Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Laboratorio de bioqumica clnica

Alumno

Irineo Ronquillo Victor Hugo

Grupo
AQM2

Seccin 2
Glucosa
Hemoglobina glicada
Glucosa a partir de mtodo automatizado

Introduccin

Se calcula que en el mundo existen ms de 180 millones de personas

con diabetes y es probable que esta cifra aumente a ms del doble para
2030. En 2005 se registraron 1.1 millones de muertes debidas a la
diabetes, de las cuales alrededor de 80% ocurrieron en pases de
ingresos bajos o medios, que en su mayora se encuentran menos
preparados para enfrentar esta epidemia. En Mxico, la DM ocupa el
primer lugar en nmero de defunciones por ao, tanto en hombres como
en mujeres las tasas de mortalidad muestran una tendencia ascendente
en ambos sexos con ms de 70 mil muertes y 400,000 casos nuevos
anuales.
Se establece el diagnstico de diabetes si se cumple cualquiera de los
siguientes criterios: presencia de sntomas clsicos y una glucemia
plasmtica casual > 200 mg/dl; glucemia plasmtica en ayuno > 126
mg/dl; o bien glucemia >200 mg/dl a las dos h. despus de una carga
oral de 75 g de glucosa anhidra disuelta en agua, sin olvidar que en la
prueba de ayuno o en la PTOG, o en ausencia de sntomas inequvocos
de hiperglucemia, estos criterios se deben confirmar repitiendo la
prueba en un da diferente.
Las determinaciones de glucosa son fundamentales en el diagnstico y
tratamiento de las enfermedades relacionadas con el metabolismo de
los hidratos de carbono y se realizan en sangre total, plasma, suero,
LCR, lquido pleural y orina. Se dispone, adems, de nuevos dispositivos
que realizan determinaciones de glucosa en lquido intersticial y
monitorizan los niveles de glucosa en pacientes diabticos en forma
continua.
La sangre venosa es la muestra de eleccin para el anlisis de glucosa.
A temperatura ambiente, la glucosa se metaboliza a una velocidad de
7mg/dL/h y a 4 C, la perdida es aproximadamente 2mg/dL/h. Una
muestra de suero es valida para el anlisis de glucosa si es separado de
las clulas en un plazo de 30 minutos; no obstante, para tiempos
superiores, debe aadirse un conservador como el fluoruro sdico para
inhibir la glucolisis.
Objetivo de la prctica

El alumno aprender a cuantificar la glucosa en muestras biolgicas por

mtodos enzimticos de forma manual.
Determinar la hemoglobina glicada presente en una muestra biolgica y
establecer la calificacin correspondiente a partir del uso de diferentes
mtodos para su determinacin.
El alumno aprender el uso bsico del analizador selectra XL parala
determinacin de glucosa srica, por el mtodo de glucosa oxidasa

Fundamento del mtodo enzimtico de la glucosa oxidasa

La glucosa oxidasa oxida a la glucosa originando cido glucnico y H 2O2. El
perxido de hidrgeno liberado reacciona con un cromgeno (fenol/4aminoantipirina) por la reaccin de Trinder, para dar una quinona que absorbe
entre 492 y 550 nm. La intensidad de color producida es directamente
proporcional a la concentracin de glucosa(fig.1).

Fig. 1 Reaccin del mtodo enzimtico a partir de la glucosa oxidasa para la

determinacin de glucosa

Fundamento del mtodo para la determinacin de hemoglobina glicada por

afinidad a boratos.
EL LabonaCheck es un equipo de prueba con cartuchos, los cuales utiliza el
reactivo R1 y el reactivo R2. El reactivo R1 contiene agentes que lisan los
eritrocitos y precipitan la hemoglobina especfica, as como un azul cido
boronico conjugado que se liga al grupo cis-diol de la hemoglobina glicada.
Cuando se le adiciona el reactivo R1 a la sangre, los eritrocitos son lisados y la
hemoglobina precipita, as como el cido boronico conjugado al grupo cis-diol
de la hemoglobina glicada. Una alcuota de la mezcla de reaccin es adicionada
al cartucho y toda la hemoglobina precipitada, el conjugado ligada y no ligada,
los remanentes permanecen en la parte superior del filtrado. Cualquier borato
no unido es removido por el reactivo R2. El precipitado es evaluado por la
medicin del azul (hemoglobina glicada) y rojo (hemoglobina total) intensidad
del color respectivamente con el LabonaCheck A1C HbA1c, la relacin entre
ellos siendo proporcional a el porcentaje de hemoglobina glicada en la muestra.

