MEDIOS SELECTIVOS

INTEGRANTES:
Mariana Navarro Torres 15100591
Ana Paola Perez Reyes 15100608
Andres Loza Guerrero
Cristian Eduardo Quintero Munguia 15100616
Aileen Ariadna Razo Oceguera

Profesor: Jose Rafael Martinez Palomar

Grupo: T-3B

EQUIPO 4

Introduccion a los medios de cultivo

Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en
condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de
virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso
pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio
requerir unas u otras condiciones. Generalmente se presentan
desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser
preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado slido,
semislido o lquido. El objetivo ltimo del cultivo es variado:
antibiograma, identificacin, multiplicacin. Uno de los sistemas
ms importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que contenga
clulas vivas.
Clasificacin
Segn sus cualidades fsicas, se distinguen:
Lquidos

Semislidos

Slidos

Segn su origen:
naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de
tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente.
sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida cualitativamente y cuantitativamente.
Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto
orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Segn su formulacin:
qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que hay en el medio.

complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no se conoce
exactamente cul es la composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn presentes
todos o casi todos los elementos que una clula puede requerir.
Segn su uso:
medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan condiciones
especiales (por ejemplo, agar CLED).
medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado (hongos, bacterias
entricas, protozoos...).
medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede ser por su
crecimiento, su metabolismo,su respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).
medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad
de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un mismo medio.
medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una especie;
medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especmenes transportados o en
transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin;
simple

Medio selectivo
Un medio selectivo es un medio de cultivo en el que slo puede crecer un tipo de microorganismo (hongos,
bacterias entricas, protozoos...).

Un ejemplo de medio selectivo sera usar un medio rico en un antibitico, como la ampicilina, para permitir
nicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a ste.
medio

Componentes
principales
Inhibidores: cristal
violeta y sales biliares.
Lactosa como agente
diferencial. Rojo neutro
como indicador.

caracteristicas usos
Selectivo y
diferencial

Aislamiento de
bacterias gram
negativas
(enterobacterias). El
colorante cristal
violeta inhiben las
gram positivas. Las
sales biliares inhiben
las gram positivas y
algunas gram
negativas (no las
enterobacterias).

Agar EMB

Inhibidores: eosina y
azul de metileno.
Lactosa como agente
diferencial.

Selectivo y
diferencial

Aislamiento de
bacterias gram
negativas
(enterobacterias).
Los colorantes
inhiben las gram
positivas.

Agar SS

Inhibidores: sales
biliares, citrato, y el
colorante verde
brillante: Incorpora
lactosa y tiosulfato
como agentes
diferenciales. Rojo
neutro como indicador.

Selectivo y
diferencial

Aislamiento selectivo
de Salmonella y
Shigella de muestras
de heces o
hisopados rectales.

Agar de
MacConkey

Agar entrico Inhibidores: sales

Selectivo y
Hektoen (HE) biliares, citrato, y los
diferencial
colorantes fucsina cida
y azul de bromotimol.
Incorpora lactosa y
tiosulfato como agentes

Aislamiento
selectivo de
Salmonella y
Shigella de
muestras de heces
o hisopados

visualizacin de las
colonias
Las enterobacterias
fermentadoras de lactosa (E.
coli, Enterobacter, Klebsiella)
se ven rosa/rojo/violeta. E.
coli puede presentar um halo
rosa alrededor de ls
colonias, debido a la
precipitacin de las sales
biliares a pH muy cido. Las
no fermentadoras de lactosa
(Salmonella,
Shigella,Providencia,
Proteus) se ven
transparentes.
Las enterobacterias
fermentadoras de lactosa
(Enterobacter, Klebsiella) se
ven rosa/rojo/violeta. E. coli
se ve de color verde
metlico, debido a la
precipitacin de los
colorantes a pH muy cido.
Las no fermentadoras de
lactosa (Salmonella,
Providencia, Shigella,
Proteus) se ven
transparentes.
Colonias de Salmonella:
incoloras, no fermentan la
lactosa y con punto central
negro (producen sulfuro).
Colonias de Shigella:
incoloras, sin punto central
negro. Coliformes (E. coli,
Klebsiella, Enterobacter)
pequeas, muy inhibidas,
pero rosa/rojo, por la
fermentacin de la lactosa.
Gram positivas no crecen.

