MARIANA PIRIH CORDEIRO

APOPTOSE: O sUicDIO DAS CLULAS

Monografia
desenvolvida
no
Departamento de Patologia Bsica
do Setor de Cincias Biolgicas da
Universidade Federal do Paran
como requisito
parcial
para
obteno do ttulo de Bacharel em
Cincias Biolgicas.

Orientadora: Prof. Ida Cristina Gubert

Curitiba
1999

AGRADECIMENTOS

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SUMRIO
1. INTRODUO ................................................................................................ 1

2. DESENVOLVIMENTO.................................................................................... 3
2.1 A Morte celular: apoptose X nec[ose .................................................... 3

2.2 Importncia da apoptose ......................................................................6

~.

2.3 Mecanismos e genes da apoptose ....................................................... 8

2.3.1 Fator Fas ...................................................................................... 11
2.3.2 As caspases ................................................................................. 12
2.3.3 Ca++ .............................................................................................. 13
2.3.4 Controle Hormonal da apoptose .................................................. 13
2.4 Apoptose na resposta imune .............................................................. 16
2.5 Apoptose naL)Jpatognese de doenas ................................................ 18
2.5.1 Doenas associadas com aumento da sobrevivncia celular.... 19
2.5.1.1 Apoptose e cncer........................................................ 19
2.5.1.2 Apoptose e autoimunidade .......................................... 20
2.5.1.3 Apoptose e infeces virais .................................. '" ..... 22
2.5.2 Doenas associadas com excesso de apoptose ......................... 24
2.5.2.1 Apoptose e AIDS .......................................................... 24
2.5.2.2 Apoptose e doenas neurodegenerativas .................... 26
2.5.2.3 Apoptose e doenas hematolgicas ............................. 27
2.5.2.4 Apoptose e o sistema cardiovascular ........................... 28
2.5.2.5 Outras doenas ............................................................ 28
2.6 Apoptose e senescncia ...................................................................29
2.7 Mtodos de avaliao da apoptose .................................................. 30
2.8 Perspectivas para o futuro ................................................................ 33
3. CONCLUSO ...............................................................................................36
4. REFERNCIAS BIBLIOGRFiCAS ............................................................. 37

1-INTRODUO
A apoptose, morte celular programada, uma forma fisiolgica de morte
celular que apresenta sofisticado controle gentico e caracterizada por
mudanas bioqumicas e morfolgicas distintas, como: ativao de proteases
endgenas resultando em ruptura do citoesqueleto, condensao celular, perda
das especializaes de membrana, desenvolvimento de vesculas de membrana
na superfcie celular, condensao cromatnica, degradao oligonucleossmica
do DNA por endonucleases, e, finalmente, fragmentao da clula em "corpos
apoptticos", que so fagocitados por macrfagos, sem induo de resposta
inflamatria. A apoptose um mecanismo muito importante para a manuteno
da homeostase nos organismos multicelulares, pois regula precisamente o
nmero de clulas no organismo, alm de contribuir para a defesa, eliminando
clulas perigosas ou indesejadas, como linfcitos auto-reativos, clulas infectadas
por vrus ou clulas tumorais. Alm disso, est envolvida na remoo organizada
de tecidos que ocorre durante o desenvolvimento embriolgico e involuo de
rgos. A desregulao da apoptose est relacionada a vrias doenas humanas,
como cncer, doenas autoimunes, doenas neurodegenerativas e infeces
virais, inclusive a AIDS. A "maquinaria" bsica para realizar a apoptose parece
estar presente em todas as clulas de mamferos, mas sua ativao regulada
por sinais intra e extracelulares. Pelo menos alguns componentes do programa
apopttico foram conservados na evoluo animal regulando uma via final de
morte celular preservada, desde vermes at humanos. Entre os sinais que
regulam a apoptose esto: informao da linhagem, dano celular por radiao ou
infeco viral, fatores extracelulares de sobrevivncia, interaes celulares e
hormnios. Vrios genes esto implicados no controle da apoptose, como por
exemplo, a famlia bcl-2, o p53, c-myc, e outros. Alm disso, existem molculas
que interagem com receptores de membrana, como o sistema Fas-FasL para a
induo da apoptose. Com as recentes descobertas do papel da apoptose na
patognese de vrias doenas, surgiram possibilidades de novas terapias,
objetivando o controle dos eventos apoptticos.

