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UNIVERSIDAD DE LA HABANA

INSTITUTO DE FARMACIA Y ALIMENTOS

TESIS EN OPCIN AL TTULO


DE MASTER EN TECNOLOGA Y
CONTROL DE MEDICAMENTOS

OBTENCIN DE UN GEL A
PARTIR DE LA TINTURA DE
Murraya paniculata (L.)
(DROGA SECA)

Autor: Lic. Wendy Snchez Martnez

La Habana
2015

UNIVERSIDAD DE LA HABANA
INSTITUTO DE FARMACIA Y ALIMENTOS

TESIS EN OPCIN AL TTULO


DE MASTER EN TECNOLOGA Y
CONTROL DE MEDICAMENTOS

OBTENCIN DE UN GEL A
PARTIR DE LA TINTURA DE
Murraya paniculata (L.)
(DROGA SECA)
Autor: Lic. Wendy Snchez Martnez
Tutoras: Dra C. Yamilet I. Gutirrez Gaitn
MC. Celia M. Casado Martn
Dra C. Viviana Garca Mir
Asesores: Dr C. Adonis Bello Alarcn
MC. Adalberto Izquierdo Castro
MC. Noel Varona Torres
Lic. Arturo Snchez Faria
La Habana
2015

DEDICATORIA

A mis padres
Mi ejemplo y mi compromiso.
A mi esposo
Mi apoyo, comprensin y confianza.

AGRADECIMIENTOS

Agradecimientos
Agradecimientos
El agradecimiento es el deber que ms obliga. Marco Tulio Cicern.

La gratitud es una de las virtudes que ninguna persona, por difciles que sean
las circunstancias, debe olvidar.
Hoy es un da muy importante para m pues he logrado vencer una meta ms
en mi vida. Si los resultados han sido gratificantes no solo son atribuibles a mi
esfuerzo, sino tambin a la ayuda y apoyo incondicional de muchas personas.
A mis tutores Dr.C. Viviana Garca Mir, Dr.C. Celia M. Casado Martn y Dr.C.
Yamilet Gutirrez, les agradezco cada uno de sus consejos, orientaciones y
enseanzas. Son excelentes profesionales capaces de hacer ciencia y ms
an de inculcar el amor por la ciencia. Para ustedes gracias por su amistad, su
comprensin y ayuda, sobre todo en esos momentos en que todo lo vea
imposible por los momentos difciles que me he enfrentado a la vida.
Agradezco a la Dr.C. Irela Prez Snchez que de igual forma acept ser mi
oponente, gracias por el tiempo dedicado a revisar la tesis, as como por las
sugerencias y sealamientos realizados.
Agradezco tambin a Dr.C. Adonis Bello Alarcn por su amistad y siempre
disposicin para ayudar, que de una forma u otra se ha ocupado y preocupado
por mi superacin. Indudablemente no olvid mencionar a Arturo, quien ha sido
mi compaero en esta contienda, el cual colabor en gran parte de la obtencin
de los resultados en esta investigacin.
Finalmente el agradecimiento eterno a toda mi familia. No por ser el ltimo es el
menos importante, sino porque es constante, imperecedero e incondicional. A
mis padres, el mayor tesoro que me ha dado la vida y con los que gracias a
Dios puedo seguir contando. Gracias por su tiempo, por soportarme y por
quererme. Quiero que sepan que su presencia me da las fuerzas necesarias
para seguir adelante, para luchar por cada meta u obstculo que la vida me ha

Agradecimientos
puesto, en lo profesional y lo personal, y que para m son todo un ejemplo de
valores.
En ms de una ocasin flaquee, titubee y si hoy he llegado aqu en gran parte
se lo agradezco a mis padres. Hoy me siento complacida, s que este trabajo
no ha sido un milagro sino el fruto de mi empeo y de la ayuda de muchos.
A mi esposo Manuel que aunque est muy alejado de esta actividad siempre
tiene lista la palabra adelante.
A mi hermana, a mis 2 bellas sobrinas, a mis tos, mi primo y a mis compaeros
de batalla, pues an de los que estn lejos he tenido el apoyo espiritual.
A los que ahora empiezan solo les digo que no se dejen vencer, que todo
resultado lleva un sacrificio y todo esfuerzo es un xito.
Agradezco a todos los aqu presentes, a los que por algn descuido
imperdonable olvid mencionar y espero se sientan tan felices como yo. A
todos, muchas gracias.

RESUMEN

Resumen

RESUMEN

Murraya paniculata L. (Jack) es reconocida tradicionalmente por sus


propiedades astringentes, estimulantes, analgsicas, antiinflamatorias, entre
otras. El uso tradicional dado a esta especie vegetal en Cuba, implica el
empleo de la droga vegetal fresca, lo que limita la extensin de su uso, ya que
no se cuenta con estudios que avalen la factibilidad del empleo de la droga
seca con garanta de su calidad, seguridad y eficacia. En este sentido y
teniendo en cuenta la amplia distribucin en nuestra zona geogrfica de la
especie, en el presente trabajo se informan por vez primera los resultados de
los parmetros farmacognsticos de control de la calidad de la droga cruda y
su preparado galnico (tintura), fueron evaluados sus ndices fsico-qumicos ,
control microbiolgico, tamizaje fitoqumico, cromatografa en capa delgada y
anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin, as como, un estudio de
estabilidad en estante por un periodo de un ao, logrndose buena estabilidad.
Se elabor un gel utilizando como ingrediente farmacutico activo la tintura
al 20 % (elaborada con mezcla hidroalcohlica al 80 %) obtenida del material
vegetal seco. Se evaluaron parmetros fsico-qumicos y tecnolgicos durante
12 meses, logrndose buena estabilidad. A la formulacin se le realiz una
prueba de preferencia utilizando una escala hednica de cinco puntos y la
misma fue aceptada por los cuatro atributos evaluados (olor, color, frescura y
apariencia. Finalmente desde el punto de vista preclnico se demostr que la
tintura y el gel no evidencian signos de toxicidad aguda drmica en los
animales de experimentacin, asimismo, pudo demostrarse una inhibicin de la
inflamacin de ambos productos bajo las condiciones ensayadas.

NDICE

ndice

NDICE
Pg.
INTRODUCCIN....

CAPTULO I. REVISIN BIBLIOGRFICA...

I.1. Murraya paniculata (L.) Jack.

I.1.1. Clasificacin taxonmica y descripcin botnica....

I.1.2. Habitat y distribucin..

I.2.3. Usos atribuidos....

I.2.4. Fotoqumica, farmacologa y toxicologa......

I.2. Medicamentos herbarios. Generalidades...

I.3. Geles......

10

I.3.1. Generalidades..........

10

I.3.2. Clasificacin de los geles...

11

I.3.3. Aplicaciones mdico-farmacuticas de los geles...

13

I.4. Pruebas de preferencia y aceptacin

13

CAPTULO II. MATERIALES Y MTODOS..

15

II.1. Recoleccin y seleccin del material vegetal.....

15

II.2.

Parmetros

de

calidad

del

material

vegetal

de

Murraya

paniculata..
II.1.1. Estudio de secado...
II.3.2. Parmetros fsico-qumicos de la droga cruda de M.
paniculata........

15
15
15

II.2.3. Estabilidad de la droga cruda de M. paniculata..

18

II.2.3.1. Parmetros fsico-qumicos.....

18

II.2.3. 2. Estudio qumico-cualitativo.

19

II.2.3.3. Control microbiolgico.....

19

II.3. Obtencin de la tintura de M. paniculata ....

19

II.4. Parmetros de calidad de la tintura de M. paniculata

20

II.4.1. Parmetros fsico-qumicos..

20

II.4.2. Control microbiolgico......

22

ndice
II.4.3. Estudio fitoqumico de la tintura..

22

II.4.3.1. Tamizaje fitoqumico

22

II.4.3.2. Cromatografa en capa delgada ....

23

II.4.3.3. Anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin


(CLAR)..

23

II.4.4. Estabilidad de la tintura de M. paniculata ..

24

II.5. Obtencin del gel a partir de la tintura de M. paniculata ..

25

II.5.1. Evaluacin de los parmetros fsico-qumicos y tecnolgicos


del gel....
II.5.2. Estudio fitoqumico del gel de M. paniculata.
II.5.2.1. Cromatografa en capa delgada
II.5.2.2. Anlisis por cromatografa

lquida de alta

resolucin (CLAR)..

26
27
27
27

II.5.3. Control microbiolgico del gel de M. paniculata

28

II.5.4. Prueba de preferencia o aceptacin de la formulacin.

28

II.5.5. Estabilidad integral de la formulacin..

28

II.6. Evaluacin preclnica de la tintura de M. paniculata y el gel...

29

II.6.1. Ensayo de toxicidad aguda drmica de la tintura de M.


paniculata y el gel
II.6.2. Evaluacin del efecto antiinflamatorio de la tintura de M.
paniculata y el gel..

29

29

II.7. Anlisis estadstico..

30

CAPTULO III: RESULTADOS Y DISCUSIN

31

III.1. Establecimiento de los parmetros de calidad del material vegetal de


Murraya paniculata L..
III.1.1. Estudio de secado....
III.1.2. Parmetros fsico-qumicos de la droga cruda de M.
paniculata...

31
31
33

III.1.3. Estabilidad de la droga cruda de M. paniculata.

35

III.1.3.1 Parmetros fsico-qumicos..

35

III.1.3.2. Estudio qumico cualitativo..

36

ndice
III.1.3.3. Control microbiolgico..

37

III.2. Obtencin de la tintura de M. paniculata....

39

III.3. Parmetros de calidad de la tintura de M. paniculata....

39

III.3.1. Parmetros fsico-qumicos

39

III.3.2. Control microbiolgico

42

III.3.3. Estudio fitoqumico de la tintura

43

III.3.3.1. Tamizaje fitoqumico..

43

III.3.3.2. Cromatografa en capa delgada..

45

III.3.3.3.

Anlisis

por

cromatografa

lquida

de

alta

resolucin (CLAR)..

46

III.3.5. Estabilidad de la tintura de M. paniculata.

49

III.4. Obtencin del gel a partir de la tintura de M. paniculata...

51

III.4.1. Evaluacin de los parmetros fsico-qumicos y tecnolgicos


del gel....
III.4.2. Estudio fitoqumico del gel de M. paniculata...
III.4.2.1. Cromatografa en capa delgada....
III.4.2.2.

Anlisis

por

cromatografa

lquida

de

alta

resolucin (CLAR)..

53
54
54
55

III.4.3. Control microbiolgico del gel de M. paniculata.

56

III.4.4. Prueba de preferencia o aceptacin de la formulacin.

57

III.4.5. Estabilidad integral de la formulacin..

58

III.5. Evaluacin preclnica de la tintura de M. paniculata y el gel..

60

III.5.1. Ensayo de toxicidad aguda drmica de la tintura de M.


paniculata y el gel..
III.5.2. Evaluacin del efecto antiinflamatorio de la tintura de M.
paniculata y el gel...

60

61

III.6. Discusin general...

63

CONCLUSIONES

65

RECOMENDACIONES.

66

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
ANEXOS

INTRODUCCIN

Introduccin

INTRODUCCIN
El tema de las plantas medicinales es quizs tan antiguo como el hombre
mismo, sin embargo, los conocimientos al respecto siempre han estado
diseminados. A pesar de la invasin farmacolgica mundial, las personas
siguen recurriendo a los remedios vegetales para aliviar sus enfermedades
comunes, por ello un esfuerzo por regresar a los productos naturales
representa un aporte muy significativo ya que son un recurso que debe
conocerse, usarse y cuidarse como parte del rico patrimonio natural de cada
pas (Quesada, 2008).

Uno de los aspectos importantes en la investigacin con plantas medicinales es


la disminucin en el costo de la teraputica medicamentosa y la puesta al
alcance de la poblacin de diferentes conocimientos prcticos para el tratamiento con plantas, las cuales deben estar debidamente autentificadas y
caracterizadas para asegurar la reproducibilidad en la fabricacin del producto
final (Neeraj y Bhupinder, 2011).

La comercializacin y uso de plantas medicinales y fitofrmacos ha mostrado


un crecimiento sostenido en las ltimas dcadas, pero solo en los ltimos aos
ha sido reconocida la importancia de la estandarizacin a todo lo largo del
proceso de diseo y desarrollo de fitomedicamentos. El valor de la etapa
agrotcnica, as como de la obtencin de extractos de calidad es indiscutible,
pero la nica forma de asegurar calidad, efectividad y seguridad ptimas, es
garantizando el adecuado cumplimiento de las buenas prcticas de fabricacin,
de acuerdo con el control de uno o ms marcadores bioactivos presentes en el
producto de inters. Solo una garanta de calidad que asegure la composicin
qumica adecuada y la actividad farmacolgica esperada, permitirn contar
entre nuestros arsenales teraputicos con productos fitoteraputicos seguros y
eficaces, que contribuyan a la salud de la poblacin y aumenten la confianza en
esta alternativa teraputica.
Ante esta situacin, los gobiernos de algunos pases, han reconocido la
necesidad de regular los aspectos bsicos de las plantas medicinales y los
productos derivados de ellas. Existen normas de estricto cumplimiento con el
1

Introduccin
fin de

garantizar la calidad y uniformidad para cada preparado de un

laboratorio, vigentes en los diferentes pases e incluso a nivel internacional.


Estas directrices estn plasmadas en Farmacopeas y regidas por la
Organizacin Mundial de la Salud, quien ha dictado diferentes lineamientos
(WHO, 1998, 2000a, 2000b, 2003, 2005).
La diversidad vegetal cubana, as como la alta aceptacin de la medicina
natural, constituyen uno de los pilares para el marcado inters que las
universidades y la industria farmacutica estn mostrando en el desarrollo de
fitoterpicos. En este sentido y teniendo en cuenta la amplia distribucin en
nuestra zona geogrfica de Murraya paniculata L. Jack (Rutaceae), es que
se considera de suma importancia el estudio y su introduccin en el arsenal
fitoteraputico de la comunidad, como una alternativa viable, a tener en cuenta
dentro de nuestra Medicina Natural y Tradicional, para tratar los sntomas y
signos de inflamacin y dolor asociados a enfermedades osteomioarticulares.
M. paniculata es conocida por los sinnimos de Chalcas paniculata L., M.
extica y por los nombres comunes de naranjo de jazmn, jazmn de Persia,
mirto, murallera y caf de la india. Tambin es reconocida tradicionalmente por
sus propiedades astringentes, estimulantes, analgsicas, antiinflamatorias,
entre otras (Roig, 1988; Ghani, 2003; Dash y cols., 2004; Rahman y cols.,
2010; Narkhede, 2012). El uso tradicional dado a esta especie vegetal en
Cuba, implica el empleo de la droga vegetal fresca, lo que limita la extensin de
su uso, considerando que el secado es uno de los procesos vitales en el
trabajo con la mayora de las plantas medicinales.
Es importante destacar que la etapa ms influyente del procesamiento poscosecha de las drogas vegetales es, sin lugar a dudas, el secado. La industria
utiliza plantas secas, lo cual facilita su almacenamiento y transportacin por
periodos de tiempo prolongados y sin riesgos de deterioro (lvarez y col.,
2008). Las excepciones son las plantas que son utilizadas para obtener aceites
esenciales, tinturas homeopticas y algunos pocos extractos. El secado
interrumpe los procesos de degradacin causados por enzimas o fermentos,
impide el desarrollo de microorganismos y las reacciones de oxidacin y de
hidrlisis. Sin embargo, este proceso involucra calor por lo que las plantas que
2

Introduccin
contienen aceites esenciales o sustancias voltiles, es recomendable secarlas
con temperaturas inferiores a 40 oC y con una adecuada circulacin de aire
(Sharapin, 2000; Acosta y Rodrguez, 2006).
Tomando en consideracin los elementos expuestos, se establece como
problema cientfico para esta investigacin:
La tintura de M. paniculata y sus fricciones, se encuentran reportadas en el
Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifrmacos del Ministerio de Salud
Pblica de Cuba, con una norma provisional que contempla algunos
parmetros fsico-qumicos y referencias que avalan su actividad biolgica,
sobre la base del empleo de la droga vegetal en estado fresco, lo que limita la
extensin de su utilizacin, ya que no se cuenta con estudios que avalen la
factibilidad del empleo de la droga seca con garanta de su calidad, seguridad y
eficacia.
Teniendo en cuenta estos antecedentes, se plantea la hiptesis siguiente:
La calidad de la droga seca de M. paniculata y su tintura, permite obtener un
fitomedicamento con garantas de seguridad y eficacia.
Para demostrar dicha hiptesis se proponen como objetivos de trabajo:
OBJETIVO GENERAL:
Obtener un gel a partir de la tintura M. paniculata (droga seca).
OBJETIVOS ESPECFICOS:
Evaluar la calidad y estabilidad de la droga seca de M. paniculata y su
tintura a travs de la determinacin de sus ndices fsico-qumicos.
Elaborar un gel a partir de la tintura de M. paniculata, garantizando su
calidad, aceptabilidad y estabilidad.
Estimar desde el punto de vista preclnico, la seguridad y efectividad de
la tintura y la formulacin obtenida.