Colonias de Salmonella:
incoloras o verdes, del color
del medio, no fermentan la
lactosa y con punto central
negro (producen sulfuro).
Colonias de Shigella:

diferenciales. Azul de
bromotimol como
indicador.

rectales.

incoloras o verdes, del color

del medio, sin punto central
negro. Coliformes (E. coli,
Klebsiella, Enterobacter)
pequeas, muy inhibidas, y
amarillas, (fermentacin de la
lactosa). Gran positivos no
crecen.
Colonias de Salmonella rosas
o rojas (no fermentan la
lactosa, pero descarboxilan la
lisina, suben el pH) con punto
central negro (por produccin
de sulfuro). Las colonias de
Shigella se ven transparentes
(no fermentan la lactosa) sin
punto central negro.
Coliformes (E. coli,
Klebsiella,Enterobacter)
pequeas, muy inhibidas,
pero amarillas, por la
fermentacin de la lactosa.
Gram positivos no crecen.
Colonias de Salmonella y
Shigella se ven transparentes
(no fermentan la lactosa).
Coliformes (E. coli, Klebsiella,
Enterobacter) pequeas, muy
inhibidas, pero rosa/rojo, por
la fermentacin de la lactosa.

Agar XLD

Inhibidores: sales
biliares a alta
concentracin, citrato y
tiosulfato. Lactosa,
sacarosa y xilosa como
agentes diferenciales.
Lisina como agente
diferencial. Tiosulfato y
citrato como agentes
diferenciales. Indicador:
rojo fenol.

Selectivo y
Diferencial

Aislamiento
selectivo
de especies de
Salmonella y
Shigella.

Agar
desoxicolatoci
trato
(ADC)

Inhibidores:
desoxicolato y citrato.
Incorpora lactosa como
agente diferencial. Rojo
neutro como indicador.

Selectivo y
Diferencial

Aislamiento
selectivo de
especies de
Salmonella y
Shigella.

Agar sulfito
de bismuto

Inhibidor: bismuto y el
colorante verde
brillante. Sulfato ferroso
y sulfito como agentes
diferenciales.

Aislamiento
selectivo de
Salmonella typhi

Colonias con bordes claros y

punto central
negro.

Agar verde
brillante

Inhibidor: colorante
verde brillante (inhibe
gram positivas). Incluye
lactosa y sacarosa. Rojo
fenol como indicador.

Selectivo y
Diferencial.
Muy
inestable, no
se puede usar
al cabo de
una semana
tras su
preparacin.
Selectivo y
Diferencial

Aislamiento
selectivo de
especies de
Salmonella, salvo
S. typhi y S.
paratyphi. No se
recomienda para
Shigella

Colonias de Salmonella
rosas, blancas o
transparentes, dependiendo
de la fermentacin de los
azcares

Agar
chocolate con
Isovitalex y
vancomicina

Agar sangre, con la

sangre lisada (por
calentamiento a 80C).
Se aade isovitalex
(suplemento vitamnico,
aminocidos, Fe,
glucosa, etc.) y
vancomicina para inhibir
gram positivos