Em virtude das crescentes evidncias a respeito da importncia da

apoptose, foi proposta a realizao deste trabalho, no qual foi realizada uma
reviso da bibliografia mais atual publicada sobre apoptose relacionando-a com o
desenvolvimento do organismo e doenas como doenas autoimunes, cncer,
AIDS e outras infeces, possibilitando a estudantes e interessados um acesso
mais rpido e simplificado a informaes importantes e atuais em torno desse
assunto.

2- DESENVOLVIMENTO
2.1 - A Morte celular: apoptose X necrose
Um dos problemas mais difceis enfrentado na evoluo dos seres vivos foi
a

passagem

dos

organismos

multicelulares.

Isto

significou

unicelulares

resolver

aos

problemas

complexos
como:

organismos

adeso

celular,

transduo de sinais do meio e diferenciao (HEGENBERGER & GHIRLANDA,

1997). A massa de clulas nestes organismos passou a ser determinada pela
relao entre o nmero de clulas que se dividiam e que morriam. Assim, a
homeostase dos organismos multicelulares mantida atravs de um equilbrio
entre proliferao e morte celular (THOMPSON, 1995; SOLARY et aI, 1996;
HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997). Enquanto a mitose tem sido estudada
h muito tempo como mecanismo de proliferao celular, a morte celular e os
fatores que a determinam vm despertando o interesse para compreenso de
vrios processos fisiolgicos e patolgicos (THOMPSON, 1995; HEGENBERGER
& GHIRLANDA, 1997).

Duas so as maneiras atravs das quais as clulas podem morrer: pela

ao de agentes nocivos (necrose) ou atravs do suicdio celular (apoptose).
Tanto um mecanismo quanto o outro envolvem uma seqncia de eventos
bioqumicos e morfolgicos consecutivos que resultam na morte da clula (KIESS
& GALLAHER, 1998).

As clulas que sofrem injrias letais, como isquemia, trauma mecnico,

exposio a agentes txicos ou calor, tm uma morte acidental resultante de
danos que no podem ser reparados. Estas clulas morrem por um processo
denominado necrose, caracterizado por. uma srie de mudanas tais como
aumento de 20-30% do volume intracelular por falhas das bombas inicas, ou
seja, rpido inchao da clula e de organelas como as mitocndrias; degenerao
das mitocndrias e perda da integridade da membrana plasmtica, com
conseqente liberao de substncias intracelulares, e resposta inflamatria no
tecido vizinho; interrupo da sntese protica; desorganizao do ncleo;
clivagem desordenada do DNA; esfacelamento da carioteca. A clula se
desintegra e fagocitada no contexto da reao inflamatria gerada por sua

morte (THOMPSON, 1995; STELLER, 1995; ORRENIUS, 1995; CAFFORIO,

1996;

HEGENBERGER

&

GHIRLANDA,

1997;

KUBY,

1997;

KIESS

&

GALLAHER, 1998).
A apoptose, suicdio ou morte pr-programada da clula, uma forma
fisiolgica de morte celular que apresenta um sofisticado controle gentico,
envolve de maneira ativa as estruturas celulares e caracterizada por mudanas
bioqumicas e morfolgicas distintas, tendo um papel central no desenvolvimento
e diferenciao do indivduo bem como nos processos patolgicos (ORRENIUS,
1995; STELLER, 1995; THOMPSON, 1995; CAFFORIO, 1996; HEGENBERGER

& GHIRLANDA, 1997; KIESS & GALLAHER, 1998). A apoptose caracterizada

pelas seguintes alteraes na clula:

ativao de proteases endgenas

resultando em ruptura do citoesqueleto (THOMPSON, 1995; HEGENBERGER &

GHIRLANDA, 1997), diminuio do volume celularl condensao celular, perda
das regies de especializaes de membrana como as microvilosidades,
conservao

morfolgica

da

maioria

desenvolvimento de vesculas de

das

membrana

organelas
(blebs)

citoplasmticas,

na sua

superfcie,

condensao cromatnica, degradao oligonucleossmica do DNA pela ao de

endonucleases, ou seja, a clula tem sua cromatina fragmentada ordenadamente
em oligossomos de vrias dimenses mas correspondentes a mltiplos de 180200 pares de bases. Finalmente, ocorre a fragmentao do ncleo e a clula,
ento, se reduz a pequenos fragmentos envolvidos por membrana, os "corpos
apoptticos" contendo cromatina fragmentada e organelas, que so fagocitados
por macrfagos ou clulas vizinhas,

