ENLAINVESTIGACION

TercerLugarPremioRmuloGarzaporInvestigacinyDesarrolloTecnolgico1999

Recuperacindearomasmediantesistemasdeextraccindedos
fasesacuosas
MarcoRitoPalomares

Losaromasyfraganciasusadosenlasindustriasdealimentos,cosmticosydedetergentesson
productosdegransignificadocomercial.Tantolosaromascomolasfraganciassoncompuestos
voltilesladiferenciaradicaenquelasfraganciasserespiran,mientrasquelosaromasseingiereny
tienensuprincipalaplicacinenlaindustriaalimentariayfarmacutica.Loanteriorimplicala
consideracindenormasrigurosas.Enestecontexto,losprocesostradicionalesdesntesisqumica
paralaproduccindearomasinvolucranunexcesivonmerodeetapasdeprocesoylamayorade
ellossonaltamentecontaminantes.Dichasituacindemandaelusodetcnicasalternativasparala
produccindeestoscompuestos.Laproduccindearomasmedianteelusodemicroorganismosha
definidounatecnologaalternativaalaqumicaparalaobtencindeestosproductos.
Uncasointeresanteeslaproduccindelactonasporhongos,enparticularlaproduccindeunalactona
conaromaacoco(6pentilalfapirona6PP)porespeciesdeTrichoderma,cuyabiosntesishasido
previamenteestudiada.Enestetipodeprocesosbiotecnolgicosesimportanteconsiderarquelasbajas
concentracionesdelosproductosdeintersenelcaldodeconcentracinendondesecultivan
presentanproblemasenlassubsecuentesoperacionesunitariasderecuperacinodownstream
processing.Adems,endiversosprocesosdefermentacin,alproducirseelmetabolitodeinters,ste
puedeprovocarlainhibicindesupropiasntesis.Taleselcasodela6PP,delacualsehareportado
unefectofungicidasobrediversoshongoseinclusivesobrelamismacepadeTrichoderma.Esto
ltimoesimportanteparalosestudiosenlosquesebuscamejorarlaproductividaddelproceso.
Dentrodelasalternativasbiotecnolgicas,losprocesosdefermentacinextractivaorecuperacinin
situpuedenserutilizadospararecuperarelaromadelcaldodefermentacinamedidaquees
producidoyalmismotiempodesintoxicarelmediodecultivo,loquepermiteunamejoraenla
eficienciadelabiosntesis.Enelcasoparticulardela6PP,variosintentosbasadosenelusode
tcnicasbiotecnolgicassehanreportadoparalarecuperacindelaroma.Algunosdeellosincluyen:el
usodeadsorbenteslipoflicos(AmberlitaXAD2),pervaporacindelamolculaatravsde
membranashidrofbicaseinmovilizacindelacepaTrichoderma.Sinembargo,unafuertedesventaja
deestossistemasradicaensucomplejidad,costoyefectosnegativossobrelacepa.Porejemplo,enel
casodelainmovilizacin,esevidenteunadisminucinenlaproduccinde6PPcomparadaconladel
sistemasoluble.
Comoconsecuencia,losmtodosbasadosenevaporacindelproducto,tamaodepartculae
inmovilizacindeclulassehandescartadocomounaalternativaviabledebidoalosefectossobreel
producto,problemasconmembranasybajosrendimientos.
Enestecontexto,laextraccinlquidolquidoutilizandosolventessehadesarrolladoparala
recuperacindecompuestosvoltiles,ysepresentacomounaalternativaalosproblemasde
complejidadencontradosenotrosmtodosdeextraccin.Desafortunadamente,elproblemaprincipal
deestemtodoradicaenlascaractersticasdelsolventeutilizado,yeslatoxicidadhacialos
microorganismosunodelosmsimportantes.Unametodologanoconvencionalquesepresentapara

