GUA DE PRCTICA

CONTROL DE CALIDAD

LIMA - PER

PRCTICA N 1
CONTROL DE CALIDAD DEL AGUA DE USO FARMACEUTICO
1.1.- Introduccin:
El agua en la industria farmacutica es usada comnmente tanto para la manufactura
de los productos medicinales, integrando o no la formulacin final, como para el lavado
de equipos, recipientes y envases primarios. Este tipo de agua denominado Agua de
uso Farmacutico (Water for pharmaceutical), debe ser preparada a partir de agua
potable y puede tener diferentes calidades dependiendo de la va de administracin de
los productos farmacuticos. Los contaminantes del agua bruta pueden ser:
compuestos inorgnicos (sales como cloruro de sodio, carbonato de Mg y Ca, y
metales pesados), compuestos orgnicos (detergentes, solventes, sustancias
plsticas), slidos en suspensin (por ejemplo tierra, arcillas y otros), gases disueltos
(nitrgeno, oxgeno, anhdrido carbnico) y microorganismos (algas, protozoarios,
bacterias)*.
* Carpiuc L. Agua de uso Farmacutico. Informe especial. Uruguay. 2010.
1.2.- Objetivo:
Determinar los parmetros fsicos, fsico-qumicos y qumicos que definen la calidad del
agua de uso farmacutico.
Mtodo:
Procedimientos de anlisis de agua de uso farmacutico, adaptados de la USP 36.
1.3.- Materiales y equipos.A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:

Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en moo

alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes largos o
anillos.

Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y

lentes de proteccin (de uso personal).

Muestras: agua potable y/o de consumo humano.

B. Materiales y Equipos:
Material
Mecheros de vidrio
Trpode
Rejilla con centro cermico
Gradillas
Tringulo de calcinacin
Tubos de ensayo 16 x 150 mm
Matraz Erlenmeyer x 250 ml
Esptulas c /mango de madera
Beaker x 100 ml
Probeta x 100 ml
Piceta c/agua destilada
Cpsula de porcelana
Pipetas graduadas 5 ml

Cantidad
5
5
5
5
5
40
5
5
5
5
5
5
10

Observacin

Pipetas graduadas 10 ml
Varilla de agitacin
Goteros de plstico x 3 ml
Propipetas de jebe
Equipos
Balanza analtica
Potencimetro

10
5
10
5
1
1

C. Reactivos
Para la entrega de reactivos se considerar un aproximado de 5 alumnos por mesa de
trabajo.
Reactivo
Cloruro de potasio
Buffer Ph 4
Buffer Ph 7
Reactivo de Nessler
Nitrato de plata
Acido ntrico
Bario cloruro
Amonio oxalato
Permanganato de potasio
Acido sulfrico

Concentracin

0.1 N
10 %
0.25 M
0.1 N
0.1 N
2M

Cant. (*)
30 g
50 ml
50 ml
20 ml
100 ml
50 ml
50 ml
50 ml
25 ml
100 ml

1.4.- Procedimiento
A.- Anlisis preliminar
1.4.1. Organolptico
Verter 10 ml de muestra en tubos 16 x 150 mm
Observar a trasluz :
Color
Olor
Presencia de partculas en suspensin
Aspecto
La muestra analizada debe ser negativa.
1.4.2. Determinacin del pH
El pH ptimo de las aguas debe estar entre 6,5 y 8,5, es decir, entre neutra y
ligeramente alcalina, el mximo aceptado es 9. Las aguas de pH menor de 6,5,
son corrosivas, por el anhdrido carbnico, cidos o sales cidas que tienen en
disolucin.
Ensayo:
Determinar potenciometricamente el pH en una alcuota de muestra (5
ml) previamente saturada con Cloruro de Potasio.
1.4.3. Determinacin de Residuos de Evaporacin (slidos disueltos)
Tomar 50 ml de la muestra problema, previa filtracin, disponerlo en una
cpsula de porcelana previamente tarada.
Evaporar a sequedad la muestra de agua. Colocar en estufa a 100. Enfriar
en Desecador. Pesar el residuo en balanza analtica.
Calculo del peso del residuo solido
S.T. =

Peso (cpsula + Residuo) - Peso (cpsula vaca)

