INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE CINTALAPA.

CIENCIA Y TECNOLOGA AL SERVICIO DE LA COMUNIDAD

INGENIERIA EN ENERGIAS RENOVABLES.

ING. ESTHER LOPEZ MUOS.

BIOQUIMICA.
UNIDAD 6: Metabolismo de Proteinas

Ensayo de
Aplicacin de la protena verde fluorescente en el monitoreo de cepas
degradadoras de fenol
EDUARDO HERRERA MORALES

2 SEMESTRE

GRUPO I

CINTALAPA DE FIGUEROA CHIAPAS A 31 DE MAYO DEL 2014 .

Como se ha dicho que Teniendo como marco las polticas de proteccin y

recuperacin del ambiente de la Empresa Colombiana de Petrleos, se cuenta con
tecnologas para reducir el impacto ambiental que ocasiona el vertimiento de
efluentes generados en los diferentes procesos de refinera. El agua agria y sodas
gastadas son las corrientes de agua que aportan la mayor parte del fenol en
aproximadamente el 90% a las plantas de tratamiento de aguas residuales de
refineras. Adems como se dijo que El consorcio bacteriano degradador de fenol
fue aislado de la planta de tratamiento de aguas residuales de la Gerencia
Complejo Barrancabermeja (GCB) y est conformado por las cepas ICP 244
Pseudomonas aeruginosa, ICP 245 P. putida Biotipo B e ICP 246 P. putida Biotipo
B. Las cepas donadoras del gen gfp corresponden a los microorganismos ICP 280
Escherchia coliS 17.1
Se dice que en la conjugacin, seleccin y caracterizacin de cepas
recombinantes, La conjugacin entre las cepas de E. coli donadoras del gen gfp y
la cepa ICP 245 se realiz mediante el mtodo de entrecruzamiento en placa
descrito por Matthysse et al. (1996). A partir de un inoculo fresco (18 horas) de la
cepa donadora y otro de la receptora, se centrifug independientemente 1 mi del
cultivo, se lav dos veces con caldo LB y el pellet celular se suspendi en 100 jul
de LB. Se mezclaron volmenes guales de las dos cepas y se sembraron 100 mi
de la mezcla en agar LB; se incub a 32C durante 24 horas y se recogieron las
clulas del agar en 2 mi de agua estril. Y como pudimos captar la Inmovilizacin
y monitoreo del biorreactor con cepa recombinante se dice que La actividad
degradadora de fenol se evalu para dos cepas recombinantes en erlenmeyer
(500 ml) con 200 ml de MBS ms 200 mg/L de fenol, agitacin constante (130
rpm) y temperatura constante (32C). Se determin la concentracin de fenol con
el mtodo de la 4-aminoantipirina (ASTM D1583-91) despus de 13 horas de
incubacin.
Adems se dice que la Estabilidad de la marcacin molecular se hace Con el fin
de establecer la estabilidad de la marcacin con el gen gfp en el cromosoma
bacteriano, se evaluaron 50 generaciones sucesivas para seis recombinantes con
el promotor constitutivo. El fenotipo fluorescente se logr mantener estable para el
100% de los recombinantes con y sin la presin del antibitico. Pero Sin embargo,
se observaron diferencias en el nivel de fluorescencia, siendo ligeramente menor
la intensidad para las cultivadas en condiciones no selectivas. A pesar de la
disminucin en la fluorescencia, la expresin de la GFP para la cepa ICP 245 se
mantiene estable sin la presin selectiva del antibitico, parmetro importante para
su monitoreo in situ en aguas industriales.
Adems El sistema de marcacin con la protena verde fluorescente (GFP)
constituye una alternativa til en el monitoreo de microorganismos en ambientes
complejos como en el proceso de tratamiento de aguas agrias de refinera. Y
como sabemos Las cepas recombinantes marcadas con la GFP presentaron una
alta estabilidad en la emisin de fluorescencia sin alterar sus principales
caractersticas fisiolgicas y capacidad de degradacin de fenol.