Ya no es diferencial.
Medio selectivo
---Los eritrocitos lisados modificado para el
liberan la hemoglobina aislamiento de Neisseria
y otros nutrientes
y Haemophilus
como factor X
(hemina) y factor V
(NAD). El aadido de
vitaminas,
aminocidos, glucosa,
Fe, etc. permite el
crecimiento de
Neisseria y
Haemophilus
Agar salino
Inhibidor: cloruro sdico Selectivo y
Aislamiento selectivo
Los estafilococos
manitol
al 7,5%. Manitol como
diferencial
de estafilococos y
coagulasa positivos
(Chapman)
agente diferencial, rojo
micrococos
(Staphylococcusaureus)
fenol como indicador.
fermentan el manitol y dan
colonias amarillas. Los
estafilococos que no
fermentan el manitol (p.e.,
S. epidermidis) dan
colonias blancas o del
color del medio.
Agar
Agar base Columbia
No es
Aislamiento de cocos
---Columbia
con colistina y cido
diferencial
gram positivos
CNA
nalidxico
Agar selectivo Inhibidores: cristal
Selectivo y
Aislamiento selectivo
Permite ver hemlisis
para
violeta y antibiticos
Diferencial
de S. pyogenes
(beta).
estreptococos (trimetoprimsulfametoxa
(garganta) y S.
zol y colistina). Tambin
agalactiae
lleva sangre.
Agar PEA
Inhibidor: alcohol fenilSelectivo. Si Aislamiento selectivo
Si lleva sangre se
(alcohol fenil etlico (inhibe gram
lleva sangre
de cocos gram
observan reacciones
etlico)
negativas). Tambin se es diferencial positivos
hemolticas. Si no, no es
puede aadir 5%
(estafilococos y
diferencial.
sangre de oveja
estreptococos).
Tambin para cocos
gram positivos
anaerobios si se
incuba en
anaerobiosis.
Agar sangre
lacada con
kanamicina y
vancomicina
(KVLB)

Sangre lacada
Selectivo. No
(congeladadescongelad es diferencial
a). Agentes inhibidores:
antibiticos
(kanamicina, inhibe
algunos gram negativos
aerbios, y
vancomicina, que inhibe
gram positivos em
general).

Aislamiento selectivo
---de anaerobios,
fundamentalmente
gram negativos, de
muestras en las que
hay microbiota aerobia
y anaerobia
mezcladas.

BHI +
Antibiticos

dem. a BHI +
cicloheximida (inhibe
hongos saprfitos) +
cloranfenicol
(antibacteriano)

Agar sangre + Agar base (BHI,

antibiticos
Columbia) + 5% sangre
de oveja desfibrinada +
cloranfenicol +
gentamicina

Selectivo. No
es diferencial

Aislamiento selectivo
de hongos patgenos

Selectivo y
Diferencial

Aislamiento selectivo
---de hongos patgenos,
incluso los ms
exigentes. Los
antibiticos inhiben las
bacterias.
Aislamiento de hongos ---patgenos
dermatofitos.

Agar glucosa Agentes inhibidores de Selectivo. No

de Sabouraud bacterias: antibiticos
es diferencial
(cicloheximida y
cloranfenicol), pH
levemente cido (5,6)
inhibe algunas bacterias
Agar SABHI

Agar base de
Sabouraud al que se le
aade BHI, para poder
aislar hongos ms
exigentes

Selectivo. No
es diferencial

----

Aislamiento ptimo de ---Blastomycesdermatitid

is e
Histoplasmacapsulatu
m

Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores
de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se
suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin
embargo, la 5 preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida
de los factores nutritivos lbiles.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medios sustancias
como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales
minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica. Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien
como indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina
o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido. Los medios solidificados con gelatina
tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas
inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los
medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran cantidad de medios
lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden
obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se
desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los
microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin de
oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo
de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones
mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.
5- Luzambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay
excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos.

6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayora
de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos
cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los
psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas
generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los
saproftos tienen rangos ms amplios
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida que
puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes
inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presin como agente esterilizante)

La evolucin de los medios de cultivo

Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en el momento en que se
descubre el microscopio y comienza la observacin de los primeros microorganismos, pero es indudable que la
puesta a punto de los medios de cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes
puntos de inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo Brefeld, que consigui aislar y
cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados a base de gelatina. Sin embargo este sistema no era
adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un
mtodo enfocado al cultivo puro basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata como soporte nutritivo
slido, pero no tard en recurrir al caldo de carnelquido, diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina,
logrando un medio slido transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin con los medios de cultivo:
el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde
entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban
hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las bacterias quimioauttrofas
(utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran importancia en el desarrollo de los medios selectivos y
de enriquecimiento. Disearon este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos metablicos, eran los nicos
capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de pH a la composicin de
ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de cidos en la fermentacin en ciertos
microorganismos.