CAPTULO I
REVISIN
BIBLIOGRFICA

Revisin Bibliogrfica

CAPTULO I. REVISIN BIBLIOGRFICA

I.1. Murraya paniculata (L.) Jack


I.1.1. CLASIFICACIN TAXONMICA Y DESCRIPCIN BOTNICA

M. paniculata presenta la clasificacin taxonmica siguiente (Wikipedia, 2009;


Casado y col., 2011; Varona, 2013):

Reino: Plantae
Subreino: Tracheobionta (planta vascular)
Superdivisin: Spermatophyta (planta con semillas)
Divisin: Magnoliophyta (plantas con flores)
Clase: Magnoliopsida (dicotiledneas)
Subclase: Rosidae
Orden: Sapindales
Familia: Rutaceae (Comprende plantas leosas o raramente herbceas,
provistas de glndulas secretoras oleferas).
Subfamilia: Citroideae
Tribu:Clauseneae
Gnero: Murraya (comprende alrededor de 35 especies de plantas con flores)
Especie: Murraya paniculata (L.) Jack

La especie es conocida tambin por los sinnimos de Chalcas paniculata L.,


M. extica y por los nombres comunes de naranjo de jazmn, jazmn de Persia,
mirto (Puerto Rico), murallera (Cuba), caf de la india (Roig, 1988). Es un
precioso arbusto o rbol ornamental (figura 1A) con un tamao promedio de 2 a
3 m de altura (Bhatterjee, 2000). Las hojas (figura 1B) son de color verde
oscuro, enteras, alternas o subopuestas. Foliolos de 3 a 9, aovados o a veces
rmbico-aovados, de 1,5-5 cm de largo y de 0,7-2,3 cm de ancho, obtusos u
obtusamente acuminados y con frecuencia emargindas en el pice,
cuneiformes en la base, cortamente pecioladas. Las flores (figura 1C) son
acampanadas, fragantes, de 1,3-2 cm de ancho, spalos triangulares, obtusos,

Revisin Bibliogrfica
ptalos de 1-2,5 cm; los frutos (figura 1D) son de color rojo, subglobosos, de 11,6cm (Roig, 1988).

A
B
C
D
Figura 1: Detalles macromorfolgicos de M. paniculata
A: Arbusto; B: Hojas; C: Flores; D: Frutos

I.1.2. HABITAT Y DISTRIBUCIN

M. paniculata es nativa de China, India, Sri Lanka, Viet Nam, Laos, Noreste de
Australia y Taiwn, adicionalmente, puede adaptarse a pases tropicales
(Parrotta 2001). Es una de las plantas ms comunes en patios y jardines, muy
empleada para formar setos y podarlas. A causa de su fcil propagacin por
semillas, se ha hecho espontnea en muchos lugares, cultivndose en las
Antillas y en Amrica tropical continental (Roig, 1988).
Esta especie se adapta a un amplio rango de condiciones. Crece en lugares
desde el nivel del mar, hasta elevaciones de 1300m. Se desarrolla en suelos
bien drenados, sedimentarios. Resiste temperaturas de -4

C y puede

desarrollarse tanto a la sombra como en sitios iluminados (Desert-Tropicals,


2002; Pacific Island Ecosystems at Risk, 2002; Casado y col., 2011). En
cultivos in vitro de la especie, se han encontrado diferencias notables en las
caractersticas de las hojas y flores respecto a las cultivadas naturalmente (Mat
y Wat, 2008).
I.1.3. USOS ATRIBUIDOS
Se ha usado tradicionalmente para formar guardarrayas en los jardines y para
adornos florales. Las hojas, cortezas y races de esta planta han sido

Revisin Bibliogrfica
empleadas para el tratamiento de diarrea, disentera, reumatismo, erupciones
en la piel y picazn. Las flores son empleadas en la fabricacin de cosmticos
(Roig, 1988; Ghani, 2003; Rout y col., 2007; Casado y col., 2011).
I.1.4. FITOQUMICA, FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA
Datos de la literatura referentes a estudios fitoqumicos revelan la presencia en
esta especie de alcaloides indlicos como el yuehchukeno y el paniculol en las
races (Kong y col., 1985; Ito y Furikawa, 1990); en las hojas han sido
encontrados isoflavonoides (Lapcik y col., 2004), flavonas e flavanonas (o
chalconas) polimetoxiladas (Zhang y col., 2011). En la corteza y pulpa de los
frutos frescos fueron encontrados los flavonoides siguientes: 5,7,3',4',5'pentametoxiflavanonol,
heptametoxiflavona,
heptametoxiflavona,
pentametoxiflavona,

5,6,7,3',4',5'-hexametoxiflavona,
5,7,8,3',4',5'-hexametoxiflavona,
3,5,7,8,3',4'-hexametoxiflavona,

3,5,6,7,3',4',5'3,5,7,8,3',4',5'-

5-hidrxi-3,7,8,3',4'-

5-hidrxi-3,7,8,3',4',5'-hexametoxiflavona

8-hidrxi-

3,5,7,3',4',5'-hexametoxiflavona (Ferracin y col., 1998). De las partes areas de


la planta fueron aisladas las coumarinas 1',2'-O-isopropilideno murrangatina
(Saied y col., 2008), onfamurrayina (Kinoshita y Shimada, 2002), murramarina
A y bismurragantina (Negi y col., 2005).

La especie tambin contiene aceites esenciales, cuya composicin vara


dependiendo del rgano de la planta y el origen geogrfico. Flores de la India
tienen como principales componentes a -elemeno, -cariofileno, germacreno
D, nerolidol, benzoato de benzilo, benzoato de feniletilo y manol (Rout y col.,
2007). El aceite esencial de las hojas y frutos de plantas que crecen en Nigeria
es rico en sesquiterpenoides y los principales compuestos de las hojas son ciclocitral, salicilato de metilo, trans-nerolidiol, - y -cubebeno, cubenol y
isogermacreno; los frutos contienen -cariofileno, zingibereno, germacreno D,
-copaeno y -humuleno (Olawore y col., 2005). Especies de Bangladesh
contienen aceites esenciales ricos en xido de cariofileno, -cariofileno,
espatulenol, -elemeno, germacreno D, y 4-metileno-6-(1-propenilideno)cicloctano (Chowdhury y col., 2008; Mesquita y col., 2008). Un estudio del

Revisin Bibliogrfica
aceite esencial obtenido a partir de las hojas de la especie, cultivada en zonas
montaosas del centro de Cuba, mostr la presencia de -cariofileno, cubebeno, -cadineno e germacreno D, entre otros (Jorge y col., 2012).
Desde el punto de vista de las actividades biolgicas, el aceite esencial de M.
paniculata demostr actividad insecticida (Qing y col., 2010), antibacteriana
contra Escherichia coli, Proteus mirabilis, Salmonella typha, Enterobacter
aerogenes y Shigella flexineri, as como propiedades antifngicas (Sundaram y
col., 2011), antiinflamatoria y analgsica (Dash y col., 2004). Otros estudios
revelan la actividad antioxidante de un extracto etanlico obtenido a partir de la
planta (Sundaram y col., 2011), antinociceptiva, antiinflamatoria (Narkhede y
col., 2012; Rodanant y col., 2012), y antidiarreica (Rahman y col., 2010).
Mientras tanto, Kumar y col. (2011) demostraron la accin analgsica del
extracto de ter de petrleo/acetato de etilo/metanol (1:1:1), de la corteza del
tallo de la especie. El extracto clorofrmico de las hojas present accin contra
Entamoeba histolytica (Sawangjaroen y col., 2006).

Los estudios preliminares del extracto etanlico de las hojas de la especie, en


plantas que crecen en la regin occidental de Cuba, han mostrado desde el
punto de vista fitoqumico la presencia, entre otros compuestos, de copaeno, cubebeno, -cariofileno, germacreno B, ostol, 6-fenil izoquinolina, sitosterol, Lprolina, cido ferlico y mio-inositol, para los cuales estn descritas en la
literatura propiedades antiinflamatorias y analgsicas. Adicionalmente, la
evaluacin preclnica inicial de los extractos, no mostr ninguna evidencia de
toxicidad cutnea aguda en los animales de ensayo, present potencial
antioxidante y corrobor el efecto antiinflamatorio (modelo de edema auricular),
tradicionalmente reconocido, con resultados prximos a los encontrados para el
tratamiento con benzidamina, en las condiciones testadas (Varona, 2013).

Resultados publicados en 2014 sugieren que los flavonoides totales extrados


de las hojas de M. paniculata tienen un efecto protector contra la lesin renal
en la nefropata diabtica (Jingtao y col., 2014). Por otro lado, el efecto

Revisin Bibliogrfica
vasorelajante de la fraccin clorofrmica del extracto metanlico de la planta
tambin fue demostrado. Dos coumarinas fueron aisladas a partir de esta
fraccin: la nueva sustancia kimcuongina y la ya conocida murracarpina, ambas
mostraron actividad vasorelajante con valores de CI50 de 37,7 M e 139,3 M,
respectivamente (Nguyen y col., 2014). Otro estudio fitoqumico llev al
aislamiento del alcaloide isomurrayafolina B, que mostro actividad analgsica
profunda en modelos de dolor perifrico y central (Fazal y col., 2014). Es
tambin muy importante realzar la presencia de trigonelina en esta especie
vegetal. Adems de las semillas de las leguminosas y el caf (Coffea arabica
L.), apenas algunas pocas especies acumulan altas concentraciones de
trigonelina y resultados recientes muestran a M. paniculata entre estas. La
trigonelina fue encontrada en todas las partes de la planta y ms del 70 % del
total, se encontraba en las hojas (Ashihara y Watanabe, 2014). Este compuesto
bioactivo tiene actividad hipoglucmica, hipolipidmica, neuroprotectora,
sedativa, contribuye a la mejora de la memoria y tambin presenta actividad
antibacteriana, antiviral y antitumoral, y demostr reducir a neuropata diabtica
auditiva y la agregacin plaquetaria (Zhou y col., 2012).
Gautam y col. (2012) en estudios de toxicidad aguda y sub-aguda por va oral,
de un extracto etanlico al 50% obtenido de las hojas de M. paniculata,
demostraron que dicho extracto era seguro, al no encontrar signos de toxicidad
por esta va en los animales de experimentacin.
I.2. MEDICAMENTOS HERBARIOS. GENERALIDADES
El concepto de medicamentos herbarios abarca hierbas, material herbario,
preparaciones herbarias y productos herbarios acabados, que contienen como
principios activos partes de plantas, u otros materiales vegetales, o
combinaciones de esos elementos (WHO, 2000a; 200b; Morales M. y Morales
J., 2009; Neeraj y Bhupinder, 2011).
En los medicamentos herbarios se rene el conocimiento ancestral
etnobotnico y etnomdico, as como, los aspectos farmacolgicos preclnico y
clnico. De esta forma, se contina el uso de la planta medicinal, ahora en
forma de extracto estandarizado y con el respaldo de toda la tecnologa

Revisin Bibliogrfica
farmacutica actual, logrndose un medicamento que no guarda diferencia en
su aspecto y calidad con los medicamentos alopticos, pero presenta
generalmente un elevado rango teraputico, es decir, condiciones de mayor
seguridad que hacen confiable su uso (Morales M. y Morales J., 2009).
Los medicamentos herbarios tienen una considerable importancia en el
comercio internacional. Sigue en aumento el reconocimiento de su valor clnico,
farmacutico y econmico, pero solo una cantidad relativamente pequea de
especies de plantas han sido estudiadas para posibles aplicaciones mdicas y
los datos sobre seguridad y eficacia estn disponibles para un nmero reducido
de ellas en algunas farmacopeas; este inconveniente limita el desarrollo,
produccin y comercializacin de fitomedicamentos, tanto en los mercados
nacionales como internacionales. Por ello, se hace necesario enfatizar en la
necesidad de garantizar su control de la calidad, con la aplicacin de tcnicas
modernas y el empleo de patrones apropiados (Busse, 2000; Osorio, 2009;
Neeraj y Bhupinder, 2011).
La calidad de un producto herbario es un estado determinado por su identidad,
pureza,

volumen,

marcadores

qumicos,

propiedades

fsico-qumicas,

propiedades biolgicas o por el proceso industrial. Al ser mezclas de varios


compuestos qumicos son difciles de caracterizar, siendo esencial una
definicin cientfica clara del material crudo (Ahmad y col., 2006), para lo cual
se hace necesario garantizar un correcto control del material vegetal desde la
recoleccin, tener conocimiento de la especie en cuanto a la organografa y
fisiologa de la misma, del lugar donde se realiza la colecta y saber las
variaciones que puede sufrir la composicin de las plantas en las diferentes
pocas y fases de su vida. (Sharapin y col. 2000; HMPWG, 2001; WHO, 2003).

Todo lo que en cuanto a control de calidad pueda ser garantizado durante el


proceso de investigacin y desarrollo de medicamentos herbarios contribuir a
una adecuada estandarizacin, palabra de orden en la actualidad en el campo
de los productos naturales y que comprende informacin y controles totales

Revisin Bibliogrfica
para, esencialmente, garantizar una composicin consistente de todas las
drogas vegetales, incluyendo operaciones analticas para sus marcadores de
identificacin y ensayos para sus principios activos. El control de calidad al
producto terminado debe conducir a la produccin de formulaciones herbarias
estandarizadas y teraputicamente efectivas. Cada pas necesita explorar sus
plantas medicinales ms relevantes, pero esto solo podr lograrse si los
medicamentos herbarios son evaluados y analizados usando tcnicas
modernas de estandarizacin (Choudhary y Singh, 2011; Garg y col., 2012).
I.3. GELES
I.3.1. GENERALIDADES
Los geles son sistemas dispersos, por lo general transparentes o traslcidos,
formados por lquidos (hidrfilos o hidrfobos) a los que se adicionan
sustancias de naturaleza coloidal capaces de formar una estructura continua,
cuya naturaleza y caractersticas definen las propiedades reolgicas del
conjunto. Otro modo de definir los geles es a partir de su mtodo de obtencin;
en este sentido, stos se obtienen a partir de soluciones coloidales que, por
diferentes modificaciones en su entorno, adquieren una estructura ordenada
tridimensional que fija las partculas de soluto alrededor de las del coloide (Juv
y col., 2007).
Es importante destacar que los geles con el tiempo pierden su condicin y su
estructura puede llegar a romperse, su estabilidad depende en gran medida de
una correcta formulacin, por lo que deben tomarse en consideracin en este
proceso las incompatibilidades que se puedan presentar, en la forma
farmacutica en s y otras especficas del polmero utilizado. Igualmente es
preciso considerar algunos factores desencadenantes de su inestabilidad como
son la temperatura, los cambios de pH, la agitacin violenta, la presencia de
electrlitos, etc. (Le Hir, 1995).