no havendo induo de resposta

inflamatria (Figuras 1 e 2). Assim, as clulas mortas so rapidamente removidas,

e qualquer vazamento do seu contedo nocivo e possivelmente perigoso
evitado (WYLLlE, 1994; THOMPSON, 1995; STELLER, 1995; CAFFORIO, 1996;
HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997; KUBY, 1997). A apoptose tambm
caracterizada pela perda da funo mitocondrial (THOMPSON, 1995).
O intervalo de tempo entre o comprometimento da clula at o
aparecimento dos primeiros sinais da apoptose na morfologia celular varia de
acordo com o tipo celular e o estmulo que provocou a sua morte; mas, h um
consenso de um perodo de uma a duas horas, talvez um pouco menor, desde o

aparecimento das primeiras mudanas estruturais at o desaparecimento desta

clula (fagocitose) (WYLLIE, 1994).

Figura 1 - Clula apopttica

(

James

A.

Sullivan

em

www.cellsalive.com).

Figura 2 - Seqncia apopttica ( James A. Sullivan em

www.cellsalive.com).

2.2 - Importncia da apoptose

A apoptose um processo to importante quanto a mitose para o
desenvolvimento e manuteno da homeostase nos metazorios pois regula
precisamente o nmero de clulas do organismo, possibilitando a constante
renovao dos tecidos, e contribui significativamente para a deleo de elementos
celulares indesejados ou funcionalmente perigosos em diversos processos, como
linfcitos auto-reativos, clulas infectadas por vrus e clulas tumorais. Ela est
envolvida tambm na remoo organizada de tecidos, sem cicatrizes ou perda da
arquitetura,

tal como o

remodelamento tecidual

que ocorre

durante o

desenvolvimento embriolgico e involuo de rgos .(MALE et aI, 1991 ;

STELLER, 1995; CAFFORIO, 1996; KIESS & GALLAHER, 1998). Por exemplo, a
apoptose responsvel pela remoo do tecido interdigital durante a formao
dos dedos do feto; pela atrofia progressiva dos rgos larvais, como a cauda,
durante a metamorfose nos anfbios;

pela involuo normal de tecidos que

dependem da concentrao de hormnios no sangue, dentre outros exemplos.

(KIESS & GALLAHER, 1998)
O papel da apoptose no controle geral das funes vitais da clula
extremamente importante. Assim, a desregulao da apoptose e o insucesso de
algumas clulas em sofrer morte celular programada esto relacionadas a vrias
doenas humanas como cncer, doenas autoimunes e infeces virais
(STELLER, 1995; THOMPSON, 1995; CAFFORIO, 1996), enquanto outras
patologias esto relacionadas com um aumento da taxa de apoptose, como
doenas neurodegenerativas, AIDS e osteoporose (THOMPSON, 1995; MAY,
1998).
O equilbrio numrico da populao de neutrfilos um exemplo claro da
importncia da apoptose. No homem adulto, h aproximadamente 5x 10 10
neutrfilos circulantes, com uma vida mdia de um dia. A morte, associada com a
produo constante de neutrfilos mantm nveis equilibrados destas clulas.
Caso haja uma falha no processo de apoptose ocorre uma leucemia (KUBY,
1997).

A morte celular programada raramente ocorre em procariontes ou

protozorios, organismos que proliferam perpetuamente sob condies ideais no
meio. Todavia, j foi descrita apoptose em alguns unicelulares
GALLAHER, 1998).