50 ml M.P.
Unidades: mg/L (Valor mximo aceptable: 1500 mg/L)
B.- Anlisis qumico
1.4.4. Amoniaco
El ion tiene escasa accin txica por s mismo, pero su existencia an en bajas
concentraciones, puede significar contenido aumentado de bacterias fecales,
patgenos etc., en el agua. La formacin del amonio se debe a la
descomposicin bacteriana de urea y protenas, siendo la primera etapa
inorgnica del proceso.
Ensayo:
Verter 5 ml de muestra problema en un tubo de ensayo de 16 x 150 mm,
aadirle 3 gotas de reactivo de Nessler.
La presencia de una coloracin amarilla o naranja, frente a un blanco de
reactivo, indica positividad en la reaccin.
1.4.5. Cloruros
Un agua con alto tenor de oxidabilidad, amonaco, nitrato, nitrito, caracteriza una
contaminacin y por lo tanto los cloruros tienen ese origen. Pero si estas
sustancias faltan ese alto tenor se debe a que el agua atraviesa terrenos ricos en
cloruros. Los cloruros son inocuos de por s, pero en cantidades altas dan sabor
desagradable.
Valor mximo aceptable: 350 mg/l.
Ensayo:
Tomar tres tubos de ensayo de 16 x 150 mm, aadir a cada uno de ellos
10 ml de muestra problema, luego aadir 0.5 ml, 1 ml y 1.5 ml de Nitrato
de Plata al 0.1N respectivamente y 0.5 ml de cido ntrico al 10 %
Agitar y observar a travs del tubo (de arriba hacia abajo). Una ligera
opalescencia indica presencia de cloruros.
1.4.6. Sulfatos
Verter 5 ml de muestra problema en un tubo de ensayo de 16 x 150 mm ,
aadirle 1ml Cloruro de bario 0.25 M.
La presencia de turbidez (pp. fino) indica presencia de sulfatos
DUREZA DEL AGUA
Se habla de aguas duras o blandas para determinar calidad de las mismas. Las
AGUAS DURAS tienen alto tenor de sales de calcio y magnesio disueltas. Las
AGUAS BLANDAS son pobres en estas sales.

Bicarbonato de calcio y magnesio: Dureza Temporal

Sulfato y cloruro de calcio y magnesio: Dureza Permanente

Puede haber tambin nitratos, fosfatos, silicatos, etc. (dureza permanente). El
agua debe tener una dureza comprendida entre 60 y 100 mg/l, no siendo
conveniente aguas de dureza inferiores a 40 mg/l, por su accin corrosiva.
Valor mximo aceptable de Dureza Total (CaCO3) 400 mg/l.
Ensayo:
1.4.7. Calcio
A una alcuota (5 ml) de muestra problema aadir 1 ml de Oxalato de
amonio al 0.1 N
La presencia de precipitado cristalino indica la existencia de iones de
calcio.
1.4.8. Sustancias oxidables

Es un indicador de la materia orgnica e inorgnica oxidable presente en el agua.

Se determina mediante la oxidacin qumica de la materia orgnica y de las
sustancias oxidables, con permanganato potsico que acta como oxidante.
Valores elevados pueden indicar un incorrecto funcionamiento del sistema de
desinfeccin, que debe ser corregido.
Ensayo:
Tomar 100 ml de muestra problema y trasvasarla a un matraz, aadirle 2
ml de Acido Sulfrico al 2 M y aadir X gotas de Permanganato de potasio
0.1N.
Hervir por 10 minutos. La solucin no debe decolorar. Todo indicio de
prdida del color original se interpreta como positivo (presencia de
sustancias oxidables)
1.5. Observaciones y resultados
Observar las caractersticas del agua.
Observar las coloraciones, decoloraciones o precipitados
Realizar las mediciones y los clculos
Anotar los resultados
1.6. Cuestionario
Cules son los tipos de agua de uso farmacutico? Explique brevemente cada uno de
ellos
Describa la obtencin del Agua Grado Inyectable, segn la Farmacopea USP.
Seale los usos del agua para inyeccin.
Describa las presentaciones del agua para inyeccin segn el Petitorio Nacional nico
de medicamentos Esenciales 2015.
1.7. Referencia bibliogrfica
Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed.
The United States Pharmacopeial Convention

PRCTICA N 2
CONTROL DE CALIDAD DE MATERIA PRIMA
2.1. Introduccin:
La materia prima debe cumplir con exigencias de calidad para su uso en el rea de
produccin de un laboratorio farmacutico.
2.2. Objetivo:
Caracterizar la materia prima mediante el anlisis cualitativo y determinar la potencia de la
materia prima mediante el anlisis cuantitativo.
Mtodo: Anlisis cuantitativo y cualitativo
2.3. Materiales y equipos:
A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:

Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en un

moo alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes
largos o anillos.

 Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y

lentes de proteccin (de uso personal).
Muestras: cido acetilsaliclico (10 tabletas por cada mesa de trabajo).
B. Materiales y Equipos:
Material
Mecheros de vidrio
Bureta con llave de tefln
Gradillas para tubo de ensayo
Lentes de proteccin
Tubos de ensayo 13 x 100 mm
Matraz erlenmeyer x 125 ml
Sistema de reflujo adaptado
Pipetas graduadas x 1 ml
Pinza de metal p/ tubo de ensayo
Esptulas c /mango de madera
Beacker x 100 ml
Probeta x100 ml
Piceta c/agua destilada
Pipetas graduadas 5 ml
Mortero de porcelana c/ piln
Pipetas graduadas 10 ml
Goteros de plstico
Propipetas de jebe
Equipos
Balanza de precisin
Campana extractora
Cocinilla

Cantidad
5
5
5
5
25
5
5

Observacin
Con accesorios De 10 ml o 25 ml

Tubos de desprendimiento recto( 30 cm de

largo aproximadamente) con tapn

5
5
5
5
5
5
5
5
5
10
5
1
1
1

C. Reactivos
Para la entrega de reactivos se considerar un aproximado de 5 alumnos por mesa de
trabajo.
Reactivo
cido acetil saliclico
Hidrxido de sodio
Hidrxido de sodio (Estandarizado)
cido clorhdrico (Estandarizado)
Fenolftaleina
Alcohol etlico
Cloroformo
Reactivo de Trinder
cido clorhdrico
Hidrxido de sodio

Concentracin
0.1 N
0.25 N
0.25 N
1%
96 %
10 %
10 %

2.4. Procedimiento
2.4.1. Anlisis preliminar.
a) Obtencin de la Muestra Problema
b) Separacin de la contra-muestra
c) Determinacin de las caractersticas organolpticas:
Color
Olor

Cant. (*)
20 g
50 ml
250 ml
250 ml
20 ml
600 ml
50 ml
20 ml
20 ml
20 ml

Aspecto

2.4.2. Ensayo de solubilidad.

Ensayar la solubilidad con agua destilada, alcohol etlico y cloroformo.
2.4.3. Identificacin de la materia prima
2.4.3.1. Reaccin de Trinder
Disolver la Muestra Problema en solvente apropiado; aadirle 2 ml agua destilada
y 3 gotas de cido clorhdrico al 10 %. Calentar por en mechero. Aadir gotas del
reactivo de Trinder. La aparicin de color azul violeta indicar presencia de cido
acetilsaliclico.
2.4.3.2. Reaccin con Hidrxido de Sodio
Disolver miligramos de Muestra Problema en solvente apropiado y aadir 0.5 ml
Hidrxido de sodio al 10%. Calentar en mechero. Aadir 1ml de Acido Clorhdrico al
10% para neutralizar. El olor a vinagre indicar presencia de salicilatos.
2.4.4. Determinacin de la potencia
2.4.4.1. Preparacin de la muestra.
Pesar una cantidad equivalente a 250 mg de principio activo. (MP).
2.4.4.2. Neutralizacin del solvente
Tomar 50 ml alcohol etlico y verterlo en un matraz Erlenmeyer. Aadir 3 gotas de
fenolftalena al 1 %. Neutralizar la acidez del alcohol con Hidrxido de sodio al
0.1N; el gasto no debe ser mayor de 0.3 ml (5 - 6 gotas). El color final debe ser un
ligero rosado persistente.
2.4.4.3. Hidrolisis de la muestra
El principio activo tomado en el paso 2.4.1 colocarlo en el matraz que contiene el
alcohol neutralizado y aadir 20 ml de Hidrxido de Sodio 0.25N; acondicionar el
sistema para calentar a reflujo por 40 min en cocinilla.
2.4.4.4. Valoracin
Luego del perodo de calentamiento valorar la muestra con Acido Clorhdrico 0.25 N.
La desaparicin del color rosado indicar el fin de la reaccin. Efectuar los clculos
considerando el Peso equivalente del cido acetilsaliclico la mitad del peso
molecular.
Clculos:
Materia Prima.
Potencia (mg) = (N1 x 20 N2 x G) ( Peso .equivalente AAS)
% AAS =

Potencia
x 100
Peso de la MP

Rango: 95% - 105% del contenido declarado

Datos.N1: NaOH 0.25N
N2: H2SO4 0.25 N
G: Gasto del H2SO4 0.25 N
Peso Molecular del AAS: 180
Peso Equiv. AAS: 90