10

Revisin Bibliogrfica
I.3.2. CLASIFICACIN DE LOS GELES

Existen diferentes criterios de clasificacin de los geles, considerados como


forma de aplicacin tpica. En funcin de su consistencia y propiedades
reolgicas, algunos de ellos pueden acondicionarse en aplicadores (barras) o
bien en tubos. Algunos autores consideran tambin dentro de esta forma de
aplicacin a preparaciones lquidas viscosas de diferente naturaleza. Los
criterios ms comunes de clasificacin son (Juv y col., 2007):
Dependiendo de su comportamiento frente al agua:

Geles hidrfilos o hidrogeles: constituidos por agua, glicerina,


propilenglicol u otros lquidos hidroflicos. Gelificados por sustancias de
tipo polimricas, goma tragacanto, almidn, derivados de la celulosa,
polmeros carboxlicos o silicatos de aluminio y magnesio.

Geles hidrfobos o lipogeles (oleogeles): constituidos por parafina


lquida adicionada de polietileno o por aceites grasos gelificados por
anhdrido silcico coloidal o por jabones de aluminio y zinc.

Segn el nmero de fases en que estn constituidos:

Geles monofsicos: el medio lquido lo constituye una sola fase o


lquidos miscibles; agua-alcohol, solucin hidroalcohlica, aceite, etc.

Geles bifsicos: constituidos por dos fases lquidas inmiscibles,


formndose una estructura transparente con propiedades de semislido.
Se pueden dividir en dos grupos:
TOW geles (Transparent Oil in Water emulsions): son geles
bifsicos transparentes, obtenidos mediante solubilizacin micelar de
la parte oleosa de la frmula, un emulgente que se comporta como
agente solubilizante. Se presentan en forma de un sistema de
cristales lquidos, transparentes y viscosos que pueden incorporar
activos tanto liposolubles como hidrosolubles. Suelen ser simples en
cuanto a ejecucin y componentes, integran uno o varios emulgentes
11

Revisin Bibliogrfica
hidrfilos, capaces de formar micelas, un cosolvente que facilita la
micelacin del lpido y un lpido (o mezcla de lpidos fluidos y agua).
TAS geles (Transparents Aqua Silicone emulsions): son geles
transparentes basados en emulsiones de siliconas. Se consideran
como cremas transparentes de agua en silicona. Para prepararlos se
incorpora la fase acuosa sobre la fase oleosa lentamente y con
agitacin media-alta. Se elaboran en fro y pueden incorporar
diferentes activos cosmticos tales como clorhidrato de aluminio,
filtros solares, etctera.
Segn su viscosidad:
-

Geles fluidos

Geles semislidos

Geles slidos (formulacin de los stikcs, desodorantes y colonias


slidas)

Segn su estructura:
-

Geles elsticos: Un gel tpico elstico es el de gelatina. Se obtiene por


enfriamiento del sol lifilo que resulta cuando se calienta esta sustancia
con agua. Otros soles dan geles elsticos, por ejemplo: agar, almidn,
pectina, siempre que no sean demasiado diluidos. El gel elstico por
hidratacin se regenera. Cuando un gel elstico ha tomado mucho
lquido, por ejemplo agua, de la fase vapor, todava puede adsorber
cantidades considerables cuando se lo coloca en el lquido, aumentando
notablemente el volumen del gel; este fenmeno se llama imbibicin o
hinchamiento o sweeling.

Geles no elsticos: El gel no elstico ms conocido es del cido silcico


o gel de slice. Se obtiene mezclando soluciones de silicato de sodio con
cido clorhdrico en concentraciones apropiadas. Un gel no elstico
(slice) se hace vtreo o se pulveriza y pierde su elasticidad por secado.
Los geles no elsticos no tienen imbibicin o hinchamiento, pueden
tomar lquido sin cambio de volumen.

12

Revisin Bibliogrfica
Segn la naturaleza de la fase interna:
-

Inorgnicos: como el magma de la bentonita.

Orgnicos:
Naturales: como la goma arbica y la gelatina.
Sintticos:

como

la

carboximetlcelulosa

sdica

hidroxiproplcelulosa.

I.3.3. APLICACIONES MDICO - FARMACUTICAS DE LOS GELES


Los geles pueden ser usados como lubricantes, analgsicos musculares, en
electrocardiografa, como geles dentales de fluoruros, geles nasales, como
excipientes para tratamiento dental, drmico y de modo intravaginal, entre
otros. Esta forma farmacutica acrecienta la adhesividad y as es capaz de
mantener durante ms tiempo en contacto al principio activo con la piel o las
mucosas (nasales, vaginales, etc.). Son usados como lubricantes y
acarreadores de espermicidas vaginales, otra virtud de los geles es que tienen
un amplio rango de humectacin, por lo tanto su evaporacin y la absorcin de
sus principios activos pueden ser ampliamente manipuladas (Farmacopea de
Estados Unidos Mexicanos, 1994).
Ser bien tolerados, fcilmente lavables y producir frescor, pueden considerarse
las principales ventajas de esta forma farmacutica, aunque no deben dejar de
tomarse en consideracin sus desventajas entre las que se destacan su
incompatibilidad con numerosos principios activos, su tendencia a la
desecacin y su bajo poder de penetracin, lo que los hace ser indicados
fundamentalmente para tratamientos superficiales (Remington, 1998).
I.4. PRUEBAS DE PREFERENCIA Y ACEPTACIN
La industria farmacutica y nutracutica que se encargan de desarrollar
productos beneficiosos para la salud encuentra una oportunidad en el mercado
debido a la creciente demanda de los consumidores por el cuidado de su salud.
En este sentido, aplicar el anlisis sensorial en el desarrollo de productos,
especialmente estas pruebas de tipo afectivas, puede implicar importantes
ventajas, pues hoy en da los consumidores valoran que los productos tengan
unas caractersticas sensoriales aceptables. Por ello, la relacin entre la

13

Revisin Bibliogrfica
conformidad del producto y unas caractersticas sensoriales aceptables es
cada vez ms importante a la hora de desarrollar un producto. Por ejemplo, en
el caso de los productos farmacuticos los consumidores se ven obligados a
tomar un medicamento o aplicar algunos por va externa y soportar
caractersticas tales como: sabores amargos, una sensacin astringente, o el
excesivo tamao de las cpsulas o tabletas que dificultan la ingesta, as como
una textura arenosa en la piel, entre otras (Ainia, 2011).

En tal sentido, la aceptacin y la preferencia son medidas usadas por los


profesionales del campo del anlisis sensorial y del consumidor, en especial
para los productos que se encuentran en sus primeras etapas de desarrollo.
Ambas medidas ofrecen informacin sobre el nivel de agrado o rechazo que
causa un producto, pero la aceptacin y la preferencia aportan datos diferentes
que no deberan considerarse intercambiables. Adicionalmente existen
diferentes riesgos, como por ejemplo en la interpretacin de los resultados,
cuando se usan estas medidas en pruebas de bienes de consumo (Rothman,
2011).
En estas pruebas, tambin conocidas como afectivas, el panelista expresa el
nivel de agrado, aceptacin y preferencia por un producto alimenticio, para lo
cual se emplean escalas de calificacin de las muestras. Particularmente las
pruebas de preferencia se utilizan para definir el grado de aceptacin y
preferencia de un producto determinado por parte del consumidor. Para estas
pruebas se requiere de un grupo bastante numeroso de panelistas los cuales
no necesariamente tienen que ser entrenados y en el caso de las pruebas de
aceptacin permiten medir adems del grado de preferencia, la actitud del
panelista o catador hacia el producto, es decir se le pregunta al consumidor si
estara dispuesto a adquirirlo y por ende su gusto o disgusto frente al producto
catado. Estas ltimas son de mucha utilidad en el desarrollo de nuevos
productos, ante el cambio de tecnologas, la mejora de productos, reduccin de
costos, la determinacin de la vida til de los productos, etc. (Carreto, 2012).

14

CAPTULO II
MATERIALES Y
MTODOS

Materiales y Mtodos

CAPTULO II. MATERIALES Y MTODOS

II.1. RECOLECCIN Y SELECCIN DEL MATERIAL VEGETAL


La especie vegetal utilizada para la realizacin del trabajo fue Murraya
paniculata (L.) Jack, recolectada en la Finca La Quirubina, localidad de
Ceiba del Agua, municipio Caimito del Guayabal, provincia Artemisa,
correspondiendo a plantas adultas.
Se trabajaron cuatro lotes de plantas: Febrero/2013 (estado fenolgico
vegetativo), Enero/2014 (estado de fructificacin), Abril/2014 (floracin),
Octubre/2014 (estado vegetativo). La especie fue recolectada por el campesino
Bienvenido Lazo de la Vega, herborizada y registrada en el Jardn Botnico
Nacional con el cdigo de identificacin HFC 85589 (HAJB).
De las colectas realizadas solo se emplearon las hojas y tallos finos (follaje),
previamente lavados con agua potable, los cuales fueron cortados en trozos
pequeos con ayuda de tijeras, para facilitar el proceso de secado.

II.2. PARMETROS DE CALIDAD DEL MATERIAL VEGETAL DE M.


paniculata
II.2.1. ESTUDIO DE SECADO
El secado se realiz a 38 C, en estufa con recirculacin de aire, marca AISET,
modelo YLD-6000 de fabricacin China. En el estudio se utilizaron 200 g de
muestra por cada rplica. Se tuvo en cuenta el nmero de das que demoraba
la droga en alcanzar peso constante (tiempo de secado) y el porcentaje de la
prdida en peso de agua (con una frecuencia de 12 h) (NRSP 309, 1992;
Miranda y Cullar 2000).
III.2.2. PARMETROS FSICO-QUMICOS DE LA DROGA CRUDA DE M.
paniculata
Los diferentes ensayos se realizaron segn la metodologa descrita por la
NRSP 309 (1992) y Miranda y Cullar (2000), los cuales se sealan a
continuacin:

15

Materiales y Mtodos
a) Humedad residual
Se emple el mtodo azeotrpico por triplicado, a partir de 10 g de muestra, se
utiliz tolueno como disolvente, un equipo Dean Star, una plancha de
calentamiento elctrica marca IKA-C-MAG-HP7, de fabricacin China y para las
pesadas se us una balanza analtica marca Sartorius.
Los resultados se obtuvieron a partir de la expresin:
Hr =

Vf

Vi

x 100

Donde:
Hr: humedad residual (%)
Vf: volumen final de agua (mL)
Vi: volumen inicial de agua (mL)
M: masa de la muestra (g)
100: factor matemtico para el clculo.

b) Sustancias solubles o extrables


Este ensayo se llev a cabo por triplicado, a partir de 5 g de droga. Se utiliz
como disolvente una mezcla hidroalcohlica al 80 %. Las muestras se agitaron
en una zaranda modelo BIOZARD- 2013 por un tiempo de 6 horas.
Los clculos se realizaron segn:

Ss =

R.500.100
M (100-H)

Donde:
Ss: sustancias solubles (%)
R: residuo de la muestra (g)
M: masa de la muestra (g)
H: humedad residual (%)
500 y 100: factores matemticos para el clculo.

16

Materiales y Mtodos
c) Cenizas totales, cenizas solubles en agua y cenizas insolubles en cido
clorhdrico al 10 %
Para las determinaciones se emple una mufla modelo MLW VEB
ELEKTROBAD FRANKENHAUSEN. Las pesadas se realizaron en balanza
analtica marca SARTORIUS. Cada determinacin se efectu 6 veces a partir
de 2 g de material.
Cenizas totales
Los clculos se efectuaron por la expresin siguiente:
CT =

M2 - M

x 100

M1 - M

Donde:
Ct: cenizas totales (%)
M: masa del crisol vaco (g)
M1: masa del crisol con la muestra (g)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
100: factor matemtico para el clculo.

Cenizas solubles en agua


Las determinaciones se llevaron a cabo a partir de las cenizas totales, luego de
disolver las mismas con agua destilada. Los clculos se realizaron mediante la
expresin siguiente:

Ca =

M2 - Ma

x 100

M1 - M

Donde:
Ca: cenizas solubles en agua en base hidratada (%)
M2: masa del crisol con las cenizas totales (g)
Ma: masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)
M1: masa del crisol con la muestra de ensayo (g)
M: masa del crisol vaco (g)
100: factor matemtico para el clculo.
17

Materiales y Mtodos
Cenizas insolubles en cido clorhdrico al 10 %
Se determinaron a partir de las cenizas totales, despus de tratar las mismas
con cido clorhdrico al 10 %. Los resultados se obtuvieron por la frmula
siguiente:

B=

M2 - M

x 100

M1 - M

Donde:
B: cenizas insolubles en cido clorhdrico en base hidratada (%)
M2: masa del crisol con la ceniza (g)
M: masa del crisol vaco (g)
M1: masa del crisol con la porcin de ensayo (g)
100: factor matemtico para el clculo.

II.2.3. ESTABILIDAD DE LA DROGA CRUDA DE M. paniculata


El estudio de estabilidad de la droga cruda, follaje de M. paniculata, fue
desarrollado al lote procedente de la colecta de Febrero de 2013, envasado en
bolsas de polietileno de baja densidad (de uso muy difundido por su bajo
costo), durante un periodo de un ao en estante, a temperatura ambiente (T=
30 oC 2 oC, Humedad relativa de 70 % 5 %). La frecuencia de los anlisis
fue determinada a partir de la Regulacin No. 23 2000 del CECMED, que
establece los requerimientos de los estudios de estabilidad para el registro de
productos farmacuticos nuevos y conocidos, y fue de 0, 3, 6, 9 y 12 meses.

II.2.3.1. PARMETROS FSICO-QUMICOS


Se evaluaron parmetros fsico-qumicos como propiedades organolpticas,
humedad residual, sustancias solubles en etanol al 80 %, cenizas totales,
cenizas solubles en agua y cenizas insolubles en cido clorhdrico al 10 %. (ya
referidos en el acpite II.2.2).

18

Materiales y Mtodos
II.2.3.2. ESTUDIO QUMICO CUALITATIVO
Se realiz un anlisis por cromatografa en capa delgada dirigido a la deteccin
de L-prolina, uno de los marcadores qumicos de la planta. Se usaron placas
de gel de slice (F 254 nm de la Merck) de 10 x 5 cm sobre soporte de vidrio.
Se emple como sustancia de referencia L-prolina (99 % pureza, procedente
de la Merck). El desarrollo cromatogrfico fue de forma ascendente. Las
condiciones de trabajo fueron las siguientes:
Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua (4:1:1)
Revelado: Rociado con solucin de ninhidrina modificada (0,2 g de
ninhidrina en 5 mL de cido actico y 95 mL de n-butanol) y calor hasta
la aparicin de manchas.

II.2.3.3. CONTROL MICROBIOLGICO


Este estudio se llev a cabo en los Laboratorios MEDSOL. Se realiz un conteo
total de aerobios mesfilos, hongos, levaduras y patgenos (Staphylococcus
aureus, Pseudomonas aeruginosa), considerando las normativas descritas en
la USP 35 - NF 30 (2012) para los productos de Categora 2, entre los que se
incluye el producto en investigacin.

II.3. OBTENCIN DE LA TINTURA DE M. paniculata

A partir del material vegetal seco, se elaboraron cuatro lotes de tinturas al 20


%, con una dimensin de 2 L cada uno. Fue utilizado el mtodo de maceracin,
por un perodo de 7 das, a una temperatura de 30 C 2 C, emplendose
como menstruo una mezcla hidroalcohlica al 80 %. Se sigui el procedimiento
descrito por la NRSP 312, 1992 y Miranda y Cullar, 2000.