(KIESS &

2.3 - Mecanismos e genes da apoptose

A apoptose ocorre atravs da ativao de um programa de suicdio
intrnseco da clula. A "maquinaria" bsica necessria para realizar a apoptose
parece estar presente em todas as clulas de mamferos, mas sua ativao
regulada por sinais intra e extracelulares. Embora vrios sinais possam induzir a
apoptose em diferentes tipos celulares, pelo menos alguns componentes do
programa apopttico foram conservados na evoluo animal regulando uma via
final comum de morte celular preservada, de vermes a humanos, sugerindo que
este processo de morte pode ser fundamental para o controle de clulas e tecidos
em organismos metazorios (WYLLlE; 1994; THOMPSON, 1995; STELLER,
1995).
As molculas efetoras apoptticas esto presentes na maioria das clulas
dos mamferos. A necessidade de sntese de RNA e de protena para a induo
da morte celular em certas situaes pode refletir a necessidade de sintetizar
molculas que ativam ou reprimem a "maquinaria" de morte celular, ao invs de
sintetizar qualquer componente necessrio para morte celular em si. Se as
protenas efetoras da apoptose esto presentes em clulas vivas, suas atividades
potencialmente letais devem ser suprimidas nas clulas que sobrevivem
(STELLER, 1995).
A apoptose um processo altamente regulado. Entre os sinais que
regulam a apoptose, promovendo-a ou suprimindo-a, esto: informao da
linhagem, dano celular por radiao ou infeco viral, fatores de sobrevivncia
extracelulares, interaes celulares, e hormnios ( citocinas, esterides e
peptdios). Os mesmos sinais podem ter efeitos diversos em diferentes tipos
celulares (STELLER, 1995). As respostas apoptticas envolvem receptores
especficos e sistemas de transduo de sinais, e segundos mensageiros,
incluindo Ca2+, cAMP, xido ntrico, tm sido implicados neste processo
(ORRENIUS, 1995).
Na maioria dos tecidos, as clulas precisam continuamente de sinais de
sobrevivncia fornecidos por clulas vizinhas e pela matriz extracelular (fatores
extracelulares) (THOMPSON, 1995; STELLER, 1995). Clulas da maioria dos

rgos sofrem apoptose se cultivadas individualmente na ausncia de fatores

exgenos de sobrevivncia. Assim, provavelmente a maioria das clulas est
programada para cometer suicdio se no receber sinais de sobrevivncia do
meio, tanto constantemente como em intervalos regulares (THOMPSON, 1995).
Este controle social da sobrevivncia celular parece garantir a manuteno de um
nmero adequado de diferentes tipos celulares em um tecido. Os fatores de
sobrevivncia poderiam evitar a apoptose reduzindo a quantidade ou atividade
das protenas efetoras da morte celular para nveis menos danosos ou, talvez,
aumentando a atividade das protenas anti- apoptticas protetoras, como os
membros da famlia Bcl-2 (STELLER, 1995).
Apesar do considervel progresso no estudo da apoptose, h muita
dificuldade na identificao das molculas responsveis por este processo
atravs dos mtodos bioqumicos e moleculares convencionais em mamferos.
Mas, graas s evidncias de que o mecanismo da apoptose pelo menos
parcialmente conservado na evoluo animal, resultados obtidos de modelos
experimentais em invertebrados podem ser relevantes para a compreenso do
mecanismo apopttico em vertebrados (STELLER, 1995).
No nematoda C. elegans foram identificadas vrias mutaes que afetam
estgios especficos da apoptose (a deciso de morrer ou no, a morte celular, a
fagocitose da clula morta pelos fagcitos, e a degradao do material
fagocitado). Estas mutaes definem 14 genes que atuam na morte celular
programada neste organismo, mas apenas trs destes genes afetam a execuo
da apoptose em si: ced-3, ced-4, ced-9 (ced vem de cel! death defective, ou seja,
morte celular defeituosa). A atividade de ced-3 e ced-4 necessria para que a
apoptose se realize. O gene ced-9, que codifica uma protena homloga a famlia
Bcl-2, necessrio para proteger as clulas que devem sobreviver, ao passo que
a expresso do Bcl-2 humano pode inibir a morte celular em nematodas,
substituindo parcialmente a perda da funo do ced-9. O gene ced-3 codifica uma
protena semelhante famlia das cistena proteases, que inclui a enzima
conversora da interleucina 1 f3 (ICE), Nedd-2I1ch-1, CPP32. A super-expresso
dessas proteases nas clulas de mamferos causa apoptose, e o produto do gene
ermA do vrus da varola bovina, que inibe algumas proteases similares a ICE,