Peso de la MP: 250 mg

2.5. Observaciones y Resultados
Observar las caractersticas de la materia prima.
Observar las coloraciones, percibir olores.
Realizar las mediciones y los clculos.
Anotar los resultados.
2.6. Cuestionario
Cul es la composicin del reactivo de Trinder y cul su fundamento qumico?
Explique el origen de la acidez del alcohol etlico?
Mediante ecuaciones qumicas fundamente la determinacin de la potencia del cido
acetilsaliclico realizada en la prctica.
2.7. Referencia Bibliogrfica
Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed.
The United States Pharmacopeial Convention

PRCTICA N 3
CONTROL DE CALIDAD DE PRODUCTO TERMINADO
3.1. Introduccin:
Los productos terminados farmacuticos deben llegar al usuario en niveles de calidad
adecuados a su uso previsto.
3.2. Objetivo:
Efectuar procedimientos generales de anlisis fisicoqumicos de productos terminados
farmacuticos.
Mtodo: Mtodos adaptados usando como referencia la USP 30.
3.3. Materiales y equipos
A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:
Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en un
moo alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes
largos o anillos.
Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y
lentes de proteccin (de uso personal).
Muestras: 20 tabletas de metamizol x mesa y 1 ampolla de metamizol x mesa.
B. Materiales y Equipos:
Material
Mortero de porcelana con piln
Beaker x 100 ml
Fiola x 50 ml
Embudos grandes
Papel filtro paso rpido

Cantidad
5
5
5
5
3 x mesa

Observacin

3 a 30

Bureta con llave de tefln 10 25 ml

Lentes de proteccin
Matraz erlenmeyer x 250 ml
Esptulas c /mango de madera
Probeta x 50 ml
Probeta x10 ml
Piceta c/agua destilada
Pipetas graduadas 5 ml
Pipetas graduadas 10 ml
Goteros de plstico x 3 ml
Propipetas de jebe
Equipos
Balanzas analtica

5
5
5
5
5
5
5
5
5
10
5
1

C. Reactivos
Para la entrega de reactivos se considerar un aproximado de 5 alumnos por mesa de
trabajo.
Reactivo
Yodo (Estandarizado)
Almidn
Acido sulfrico

Concentracin
0.1 N
1%

Cant. (*)
350 ml
50 ml
50 ml

3.4. Procedimiento
3.4.1. Anlisis organolptico
A. Tabletas
Forma
Tamao
Color
Borde y superficie
Presencia de partculas extraas
Evaluacin del rotulado del envase primario, conforme al reglamento D.L. 010/97
(DIGEMID) y del envase secundario.
B. Ampollas
Color del liquido
Presencia de partculas extraas
Aspecto
Envase y sellado
Evaluacin del rotulado del envase primario, conforme al reglamento D.L. 010/97
(DIGEMID) y del envase secundario.
3.4.2. Determinacin de parmetros fisicoqumicos
A. Uniformidad de peso
Determinar la uniformidad de peso de 20 tabletas de Metamizol.
Hallar la desviacin estndar.
B. Determinacin del contenido de la ampolla
Hallar el volumen exacto del contenido de una ampolla de Metamizol con ayuda de
una probeta graduada.
Comparar el resultado con los valores obtenidos por los otros grupos.

 Hallar la desviacin estndar.

3.4.3. Determinacin del contenido
A. Preparacin de la muestra
A) Tabletas
Triturar 2 - 4 tabletas de metamizol y pesar un equivalente de 50 a 60 mg de
muestra.
Extraer con 10 ml de agua destilada. Filtrar y conservar el sobrenadante.
Repetir el procedimiento de extraccin 2 veces ms.
Unir los extractos y verterlos en el matraz de 250 ml.
B) Ampollas

Diluir 1 ml del contenido de una ampolla de Metamizol con agua destilada en

fiola de 50 ml.

Tomar 50 ml de la dilucin y verterlo en matraz erlenmeyer

C. Valoracin
Fundamento: se basa en la oxidacin del grupo sulfnico (HSO3 ), previa hidrlisis por la
accin oxidante del iodo en medio sulfrico, a sulfato.
Tcnica: Dubash, D.D. y Moore, W. EJ., J. Pharm. Sci. 61. 386 (1972)
Ensayo:

Al matraz que contiene los extractos o la dilucin aadir 50 ml de agua

destilada; 2 ml de cido sulfrico 1N y 1 ml de almidn al 1 %.

Valorar con solucin de Yodo 0.1 N hasta aparicin de color azul persistente que
indica fin de la reaccin, repetir el ensayo por dos veces o hasta que al menos dos
gastos sucesivos sean homogneos.