19

Materiales y Mtodos
II.4. PARMETROS DE CALIDAD DE LA TINTURA DE M. paniculata
II.4.1. PARMETROS FSICO-QUMICOS
Para las determinaciones de calidad se sigui el procedimiento descrito en la
NRSP 312, 1992 y por Miranda y Cullar, 2000, se realizaron cinco rplicas
para cada experimento, siendo evaluados los parmetros siguientes:

a) Requisitos organolpticos

a.1) Determinacin del olor. Se toma una tira de papel secante de


aproximadamente 1 cm de ancho por 10 cm de longitud y se introduce un
extremo en la muestra de ensayo. Se huele y se determina si corresponde con
la caracterstica del producto.

a.2) Determinacin del color. Se toma un tubo para ensayos, bien limpio y
seco, se llena hasta las tres cuartas partes con la muestra de ensayo y se
observa el color, la transparencia, la presencia de partculas y la separacin en
capas. Se informa el resultado.
b) pH
Para la determinacin del pH se utiliz un pH-metro modelo Basic 20 Crizon,
previamente ajustado con soluciones buffer a pH = 4,01 y 7.
c) Slidos totales
Se emple una balanza de peso seco marca Sartorious. Los slidos totales St
(%) se calcularon mediante la frmula siguiente:

St

Pr P
100
V

Donde:
Pr = masa de la cpsula ms el residuo (g)
P = masa de la cpsula vaca (g)
V = volumen de la porcin de ensayo (mL)
100 = factor matemtico

20

Materiales y Mtodos
d) Densidad relativa
Se realiz por picnometra y se utiliz una balanza analtica monoplato marca
Metttler H10T. De la muestra de ensayo se tom la cantidad necesaria de
acuerdo con la capacidad del picnmetro y se enfri a 25 oC.
La densidad relativa a 25 oC se calcul mediante la frmula siguiente:

D25

M1 - M
M2 - M

Donde:
M = masa del picnmetro vaco (g)
M1= masa del picnmetro con la muestra de ensayo (g)
M2= masa del picnmetro con agua (g)
D= densidad relativa (g/mL)

e) ndice de refraccin
Se utiliz un refractmetro ABBE de la marca Carlzeiss Jena.

f) Contenido alcohlico
Se desarroll mediante un proceso de destilacin a partir de 25 mL de la
muestra de anlisis, hasta garantizar que todo el alcohol presente en la misma
fuera arrastrado hacia el destilado. Con la posterior determinacin del peso
especfico de dicho destilado se obtuvo el porcentaje de alcohol de la muestra
segn datos tabulados (NRSP 312, 1992 y Miranda, 2000).

P.E = M 1 - M
M2 - M

21

Materiales y Mtodos
Donde:
M1 = peso del picnmetro con la muestra a 20 C (g)
M2 = peso del picnmetro con agua a 20 C (g)
M = peso del picnmetro vaco (g)
P.E= Peso especfico (g/mL)

g) Anlisis capilar
Este ensayo se desarroll segn lo descrito en la NRSP 312, 1992, empleando
papel Whatman # 1. Para el anlisis e interpretacin de la imagen se tuvieron
en cuenta los aspectos siguientes:
Color
Altura
Descripcin de las diferentes partes
Examen bajo la luz ultravioleta
Cambios de coloracin con vapores de amonaco

II.4.2. CONTROL MICROBIOLGICO

Se sigui el mismo procedimiento referido en el acpite II.2.3.3.

II.4.3. ESTUDIO FITOQUMICO DE LA TINTURA


II.4.3.1. TAMIZAJE FITOQUMICO

Las tinturas obtenidas fueron sometidas a diferentes ensayos (figura 2), segn
lo establecido en la NRSP 312, 1992 y por Miranda y Cullar, 2000, para
extractos alcohlicos.

22

Materiales y Mtodos
EXTRACTO ALCOHLICO
O TINTURA
Dividir en fracciones

ENSAYO
BALJET
(Lactonas y
Coumarinas)
ENSAYO
RESINAS
(Resinas)

ENSAYO
FEHLING
(Sustancias reductoras)

ENSAYOS

ENSAYO
TRICLORURO
FRRICO
(Fenoles)

ENSAYO
ESPUMA
(Saponinas)

DRAGENDORFF
MAYER
(Alcaloides)

ENSAYO
NINHIDRINA
(Aminocidos)

ENSAYO
LIEBERMANN-BURCHARD
(Triterpenos y/o esteroides)

ENSAYO
SHINODA
(Flavonoides)

ENSAYO
BORNTRAGER
(Quinonas)

ENSAYO
ANTOCIANIDINAS
(Antocianidinas)

Figura 2. Ensayos de tamizaje fitoqumico efectuados a la tintura de


M. paniculata

II.4.3.2. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA


Se sigui el mismo procedimiento referido en el acpite II.2.3.2
II.4.3.3. ANLISIS POR
RESOLUCIN (CLAR)

CROMATOGRAFA

LQUIDA

DE

ALTA

Las muestras fueron filtradas por membrana de tefln y se introdujeron


directamente en el equipo. Se utiliz como sustancia de referencia el
aminocido L-prolina (99 % de pureza, procedente de la Merck) a la
concentracin de 200 g/mL y el mismo se solubiliz en metanol grado CLAR.
Para el estudio se utiliz un cromatgrafo lquido Smartline (Knauer, Alemania)
compuesto por una interfase Manager 5000, una bomba cuaternaria S-1000,
horno para columnas (KNAUER), autoinyector Marathon 3800(Knauer),
detector UV-2500 todo integrado al programa ClarityChrom v 2.4 para la
adquisicin, procesamiento y reporte de datos (Knauer, Alemania). Las
condiciones cromatogrficas ms adecuadas de trabajo fueron las siguientes:

23

Materiales y Mtodos
Fase mvil: Solucin buffer fosfato pH=2,4: acetonitrilo (70:30)
Detector UV: 440 nm
Flujo: 0,6 mL/min., modo isocrtico
Volumen de inyeccin: 20 L
Columna: C-18 No. de parte UP5ODB-150/046, No de serie 1105333,
lote A-5-7130, fabricante (Interchim, FRANCIA).
Temperatura de la columna: 25 C

En la determinacin cualitativa se tuvo en cuenta el tiempo de retencin del


estndar y las muestras, considerndose como positivas para la presencia de
L-prolina el valor que se encontraba en el rango promedio de su tiempo de
retencin.
La determinacin cuantitativa se realiz mediante una curva de calibracin
elaborada con diferentes concentraciones de la sustancia de referencia Lprolina (30, 50, 200, 300 y 350 g/mL) y la estimacin de la concentracin de
dicho compuesto en las muestras analizadas, las cuales constituyeron las
tinturas. Se valor el pico positivo para el patrn ensayado y el valor de rea
que corresponda al mismo.
Con los valores de reas obtenidos a partir del estndar de trabajo se elabor
la curva de calibracin: rea (y) vs Concentracin terica (x). Se realiz un
anlisis de regresin lineal y se obtuvo la ecuacin lineal (y=a+bx) y el valor de
correlacin (r).
En la ecuacin lineal obtenida se reemplaz el valor de Y por cada una de las
cuentas de rea de las muestras y sus rplicas. Este resultado correspondi a
la concentracin del compuesto de inters (aminocido prolina) expresada en
g/mL de muestra.
II.4.4. ESTABILIDAD DE LA TINTURA DE M. paniculata
Para evaluar la estabilidad integral de la tintura se escogi el lote obtenido de la
colecta de Febrero/2013. La tintura se mantuvo almacenada en frascos de
cristal mbar, de 120 mL de capacidad, con tapas de baquelita o propileno,
ranuradas o estriadas, aptas

para contener productos de uso humano, a

temperatura ambiente (T= 30 oC 2 oC, Humedad relativa de 70 % 5 %).

24

Materiales y Mtodos
Se dio seguimiento al comportamiento de los parmetros fsico-qumicos de
calidad, determinacin del contenido de L-prolina por CLAR y control
microbiolgico, reflejados en los acpites II.4.1, II.4.3.3 y II.2.3.3.
La frecuencia de los anlisis fue determinada a partir de la Regulacin No. 23 2000 del CECMED, que establece los requerimientos de los estudios de
estabilidad para el registro de productos farmacuticos nuevos y conocidos, y
fue de 0, 3, 6, 9 y 12 meses.

II.5. OBTENCIN DEL GEL A PARTIR DE LA TINTURA DE M. paniculata


Se prepararon tres lotes de las formulaciones en el laboratorio, siguiendo la
tcnica de incorporacin (figura 3). Las formulaciones se envasaron en frascos
de cristal color mbar, de 200 g de capacidad, con tapas de baquelita o
propileno, aptas para contener productos de uso humano y fueron evaluados
los parmetros fsicos-qumicos y tecnolgicos, que permiten establecer la
calidad de la formulacin.
Carbopol
Agua (50 mL)
(Bao ultrasnico)

Vaso precipitado (250mL)


Tintura
Mentol
Propilenglicol
Metilparabeno
Propilparabeno

Agitacin manual

Completar volumen con


agua

Figura 3. Diagrama de flujo para la elaboracin del gel de M. paniculata

25

Materiales y Mtodos
Se emple la tintura al 20 % de M. paniculata (droga seca) como ingrediente
farmacutico activo y la misma se utiliz al 30 % en la formulacin. El resto de
los componentes fueron de calidad farmacutica y se listan a continuacin:
Mentol
Propilenglicol
Carbopol 940
NaOH al 10 %
Metilparabeno
Propilparabeno
Agua destilada

II.5.1.

EVALUACIN

DE

LOS

PARMETROS

FSICO-QUMICOS

TECNOLGICOS DEL GEL


Se realizaron las mediciones de los parmetros por triplicado, calculndose sus
valores promedios y sus respectivas desviaciones estndar (n=3, / s).
a) Determinacin de las propiedades organolpticas
Para este anlisis se tom en cuenta, de forma general, el olor, color, brillo y
apariencia de los geles.

b) Determinacin del pH
Se determin el pH de cada una de las muestras utilizando un pH-metro
modelo Basic 20 Crizon, previamente ajustado con soluciones buffer a pH =
4,01 y 7. Para hacer la medicin se transfirieron aproximadamente 20 g de
muestra a un vaso de precipitados de 50 mL.

c) Determinacin del rea de extensibilidad


Se tomaron dos lminas de vidrio de 12 x 15 cm, colocando una de ellas sobre
papel milimetrado. Se aadieron 2 g de preparacin pesado en balanza tcnica
digital Sartorius MC 1, en el centro de la placa antes sealada y se coloc

26

Materiales y Mtodos
cuidadosamente la otra lmina de vidrio; esta ltima con un peso de 250 g.
Transcurridos 5 minutos, se determin la distancia desde el punto de aplicacin
hasta donde se extendi el semislido. Se midi la extensibilidad en cuatro
direcciones perpendiculares entre s (PNO-LAB 12-002, 2002; Prez y col.,
2013).
Se calcul el rea de la circunferencia formada aplicando la frmula siguiente:

Donde:
A: rea de la circunferencia formada (cm2)
d1 y d2: dimetros perpendiculares a la circunferencia formada (cm)
E: extensibilidad del producto (cm2)

d) Propiedades viscoelsticas
La firmeza (N), la consistencia (g/s), la cohesividad (N), y el ndice de
viscosidad (m.pa.s) fueron determinadas mediante el empleo de un analizador
de textura (textureanalyzerTA HD plusStable Microsystems), utilizando 50 g de
muestra y las condiciones de trabajo siguientes: dimetro del vstago 18,8 mm,
modo de prueba compresin, velocidad de pre-test y

test: 1,00 mm/s,

velocidad post test 10 mm/s y distancia de penetracin 30,0 mm.

II.5.2. ESTUDIO FITOQUMICO DEL GEL DE M. paniculata


II.5.2.1. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA

El anlisis estuvo encaminado a la deteccin del aminocido L-prolina, para lo


cual se se pes 1 g de gel, se redispers en etanol al 80 % en un bao
ultrasnico por 10 minutos y posteriormente se filtr. Al filtrado se le realiz el
anlisis por cromatografa en capa delgada, siguiendo el mismo procedimiento
descrito en el acpite II.2.3.2.

27

Materiales y Mtodos
II.5.2.2. ANLISIS POR
RESOLUCIN (CLAR)

CROMATOGRAFA

LQUIDA

DE

ALTA

Para el anlisis se pes 1 g de gel, se redispers en metanol grado CLAR en


un bao ultrasnico por 10 minutos y posteriormente se filtr. Las muestras
fueron filtradas por membrana de tefln y se introdujeron directamente en el
equipo, siguiendo las mismas condiciones cromatogrficas que se detallan en
el acpite II.4.3.3.
II.5.3. CONTROL MICROBIOLGICO DEL GEL DE M. paniculata
Se sigui el mismo procedimiento referido en el acpite II.2.3.3.

II.5.4. PRUEBA DE PREFERENCIA O ACEPTACIN DE LA FORMULACIN


Para la realizacin de esta prueba se utiliz una escala hednica de cinco
puntos la cual se muestra a continuacin:
Me gusta mucho (5 puntos)
Me gusta moderadamente (4 puntos)
No me gusta ni me disgusta (3 puntos)
Me disgusta moderadamente (2 puntos)
Me disgusta mucho (1 punto)

El estudio se llev a cabo con 50 jueces no adiestrados, en un local


acondicionado al efecto. En anexo 1 se muestra la boleta de evaluacin
sensorial de la

formulacin con los diferentes atributos analizados. La

metodologa empleada para llevar a cabo esta prueba se bas en lo reportado


por Arcila y col. (2006), Acevedo y col. (2009) y Castaeda y col. (2009).

II.5.5. ESTABILIDAD INTEGRAL DE LA FORMULACIN


El estudio de estabilidad del gel de M. paniculata, fue desarrollado durante un
periodo de un ao, en condiciones de estante (temperatura de 30 oC 2 oC,
Humedad relativa de 70 % 5 %), durante el cual fueron evaluados sus
parmetros fsico-qumicos de calidad, determinacin del contenido de L-

28

Materiales y Mtodos
prolina por CLAR y control microbiolgico. Se segui la misma metodologa
descrita en los acpites II.5.1, II.5.2.2 y II.2.3.3.

II.6. EVALUACIN PRECLNICA DE LA TINTURA DE M. paniculata Y EL


GEL
II.6.1. ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA DRMICA DE LA TINTURA DE M.
paniculata Y EL GEL
Se desarroll la metodologa descrita en la OECD # 402, 1987. Para ello se
emplearon ratas procedentes del CENPALAB (Centro Nacional para la
Produccin de Animales de Laboratorio), se confeccionaron dos grupos,
compuestos por cinco animales, que recibieron los productos en estudio (tintura
de M. paniculata de Febrero/2013 y gel). El ensayo tuvo una duracin de 19
das (5 de aclimatacin y 14 de ensayo). Se aplicaron 4 mL por 200 mg de
peso corporal de las ratas, por va drmica y se evaluaron en ellos, signos
clnicos y conductuales, as como, la ganancia de peso, entre otros elementos.

II.6.2. EVALUACIN DEL EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE LA TINTURA


DE M. paniculata Y EL GEL
Para el experimento antiinflamatorio se indujo la inflamacin por aceite de
croton en la oreja del ratn, por va tpica. Se emplearon ratones de la lnea
OF1, machos, procedentes del CENPALAB, cuyo peso variaba de 25 a 30 g.
La comida y el acceso al agua fue "ad libitum, las condiciones de luz y
humedad fueron las descritas en la norma CYTED (1996). Para el estudio se
confeccionaron grupos de 5 animales cada uno, a saber, grupo control (tratado
con aceite de croton), grupo control positivo (tratado con indometacina) y dos
grupos tratados (Tintura de M. paniculata y gel). En cada caso fue aplicado 25
L de la muestra por cada cara del pabelln auditivo de la especie roedora. Las
orejas control y tratadas fueron pesadas y se determin el porcentaje de
inhibicin de la inflamacin. La tintura y el gel se administraron en la oreja
derecha de forma tpica, inmediatamente despus del agente irritante, de
modo que se lograra una capa fina en la zona afectada. Se sacrificaron a los
ratones, despus de 30 min. de la aplicacin de la solucin y se procedi a
29

Materiales y Mtodos
cortar las orejas a travs de las aristas. El porcentaje de inhibicin fue
calculado por la ecuacin siguiente:

% Inhibicin =100- [(Peso de la oreja tratada/Peso de la oreja control)100]

II.7. ANLISIS ESTADSTICO


Los resultados correspondientes al control de calidad de los lotes de droga
cruda y las tinturas de M. paniculata, as como la comparacin estadstica de
las formulaciones ensayadas, fueron procesados por el programa Statgraphics
Plus, versin 5.0, llevndose a cabo un anlisis de varianza de clasificacin
simple a travs de ANOVA-1, para un nivel de confianza del 95 %. Para la
comparacin de las medias se utiliz el test de Rangos Mltiples de Duncan.