10

pode proteger as clulas de mamferos contra apoptose induzida por privao de

fator de crescimento. Assim, existem boas razes para acreditar que uma cistena
protease similar a ced-3/ICE inicie o estgio irreversvel da apoptose tanto em
nematodas como em mamferos. J a protena codificada pelo gene ced-4 no
tem nenhuma similaridade com outras protenas conhecidas (STELLER, 1995;
SOLARY, 1996).
Como j foi comentado a apoptose regulada por muitos sinais diferentes
e distintos, e parece 'que diferentes vias sinalizadoras convergem para ativar um
programa apopttico comum, de maneira que s alguma clulas so selecionadas
para morrer. Estudos genticos em Drosophila melanogaster mostra que a
maioria seno todas as mortes celulares programadas so mediadas por um
mecanismo comum, o gene reaper, que capaz de integrar as informaes de
diferentes vias sinalizadoras para ativar o programa a po pttico , sendo que a
expresso de reaper suficiente para induzir a apoptose em clulas que
normalmente sobreviveriam. Assim, o gene reaper pode ser considerado como
um ativador universal da apoptose apesar de no fazer parte do programa
apopttico em si, pois a apoptose pode ser induzida em clulas que no o
apresentam, sugerindo que o gene reaper codifica uma molcula reguladora e
no efetora. Este gene poderia agir ativando efetores da morte celular ou inibindo
seus reguladores negativos, sendo possvel que a convergncia dos diferentes
sinais ocorra ao nvel do promotor do gene reaper (STELLER, 1995).
Apesar de se acreditar que as clulas apoptticas sofrem clivagem
endonucleoltica do DNA, clulas sem ncleo, fisiologicamente ativas, podem ser
induzidas a sofrer as mudanas citoplasmticas caractersticas da apoptose. Em
contraste,

ncleos

isolados

podem

exibir

condensao

degradao

oligonucleossmica do DNA em sistemas acelulares. A partir destas observaes

sugere-se que mltiplos fatores podem contribuir para a morte e diferentes
. compartimentos celulares tm considervel autonomia em sofrer mudanas
estruturais durante a apoptose (STELLER, 1995).

provvel que alguns componentes do programa apopttico sejam

compartilhados com outros processos celulares, incluindo a mitose. Por exemplo,
fatores de crescimento podem tanto estimular o desenvolvimento celular quanto

11

evitar a morte celular. Outro apoio para esta conexo vem de genes implicados na
regulao da proliferao celular e no controle da apoptose, como p53, c-myc,
Rb-1, ciclina 01 e outros. Alguns destes genes afetam a apoptose em situaes
especficas (STELLER, 1995; SOLARY, 1996). Por exemplo, o p53, gene
supressor tumoral, que tem grande importncia na regulao do ciclo celular,
parece ser predominantemente necessrio para mediar resposta apopttica em
resposta a dano ao ONA, evitando, assim, o aparecimento de neoplasias. No
curso de ativao, o p53 est em uma posio anterior ao programa bsico de
suicdio

celular

(STELLER,

1995;

SOLARY,

1996;

HEGENBERGER

&

GHIRLANOA, 1997). Outros genes associados com a proliferao celular, como o _

c-myc so capazes de induzir apoptose quando so aberrantemente expressados
(WYLLlE, 1994; STELLER, 1995; SOLARY, 1996). Mesmo assim, parece que a
natureza terminal e as caractersticas especficas da apoptose requerem pelo
menos alguns componentes especificamente devotados a este processo
(STELLER, 1995).

2.3.1 - Fator Fas

Em 1989, dois grupos independentes isolaram anticorpos de ratos com
atividade citoltica para vrias clulas humanas. As protenas de superfcie celular
reconhecidas

por

respectivamente

estes
(NAGATA

anticorpos
&

foram

GOLOSTEIN,

designadas
1995;

Fas

APO-1,

HEGENBERGER

&

GHIRLANOA, 1997). Este receptor uma protena de membrana tipo 1 de 325

aminocidos. O Iigante deste receptor uma protena de membrana tipo 2 de
peso molecular 40000 denominada FasL (HEGENBERGER & GHIRLANOA,
1997).