Curva de crecimiento bacteriano

El crecimiento de las bacterias sobre un medio de cultivo liquido es claramente exponencial, y la determinacion
de este crecimiento cuantitativo se puede representar mediante una curva en la que se distinguen las siguient.es
fases 0 periodos.
*Esludiocuanlitativo Debe seguirse obligatoriamente sobre el crecimiento global de una poblacion bacteriana
homogenea, y el cultivo puro de una sola cepa permite obtener la curva de desarrollo bacteriano, relacionando la
tasa de crecimiento en funcion del tiempo.*

Fase de latencia.
Es el tiemponecesario para la adaptacionde las bacteriasal nuevo medio donde se siembran. Durante este
periodo losmicroorganismos en estado latente aumentansu actividad metabolica, se embeben en agua, se
incrementa la tasa de ARN. Principalmente ribosomico (esencial para la sintesis de nuevas proteinas
bacterianas), y se producen posiblemente enzimas inducibles para utilizar lasnuevas sustancias s que se les
ofrecen. En definitiva hay un aumento de volumen,perono de division.dado que no hay recopilacin de ADN
cuyos niveles permanecen constantes durante toda la fase.
Si las bacterias sembradas procediesen de un cultivo similar. Con los mismos sustratos y en fase
Logaritmicapracticamente no habriasolucion de continuidad y la fase de latencia se acortaria extraordinariamente.
Por el contrariosufriria una serie de retrasos indefinidos en el caso de existir oxigeno en un cultivo de
anaerobiosis.Asi como en la aireacion forzada que impidiera la acumulacion de CO2 o la adicion de sustancias
antibacterianas, como sulfamidas, antibiticos, colorantes, etc. Cuando se usa como inoculo celulas en estado
metabolico latente, son factores de importancia critica para iniciar el crecimiento: El pH, la temperatura. la
presencia de concentraciones adecuadas de oxigeno (potencial de oxidacionreduccion) y concentraciones
favorables de CO2, Deben existir tambien ciertas sustancias nutritivas. en especial aquellas que las celulas
producen lentamente o con dificultad por si mismas. Si el nuevo medio contiene nutrientes que no son asimilables
por la mayoria de las bacterias del inoculo. Pero posiblemente sean utilizables por una o dos celulas mutantes.
lascelulas no mutadas moriran y aparecera un crecimiento perceptible despues de un retraso inusitadamente
largo.

Fase de desarrollo exponencial o logartmica

Una vez iniciado el desarrollo se meanifiesta pronto por la asecedente inflexin de la curva, Llamada fase de
crecimiento acelerado. Durante este periodo precoz cuando la division es lenta el tamao de las celulas es
grande; casi el maximo alcanzable por las respectivas especies .Este hecho es debido probablemente. a la