Efectuar los clculos considerando el Peso Equivalente del Metamizol igual al

peso molecular.

D. Clculos
a)

Muestra analizada : Tabletas de metamizol 500 mg

Contenido por Tab. (mg)

= ( Peso Tab.) (N x Peso equiv. MP x Gasto)

Peso Muestra

Porcentaje de metamizol =

mg x 100%
500

Rango: 95 105% del contenido declarado

Datos

Peso Tab. : Peso promedio en mg

b)

N : normalidad del yodo

Peso equiv. Metamizol : 180
G : gasto en mL
Peso muestra: peso del triturado del metamizol
mg: contenido de metamizol por Tab.
500mg: contenido terico declarado por tab.

Muestra analizada: metamizol en ampolla por 5mL

Determinar previamente el volumen (V) de la ampolla de metamizol.
Contenido por ampolla (mg) = N x Peso equiv. MP x G x Factor de dilucin
Porcentaje de metamizol = Contenido por ampolla x 100%
Contenido declarado
Datos
N: normalidad del yodo
Peso equivalente del Metamizol: 180
G: gasto
Factor de dilucin: 10

3.5. Observaciones y Resultados

Observar las caractersticas del producto
Observar las coloraciones
Realizar las mediciones y los clculos
Anotar los resultados
3.6. Cuestionario
Cules son las reacciones de identificacin del metamizol? Explique cada una
brevemente
Cul es el fundamento de la valoracin del metamizol?
3.7. Referencia Bibliogrfica
Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed.
The United States Pharmacopeial Convention.
Gua Prcticas de Laboratorio. Univ. Los ngeles de Chimbote [ltima visita: 27 junio
2016] https://es.scribd.com/doc/309910485/FARMACOQUIMICA-II.

PRCTICA N 4
CONTROL DE CALIDAD DE COSMETICOS
4.1. Introduccin:
Los productos cosmticos deben llegar al usuario en niveles de calidad adecuados a su
uso previsto.
4.2. Objetivo:
Realizar el control preliminar de productos cosmticos acabados, evaluar el rotulado y
ensayar determinaciones fisicoqumicas.
Mtodo: Mtodos adaptados recomendados en las normas de la comunidad andina para
productos fisicoqumicos.

4.3. Materiales y equipos

A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:
Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en un
moo alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes
largos o anillos.
Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y
lentes de proteccin (de uso personal).
Muestras: Muestras cosmticas lquidas o semislidas (Champ, Polvo facial, Lpiz
labial u otros).
B. Materiales y Equipos:
Material
Beacker 100 ml
Tubos de ensayo 16 x 150
Gradillas
Fiola x 50 ml
Picnmetro
Esptulas con mango de madera
Probeta graduada 100 ml
Piceta c/agua destilada
Pipetas graduadas 10 ml
Varillas de agitacin o baguetas
Propipetas de jebe
Equipos
Balanzas mecnicas
Potencimetro

Cantidad
5
30
5
5
1
5
5
5
10
5
5

Observacin

c/ carn (Opcional)

5
1

C. Reactivos
Para la entrega de reactivos se considerar un aproximado de 5 alumnos por mesa de
trabajo.
Reactivo
Buffer pH 4
Buffer pH 7

Observacin

Cant. (*)
50 ml
50 ml

4.4. Procedimiento
4.4.1. Anlisis Organolptico
Control de rotulado.- Determinar el cumplimiento de las especificaciones de rotulado de
los productos cosmticos (D.S. 010/ 97 SA)
Aspecto.- Descripcin del Producto: Consistencia. Uniformidad. Presencia de partculas
extraas.
4.4.2. Control de calidad Fsico-qumico.
A una muestra del producto realizar los siguientes ensayos:
Determinacin del pH. Efectuar una dilucin del producto en agua destilada (Productos
slidos) en la proporcin 1:10. Efectuar la medicin.
Si el producto es lquido tomar directamente el pH.
Valores de referencia:

Para Champ : pH entre 5,0 - 5,5

Para cremas : pH entre 5,0 6,0
Para polvos faciales y lpiz de labio: pH entre 5,0 6,5

4.4.3 Determinacin de la densidad para productos cosmticos lquidos:

Mtodo del Picnmetro o gravimtrico (Utilizar fiola, opcionalmente picnmetro).
Valor referencial: 0,99 1,03 (para el champ y otros productos lquidos)
4.5. Observaciones y Resultados
Observar las caractersticas del producto
Realizar las mediciones y clculos
Anotar los resultados
4.6. Cuestionario
Por qu se realiza una dilucin 1:10 para efectuar la determinacin del pH de
productos cosmticos slidos?
Qu ensayos microbiolgicos se realizan a los cosmticos?
4.7. Referencia Bibliogrfica
Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed.
The United States Pharmacopeia Convention.

