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Una mezcla de los siguientes aminocidos, cuyos pKa se indican entre parntesis, se
somete a electroforesis en papel a pH = 3,9: Ala (2,34; 9,69), Ser (2,2; 9,2), Leu (2,4;
9,6), Arg (2,2; 9,0; 12,5), Asp (2,1; 3,9; 9,8) e His (1,77; 6,10; 9,18) Cal ir hacia al
nodo (+)? Cal ir hacia el ctodo (-)?.
2. Un analizador de aminocidos es un equipo que separa automticamente los
aminocidos por cromatografa de intercambio cationico y determina sus relaciones
molares. La resina de intercambio catinico contiene poliestireno con grupos sulfnicos
unidos covalentemente a los anillos bencnicos. Para separar los aminocidos actan
dos clases de efectos principales: las interacciones electrostticas con los grupos
sulfnicos cargados negativamente y las interacciones hidrofbicas con los anillos
bencnicos no polares.
a) Argumente el orden de elucin para los siguientes conjuntos de aminocidos.
(1) Asp
(2) Ser, Try
(3) Gly, Ala
(4) Val, Met, Leu, y Ile
(5) Tyr, Phe
(6) Lys, His
(7) Arg.
b) Argumente el orden de elucin para los aminocidos de los conjuntos 3 y 5. Explique
por qu el Asp eluye antes que el Glu.
3. Los aminocidos pueden ser utilizados como amortiguadores. Un amortiguador es una
solucin que resiste cambios de pH cuando se le agrega cido o base. El intervalo de
pH sobre el cual es efectivo un amortiguador se denomina intervalo amortiguador,
generalmente definido como pKa +1 a pKa -1.
a) Indique el intervalo amortiguador (o intervalos) de Gly, His, Asp y Lys
b) Esperara que una protena que contiene 100 aminocidos pudiera ser tan buen
amortiguador como sus aminocidos constituyentes libres a concentraciones molares
equivalentes?.
4. Calcule el pI del tripptido Lys-Lys-Lys. El valor calculado es: menor, igual o mayor
con respecto a los pKa individuales, explique?
5. Se tiene el siguiente peptido:
Ala-Lys-Lys-Asp-Gly-Asn-Val-Glu-Arg-Glu
a) Diga cuales pptidos producira la accin de la quimiotripsina.
b) Cal sera la carga de esos pptidos a pH = 1,5 y pH = 7.
6.
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10.
1)Lys-Asp-Gly-Ala-Ala-Glu-Ser-Gly.
2)Ala-Ala-His-Arg-Glu-Lys-Phe-Ile.
3)Tyr-Cys-Lys-Ala-Arg-Arg-Gly.
4)Phe-Ala-Glu-Ser-Ala-Gly.
b) Si cada uno de los fragmentos resultantes por digestin trptica se trata a
continuacin con 2,4-dinitrofluorobenceno, y luego se realiza la hidrlisis de los enlaces
peptdicos, cul o cuales seran los 2,4-dinitrofenil-aminocidos resultantes.
12. a) Escrbanse los pptidos formados cuando se trata con quimotripsina el
siguientepolipptido:
Val-Ala-Lys-Glu-Glu-Phe-Val-Met-Tyr-Cys-Glu-Trp-Met-Gly-Gly-Phe.
b) Supngase que los pptidos reaccionan posteriormente con bromuro de ciangeno;
hgase una lista de los productos obtenidos.
13. Predecir la direccin de la emigracin (es decir, estacionario (0), hacia el ctodo (C) o
hacia el nodo (A) de los siguientes pptidos, durante la electroforesis sobre papel a
pH 1.9 , 3.0 , 6.5 y 10.0:
a) Lys-Gly-Ala-Gly.
b) Lys-Gly-Ala-Glu.
c) His-Gly-Ala-Glu.
d) Glu-Gly-Ala-Glu.
e) Gln-Gly-Ala-Lys.
14. Si los cinco pptidos del problema 13 se encuentran presentes en una mezcla.
Predgase el orden de elucin relativo de cada pptido en una columna de resina de
intercambio inico conteniendo Dowex-1 (intercambiador aninico) cuando la columna se
eluye con un sistema tampn cuyo pH experimenta un cambio continuo desde un valor
inicial de 10 hasta un valor final de 1.0.
15. Se obtuvieron los siguientes datos, acerca de la estructura de una cadena polipeptdica.
La hidrlisis total produjo Gly, Ala,Val2, Leu2, Ile, Cys4, Asp2, Glu4, Ser2, Tyr2. El tratamiento
de la cadena con 2,4-dinitrofluorobenceno, seguido de hidrlisis cida, rindi 2,4dinitrofenil-glicina. El anlisis del grupo C-terminal dio aspartato. La hidrlisis cida
parcial proporcion los siguientes oligopptidos , entre otros: Cys-Cys-Ala, Glu-Asp-Tyr,
Glu-Glu-Cys, Glu-Leu-Glu, Cys-Asp, Tyr-Cys, Ser-Val-Cys, Glu-Cys-Cys, Ser-Leu-Tyr,
Leu-Tyr-Glu, Gly-Ile-Val-Glu-Glu. La escisin con
pepsina rindi un pptido que por hidrlisis dio Ser-Val-Cys y Ser-Leu. Formlese una
estructura que est de acuerdo con los datos anteriores.
16. Un pptido A, de composicin Lys, His, Asp, Glu2, Ala, Ile, Val y Tyr, produjo
2,4-dinitrofenilaspartato al efectuar el anlisis del resto N-terminal con 2,4dinitrofluorobenceno y valina libre como primer producto con la carboxipeptidasa. La
digestin de A con tripsina rindi dos pptidos. Uno de ellos contenia Lys, Asp, Glu, Ala, y
Tyr. El otro (His, Glu, Ile, Val) rindi 2,4-dinitrofenilhistidina al analizar el resto Nterminal con 2,4-dinitrofluorobenceno. La escisin del ltimo con termolisina rindi entre
otros productos, histidina libre. A partir de A, se formaron tambin dos pptidos
quimotrpticos. Uno contena Asp, Ala, y Tyr y el otro contena Lys, His, Glu 2, Ile yVal.
Dedzcase una estructura para el pptido A.
17. La hidrlisis cida de 1 mmol de un pentapptido hipottico rindi 2mmol de cido
glutmico, 1mmol de lisina, y no se recuper cuantitativamente ningn otro
aminocido. La tripsina escinde el pentapptido original en dos fragmentos. Por
electroforesis a pH 7.0 uno de los fragmentos trpticos se desplaza hacia el nodo, y el otro
hacia el ctodo. El tratamiento de uno de los fragmentos trpticos con DNFB, seguido de
hidrlisis cida, rinde cido DNF-glutmico. El tratamiento del pentapptido original con
quimotripsina origina dos dipptidos y cido glutmico libre. Propngase una secuencia
aminocida para el pentapptido que est de acuerdo con los datos precedentes.
18. Un organismo de origen desconocido produce un potente inhibidor de la transmisin
nerviosa y queremos secuenciarlo. El anlisis de aminocidos muestra una composicin de
Ala5, Lys1, Phe1, El pptido intacto reacciona con DNFB y tras la hidrlisis cida del
mismo se obtiene DNF-alanina. La digestin con tripsina produce un tripptido y un
tetrapptido de composiciones Ala3. Phe1 y Lys1, Ala2. La reaccin del pptido intacto con
quimotripsina da un hexapptido y alanina libre. Cul es la secuencia del inhibidor?.