30

CAPTULO III
RESULTADOS Y
DISCUSIN

Resultados y Discusin

CAPTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIN


III.1. ESTABLECIMIENTO DE LOS PARMETROS DE CALIDAD DEL
MATERIAL VEGETAL DE Murraya paniculata L
El establecimiento de los parmetros fsico-qumicos de una droga vegetal es
indispensable para proponer ndices de calidad que puedan garantizar su
eficacia y seguridad. El estudio fue desarrollado en varias pocas de colectas
con el propsito de poder determinar la influencia de este factor en las
caractersticas fsico-qumicas de la planta.
El anlisis se efectu con cuatro lotes de la especie colectados en los meses
de Febrero/2013, Enero/2014, Abril/2014 y Octubre/2014.
III.1.1. ESTUDIO DE SECADO
El secado es un aspecto fundamental dentro de los estudios farmacognsticos
encaminados a establecer la calidad de una droga, por lo que aplicar un
mtodo de secado apropiado evita que se activen procesos enzimticos
(fermentativos) que modifiquen la estructura de los posibles principios activos
(Miranda y Cullar, 2001; Acosta y Rodrguez, 2006).
Se conoce que el secado artificial es el ms recomendado en todos los casos.
Se emple la estufa porque, para la mayora de las especies vegetales, es el
mtodo ms eficiente y rpido para eliminar el alto contenido de agua que se
acumula en los materiales naturales. En este sentido, resulta conveniente
estudiar el tiempo que demora en secar el material bajo esas condiciones, la
prdida en peso de agua del material vegetal y el contenido de humedad
residual, aspectos imprescindibles a la hora de definir las condiciones de
secado de la planta.
Con relacin a la temperatura de secado hay que sealar que su control es
fundamental y constituye una seria limitante en el proceso; temperaturas
demasiado altas descomponen los metabolitos responsables de la accin
teraputica de las plantas medicinales y muy bajas hacen ms largo y costoso
el proceso, adems de ocasionar daos en el material por el desarrollo de
hongos. Por regla general la temperatura de secado no debe exceder los 40 oC

31

Resultados y Discusin
(Acosta y Rodrguez, 2006). En cuanto al tiempo de secado influyen numerosos
factores, entre ellos estn la consistencia de la planta o del rgano vegetal
cosechado donde la relacin masa fresca: masa seca es sumamente variable
(prdida en peso de agua), la humedad relativa, la cantidad de agua
acumulada en la planta antes del proceso de colecta, entre otros factores. Los
resultados del estudio se exponen en la tabla I.
Tabla I. Resultados del estudio de secado en estufa del material vegetal
de M. paniculata
_

Parmetros X /S

Lotes

Prdida por desecacin (%)

Tiempo de secado (das)

Febrero/2013

34,40/0,18a

7,0/0,9a

Enero/2014

34,60/0,23a

8,0/0,6b

Abril/2014

34,51/0,11a

7,0/0,2a

Octubre/2014

34,89/0,60a

7,0/0,6a

Leyenda:

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

Al someter la muestra a un secado en estufa (con recirculacin de aire,


temperatura de 38

C) se pudo constatar que el material vegetal sec

completamente entre los 7 y 8 das (168 y 192 horas respectivamente),


logrndose valores de prdidas en peso entre 34,40 y 34,89 %.
Al comparar los resultados para cada parmetro entre muestras de diferentes
meses de colecta, se demostr que existan diferencias significativas
solamente en los das de secado, lo cual pudiera atribuirse a las condiciones
climticas (humedad relativa) durante los das en que se realiz el estudio, as
como a la cantidad de agua acumulada en la planta antes del proceso de
recoleccin, que puede variar en dependencia de la poca de recoleccin.

32

Resultados y Discusin
III.1.2. PARMETROS FSICO-QUMICOS DE LA DROGA CRUDA DE M.
paniculata
Dentro del estudio farmacognstico de una droga se encuentra la
determinacin de un conjunto de parmetros fsico-qumicos, los cuales son
indispensables para garantizar su calidad y pureza, lo que se traduce en el
valor intrnseco de la misma. A continuacin se muestran en la tabla II algunos
de los parmetros que le fueron evaluados a los cuatro lotes de M. paniculata.

Tabla II. Parmetros fsico-qumicos de la droga cruda de M. paniculata


Resultados
_
X /S

Parmetros (%)
Febrero/2013

Enero/2014

Abril/2014

Octubre/2014

Humedad Residual

8,2/0,02a

8, 3/0,10a

8,5/0,20a

8,5/0,10a

Sustancias solubles
en etanol 80%

45,13/0,15b

40,33/0,10c

54,02/0,06d

49,23/0,12e

Cenizas totales

7,31/0,06f

7,39/0,09f

7,33/0,16f

7,37/0,06f

Cenizas solubles en
agua

1,87/0,07g

1,82/0,21g

1,85/0,14g

1,80/0,01g

Cenizas insolubles
en HCL al 10%

0,93/0,05h

0,98/0,08h

0,99/0,03h

0,96/0,02h

Leyenda:

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

El primer parmetro evaluado fue el contenido de humedad residual. Un exceso


de agua en la droga puede ocasionar la proliferacin de microorganismos e
insectos, seguido de la hidrlisis de principios activos, especialmente de
metabolitos glicosilados, y por consiguiente el deterioro del material vegetal.
(Miranda y Cullar, 2001). En la literatura se describen diversos mtodos para
determinar el contenido de humedad, pero el seleccionado en nuestra
experiencia fue el mtodo azeotrpico.
Generalmente, las normas y farmacopeas establecen un contenido de
humedad residual entre el 8 % y el 14 %, en dependencia del material vegetal
33

Resultados y Discusin
(Lou-Zhi-cen, 1980; WHO, 1998; Miranda y Cullar, 2001). En el estudio
efectuado a la planta, no se presentaron diferencias significativas entre las
cuatro muestras y el promedio de las determinaciones estuvo dentro del
intervalo exigido, o sea, se alcanzaron valores del 8,2 al 8,5 %, lo que demostr
la eficiencia del proceso de secado (estufa de recirculacin de aire a 38 C).
La determinacin de sustancias extrables o solubles es uno de los ndices
numricos ms importantes para seleccionar los mejores disolventes en el
proceso de extraccin. En la experiencia realizada se utiliz una mezcla
hidroalcohlica al 80 % considerando los resultados de estudios anteriores
donde se utiliza el mismo menstruo para la obtencin de la tintura a partir del
material vegetal en estado fresco. El anlisis estadstico de los resultados
mostr con un nivel de confianza del 95 %, que existen diferencias
significativas entre los lotes evaluados, siendo mayor el rendimiento de
sustancias extrables en la muestra procedente de la colecta de Abril/2014. Las
diferencias pudieran estar relacionadas con una mayor disponibilidad de
metabolitos por parte de la planta para favorecer algn proceso fisiolgico que
estuviese ocurriendo en ese momento (estado fenolgico) o con las
condiciones climatolgicas o ambas.
Las cenizas totales se definen como residuos que se obtienen al incinerar una
droga y su determinacin est incluida dentro de los parmetros de calidad de
inters a evaluar para el anlisis de un material vegetal. Adems, constituyen
una base para juzgar la pureza e identidad de este, brindando informacin
relativa a la posible adulteracin con materias inorgnicas o cuerpos extraos
que posea la misma, o la cantidad de estos en su contenido (Miranda y Cullar,
2001).
Las Farmacopeas plantean un ndice de cenizas totales hasta el 5 % (Lou-Zhicen, 1980; WHO, 1998), aunque los valores pueden variar significativamente
en dependencia del material vegetal y lugar de colecta. En la experiencia
realizada los valores obtenidos fueron algo elevados (entre 7,31 y 7,37 %),
aunque pueden ser caractersticos de esta planta. No se observaron
diferencias significativas entre las muestras evaluadas, aspecto lgico de

34

Resultados y Discusin
esperar pues las colectas a pesar de realizarse en pocas o estados
fenolgicos diferentes, el lugar de recoleccin siempre fue el mismo.

La cantidad

de

cenizas solubles

en agua

las

insolubles en cido

clorhdrico al 10 %, son tambin parmetros que ayudan a evaluar la pureza


de la droga. En ambas determinaciones los valores fueron pequeos y estn
dentro de los lmites establecidos (alrededor del 2 % para plantas medicinales)
(Lou- Zhi-cen, 1980; WHO, 1998). Tampoco se observaron diferencias
estadsticamente significativas entre los valores obtenidos.
III.1.3. ESTABILIDAD DE LA DROGA CRUDA DE M. paniculata
El estudio de estabilidad de la droga cruda, follaje de M. paniculata, fue
desarrollado al lote procedente de la colecta de Febrero de 2013, envasado en
bolsas de polietileno de baja densidad (de uso muy difundido por su bajo
costo), durante un periodo de un ao en estante, a temperatura ambiente (T=
30 oC 2 oC, Humedad relativa de 70 % 5 %).
III.1.3.1 PARMETROS FSICO-QUMICOS
Se evaluaron parmetros fsico-qumicos como propiedades organolpticas,
humedad residual, sustancias solubles en etanol al 80 %, cenizas totales,
cenizas solubles en agua y cenizas insolubles en cido clorhdrico al 10 %. Los
ndices numricos determinados se muestran en la tabla III.

35

Resultados y Discusin
TABLA III. Parmetros fsico-qumicos determinados en el estudio de
estabilidad en estante de la droga cruda de M. paniculata de Febrero/2013

Parmetros
(%)
_
X/S

Tiempo
Humedad
(meses)
Residual

Sustancias
solubles en
etanol al 80%

Cenizas
totales

Cenizas
solubles
en agua

Cenizas
insolubles en
HCL al 10%

8,20 /0,02a

45,13/0,15d

7,51/0,06e

2,27/0,07f

0,97/0,05g

8,32 /0,01a

45,10/ 0,20d

7,53/0,03e

2,25/0,01f

0,97/0,02g

8,45 /0,02a

45,17/ 1,18d

7,60/ 0,06e

2,25/0,02f

0,94/0,09g

9,26/0,02b

45,24/1,22d

7,55/0,08e

2,20/0,01f

0,97/0,03g

12

10,58 /0,06c

45,22/1,35d

7,55/0,01e

2,25/0,09f

0,90/0,01g

Leyenda: X / S: valor medio/ desviacin estndar


Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

Desde el punto de vista organolptico la droga vegetal present un color verde


y olor caracterstico, los cuales permanecieron inalterables durante los 12
meses de estudio. El anlisis estadstico de los resultados del resto de los
parmetros, mostr un comportamiento estable de la droga objeto de estudio
en el periodo, al no ponerse de manifiesto diferencias estadsticamente
significativas entre los valores encontrados para la mayora de las
cuantificaciones realizadas. Solo en el caso de la humedad residual fueron
encontradas diferencias significativas, que se considera debern estar
relacionadas con la absorcin a partir de la humedad relativa medio ambiental,
teniendo en cuenta adems, que el envase utilizado para su almacenamiento
fue bolsas de polietileno, no obstante, los valores encontrados estuvieron muy
por debajo del lmite mximo permisible (14 %).
III.1.3.2. ESTUDIO QUMICO CUALITATIVO
Desde el punto de vista qumico cualitativo pudo corroborarse, la estabilidad de
la droga cruda, al ser encontrados resultados muy similares para las
determinaciones realizadas en cuanto a la deteccin por cromatografa en capa
delgada de L-prolina. Este aminocido es un componente estructural del

36

Resultados y Discusin
colgeno, que presenta efecto antiinflamatorio y es importante para restaurar la
fluidez en las junturas, tendones y huesos. Sus beneficios como suplemento
diettico estn dirigidos fundamentalmente a la estructura y mantenimiento del
cuerpo, siendo fundamental en el tratamiento de la osteoartritis (Doulgkeris y
col., 2006; Mndez, 2010). Todas estas propiedades estn en concordancia
con las propiedades analgsicas y antiinflamatorias referidas para la especie
M. paniculata (Kumar y col., 2011; Narkhede y col., 2012; Rodanant y col.,
2012).
En la figura 4 puede observarse el comportamiento cromatogrfico similar de
los extractos hidroalcohlicos al 80 %, en su evaluacin inicial (Ms t0) y al
concluir el estudio (Ms t12), pudiendo apreciar en ambos casos la presencia
del aminocido L-prolina bajo las condiciones de trabajo ensayadas; el mismo
se mostr de color amarillo con un valor de Rf de 0,26, una vez asperjada la
cromatoplaca con ninhidrina y expuesta a una temperatura de 105 oC.

Figura 4. Cromatografa en capa delgada de la droga seca de M.


paniculata en el estudio de estabilidad
Soporte: Gel de slice sobre soporte de vidrio, Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua
(4:1:1), Revelador: solucin de ninhidrina/calor.
Leyenda: Ms t0: M. paniculata droga seca tiempo cero; Ms t12: M. paniculata droga seca 12
meses;
P: L-prolina (sustancia de referencia)

III.1.3.3. CONTROL MICROBIOLGICO


Desde el punto de vista microbiolgico es importante destacar que cuando una
especie vegetal es cosechada, la misma transporta del suelo bacterias y tierra,
como consecuencia pueden aparecer en la microflora de estas plantas, siendo
37

Resultados y Discusin
predominantes las especies aerbicas. Por otra parte, la posterior manipulacin
y produccin, son tambin causas adicionales de contaminacin microbiana,
siendo la presencia de aflatoxinas, provocadas por hongos contaminantes,
altamente peligrosa, de ah que se hace necesario, en el control de calidad de
una droga, determinar la presencia de microorganismos. (Miranda y Cullar,
2001)
Los lmites establecidos para la contaminacin microbiana, estn de acuerdo al
uso para el que ser destinado el material. En nuestro caso la droga objeto de
estudio (follaje de M. paniculata) ser pretratada, o sea, a partir de la misma
se elaborar una tintura para ser empleada en una formulacin por va tpica.
Los lmites mximos admisibles por gramo, establecidos por la literatura, as
como los resultados del estudio se muestran en la tabla IV.
Tabla IV. Resultados del anlisis microbiolgico de la droga cruda
M. paniculata durante el estudio de estabilidad en estante
Anlisis

Lmites
Microbiolgicos
Permisibles
(UFC/g)

Resultados (UFC/g)
Tiempo (meses)
0

Conteo total
de aerobios mesfilos

100

Ausencia

Conteo total
de hongos y levaduras

10

Ausencia

Staphylococcus aureus

Ausencia

Ausencia

Pseudomona aeruginosa

Ausencia

Ausencia

12

Al efectuar un anlisis de los resultados obtenidos para el estudio


microbiolgico del material vegetal de M. paniculata, se observ que los
mismos estn enmarcados dentro de los lmites indicados por la literatura, no
existiendo proliferacin microbiolgica durante los 12 meses de estudio, por lo
que la droga puede considerarse apta para el uso, desde el punto de vista
microbiolgico.
Los resultados permiten inferir que hasta un ao (tiempo de anlisis), el
material vegetal de M. paniculata puede ser conservado fragmentado en