O Fas,

tambm chamado C095 ou APO

1, uma molcula

transmembrana da famlia TNF (fator de necrose tumoral), que interage com FasL
(C095L) - da famlia TNF/FCNeural- para induo da apoptose (ROITT, 1999).
A ativao da seqncia apopttica requer ligao cruzada do Fas com
FasL solvel, clulas expressando FasL ou anticorpos monoclonais para Fas
(SOLARY, 1996; HEGENBERGER & GHIRLANOA, 1997). O Fas ativado interage
com vrias protenas celulares e ativa uma seqncia dependente de

12

esfingomielinase. A apoptose mediada por Fas ativada por proteases ICE ou

similares a ICE (SOLARY, 1996). A expresso de Fas aumenta por ao do
interferon gama e TNFa deixando a clula mais suscetvel interao com FasL e
conseqente apoptose, o que explica, em parte, por que estas citocinas
aumentam

a toxicidade

mediada

por

linfcitos

(HEGENBERGER

&

GHIRLANDA, 1997).
O receptor de Fas est presente em vrios tipos celulares somticos,
sendo abundantemente expressado em linfcitos ativados e em clulas primrias
de vrios outros tecidos, como fgado, corao, pulmes e ovrios. J o FasL
expressado predominantemente em linfcitos T CD4+ e CD8+ ativados e em
clulas NK. O sistema Fas e FasL est envolvido na deleo clonal de clulas T
autoreativas na periferia, mas no no timo, na limitao da resposta imune e nos
mecanismos que as clulas T citotxicas usam para matar as clulas-alvo
infectadas (um caminho distinto do caminho da perforina) (NAGATA &
GOLDSTEIN, 1995; SOLARY, 1996). O mal funcionamento do sistema Fas causa
distrbios linfoproliferativos e acelera doenas autoimunes, enquanto que sua
exacerbao pode causar destruio do tecido (NAGATA & GOLDSTEIN, 1995).

2.3.2 - As Caspases

As caspases, um pequeno grupo de cistena proteases celulares, so

ativadas na apoptose, colocando o processo em movimento.

As caspases

existem como pr-enzimas inativas e podem ser ativadas por clivagem proteoltica
determinando uma cascata de eventos que incapacita uma variedade de funes
celulares, levando inevitvel morte (DeFRANCESCO, 1997; STITES et aI,
1997). Alguns vrus produzem inibidores especficos das caspases, impedindo a
apoptose das clulas infectadas. Um dos alvos das caspases so as lamininas,
protenas nucleares filamentosas que organizam a estrutura da cromatina; a
clivagem das lamininas pode ser um mecanismo na iniciao da fragmentao
nuclear caracterstica da apoptose (STITES et aI, 1997). Alm da destruio do
citoesqueleto do ncleo e do citoplasma pela clivagem de protenas estruturais,
levando a mudanas morfolgicas gerais, acredita-se que as caspases atuem na

13

incapacitao de enzimas envolvidas com a funo e manuteno do genoma,

deixando a clula incapaz de reparar danos no DNA e reduzindo o nmero de
transcritos produtivos; no rearranjo da membrana plasmtica, levando a
fosfatidilserina a se expor externamente membrana, sinalizando a morte para
clulas envolvidas com a remoo de detritos, como os macrfagos; na
fragmentao do DNA; na liberao de clulas em tecidos por clivagem da cinase
de adeso focal (FAK) (DeFRANCESCO, 1997).

2.3.3 - Ca++

aumento da concentrao

de Ca ++

intracelular tem se mostrado

necessrio para desencadeamento da apoptose em vrios tipos celulares,

inclusive para a morte da clula-alvo induzida por

clula T citotxica. Este

aumento pode ser crtico para a ativao das endonucleases presentes no ncleo
da clula e conseqente morte celular induzida (MALE et aI, 1991; ORRENIUS,
1995; KIESS & GALLAHER, 1998). A presena de atividade de enzimas
dependentes de Ca 2+/Mg 2+ geradoras de clivagem cromatnica com padro
apopttico foi encontrada em vrios tipos celulares (ORRENIUS, 1995; KIESS &
GALLAHER, 1998).

2.3.4 - Controle Hormonal da apoptose

Fatores de crescimento, como o fator de crescimento epidrmico e o fator
de crescimento similar a insulinal famlia insulina so capazes de evitar a
apoptose em muitas clulas. Acredita-se que genes como o c-myc, que podem
induzir tanto a proliferao como a morte celular, tenham um papel central na
apoptose causada por retirada de fatores de crescimento. Alguns neurnios
dependentes de fatores neurotrficos sofrem apoptose na ausncia destes.
Acredita-se que a suscetibilidade de uma clula para a induo da apoptose seja
conseqncia da ativao de vias sinalizadoras estimuladoras e inibidoras do
crescimento simultaneamente (KIESS & GALLAHER, 1998).