imbibicion de agua con la hinchazon consiguiente y al comienzo de la actividad metabolica. Durante la fase de
crecimiento acelerado el tiempo requerido para que cada celula se divida va disminuyendo.
Esta fase de desarrollo logaritmico esta mediatizada por una serie de factores limitantes intrinsecos, como
la velocidad de difusion osmtica y factores extrinsecos diversos, como la concentracion del sustrato presencia
de oxigeno. etc. La temperatura es asimismo un factor importante, ya que para las bacterias patogenas el
optimode crecimiento se consigue a los 37C. Ypara las levaduras y otros hongos, a 25C.Durante esta fase se
alcanza el valor mas alto en el numero de generaciones por hora. Ademas, el recuento de celuIas viables es
prcticamente idntico al de celulas totales. Al tratarse de una poblacion joven, en que el numero de bacterias
muertas es minimo
Por otro lado la actividad metabolica es el mximo, el tamao medio bacteriano se reduce, las estructuras (pared,
membrana. etc.) presentan. ademas, un espesor minimo, la sensibilidad a los agentes fsicos qumicos y
antimicrobianos y fagos es optima en esta fase, y las caractersticas bioqumicas y biofsicas son mas evidentes.
Debido a estos atributos fisiologicos adquiridos por las bacterias en esta fase, si se realiza un subcultivo en caldo
a temperatura adecuada el crecimiento continua a ritmo exponencial sin apenas fase de latencia. Si el
crecimiento exponencial siguiese ininterrumpidamente en poco tiempo se llegaria a constituir una masa solida de
bacterias, lo que no sucede al aparecer numerosos factores que interfieren en dicha multiplicacion. Al cabo de
pocas horas (odias) del inicio de la fase logaritmica, los microorganismos encuentran dificultades para continuar
la multiplicacion. Los nutrientes se agotan , las materias residuales toxicas se acumulan, el pH se modifica, los
aceptores de hidrogeno desaparecen, latranferencia de energia disminuyen y las celulas se obstaculizan
mutuamente. La tasa de division celular comienza a declinar y hay microorganismosque mueren en numero
creciente de tal modo que el progreso numerico de las celulas vivas se retarda considerablemente. Este proceso
se designa como fase de aceleracion negativa del crecimiento

Fase estacionaria
Hay un crecimiento desequilibrado debido a que los componentes bacterianos (ADN, ARN, protenas, etc.) se
sintetizan a tasas diferentes. Se produce una estabilizacin del modo que el numero de celulas que se
reproducen equivalen a las que mueren. Puede ser debido a la disminucin de factores esenciales para la
respiracion o a falta de elementos nutritivos del sustrato. El acumulo de productos finales del metabolismo,
acidosorganicoso alcoholes obtenidos a partir de la degradacion de los carbohidratos, y enzimas autocataliticas
del tipo de las proteasas y de las nucleasas son factores dignos de tenerse en cuenta al actuar como inhibidores.
A veces la causa limitante es la concentracion de glucosa; por ello, su adicion a un mediotamponado para
neutralizar las pequeas cantidades de acido producido puede estimular un nuevo cicIo de desarrollo.

Fase de declinacion o muerte

Al volverse las condiciones del medio mas adversas cada vez, las bacterias se reproducen mas
lentamente ypredominan las celulasmuertas. Aparece una fase de declinacin exponencial similar,
pero en sentido contrario a lo que sucede en la fase logaritmica. En la mayor parte de las bacterias,
el proceso se desarrolla en 72 horas de forma que al final de estas el numerode celulas viables es
muy pequeo, si bien la esterilidad total del cultivo puede no lograrse hasta transcurridas varias
semanas a meses y depende, entre otros factores, del tipo de microorganismo, pH, presencia a
ausencia de determinados iones, etc. Para reconocer la muerte bacteriana en la que se pierde toda
capacidad metabolica y de division, es necesario proceder a una resiembra sobre medios solidos y
comprobar la ausencia de colonias tras la incubacin pertinente. Este efecto se aplica
constantemente en la practica para reconocer cuando un antimicrobiano es bacteriostatica (que
inhibe simplemente el desarrollo de las bacterias) a bactericida (si produce la lisis bacteriana),
segun la aparicion a no de crecimiento cuando se resiembra en un media de cultivo nuevo y
adecuado. Igualmente sirve para comprobar la inocuidad de las vacunas elaboradas can bacterias
muertas.

Bibliografas:
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/34/medios-de-cultivo.pdf
Microbiologia y parasitologia medica -A. PUMAROLA, A. RODRIGUEZ-TORRES, J. A. GARCIA-RODRIGUEZG.
Y PIEDROLA-ANGULO 2da edicion