PRCTICA N 5
CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGICO DE MEDICAMENTOS I. RECUENTO
DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS.
5.1. Introduccin:
Los medicamentos deben poseer una pureza microbiolgica adecuada a su uso previsto.
Los recuentos de microorganismos aerobios mesfilos viables en los medicamentos no
estriles deben estar dentro de lmites mximos permisibles.
5.2. Objetivo:
Determinar la contaminacin microbiana de productos farmacuticos y superficies de
trabajo.
Mtodo: Preparacin de la muestra segn mtodo descrito por USP 30. Recuento de los
microorganismos aerobios totales y de hongos.
5.3. Materiales y equipos
A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:
Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en un
moo alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes
largos o anillos.
Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y
lentes de proteccin (de uso personal).
Muestras: Productos farmacuticos lquidos en solucin o productos naturales,
asa de siembra, pabilo, bolsas plsticas, plumn marcador, algodn y papel kraft
(por mesa de trabajo).
B. Materiales y Equipos:
Material

Cantidad

Observacin

Placas petri
Matraz de 250 ml
Matraz de 125 ml
Tubo de ensayo 16 x150 mm
Gradillas p / tubos 16 x 150 mm
Pipetas graduadas x 5 ml
Propipetas de jebe
Pipetas graduadas x 1ml
Probeta graduada x 10 ml
Mecheros
Piceta con desinfectante
Equipos
Incubadora
Balanzas mecnicas

(60) 6 x mesa
Segn Volumen
(10) 1 x mesa
(20) 2 x mesa
5
(20) 2 x mesa
5
(20) 2 x mesa
(10) 1 x mesa
5
1
1
5

Estriles
Estriles (conteniendo los agares )
Estriles (conteniendo el diluyente)
Estriles (conteniendo el diluyente )
Estriles
Estriles
Estriles
Con alcohol
Para limpieza de la mesa de trabajo

1 x mesa de trabajo

C. Reactivos
Para la entrega de los medios de cultivo y materiales se considerar un aproximado
de 5 alumnos por mesa de trabajo y mximo 10 mesas de trabajo.
.
Denominacin
Alcohol etlico 70
Agar tripticasa soya

Cantidad (*)
50 ml
fundido

Agar Sabouraud

fundido

Observacin
20 ml x placa ( 3 placas x mesa ) en matraces
x 250 ml
20 ml x placa ( 3 placas x mesa ) en matraces
x 250 ml
Volumen 90 ml x matraz. 1 matraz x mesa
Volumen 9 ml x tubo 16 x 150 mm ( 2 tubos x
mesa)

Diluyente: Solucin al 5%
En matraz x 125 ml
de tween 20 en agua
En tubo 16 x 150 mm
tamponada al 0.1% estril
(*) Para
Importante.- Al finalizar la prctica, las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados, se
entregarn al Laboratorio por separado segn temperatura de incubacin. Los alumnos asistirn a verificar
las placas y tubos, solo en los horarios establecidos por el Laboratorio. La presentacin es obligatoria con:
mandil, guantes y mascarilla.
5.4. Procedimiento
5.4.1. Acondicionamiento del rea de trabajo y del personal.
Efectuar la limpieza y desinfeccin de la zona de trabajo con el desinfectante
proporcionado por el laboratorio. El personal debe contar con guardapolvo, guantes,
mascarillas y gorro.
5.4.2. Obtencin de la muestra
Desinfectar el envase del producto a analizar, usar alcohol etlico de 70 y algodn. Abrir el
recipiente en forma asptica con ayuda del mechero, en caso de usar otros materiales
estos deben estar esterilizados.
5.4.3. Preparacin de la muestra
Diluir 10 ml de la muestra
en 90 ml del agua tamponada (Para muestras con alto contenido
Dilucin
10-1
de lpidos cuenta con Tween
20 al 5%). Preparar diluciones seriadas 10 -1; 10-2, 10-3.
Matraz con la muestra

Preparacin de las diluciones:

La solucin preparada anteriormente ser considerada como la dilucin 10 -1 y seguir de acuerdo
al esquema siguiente:
1
ml
1
Cada tubo de 16 x 150 mm debe contener 9 ml
ml
del diluyente con tween 20 al 5%
102
Tubo
1

