa de
fase inversa se puede explicar de dos formas:

Reparto entre dos fases lquidas

Adsorcin del soluto a la fase estacionaria

Ambos mecanismos, de manera conjunta, pueden explicar el por qu de

la separacin en este tipo de cromatografa, de tal manera que la
polaridad del soluto frente a la de las fases estacionaria y mvil
condiciona que los compuestos con polaridad semejante a la de la fase
estacionaria presenten una mayor retencin, necesitando fases mviles
de mayor fuerza de elucin para reducir el tiempo de retencin y lograr
que el compuesto salga de la columna.

La fase estacionaria
Si bien es cierto que con las fases ligadas se dispone de ms versatilidad
en la eleccin de fases estacionarias, la ms habitualmente utilizadas
son:
Cadenas hidrocarbonatadas de 18 carbonos para la fase inversa.
Cadenas con extremos amino para la fase normal.
No hay que olvidar que el soporte de la fase estacionaria juega un papel
importante ya que puede presentar puntos activos de adsorcin
especfica que pueden modificar los resultados de retencin esperados
por el sistema cromatogrfico.
Los grupos activos de la fase estacionaria (grupos silanol en la slice) se
encuentran como parte de una molcula orgnica ligada al relleno, y son
de naturaleza ms variada.
(IMAGEN)
La fase mvil
Para la fase normal se utilizan por regla general disolventes de polaridad
baja (n-hexano por lo general).
En FI-HPLC la fase mvil es la variable que ms influye en la
selectividad. sta fase contiene grandes proporciones de agua, que es
sin duda el eluyente principal, junto con un modificador orgnico. La
presencia de agua permite la variacin del pH de la fase mvil o la
adicin de otras sustancias que permiten modificar el soluto para
realizar una separacin concreta.
El agua es el disolvente menos fuerte para la elucin de solutos en
cromatografa de fase reversa, dando origen a tiempos de retencin muy
elevados; por este motivo, se tiene la necesidad de utilizar
modificadores orgnicos (los ms usados son metanol y acetonitrilo).