minimizarlosproblemastpicosdelaextraccinconsolventeseslaextraccinbasadaenelusode
sistemasdedosfasesacuosas.
Lossistemasdedosfasesacuosasseformanalmezclardospolmeros(ej.polietilenglicol(PEG)y
dextrano),obien,unpolmeroyunasal(PEGyfosfato)aciertasconcentraciones.Laaplicacinde
estatcnicaalafermentacinextractivadeproductossepuederealizaragregandopolmeros(o
polmeroysal)alcaldodefermentacinhastaformardosfases.Losmicroorganismospermanecern
enunafase(idealmentelafasepesada)yloscompuestosdebajopesomolecularsedistribuirnentre
lasfases.Unadelasprimerasextraccionesbasadasenestametodologafueladetoxinasgeneradaspor
Clostridiumtetani.Enestecaso,lasclulaspermanecieronenlafasepesadaricaenelpolmero
(dextrano,enestecaso),mientrasquelatoxinasedistribuyentrelasfases.Comoresultado,un
aumentoenlaproduccindelatoxinafuereportado.
Algunasventajasadicionalesdeestatecnologasonsubiocompatibilidadconmacromolculas,su
facilidaddeaplicacinagranescalaybajocostoascomosubajoefectosobreelcrecimiento
microbiano,entreotras.Adems,ciertosparmetros,comolarelacindevolmenesdelasfases,son
manipuladosafindeconcentrarelproductodeintersenunadelasfases(idealmentelaligera)de
dondepuedeserrecuperadoposteriormentepormtodosconvencionales,obien,porotrosistemade
dosfasesacuosas.
Lossistemasdedosfasesacuosashansidoutilizadosparalarecuperacindeproductosproteicosa
partirdesuspensionesbiolgicas.Enelreadefermentacinextractiva(orecuperacininsitu)existen
tambinciertosintentosreportadosparalarecuperacindelmismotipodeproductos.Sinembargo,no
existenreportesquediscutanelusodeestatecnologaencultivosconhongosymsaun,parala
recuperacindearomasproducidosporestetipodecultivosfilamentosos.
EnelCentrodeBiotecnologadelCampusMonterreydurante18mesessedesarrollunproyecto
sobrelarecuperacindearomasproducidosporhongos,encolaboracinconelInstitutode
BiotecnologadelaUniversidadNacionalAutnomadeMxico(UNAM)yconfinanciamientodel
ConsejoNacionaldeCienciayTecnologa(CONACYT).Elobjetivofueevaluarelcomportamiento
de6PPyelsistemadefermentacinensistemasdedosfasesacuosas.Unsegundoobjetivofuela
definicindelascondicionesdeoperacinparaelprocesoderecuperacininsitudelaroma6PPque
minimizaelefectodeinhibicindelaromasobreelmicroorganismoypermiteaumentarla
productividaddelproceso.Estetipodeinvestigacinrepresentalaaplicacindelestadodelarteen
procesosdebioseparacinenlasolucindeproblemasdeinhibicinobservadosenprocesosde
fermentacindehongosfilamentosos.Enesteestudioenparticularseseleccionunsistemamodelo
formadoporlaproduccinde6PPporTrichodermaharzianum.Estesistemacumpleconciertas
caractersticas,talescomoproblemasdeagitacin,produccindearomaseinhibicinporproducto,
porloqueseconsideraunejemplorepresentativo.

Metodologa
Elprocedimientonecesarioparalaobtencindelascondicionesdeoperacindelprocesode
recuperacinde6PPinvolucr,comoprimeraetapa,evaluarelcomportamientodelsistemade
fermentacinenlossistemasdedosfasesacuosas.Laparticindelaroma(6PP)ydelmicroorganismo
(Trichodermaharzianum)enlossistemasdedosfasesacuosasseevaluutilizandosistemas
experimentalesanivellaboratorio.Lossistemasdedosfasesacuosasutilizadosfueroncaracterizados
porelusodepolietilenglicol(PEG)dediferentespesosmoleculares(1,000,1,450,3,350y8,000
daltons),fosfatoyelcaldodefermentacinquecontenaelaroma.Ladisolucindeloscompuestosse
logrmedianteagitacinmecnicapor30minutosa25C.Laseparacindelasfasesfuealcanzada
porcentrifugacina1,500gpor20minutosa25C.Conelobjetodecaracterizarlossistemas,se
tomaronmuestrasdelasfasesparaestimarelcontenidodearomaybiomasaencadaunadeellas,
utilizandocromatografadegasesylatcnicadepesoseco,respectivamente.Estosresultadosfueron
utilizadosparaestimarelcoeficientedeparticindelossolutos(K=concentracindelsolutoenla
faseligera/concentracindelsolutoenlafasepesada),elporcentajederecuperacindelaromayel
deeliminacindecontaminantes(biomasa).Conelusodeestametodologafueposibleevaluar
diversascondicionesdeoperacinparalarecuperacinde6PPdelcaldodefermentacinde
Trichodermaharzianum.