10-3
Tubo
2

Interpretacin del esquema:

El matraz que contiene el diluyente con la muestra disuelta en el, seria la dilucin
10- 1.
Luego tomamos del matraz (dilucin 10 - 1) con pipeta estril 1ml de la dilucin y
vertemos en el Tubo 1 (esta seria nuestra dilucin 10 - 2).
Seguidamente tomamos 1ml del Tubo 1 con otra pipeta estril y vertemos al
Tubo 2 (esta sera nuestra dilucin 10 - 3).
Seleccionar tres diluciones convenientes para la siembra.
Recuento de microorganismos en placa.-

10-2

10-1

10-3

1
1
m
m
L
L
L
L
L
Las placas deben estar vacas y estriles. El mtodo de siembra debe ser por incorporacin. Tomar
L -3 ) y proceder a verterlo en la placa. Aadir 15 L la mayor dilucin ( 10
1 ml del tubo que contiene
L
20 ml de AGAR TRIPTICASA
SOYA a aproximadamente
46C - 48C. Mezclar por rotacin.
L
Realizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones (10 -2 y 10-1 respectivamente)
L
empleando la misma pipeta
y empezando por la de mayor dilucin (10 -3; 10-2 y 10-1
L
respectivamente) Incubar a 37C por 24 - 48 h.
1
m
L
L
L
L

Interpretacin: Contar el nmero de colonias crecidas en la placa de mayor dilucin y multiplica

por la inversa del valor de dilucin. Reportar como UFC/ ml.
Recuento de mohos y levaduras

10-2

10-1

1
m
L
L
L
L

1
m
L
L
L

10-3

1
m

L
L
L
L

L
L

Las placas deben estar vacas y estriles. El mtodo de siembra debe ser por incorporacin
Tomar 1 ml del tubo que contiene la mayor dilucin (10 -3) y proceder a verterlo en la placa
.Aadir 15 - 20 ml de AGAR SABOURAUD a aproximadamente 46C - 48C. Mezclar por
rotacin. Realizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones (10 -2 y 10-1
respectivamente) empleando la misma pipeta y empezando por la de mayor dilucin (10-3;
10-2 y 10-1 respectivamente) Incubar a 25C por 5 -7 das.

Interpretacin: Contar el nmero de colonias crecidas en la placa de mayor dilucin y

multiplicar por la inversa del valor de dilucin. Reportar como UFC/ml.
5.5. Observaciones y Resultados
Observar las caractersticas de las colonias.
Realizar el conteo y los clculos.
Anotar los resultados.
5.6.- Cuestionario
Cul es el valor de la determinacin de los microorganismos aerobios mesfilos viables
en el control de los medicamentos?
Describa la composicin del agar tripticasa soya y su forma de preparacin.
Describa la composicin del agar Sabouraud y su forma de preparacin.
Explique por qu los cultivos de hongos en placa se leen a los 5-7 das.
5.7.- Referencia Bibliogrfica
Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed. The
United States Pharmacopeial Convention

PRCTICA N 6
CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLGICO DE MEDICAMENTOS II.
INVESTIGACIN DE PATGENOS
6.1.- Introduccin:
Los medicamentos deben poseer una pureza microbiolgica adecuada a su uso previsto.
Los microrganismos patgenos deben estar ausentes en los medicamentos.

6.2.- Objetivo:
Conocer los procedimientos bsicos de investigacin de patgenos considerando el
estudio de los agentes indicadores de contaminacin.
Mtodo: Mtodo adaptado de la USP XXX de investigacin de patgenos e indicadores
de contaminacin (Sthaphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli).
6.3. Materiales y equipos:

A. Materiales e indumentaria proporcionada por los alumnos:

Los alumnos ingresarn al laboratorio con guardapolvo, cabello recogido en un
moo alto, con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras, aretes
largos o anillos.
Los ensayos se realizarn con mascarilla, gorro cobertor, guantes descartables y
lentes de proteccin (de uso personal).
Muestras: Productos medicamentosos y/o naturales, algodn, asa de siembra,
pabilo, bolsas plsticas, plumn marcador y papel kraft (por mesa de trabajo).
B. Materiales y Equipos:
Material
Esptulas chicas y planas
Probeta x 10 ml
Matraz de 125 ml

Cant (*)
(10) 1 x mesa
(10) 1 x mesa
(20) 2 x mesa

Detalle
Estriles
Estriles
1 conteniendo caldo tripticasa soya
1 conteniendo caldo lactosado

