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LA MOLINA
INFORME N 1
CURSO: Laboratorio de Microbiologa General
TTULO: Tincin simple con colorantes bsicos
INTEGRANTES:
20130318
20150092
20131314
20100080
LA MOLINA
2016
INTRODUCCIN
El microscopio de campo claro es el ms til para la observacin de
especmenes teidos. Los colorantes son compuestos qumicos utilizados
para aumentar el contraste. Existen algunos, llamados colorantes vitales,
que pueden aadirse directamente a una preparacin en fresco; por tanto,
colorean clulas vivas. No obstante, la mayora de los colorantes son
solamente efectivos despus de que los microorganismos hayan sido
fijados, es decir, se encuentren muertos y adheridos al portaobjetos. Para la
fijacin por calor, se realiza una fina extensin de una gota de muestra
lquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a continuacin, se pasa
la preparacin de Forma rpida sobre la llama de un mechero. El calor de la
llama mata las clulas microbianas por desnaturalizacin de sus protenas.
Las protenas coaguladas unen las clulas a la lmina. Cuando se desea fijar
especmenes delicados se utiliza la fijacin qumica, ya que es menos lesiva
que el calor. Para ello se aade una gota del fijador, por ejemplo, cido
smico, formaldehdo, o glutaraldehdo, sobre la muestra lquida con los
microorganismos.
La fijacin posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona
la apariencia real de las clulas, lo cual dificulta la identificacin; adems,
no permite la observacin del movimiento de los microorganismos. Despus
de la fijacin, se aade el colorante, que debe permanecer el tiempo
suficiente en contacto con el espcimen, para que pueda ser absorbido. A
continuacin, se retira el exceso de colorante, normalmente lavando con
agua.
Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones
cargados. Los colorantes bsicos son aquellos en los cuales el agente que
tie es el ion cargado positivamente, mientras que en los cidos, el
colorante es el ion cargado negativamente. Los colorantes ms utilizados
son los de tipo bsico, ya que la mayor parte de las clulas microbianas
Poseen cargas dbilmente negativas en su superficie, lo cual facilita su
unin. Entre los colorantes bsicos ms comunes se encuentran la
safranina, la fucsina bsica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los
colorantes cidos se unen a las partes de las clulas cargadas
positivamente. Se utilizan para teir tejidos animales infectados con
microorganismos. Entre los ms frecuentes estn la eosina, la fucsina cida
y el rojo Congo.
I-Objetivos:
II-Marco terico:
La mayor parte de las bacterias son transparentes, por lo que suele ser
necesario recurrir al uso de tinciones si se desea observar a estos seres
vivos con un microscopio ptico convencional de campo claro. Las tinciones
aumentan artificialmente el contraste entre las clulas bacterianas y el
medio circundante. A continuacin, se da a conocer los tipos de colorantes:
1. Tipos de Colorantes:
1.1 Colorantes segn su origen:
a) Colorantes Naturales: Son extrados principalmente de plantas, pero
tambin de animales. Ejemplo:
La Hematoxilina: extrada de la leguminosa
Haematoxylum
campechianum.
El Azul de ndigo: extrada de la planta Indigofera spp.
El Carmn: extrada de la cochinilla americana Dactylopius coccus.
Cristal Violeta
Azul de Metileno
Ac. Pcrico
Fucsina bsica
Oxalato verde de malaquita
Purpura de Metacresol
Safranina
2. Tcnica de Tincin:
El proceso de Tincin supone una reaccin de intercambio de Iones entre el
colorante y los sitios activos de la superficie o del interior de la clula
bacteriana, de tal manera que los iones teidos del colorante remplazan
iones celulares. Permitiendo contrastar el microorganismo con el medio que
lo rodea.
2.1 Ventajas de la Tcnica de la Tincin:
Observar ms adecuadamente la morfologa de los microorganismos.
Permite diferenciar distintos tipos morfolgicos.
Informacin sobre estructuras internas y/o externas, que al realizarse por
No necesita fijacin.
Para ambos casos, una vez esparcido el inoculo, la muestra se fija mediante
flameado de la preparacin con calor, as las protenas se coagulan
rpidamente quedando adheridas al porta objetos.
III-Materiales:
Asa de Kolle
Muestra de
cultivo de
Laminas
portaobjetos
Mechero de
alcohol
Papel Secante
Soporte para
Tincin
Aceite de Inmersin
Colorantes Bsicos:
Azul de Metileno
Cristal Violeta
Carbolfucsina
Asa de Kolle
Tres lminas portaobjetos
Mechero de alcohol
Cultivo de bacterias en medio solido: Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Bacillus cereus.
Procedimiento:
-
papel secante
Procedimiento:
Colorante
Azul de metileno
Cristal Violeta
20 segundo
Carbolfucsina
10 segundos
120 segundos
VI-Discusiones:
VII-Conclusiones:
Se demostr que el Cristal Violeta produce una mejor tincin que los
colorantes Azul de Metileno y Fucsina para la bacteria S. aureus y otras
bacterias Grampositivas en general.
El Azul de Metileno es el colorante ms dbil de los tres, razn por la
cual se usa ms concentrado y se deja actuar durante ms tiempo.
Tambin a la solucin de azul de metileno de uso se le agrega un lcali
(KOH) como intensificador de color, que acta haciendo ms rpida e
intensa la reaccin de coloracin.
El lavado del frotis con colorante se debe realizar con el mximo cuidado
posible evitando que el agua caiga directamente sobre la muestra y lo
suficiente para evitar la formacin de artefactos.
Se demostr que la tcnica de fijacin de la muestra por calor se realiza
en un tiempo mucho menor que la que requiere alcohol.
VIII-Bibliografa:
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000024/leccione
s/cap01/01_03_05.htm
IX-Anexos:
Extraccin de la muestra de
bacterias
Fijacin de la muestra
Agregando el colorante
Secando la muestra
Observando la muestra de
Staphylococcus sp.
Lavando la muestra