38

Resultados y Discusin
bolsas de polietileno, sin que se produzcan alteraciones en su apariencia,
parmetros farmacognsticos, qumico cualitativos y microbiolgicos.
III.2. OBTENCIN DE LA TINTURA DE M. paniculata
A partir del material vegetal de M. paniculata en estado seco, se elaboraron
tinturas al 20 %

con un menstruo hidroalcohlico al 80 %. El mtodo de

extraccin utilizado fue la maceracin por ser uno de los ms empleados en el


campo de los productos naturales, incluso para la elaboracin de extractos y
tinturas, y menos agresivo para el material vegetal.
Respecto al menstruo, la Gua Teraputica Dispensarial de Fitofrmacos y
Apifrmacos (1992) plantea la mezcla hidroalcohlica al 70%, como igualmente
fue sugerido para la inclusin en el Formulario Nacional de Fitofrmacos y
Apifrmacos (2010), por nuestro grupo de trabajo, a partir de resultados
anteriores de nuestra investigacin. No obstante, este aspecto fue variado en la
experiencia realizada debido a estudios previos realizados por Varona (2013)
donde se percibi una disminucin considerable del contenido alcohlico y
precipitacin de los fitoconstituyentes. Al aumentar el porcentaje de alcohol
(mezcla

hidroalcohlica

al 80 %) se pudo demostrar que el contenido

alcohlico de la tintura se mantena en rangos adecuados, sin ocurrir


precipitacin de los componentes presentes (Varona, 2013).
El material vegetal se us en estado seco con el propsito de aumentar el
margen de utilizacin del producto y la factibilidad de poderlo extender a los
centros de producciones locales. Por otra parte, no se cuenta con estudios que
avalen la factibilidad del empleo de la droga seca con garanta de su calidad,
seguridad y eficacia.
III.3. PARMETROS DE CALIDAD DE LA TINTURA DE M. paniculata
III.3.1. PARMETROS FSICO-QUMICOS
Con el propsito de obtener la tintura de M. paniculata estandarizada y que
pudiera ser empleada como fitomedicamento, se procedi al anlisis de los
parmetros

fsico-qumicos

de

cuatro

39

lotes

para

establecer

sus

Resultados y Discusin
especificaciones de calidad. Fueron considerados los aspectos siguientes:
propiedades organolpticas (olor y color), anlisis del pH, densidad relativa,
slidos totales, ndice de refraccin, contenido alcohlico y anlisis capilar. Los
resultados se presentan en la tabla V.
Desde el punto de vista organolptico todas las muestras ensayadas
presentaron un color verde intenso, traslcido con un olor aromtico
caracterstico.
El pH mostr valores dbilmente cidos (entre 6,09 y 6,40), los que pudieran
estar relacionados con la presencia de compuestos de naturaleza fenlica. Se
observaron diferencias significativas entre lotes, atribuibles fundamentalmente,
a la composicin qumica de dichos preparados.

Tabla V. Parmetros fsico-qumicos de calidad determinados a los lotes


de tinturas de M. paniculata
Resultados
_
X /S

Parmetros
Febrero/2013
Propiedades
organolpticas

Enero/2014

Abril/2014

Octubre/2014

Lquido de color verde intenso, traslcido y olor caracterstico


aromtico

pH

6,35/0,01a

6,40/0,01a

6,22/0,03b

6,09/0,01c

Slidos totales (%)

2,06/0,03d

1,75/0,19e

2,67/0,08f

2,16/0,02g

Densidad Relativa
(g/mL)

0,874/0,001h

0,875/0,001h

0,876/0,001h

0,878/0,002h

ndice de
refraccin

1,360/0,001i

1,361/0,003i

1,360/0,002i

1,362/0,001i

Contenido
Alcohlico (%)

76,9/0,18j

76,5/0,23j

76,5/0,12j

76,6/0,09j

Altura de la imagen
capilar (cm)

10,0/0,10k

10,1/0,06k

10,1/0,12k

10,0/0,10k

Leyenda:

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

Otro parmetro medido de gran importancia fue el contenido de slidos totales,


los cuales brindan informacin sobre la cantidad de constituyentes no voltiles
40

Resultados y Discusin
presentes en un extracto o tintura, adems de servir de referencia para los
ajustes de dosis en ensayos farmacolgicos y toxicolgicos, cuando no se
conoce la concentracin del principio activo que ejerce la accin. Al hacer una
comparacin entre lotes se constataron diferencias significativas, donde el
mayor porcentaje correspondi a la muestra de Abril/2014 (2,67 %) y el menor
valor para la tintura obtenida de la colecta de Enero/2014 (1,75 %). Los
resultados pueden estar relacionados con la poca de recoleccin de la planta,
donde la disponibilidad de metabolitos puede variar segn el proceso fisiolgico
que estuviese ocurriendo en ese momento, o con las condiciones
climatolgicas, o ambas.
La densidad relativa y el ndice de refraccin son caractersticos de cada
extracto o tintura, el primero da criterio del peso especfico de los mismos y el
segundo parmetro representa la relacin entre el seno del ngulo de
incidencia de la luz y el seno del ngulo de refraccin cuando la luz pasa
oblicuamente a travs de un medio (Miranda y Cullar, 2000). El anlisis de
ambos parmetros no evidenci diferencias significativas entre lotes.
El contenido alcohlico tampoco manifest diferencias significativas entre lotes.
Este resultado es lgico de esperar si se tiene en consideracin que se trabaj
con material vegetal seco de un contenido de humedad residual similar,
aspecto este que no propici disminucin significativa del contenido alcohlico
de las preparaciones aunque
porcentajes

obtenidos

(entre

correspondieran a colectas diferentes.

Los

76,5 y 76,9 %) estuvieron cercanos al

porcentaje de etanol con que fueron elaboradas las tinturas (mezcla


hidroalcohlica al 80 %).
El anlisis capilar permite observar el corrimiento de los diferentes
componentes de un extracto o tintura a travs de una tirilla de papel de filtro y
brinda informacin importante sobre los posibles cambios por alcalinidad,
cuando se expone la muestra a vapores de amonaco, y la presencia de
compuestos con caractersticas fluorescentes, cuando la misma se analiza a la
luz UV. La altura de la imagen capilar en todos los casos fue alta (mayor de 8
cm) sin manifestar diferencias significativas entre lotes.

41

Resultados y Discusin
Respecto a las otras caractersticas de la imagen capilar (figura 5), las cuatro
muestras de tinturas mostraron una apariencia similar. En trminos generales
manifestaron una imagen vivamente coloreada, con

franja dentada, sub-

franja de color crema, variando en intensidad, banda con diferentes tonalidades


que oscilaron desde el verde claro, verde amarillento-verde oscuro hasta
carmelita verdoso y la sub-banda se mostr verde amarillenta. Frente a los
vapores de amonaco la imagen se torn amarilla, lo cual es indicativo de
metabolitos con caractersticas cidas y bajo la exposicin a la luz ultravioleta
se observ fluorescencia en la franja y en la banda.

Figura 5. Anlisis capilar de los lotes de tintura de M. paniculata

III.3.2. CONTROL MICROBIOLGICO


En el caso de los extractos o tinturas, los lmites establecidos para la
contaminacin microbiana tambin estn definidos de acuerdo al uso para el
que sern destinados. En el caso de la experiencia realizada, la tintura ser
empleada por va tpica. Los lmites mximos admisibles establecidos por la
literatura, as como los resultados del estudio se muestran en la tabla VI. Los
cuatro lotes de tinturas evaluados no mostraron proliferacin microbiolgica.

42

Resultados y Discusin
Tabla VI. Resultados del anlisis microbiolgico de las tinturas de
M. paniculata
Anlisis

Lmites

Resultados (UFC/g)

Microbiolgicos

Tiempo (meses)

Permisibles
(UFC/g)

Feb.

Ene.

Abr.

Oct.

2013

2014

2014

2014

Conteo total
de aerobios mesfilos

100

Conteo total

Ausencia

NR

Ausencia

NR

de hongos y levaduras

10

Staphylococcus aureus

Ausencia

Ausencia

NR

Pseudomona aeruginosa

Ausencia

Ausencia

NR

Leyenda: NR: ensayos no realizados

III.3.3. ESTUDIO FITOQUMICO DE LA TINTURA


Como parte del estudio de los parmetros de calidad de la tintura, se realiz
una evaluacin qumica de tipo cualitativa que contempl: tamizaje fitoqumico,
cromatografa en capa delgada y un anlisis por cromatografa lquida de alta
resolucin.
III.3.3.1. TAMIZAJE FITOQUMICO
Al efectuar los anlisis correspondientes al tamizaje fitoqumico a los cuatro
lotes, se evidenciaron resultados positivos para sustancias reductoras, lactonas
y coumarinas, saponinas, ncleos triterpnicos y esteroidales, compuestos
fenlicos (taninos pirocateclicos) y aminocidos, siendo dudosa la presencia
de quinonas y negativos los ensayos para flavonoides, antocianidinas y
alcaloides. En la tabla VII se reflejan los resultados.

43

Resultados y Discusin
Tabla VII. Resultados del tamizaje fitoqumico efectuado a los lotes de
tintura de M. paniculata
Resultados
Ensayos

Metabolitos

Febrero
2013

Enero
2014

Abril
2014

Octubre
2014

Resina

Resinas

Fehling

Sustancias reductoras

++

++

++

++

Baljet

Lactonas y
coumarinas

++

Espuma

Saponinas

Lieberman
burchard

Triterpenos y/o
esteroides

++

Tricloruro
Frrico

Compuestos fenlicos

++

Ninhidrina

Aminocidos

++

++

++

++

Borntrager

Quinonas

Shinoda

Flavonoides

Antocianidina

Antocianidinas

Dragendorff

Alcaloides

Mayer

Alcaloides

Leyenda: +: Ensayo positivo, ++: muy positivo, : Ensayo dudoso, -: Ensayo negativo

Es importante destacar que no se apreciaron diferencias en la composicin


qumica determinada por tamizaje fitoqumico en las muestras evaluadas, pero
si en las intensidades de color de algunos ensayos (Baljet, Lieberman-Burchard
y Ninhidrina).
En estudios fitoqumicos efectuados a la especie M. paniculata se revelan la
presencia

de alcaloides, flavonoides, coumarinas, carotenoides, aceite

esencial rico en cariofileno, nerolidiol, germacreno, entre otros. Algunos de


estos metabolitos no pueden ser detectados a travs de reacciones de tamizaje
fitoqumico, pero otros confirman de manera tentativa algunos compuestos
como coumarinas referidos por Rout (2007). Sin embargo, no se detectaron
alcaloides ni flavonoides, lo cual puede ser atribuido esencialmente a las
caractersticas ecolgico-geogrficas donde se desarroll la especie objeto de
estudio.

44

Resultados y Discusin
III.3.3.2. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
Se decidi realizar la cromatografa en capa delgada de aminocidos,
considerando los resultados del tamizaje fitoqumico, donde estos ofrecieron
resultados muy positivos en las muestras ensayadas. Por otro lado, se utiliz
como sustancia de referencia el aminocido L-prolina, considerando los
estudios efectuados a la tintura a partir de la droga fresca (Varona, 2013),
donde el mismo fue propuesto como uno de los biomarcadores de la planta, por
las propiedades antiinflamatoria y analgsica, referidas anteriormente en el
acpite III.1.3.2, las cuales pudieran correlacionarse con las descritas para la
especie vegetal objeto de estudio, tambin sealadas en ese acpite.
Se llev a cabo la combinacin de la cromatografa en capa fina con la reaccin
de la ninhidrina, con la cual se pueden identificar los aminocidos por la tincin
color magenta o morado que se presenta en ellos, excepto con la L-prolina, la
cual da un tono amarillo al reaccionar con dicho reactivo debido a que no
presenta el grupo amino libre, aspecto importante a la hora de diferenciarla del
resto de los aminocidos presentes (Lehninger, 2000).
El anlisis cromatogrfico (figura 6) permiti apreciar en todas las muestras la
presencia del aminocido L-prolina (mancha nmero 1) bajo las condiciones de
trabajo ensayadas, el mismo se mostr de color amarillo con un valor de Rf de
0,26, una vez asperjada la cromatoplaca con ninhidrina y expuesta a una
temperatura de 105 oC. Fue evidente tambin, la presencia de otras manchas
de color entre magenta y morado, las cuales variaron en intensidad y que
pudieran estar relacionadas con la presencia de aminocidos con grupos amino
libres.

45

Resultados y Discusin

Figura 6. Cromatografa en capa delgada de los lotes de tintura de


M. paniculata y L-prolina
Soporte: Gel de slice sobre soporte de aluminio, Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua
(4:1:1), Revelador: solucin de ninhidrina/calor.
Leyenda: P: L-prolina (sustancia de referencia), TF: tintura Febrero/2013, TE: tintura
Enero/2014,
TA: tintura Abril/2014, TO: tintura Octubre/2014

III.3.3.3. ANLISIS POR


RESOLUCIN (CLAR)

CROMATOGRAFA

LQUIDA

DE

ALTA

La cromatografa lquida de alta resolucin es muy utilizada en la industria


farmacutica y laboratorios analticos debido a su alta resolucin, sensibilidad y
rpido tiempo analtico. Una de las principales ventajas de esta tcnica
cromatogrfica es que puede acoplarse con la espectroscopia ultravioleta con
arreglo de diodos, espectrometra de masas, resonancia magntica nuclear,
entre otras, los cuales brindan mayores posibilidades de deteccin de los
diferentes constituyentes, tanto de forma cualitativa como cuantitativa
(Chimezie y col., 2008; Rao y Anna, 2009; Kartik y col., 2010; Saravanan y col.,
2010; Neeraj, 2011). La mayor parte de los trabajos realizados sobre anlisis
de aminocidos, se ha llevado a cabo en columnas de fase reversa, y las fases
mviles ms utilizadas son mezclas de agua y un disolvente orgnico (metanol,
acetonitrilo, o tetrahidrofurano).
Este anlisis se realiz a las tinturas de Febrero/2013, Enero/2014, Abril/2014 y
Octubre/2014, y el mismo estuvo encaminado a identificar el aminocido Lprolina, a partir de los antecedentes de su presencia evidente en las muestras
46

Resultados y Discusin
ensayadas por cromatografa en capa delgada, y por ser uno de los
compuestos que pudieran estar relacionados con las propiedades analgsicas
y antiinflamatorias atribuidas a la planta.

En la prueba de deteccin cualitativa se inyect primeramente la sustancia de


referencia L-prolina a la concentracin de 200 g/mL y se estableci un tiempo
de retencin promedio de 2,72 minutos (figura 7). Al inyectar las muestras de
tintura de M. paniculata se pudo constatar la presencia de L-prolina, por
similitud de los tiempos de retencin. En la tabla VIII se presentan los tiempos
de retencin y los valores de reas promedios obtenidos en el estudio.
Tabla VIII. Resultados del anlisis por CLAR del patrn
L-prolina y las muestras de tinturas de M. paniculata
Resultados
_
X /S

Muestras
Tiempos de retencin
(min.)

reas (mAV.s)

L-prolina

2,72/0,08

164,84/6,23

Tintura de Febrero/2013

2,72/0,10

122,75/3,08

Tintura de Enero/2014

2,71/0,10

152,90/8,46

Tintura de Abril/2014

2,72/0,11

187,30/2,31

Tintura de Octubre/2014

2,73/0,06

109,54/2,19

Al observar los cromatogramas (figura 7) se pudo constatar una adecuada


separacin del compuesto de inters del resto de los constituyentes presentes
en cada muestra de tintura analizada.