Placas petri estriles

(30) 3 x mesa

1 placa de cada medio

Gradillas p / tubos 16 x 150 mm

Mango de siembra
Mecheros de vidrio
Mango de siembra
Piceta con desinfectante
Equipos
Incubadora
Balanzas mecnicas

Observacin
Un da antes
(Los alumnos debern venir
un da antes de su practica
para el enriquecimiento de
sus muestras)
Da de la prctica
(Se entregaran los
matraces del da anterior)

5
5
5
5
1
1
5

Uso en la primera parte

C. Reactivos
Para la entrega de los medios de cultivo y materiales se considerar un aproximado
de 5 alumnos por mesa de trabajo y mximo 10 mesas de trabajo.
Denominacin
Alcohol etlico 70
Caldo Tripticasa Soya
Caldo Lactosado
Agar Manitol Salado
Agar Mac Conkey
Agar Cetrimide

Cant. (*)
50 ml
Volumen 90 ml x matraz. 1 matraz x mesa
Volumen 90 ml x matraz. 1 matraz x mesa
20 ml x placa ( 1 placa x mesa ) - Plaqueado
20 ml x placa (1 placa x mesa ) - Plaqueado
20 ml x placa ( 1 placa x mesa ) - Plaqueado

Observacin
Un da antes de la prctica
Da de la prctica
(Se entregaran los matraces
del da anterior)

(*) Pa
r
Importante.- Al finalizar la prctica, las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados, se
entregarn al Laboratorio. Los alumnos asistirn a verificar las placas y tubos, solo en los horarios
establecidos por el Laboratorio. La presentacin es obligatoria con: mandil, guantes y mascarilla.
6.4. Procedimiento
6.4.1. Acondicionamiento del rea de trabajo y del personal
Efectuar la limpieza y desinfeccin de la zona de trabajo con desinfectante. El personal
debe contar con guardapolvo, guantes, mascarillas y gorro.

El procedimiento incluye nicamente la fase de aislamiento e identificacin de colonias

en medios de cultivo selectivos, no se realizan procedimientos de diferenciacin
bioqumica (medios diferenciales).
6.4.2. Obtencin de la muestra
Desinfectar el envase del producto a analizar, usar alcohol etlico de 70 y algodn. Abrir
el recipiente en forma asptica con ayuda del mechero, en caso de usar otros materiales
estos deben estar esterilizados.
6.4.3. Mtodo operatorio
A) Un da antes de la prctica
Realizar el enriquecimiento un da antes de la prctica.
Investigacin de Patgenos I. Staphylococcus aureus y Pseudomonas
aeruginosa
Enriquecimiento de la muestra.
Sembrar 10 g o 10 ml de MP en 90 ml de caldo tripticasa soya e incubar a 37
por 24 h.
Investigacin de Patgenos II. E. coli
Enriquecimiento de la muestra
Sembrar 10 g o 10 ml de MP en 90 ml de caldo lactosado e incubar a 37 por 24
h.
B) Da de la prctica
Se entregaran los matraces del da anterior para que se realice la siembra en las
placas.
Caldo Tripticasa Soya
1. Siembra en medio selectivo para Pseudomona
Siembra por extensin en superficie (agotamiento) en agar cetrimide. Incubar a
37 por 24 h.
2. Siembra en medio selectivo para estafilococos.
Siembra por agotamiento en superficie en agar Manitol Salado. Incubar a 37
por 24 h.
Caldo Lactosado
a) Siembra en medio selectivo para E.coli.
Repicar a partir del caldo lactosado a agar Mac Conkey incubar a 37 por x 24
h.
C) Lectura de placas con medios
Se proceder tambin a realizar la lectura de las placas con medios sembradas el da
anterior.
6.5. Observaciones y Resultados
Observar si hay crecimiento de colonias y sus caractersticas.
Anotar los resultados.
6.6. Cuestionario

Describa la composicin del caldo tripticasa soya y su forma de preparacin.

Describa la composicin del caldo lactosado y su forma de preparacin.
Describa la composicin del agar manitol salado y su forma de preparacin.
Describa la composicin del agar cetrimide y su forma de preparacin.
Describa la composicin del agar Mac Conkey y su forma de preparacin.
Cul es el propsito de la investigacin de microorganismos ndices y microorganismos
indicadores en el control de los medicamentos?

6.7. Referencia Bibliogrfica

Secretaria de la Junta Directiva de la Convencin de la USP o del NF. 2007. USP 30
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica. NF 25 Formulario Nacional. 30a ed. The
United States Pharmacopeial Convention.