Resultados
Tabla 1. Determinacin de glucosa srica por el mtodo manual
Muestra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20

A 500
0.098
0.276
0.071
0.412
0.105
0.406
0.09
0.374
0.107
0.426
0.098
0.242
0.101
0.272
0.097
0.304
0.122
0.281
0.111
0.269

mg/dL glucosa
102
286
74
427
109
421
93
388
111
441
102
251
105
282
101
315
126
291
115
279

Tabla 2. Resutlado de clculos a partir de la determinacin de glucosa por el

mtodo manual
Paciente 1
Media
104
SD
14.0
CV
13.5
%E
26.8
Paciente 2
Media
338

SD
CV
%E

72.7
21.5
44.4

Tabla 3. Determinacin de glucosa por el mtodo automatizado

Muest
ra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Media
SD
CV
%E

C2 mg/dL
glucosa
93
94
91
96
92
97
93
93
93
93
94
1.78
1.9
14.6

Muest
ra
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Media
SD
CV
%E

C3 mg/dL
glucosa
219
238
230
231
226
229
229
224
223
219
227
5.85
2.6
3.0

Tabla 4. Determinacin de los valores de controles por parte de cada equipo

Muestr
a
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Media
SD
CV

C2 (mg/dL
glucosa)
102
97
92
140
150
118
82
89
116
110
23
21.4

Muestr
a
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Media
SD
CV

C3 (mg/dL
glucosa)
331
301
355
342
379
296
319
379
346
339
30
8.9

%E
PIV

5.5
71

%E
PIV

3
39

Fig. 2 grafica de Levey-Jennings de la medicin de los controles 2 y 3

Discusin de resultados
A partir de los resultados obtenidos en el anlisis de las muestras por el
mtodo manual, podemos observar que para la muestra 1, se obtuvo un
coeficiente de variacin entre el 10-20%, lo que en la bibliografa
revisada maneja dentro de un rango aceptable de precisin los valores
obtenidos, mientras que para la muestra nmero 2, el coeficiente de
variacin es superior al 20%, por lo que la precisin obtenida es no
confiable, esto es posible debido a la imprecisin por parte del analista,
teniendo errores en momentos crticos de la tcnica, tales como, la
manera de pipetear, el tiempo de incubacin, la temperatura de
incubacin, el mal uso del espectrofotmetro, entre otros. Al comparar
ambos resultados, podemos inferir que ambos analistas presentan una
baja eficiencia en la tcnica para la determinacin de glucosa por el
mtodo manual, ya que la precisin observada para ambos analistas es
baja. Al analizar el porciento de error(tabla 2), se puede observar que los
porcentajes de ambos analistas obtuvieron un alto ndice de error, lo que
nos indica que tampoco existe exactitud en las mediciones realizadas
por cada uno de los analistas.
Al comparar los resultados obtenidos por el mtodo manual con el
automatizado, se observa que el coeficiente de variacin del mtodo
automatizado no supera el 5%, por lo que el mtodo automatizado
presenta una precisin superior al mtodo manual; mientras que por
parte del error, se observa (tabla 3) que, el mtodo automatizado
presenta un ndice de error menor al 15% para ambas muestras, lo que
nos indica que este mtodo adems de presentar una precisin alta, de
igual manera presenta un alto ndice de exactitud. Al ser comparados
ambos mtodos en cuanto a su precisin y exactitud, as como a la
metodologa llevada a cabo por ambos mtodos, se puede observar que
existe un mayor nmero de posibles puntos en los cuales pueden existir
errores en el momento de llevar a cabo las determinaciones en el
mtodo manual que en el automtico, ya que en la metodologa
automatizada, el equipo que realiza las determinaciones esta calibrado y
lleva a cabo los procesos de manera sistemtica en cada determinacin.
En cuanto a la grafica de levey-jennings(fig.2), podemos observar que se
no se cumple ninguna de las reglas de Levey-Jennings, ni tampoco

ninguna de las reglas de Wesgard, por lo que la corrida puede ser

validada. Las reglas 1, 3 y 5 de Wesgard son de alerta, o sea que si se
incumple alguna de estas reglas se debe activar una revisin de los
procedimientos de la prueba, chequeo de los reactivos y calibracin de
los equipos. La 2 y 4 son reglas mandatorias, si alguna de ellas no se
cumple se deben rechazar los resultados.

Conclusiones

Bibliografa
NORMA Oficial Mexicana NOM-015-SSA2-2010, Para la prevencin, tratamiento
y control de la diabetes mellitus.