47

Resultados y Discusin

Figura 7: Cromatogramas del anlisis por CLAR del patrn L-prolina y las
tinturas de M. paniculata
Leyenda: P: prolina

Para corroborar la presencia de este compuesto se efectu una inyeccin de


las muestras con el patrn y se obtuvo como resultado un incremento en los
valores de reas (Tabla IX).
Tabla IX. Resultados del anlisis por CLAR de la inyeccin de las
muestras de tinturas con el patrn L-prolina
Resultados/S
Muestras

Tiempos de retencin
(min.)

reas (mAV.s)

Tintura de Febrero/2013

2,73/0,05

142,07/1,23

Tintura de Enero/2014

2,74/0,12

179,13/3,85

Tintura de Abril/2014

2,72/0,14

206,12/1,83

Tintura de Octubre/2014

2,74/0,09

128,61/4,90

48

Resultados y Discusin
En la determinacin cuantitativa del compuesto de inters en las tinturas, se
analiz aquel pico positivo para L-prolina y se consider el rea que
corresponda a la misma, se confeccion una curva de calibracin de
concentracin contra reas y se obtuvieron las concentraciones que se
muestran en la tabla X. Se evidenciaron diferencias significativas entre los lotes
evaluados, correspondiendo el mayor valor para la tintura de Abril/2014 y la
menor concentracin para la de Octubre/2014, lo cual pudiera estar relacionado
con la poca de recoleccin de la planta. Es importante sealar que los bajos
valores de prolina detectados en el mes de Octubre de 2014, estn en
correspondencia con los obtenidos en la tintura a partir del material vegetal
fresco, a un lote elaborado a partir de una colecta efectuada en el mismo mes
pero del ao 2010 (Varona, 2013).
Tabla X. Concentracin de L-prolina en las muestras de tinturas
Muestras

Resultados (g/mL)
_
X /S

Tintura de Febrero/2013

215,62/6,05a

Tintura de Enero/2014

247,24/10,50b

Tintura de Abril/2014

296,25/3,16c

Tintura de Octubre/2014

196,71/2,86d

Leyenda: Leyenda:

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

III.3.5. ESTABILIDAD DE LA TINTURA DE M. paniculata


El estudio de estabilidad de la tintura de M. paniculata, fue desarrollado con el
lote obtenido de la colecta de Febrero/2013, durante un periodo de 12 meses,
en condiciones de estante (Temperatura de 30 oC 2 oC, Humedad relativa
de 70 % 5 %), durante el cual fueron evaluados sus parmetros fsicoqumicos de calidad, determinacin del contenido de L-prolina por CLAR y
control microbiolgico. Los resultados de los mismos se discuten a
continuacin.

49

Resultados y Discusin
El anlisis estadstico de los resultados de las determinaciones fsico-qumicas
(tabla XI), manifest un comportamiento estable de la tintura, al no encontrarse
diferencias estadsticamente significativas en la mayora de los parmetros
evaluados, a excepcin del contenido alcohlico que mostr una ligera
disminucin en el tiempo, aunque el mismo se mantuvo cercano al porcentaje
hidroalcohlico original de la tintura (80 %), no afectndose los dems
parmetros.
Tabla XI. Parmetros fsico-qumicos de calidad determinados en el
estudio de estabilidad de la tintura de M. paniculata de Febrero/2013
Parmetros
_
X /S

Tiempo (meses)
0

3
a

6,35/0,02

9
a

6,36/0,08

12
a

6,39/0,02a

pH

6,35/0,01

Slidos
totales (%)

2,06/0,03b

2,05/0,01b

2,04/0,00b

2,08/0,06b

2,08/0,03b

Densidad
Relativa
(g/mL)

0,874/0,001c

0,874/0,001c

0,875/0,002c

0,875/0,00c

0,875/0,001c

ndice de
refraccin

1,360/0,001d

1,361/0,00d

1,361/0,002d

1,362/0,002d

1,362/0,00d

Contenido
Alcohlico (%)

76,90/0,18e

75,90/0,13 f

75,82/0,10 f

75,65/0,30f

75,27/0,11g

Altura de la
imagen capilar
(cm)

10,0/0,10h

10,0/0,20h

10,0/0,10h

10,0/0,20h

10,1/0,20h

Concentracin
de L-prolina
(g/mL)

215,62/6,05a

213,24/1,87a

212,96/5,12a

Leyenda:

6,38/0,03

6
a

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

Desde el punto de vista microbiolgico tambin pudo corroborarse la


estabilidad de la muestra, al no hallarse proliferacin de microorganismos
durante los 12 meses de estudio.

50

Resultados y Discusin
Con relacin al contenido de L-prolina determinado por CLAR (tabla XI), se
confirm una vez ms la estabilidad de la preparacin, al no constatarse
diferencias significativas en los anlisis a tiempo cero y a los 12 meses de
estudio.
III.4. OBTENCIN DEL GEL A PARTIR DE LA TINTURA DE M. paniculata
El uso de plantas medicinales en el desarrollo de formulaciones resulta cada
vez ms interesante. Muchos fitoconstituyentes como compuestos fenlicos,
algunos aminocidos como la L-prolina, entre otros, proporcionan actividades
antiinflamatorias y analgsicas, siendo fundamental en el tratamiento de la
osteoartritis (Doulgkeris y col., 2006; Mndez, 2010).
Considerando que M. paniculata presenta entre sus marcadores qumicos el
aminocido L-prolina y basados en las propiedades antiinflamatorias de su
tintura (al 20 % elaborada con mezcla hidroalcohlica al 80 %), demostradas
por Varona (2013) y su uso en enfermedades osteomioarticulares, reportado en
el Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifarmacos (2010, 2014), se decidi
elaborar un gel a partir de este preparado galnico obtenido del material
vegetal en estado seco, con el propsito de extender su utilizacin a los centros
de producciones locales.
En el formulario aparece el empleo de las fricciones de M. paniculata,
utilizando droga fresca, sin embargo, se consider la posibilidad de diversificar
este tipo de preparacin mediante el desarrollo de un gel con similares
potencialidades

empleando

este

producto

natural

como

ingrediente

farmacolgico activo.
Para el desarrollo de la formulacin se consideraron los resultados del estudio
desarrollado por Snchez (2014), donde se dise un gel antiinflamatorio a
partir de la tintura obtenida de las hojas frescas de esta especie vegetal. La
optimizacin de los componentes del gel, fue llevada a cabo mediante el
empleo de un diseo D-optimal de tres componentes con restricciones,
evaluando como variables respuesta, diferentes parmetros como pH,
extensibilidad, fuerza de gel, firmeza, cohesividad, viscosidad relativa y

51

Resultados y Discusin
consistencia, obteniendo ecuaciones matemticas que permitieron optimizar los
componentes. Finalmente se obtuvo una formulacin ptima, la cual sirvi de
base para la realizacin de este trabajo.
A partir de los resultados obtenidos se procedi a preparar tres lotes de gel a
escala de laboratorio. Durante el proceso de elaboracin no se presentaron
dificultades que incidieran de forma negativa en la calidad del producto final. La
cantidad de tintura en la formulacin (30 %) se determin a partir de los
resultados establecidos por Snchez (2014) y los referidos por Varona (2013).
Se escogi como base, un gel de carbopol 940 (polmero del cido acrlico)
debido al alto contenido alcohlico (80 %) de la tintura. El resto de los
componentes se seleccionaron de acuerdo a los excipientes ms frecuentes en
este tipo de preparacin farmacutica. Otras materias primas empleadas se
discuten a continuacin:
Se incorpor el mentol al 1 % en la preparacin, a partir del anlisis de las
experiencias positivas de su empleo en las fricciones de M. paniculata que
aparecen reportadas en el Formulario Nacional de Fitofrmacos y Apifrmacos
(2010, 2014), adems de ser un excipiente farmacutico con utilidad como
coadyuvante de la penetracin cutnea, as como agente teraputico que
puede ser empleado en concentraciones entre 0,05 y 10 % en formulaciones
tpicas, segn Pharmaceutical Excipients v 1.0 (2000).
El propilenglicol fue utilizado como humectante en la formulacin a una
proporcin del 10 %. Es un lquido viscoso, higroscpico, miscible con agua y
con etanol al 96 % (Real Farmacopea Espaola, 2005) y es muy empleado en
productos farmacuticos, cosmticos, alimentarios, entre otros. (Diccionario de
Ingredientes Cosmticos, 2009).
Como preservos se utilizaron los steres del cido para-hidroxibenzoico, por
presentar estabilidad qumica en el rango neutral de pH, ser no txicos, no
irritantes y no alergnicos, adems de presentar amplio espectro de accin
antimicrobiana tanto en hongos como bacterias, y ser adecuadamente solubles
(Von y col., 1999; Soni y col., 2005). Son muy utilizados en las industrias

52

Resultados y Discusin
farmacutica y cosmtica. La mezcla de parabenos estuvo en la combinacin
clsica de 0,18 - 0,02 % de metil y propilparabenos, respectivamente.
El hidrxido de sodio se utiliz en una proporcin del 0,8 %. Su utilizacin tiene
como finalidad, estabilizar el pH de la formulacin. El mismo, conjuntamente
con otras bases orgnicas o inorgnicas puede influir en el tacto y en la
transparencia del preparado. La cantidad de base requerida debe incorporarse
a la dispersin del gelificante, determinando constantemente el pH que adopta
el preparado, hasta obtener aquel en el que se considera que la correlacin
entre la consistencia adquirida y el pH deseado (lo ms prximo posible al pH
de la piel) es idnea (Juv y col., 2007).
III.4.1.

EVALUACIN

DE

LOS

PARMETROS

FSICO-QUMICOS

TECNOLGICOS DEL GEL


Los tres lotes de geles elaborados fueron sometidos a una serie de
evaluaciones de calidad que segn su forma farmacutica, se encuentran
preestablecidas. Los resultados obtenidos se analizan a continuacin y se
muestran en la tabla XII.
Desde el punto de vista organoltico las preparaciones presentaron un color
verde, olor a mentol y un aspecto homeogneo con brillo.
Tabla XII. Parmetros fsico-qumicos determinados a los tres lotes de geles

Lotes

Resultados
pH

_
X /S

5,38/
0,01a

Firmeza
(N)
0,399/0,
006b

Consistencia
(g/s)
830,16/
6,65c

Cohesividad
(N)
60,58/0,70d

Viscosidad
(m.Pa.s)
8066/57,70e

Extensibilidad
(cm2)
234,06/2,55f

5,37/
0,02a

0,398/0,
004b

832,30/
3,63c

60,76/0,45d

8051/71,01e

236,23/2,05f

5,37/
0,01a

0,396/0,
002b

830,33/
0,57c

60,54/0,42d

8059/57,73e

235,70/0,47f

Leyenda:

_
X / S: valor medio/ desviacin estndar

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

53

Resultados y Discusin
El pH obtenido en cada formulacin, se encontr en el rango entre 5,37 y 5,38,
valores cercanos a la acidez caracterstica de la piel. Segn la literatura
consultada, el valor del pH de la piel es variable, segn la zona del cuerpo, la
edad, e incluso algunos autores incluyen la raza. La superficie tiene un pH
cido y oscila entre 4 y 6 (Gil y Howard, 1996; Schmid-Wendtner y Korting,
2006). No se apreciaron diferencias estadsticamente significativas entre los
tres lotes de geles, al aplicar ANOVA-1 para un 95 % de confianza.
La caracterizacin reolgica es fundamental en la investigacin y desarrollo de
formas farmacuticas semislidas como los geles, debido a que las
propiedades reolgicas tienen una gran influencia en la estabilidad y en la
textura de estos productos (Signorelli e Isla, 2005). Son vlidos varios
procedimientos. En este estudio se consideran las determinaciones de firmeza,
consistencia, cohesividad, ndice de viscosidad y la extensibilidad, debido a la
relacin existente entre estos parmetros para definir dicho comportamiento.
Es importante destacar que la prueba de extensibilidad proporciona una
medida del umbral de deformacin del sistema, y es inversamente proporcional
a la consistencia de las muestras (Signorelli e Isla, 2005). En la experiencia
realizada no se observaron diferencias significativas entre lotes para cada
parmetro ensayado.
III.4.2. ESTUDIO FITOQUMICO DEL GEL DE M. paniculata
Como parte del estudio de los parmetros de calidad del gel, se realiz una
evaluacin fitoqumica que contempl la cromatografa en capa delgada y un
anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin, ambas destinadas a
detectar uno de los marcadores qumicos de la planta, el aminocido L-prolina.
III.4.2.1. CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
El anlisis por cromatografa en placa delgada del gel elaborado permiti
visualizar el aminocido L-prolina, al compararlo con la sustancia de referencia
y la tintura de partida, con un valor de Rf de 0,26 (mancha 1). En la figura 8 se
representa el cromatograma.

54

Resultados y Discusin

Figura 8. Cromatografa en capa delgada del gel de M. paniculata, Lprolina y la tintura de Febrero 2013 (TF)
Soporte: Gel de slice sobre soporte de aluminio, Fase mvil: n-butanol: cido actico: agua
(4:1:1), Revelador: solucin de ninhidrina/calor.

III.4.2.2. ANLISIS POR


RESOLUCIN (CLAR)

CROMATOGRAFA

LQUIDA

DE

ALTA

El anlisis por CLAR (figura 9) tambin permiti visualizar en el cromatograma


la L-prolina, con tiempo de retencin de 2, 72 min, similar al obtenido para la
sustancia de referencia utilizada (ver figura 7). Importante destacar que el
comportamiento cromatogrfico de la formulacin fue similar al de la tintura de
partida (lote de Febrero 2013), a excepcin de un pico que aparece a 10,78
min. que pudiera estar relacionado con algn componente de la formulacin.

Figura 9: Cromatograma del anlisis por CLAR del gel de M. paniculata


Leyenda: P: prolina

55

Resultados y Discusin
La determinacin cuantitativa del marcador qumico no mostr diferencias
estadsticamente significativas entre los tres lotes ensayados. En la tabla XIII
se muestran los resultados del estudio.
Tabla XIII. Concentracin de L-prolina determinada a los tres lotes de geles

Lotes

Resultados (g/mL)
_
X /S

67,34/2,13a

67,29/2,03a

67,21/1,89a

_
X
Leyenda: / S: valor medio/ desviacin estndar
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

III.4.3. CONTROL MICROBIOLGICO DEL GEL DE M. paniculata


Los conservantes antimicrobianos son sustancias agregadas a las formas
farmacuticas no estriles, para protegerlas del desarrollo microbiano o de
microorganismos que se introducen sin ser advertidos durante el proceso de
fabricacin o despus de ste. La eficacia antimicrobiana, ya sea inherente al
producto o producida por la adicin de un preservo, debe ser demostrada,
principalmente cuando las formas farmacuticas son multidosis orales y tpicas
(USP 35- NF 30, 2012).
En el caso particular del trabajo se realiz la evaluacin antimicrobiana al gel
de M. paniculata (droga seca), donde los conservantes o preservos utilizados
fueron los steres del cido para-hidroxibenzoico, en la combinacin clsica de
0,18-0,02 % de metil y propilparabenos, respectivamente.
Los lmites establecidos para la contaminacin microbiana tambin estn
definidos de acuerdo al uso para el que sern destinadas las preparaciones. En
la experiencia realizada, el gel ser empleado por va tpica. Los lmites
mximos admisibles establecidos por la literatura, as como los resultados del

56

Resultados y Discusin
estudio se muestran en la tabla XIV. Los lotes evaluados no mostraron
proliferacin microbiolgica.
Tabla XIV. Resultados del control microbiolgico de los lotes de gel de
M. paniculata
Lmites
Microbiolgicos
Permisibles
(UFC/g)

Resultados (UFC/g)

Conteo total de bacterias

100

Ausencia

Conteo total enterobacterias

10

Ausencia

Conteo total de hongos

10

Ausencia

Staphylococcus aureus

Ausencia

Ausencia

Pseudomona aeruginosa

Ausencia

Ausencia

Anlisis

Lotes de gel
1

III.4.4. PRUEBA DE PREFERENCIA O ACEPTACIN DE LA FORMULACIN


Dada la importancia que el paciente le concede a las caractersticas
organolpticas de una formulacin y para tener una idea de la preferencia, o
no, de la forma farmacutica elaborada, se realiz una prueba de preferencia o
aceptacin a 50 jueces no adiestrados, donde se evaluaron como atributos el
olor, color, frescor y apariencia. Los resultados del estudio se visualizan en la
tabla XV.
Tabla XV. Resultados de la prueba de preferencia o aceptacin del gel de
M. paniculata
Puntaje
Criterios
Nmero de individuos
Atributos
Olor Color Frescor Apariencia
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2
0
15
4
4
Me gusta moderadamente
44
16
23
37
3
No me gusta ni me disgusta
4
25
12
8
2
Me disgusta moderadamente
0
9
0
1
1
Me disgusta mucho
0
0
0
0
Media (puntos) /desviacin estndar 3,96/ 3,14/
4,06/
3,88/
0,34
0,70
0,73
0,55

57

Resultados y Discusin
Como se puede observar, se alcanzan valores medios entre 3,14 y 4,06
puntos, los cuales se pueden ubicar entre las opciones me gusta
moderadamente y no me gusta ni me disgusta, por tanto puede ser aceptada
la formulacin, pues se alcanzan valores superiores a los 3 puntos.
La figura 10 muestra una representacin grfica ms detallada de

los

resultados de la tabla anterior segn la distribucin del nmero de jueces


(expresado en porciento) y los diferentes criterios de aceptacin por cada
atributo evaluado. Se observa como a los panelistas les gusta moderadamente
la formulacin por su olor (88 %) y apariencia (74 %). Respecto al color, la
mayor cantidad de jueces (50 %) se inclinaron hacia la opcin no me gusta ni
me disgusta. El atributo frescor tuvo el mayor porcentaje de jueces (46 %) en la
opcin me gusta moderadamente.