Resultados
Seevaluelcomportamientode6PPproducidoporTrichodermaharzianumensistemasdedosfases
acuosas(PEGfosfato),bajodiversascondicionesdeoperacin:pesomoleculardePEG,
concentracindePEG,concentracindefosfato,relacindevolumendelasfases,etctera.Se
encontraronlascondicionesdeoperacin(PEG1450,relacindevolumenmenora0.3,concentracin
deloscompuestosmenora15%)bajolascuales6PPyTrichodermaharzianumseconcentranenfases
opuestas.Esimportanteresaltarquedichascondicionespermitendisminuirelefectodeinhibicinde
6PPsobreelmicroorganismoporqueamedidaqueelaromaseproduce,seconcentraenunafase(fase
extractiva)opuestaalafase(fasefermentativa)enlacualseconcentraTrichodermaharzianum.En
general,lossistemasevaluadosenesteestudiopermitieronconcentrarmsdel85%debiomasaenla
fasefermentativaymsdel75%de6PPenlafaseextractiva.
Elusodesistemasdedosfasesacuosasparalarecuperacindecompuestosnoproteicosy,en
particular,paralarecuperacindearomasfueporprimeravezinvestigadoyreportadocomoresultado
deesteestudio.Lascondicionesdeoperacindelprocesoderecuperacindelaromaobtenidasanivel
laboratorio(1550mL)fueronaplicadasanivelesdefermentacindehasta7litros,ycomoresultado
seobtuvounaumentoenlaproductividaddelsistemacercanoal25%.Losresultadosobtenidoshan
demostradolafactibilidadtcnicadelproceso.Esclaroquelosresultadosdeesteproyectopermiten
descubrirelpotencialdeaplicacindelossistemasdeextraccindedosfasesacuosasparala
recuperacindeproductosbiotecnolgicosy,enparticular,aromas.
Enconclusin,elusodelatcnicanoconvencionaldeextraccinqueexplotalossistemasdedosfases
acuosaspresentaunaalternativatecnolgicaparalarecuperacindearomasdefermentacin
miceliares(hongos)queevitalosproblemasdetoxicidadpresentesenciertossistemasde
fermentacin.Enparticular,sedemostrelpotencialtcnicoderecuperar6PPproducidopor
Trichodermaharzianumcomounaalternativaalossistemasdeextraccinevaluadosyreportadoshasta
elmomento.Elusodeestatcnicadeextraccinpotencialmentepuedereducirlosproblemasde
toxicidadpresentesenciertossistemasdefermentacin.Comoresultadodelpresenteestudio,la
aplicacindesistemasdedosfasesacuosasparalarecuperacindearomas(6PP)fueporprimeravez
reportadaalacomunidadcientfica.

MarcoRitoPalomaresobtuvoelDoctoradoenIngenieraQumicayBiotecnologadeUniversityof
Birmingham,delReinoUnidoen1995.EsprofesordelCentrodeBiotecnologayprofesoradscrito
delDepartamentodeIngenieraQumica.

Contenido
TransferenciaAo13,Nmero50Abrilde2000

Transferencia
TransferenciaPosgrado,InvestigacinyExtensinenelCampusMonterrey
eslapublicacindelCampusMonterreydelTecnolgicodeMonterreyquedivulgalasactividades
deinvestigacin,extensinyposgrado.