ME GUSTA MUCHO

100
80

ME GUSTA MODERADAMENTE

60
40

NO ME GUSTA NI ME DISGUSTA

20
ME DISGUSTA MODERADAMENTE

0
OLOR

COLOR

FRESCOR APARIENCIA
ME DISGUSTA MUCHO

Figura 10. Representacin grfica de los resultados de la prueba de


preferencia o aceptacin del gel M. paniculata
En trminos generales se puede plantear que los cuatro atributos evaluados,
ostentan del mismo modo, resultados adecuados (se encuentran entre las
opciones me gusta moderadamente y no me gusta ni me disgusta), aspecto
este que habla a favor de la formulacin.
III.4.5. ESTABILIDAD INTEGRAL DE LA FORMULACIN
El estudio de estabilidad del gel de M. paniculata, fue desarrollado durante un
periodo de un ao, en condiciones de estante (Temperatura de 30 oC 2 oC,
Humedad relativa de 70 % 5 %), durante el cual fueron evaluados sus
parmetros fsico-qumicos de calidad, determinacin del contenido de L58

Resultados y Discusin
prolina por CLAR y control microbiolgico. Los resultados de los mismos se
discuten a continuacin y un resumen de ellos se muestra en la tabla XVI.
El anlisis estadstico de los resultados a los parmetros evaluados durante el
estudio de estabilidad, mostr un comportamiento estable de la formulacin en
el periodo, al no ponerse de manifiesto diferencias estadsticamente
significativas entre los valores obtenidos.
Tabla XVI. Parmetros fsico-qumicos de calidad determinados en el
estudio de estabilidad de los lotes de geles de M. paniculata
Parmetros
_
X /S

Tiempo (meses)
0

12

5,38/0,01a

5,38/0,04a

5,37/0,01a

5,37/0,09a

5,36/0,06a

5,37/0,02a

5,37/0,01a

5,37/0,30a

5,35/0,06a

5,35/0,01a

5,37/0,01a

5,37/0,00a

5,36/0,08a

5,36/0,50a

5,35/0,03a

0,399/0,006b

0,396/0,02b

0,395/0,001b

0,396/0,007b

0,398/0,004b

0,395/0,009b

0,396/0,002b

0,393/0,005b

830,16/6,65c

829,10/4,15c

829,01/3,30c

828,11/1,25c

832,30/3,63c

830,13/2,10c

830,33/0,57c

828,00/4,39c

60,58/0,70d

61,18/0,20d

60,23/0,18d

60,10/0,50d

60,76/0,45d

60,24/0,33d

60,54/0,42d

60,00/0,01d

8066/57,70e

8059/63,10e

8059/42,18e

8060/37,12e

8051/71,01e

8047/23,06e

8059/57,73e

8050/35,23e

234,06/2,55f

234,24/0,34f

235,86/3,25f

235,27/1,35f

234,98/2,01f

Extensibilidad
(cm2)

236,23/2,05f

237,10/0,12f

236,32/2,17f

236,05/2,67f

236,73/3,06f

235,70/0,47f

235,42/0,24f

235,21/4,83f

236,41/2,90f

235,19/1,21f

Concentracin
de L-prolina
(g/mL)

67,34/2,13g

67,13/3,15g

66,18/2,11g

67,29/2,03g

66,36/1,87g

67,21/1,89g

66,24/2,31g

pH

Firmeza (N)

Consistencia
(g/s)

Cohesividad
(N)

Viscosidad
(m.Pa.s)

_
X
Leyenda: / S: valor medio/ desviacin estndar
- ensayo no realizado
Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza.

59

Resultados y Discusin
Igualmente pudo corroborarse, desde el punto de vista organolptico, y
microbiolgico, la estabilidad de la misma, al ser encontrados resultados muy
similares para las determinaciones realizadas (las preparaciones presentaron
un color verde, olor a mentol y un aspecto homogneo con brillo) y la ausencia
de microorganismos durante el ao de estudio.
III.5. EVALUACIN PRECLNICA DE LA TINTURA DE M. paniculata Y EL
GEL
III.5.1. ENSAYO DE TOXICIDAD AGUDA DRMICA DE LA TINTURA DE M.
paniculata Y EL GEL
En el estudio toxicolgico efectuado se tuvo en cuenta en primer lugar el peso
corporal de los animales donde se evidencia una ganancia del peso de los
mismos como un aspecto indicativo de la no toxicidad (tabla XVII).
Tabla XVII. Variacin en el peso corporal (g) de los animales en el ensayo
de toxicidad aguda drmica de la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y
el gel
Valor promedio/ Desviacin estndar
GRUPO
Machos (ratas)

TIEMPO (das)
1

7
a

Tintura de M. paniculata

188,20/ 7,24

Gel de M. paniculata

180,40/4,65d

197,20 / 16,02

14
b

189,34/10,67e

209,0 / 12,16c
200,75/16,01f

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza

Tambin fueron evaluados los signos clnicos (ojo, mucosa, piel y otros
conductuales), no evidencindose durante los 14 das de estudio manifestacin
alguna y por ltimo, una vez sacrificado el animal, se examinaron durante las
autopsias algunos rganos (pulmn, corazn, bazo, riones, estmago) sin
afectaciones. Por lo anteriormente planteado y bajo las condiciones
experimentales evaluadas se evidencia que la administracin de forma aguda
de la Tintura de M. paniculata y el gel obtenido de la misma, por va tpica, no
produce efectos txicos en los animales de experimentacin. En la tabla XVIII
se presentan los resultados.

60

Resultados y Discusin
Tabla XVIII. Observaciones realizadas durante el ensayo de toxicidad
aguda drmica a la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y al gel
Das
Signos clnicos

10

11

12

13

14

Ojos

Mucosa

Sist. Respiratorio

Circulatorio

Autnomo

Nerv. Central

Mudanza de pelo

Temblores

Convulsiones

Salivacin

Piel

Sedacin

Somnolencia

Muerte

III.5.2. EVALUACIN DEL EFECTO ANTIINFLAMATORIO DE LA TINTURA


DE M. paniculata y el gel
La evaluacin del efecto antiinflamatorio brind evidencias de la efectividad de
la tintura de M. paniculata y el gel en este sentido. En la tabla XIX se muestran
los resultados de los pesos medios

de las orejas derecha (tratadas) e

izquierdas (controles) de los diferentes grupos de animales sometidos al


ensayo. Se pudo constatar una disminucin significativa en el peso de las
orejas una vez tratadas con el control positivo, la tintura y el gel.
Los mejores resultados del efecto antiinflamatorio se presentaron para los
animales tratados con la Indometacina con respecto al control, o sea, los
animales tratados con el aceite de croton solo, sin embargo, la tintura de M.
paniculata y el gel obtenido de la misma, mostraron tambin evidencias como
antiinflamatorios.

61

Resultados y Discusin
Tabla XIX: Resultados de los pesos medios de las orejas en el ensayo del
efecto antiinflamatorio de la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y el
gel
Peso medio de las orejas (mg)/ S
GRUPO

IZQUIERDA

DERECHA

Control (Croton)

9,81/0,23a

22,14/1,21e

Control positivo (Indometacina)

6,85/0,27b

12,37/1,19f

Tintura de M. paniculata

7,28 /1,57c

14,14/0,67g

Gel de M. paniculata

7,92/1,02c

15,24/1,31h

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza
S: desviacin estndar

En la tabla XX se muestran los resultados para el porcentaje de inhibicin de la


inflamacin, comparado con el aceite de croton. A pesar de encontrar
diferencias significativas entre la Indometacina, la tintura de M. paniculata y el
gel, la inhibicin de la inflamacin de la tintura estuvo cercana a la del control
positivo, por lo que puede considerarse un efecto antiinflamatorio, bajo las
condiciones ensayadas. El gel aunque fue el que manifest menor porcentaje
de inhibicin de la inflamacin, su valor estuvo prximo al de la tintura de
partida, siendo capaz de disminuir el efecto irritante que produce el aceite de
croton en las orejas de los animales.
Tabla XX: Porcentajes de inhibicin de la inflamacin en el ensayo del
efecto antiinflamatorio de la tintura de M. paniculata (Febrero/2013) y el
gel
Grupos

Porcentaje de inhibicin

Control (Croton)

Control positivo (Indometacina)

44,12a

Tintura de M. paniculata

36,13b

Gel de M. paniculata

31,16c

Letras iguales muestran que no existen diferencias significativas y letras diferentes que si
existen diferencias significativas para un 95 % de confianza

Los estudios de estandarizacin en los ltimos aos estn encaminados a


correlacionar la concentracin y estabilidad de los marcadores qumicos
conocidos, con la actividad biolgica, proporcionando un protocolo viable para
62

Resultados y Discusin
el anlisis de cualquier producto herbario (Mosihuzzaman y Choudhary, 2008;
Venil,

2010). En

la

experiencia

realizada,

fue

determinada

la

concentracin de L-.prolina, uno de los compuestos asociados con la actividad


farmacolgica referida para la planta, y se demostr que la tintura procedente
de la colecta de Febrero/2013 y el gel obtenido de la misma, con una
concentracin de 215,62 g/mL y 67,34 g/mL de dicho aminocido produce
efecto antiinflamatorio en los animales de experimentacin.
No obstante, se prev para estudios futuros analizar otros lotes de tintura
desde el punto de vista antiinflamatorio y analgsico, y establecer mtodos de
anlisis que permitan cuantificar y determinar la estabilidad de otros
compuestos ya identificados por CG-EM en estudios efectuados por Varona
(2013), pues es por todos conocidos que esta determinacin no da un cuadro
completo del producto herbario, porque muchas veces los efectos teraputicos
estn condicionados por la accin mltiple de un conjunto de constituyentes
qumicos.

III.6. DISCUSIN GENERAL


La calidad de un producto herbario es un estado determinado por su identidad,
pureza,

volumen,

marcadores

qumicos,

propiedades

fsico-qumicas,

propiedades biolgicas o por el proceso industrial. Al ser mezclas de varios


compuestos qumicos son difciles de caracterizar, siendo esencial una
definicin cientfica clara del material crudo (Ahmad y col., 2006), para lo cual
se hace necesario garantizar un correcto control del material vegetal desde la
recoleccin, tener conocimiento de la especie en cuanto a la organografa y
fisiologa de la misma, del lugar donde se realiza la colecta y saber las
variaciones que puede sufrir la composicin de las plantas en las diferentes
pocas y fases de su vida. (Sharapin y cols., 2000; HMPWG, 2001; WHO,
2003).
Murraya paniculata (L.) Jack (Rutaceae), es empleada tradicionalmente en
algunas provincias de nuestro pas para el alivio del dolor y la inflamacin
asociados a enfermedades osteomioarticulares, a pesar de esto no se cuenta

63

Resultados y Discusin
en los Centros de Produccin Local, ni en los Laboratorios de Control de
Calidad, subordinados a las Empresas de Medicamentos, con procedimientos
homogneos, ni parmetros de calidad que permitan la estandarizacin del
material vegetal seco y su tintura (al 20 % elaborada con mezcla
hidroalcohlica al 80%) y los consiguientes controles de calidad y estudios de
estabilidad de las preparaciones, que de ella se derivan.
El trabajo que se presenta hace un aporte importante en este sentido ya que se
establecieron por vez primera los parmetros de calidad para la droga cruda
de M. paniculata (material vegetal en estado seco) y su tintura, los cuales se
mantuvieron estables durante un ao de estudio. As mismo, se propone una
formulacin a partir de la tintura, con buena estabilidad fsico-qumica y
tecnolgica, como alternativa a tener en cuenta dentro de nuestra Medicina
Natural y Tradicional.
Desde el punto de vista preclnico se demostr que la tintura y el gel no
evidencian signos de toxicidad aguda drmica en los animales de
experimentacin y pudo demostrarse una inhibicin de la inflamacin de ambos
productos bajo las condiciones ensayadas. Estos estudios tambin representan
un aporte al estudio de la especie que crece en Cuba.
Los resultados obtenidos en esta experiencia, nos permiten avalar la
factibilidad del uso de la droga seca de M. paniculata, lo que basado en los
beneficios econmicos que ofrecera a la industria de fitomedicamentos,
permitir la extensin de su uso, an ms cuando se cuenta con evidencias
farmacognsticas, fitoqumicas y preclnicas que garantizan su calidad,
seguridad y eficacia.

64

CONCLUSIONES

Conclusiones

CONCLUSIONES

1. El estudio farmacognstico de la droga seca de M. paniculata y su


tintura permiti establecer sus principales parmetros de calidad y la
composicin qumica a travs del anlisis de diferentes lotes. Tambin
se demostr que las muestras eran estables durante un ao bajo las
condiciones ensayadas.

2. Se elabor un gel a partir de la tintura, el cual fue aceptado por sus


atributos de olor, color, frescura y apariencia, y mantuvo buena
estabilidad fsico-qumica y tecnolgica, en las condiciones de envase y
almacenamiento ensayadas durante un periodo de un ao.
3. Desde el punto de vista preclnico se demostr que la tintura y el gel no
evidenciaron signos de toxicidad aguda drmica en los animales de
experimentacin. As mismo, pudo demostrarse el efecto antiinflamatorio
de ambas muestras, aunque los mejores resultados se presentaron para
los animales tratados con la Indometacina.

65

RECOMENDACIONES

Recomendaciones

RECOMENDACIONES

1. Evaluar desde el punto de vista fsico-qumico otros lotes de droga seca


y tintura con el propsito de establecer los lmites de calidad.

2. Continuar con los estudios de estabilidad de las muestras estudiadas


(droga seca, tintura y gel).

3. Evaluar la toxicidad crnica y subcrnica de la tintura de M. paniculata y


el gel, as como el efecto analgsico de ambos.

66

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ANEXOS

Anexos
Anexo 1. Boleta de evaluacin sensorial del gel de M. paniculata

Usted probar como consumidor un gel antiinflamatorio con tintura de Murraya


paniculata. Exprese su criterio marcando con una X donde crea apropiado
dentro de las escalas que se ofrecen.

Criterios
Olor
Me gusta mucho
Me gusta
moderadamente
No me gusta ni me
disgusta
Me disgusta
moderadamente
Me disgusta
mucho

Atributos
Color
Frescor

Apariencia