14

Hormnios esterides tm um papel importante na regulao do

crescimento, desenvolvimento, homeostase

e morte celular programada.

Juntamente com outros hormnios e fatores de crescimento, os esterides

regulam a induo e inibio da morte celular. Glicocorticides induzem apoptose
em timcitos imaturos e clulas T atravs de um processo ativo caracterizado por
fragmentao do DNA. Os glicocorticides podem regular tambm a apoptose no
sistema nervoso central, reprimindo a morte celular no hipocampo. Esterides
sexuais tm um importante papel na regulao da apoptose no ovrio: enquanto o
estrognio inibe a apoptose da granulosa ovariana, andrognios parecem elevar a
fragmentao do DNA. J a progesterona um potente inibidor da apoptose nas
clulas do cncer de mama (KIESS & GALLAHER, 1998).
A morte celular durante a metamorfose de anfbios est sob controle
hormonal: o hormnio da tireide capaz de iniciar a apoptose e levar a
regresso da cauda durante o desenvolvimento dos anfbios (KIESS &
GALLAHER, 1998).
Os hormnios peptdios tambm participam da regulao da apoptose. Por
exemplo, a prolactina e o hormnio adenocorticotrfico (ACTH) tm a capacidade
de prevenir a apoptose (KIESS & GALLAHER, 1998).
As clulas epiteliais da prstata sofrem apoptose aps castrao,
mostrando que os andrognios funcionam como reguladores endgenos da morte
celular programada. Nos ovrios, a atresia dos folculos iniciada por apoptose
das clulas da granulosa em resposta privao hormonal. As clulas da
granulosa so as principais produtoras dos hormnios esterides sexuais
femininos responsveis pelo ciclo ovariano. A apoptose no ovrio limita o nmero
de folculos capazes de ovular e evita o desenvolvimento de um nmero maior de
embries que no poderiam completar a gestao. Assim, s um pequeno
nmero de folculos escapam da apoptose. Os fatores de sobrevivncia dos
folculos so fatores de crescimento e estrognio enquanto andrognios e
hormnios liberadores das gonadotrofinas potencializam a apoptose dos folculos
(KIESS & GALLAHER, 1998).
A regulao hormonal parece ser de grande importncia para o
desenvolvimento das glndulas mamrias. O crescimento da glndula mamria

15

normal envolve a proliferao, diferenciao, apoptose e remodelamento da

membrana basal atravs da estimulao ovariana cclica do ciclo menstrual,
gestacional e de lactao, sendo observados padres cclicos de diviso e morte
celular. A regulao destes processos envolve a ao de estrgeno e
progesterona. A regresso da glndula mamria aps a lactao induzida pelo
decrscimo dos nveis de prolactina e hormnios glicocorticides associado com o
desmame. A retirada de hormnios lactognicos ativa o programa apopttico
caracterizado por decrcimo da expresso gnica para a protena do leite casena
e aumento da expresso de genes associados com a apoptose (KIESS &
GALLAHER, 1998).
No tero, a progesterona e o estradiol tm efeito proliferativo ou antiapopttico sobre o endomtrio. Contudo, aps longa exposio progesterona,
as clulas do endomtrio sofrem apoptose, contribuindo para a menstruao
(KIESS & GALLAHER, 1998).

16

2.4 - Apoptose na resposta imune

Na resposta imune, a apoptose age como um mecanismo efetor na
eliminao de patgenos ao lado da neutralizao feita pelas imunoglobulinas, a
fagocitose e reaes citotxicas por ao de perforinas. Neste mbito, o programa
de autodestruio da clula-alvo iniciado a partir do recebimento de sinais
emitidos por algumas clulas citotxicas (ROITT et ai, 1997). Assim, as clulas T
citotxicas podem matar a clula alvo por dois mecanismos: (1) atravs da
exocitose da perforina, uma protena que perfura membrana plasmtica de
clulas- alvo com antgenos associados ao MHC de classe I; (2) por apoptose
(ASSAS et ai, 1994).
A apoptose tambm o processo que d fim vida ds plasmcitos, os
produtores das imunoglobulinas, que tm uma sobrevida de apenas alguns dias
(RO/TT et ai, 1997).
Na resposta imune humoral ocorre a produo de anticorpos em resposta a
antgenos. Esses anticorpos so produzidos por clulas S ativadas. Os linfcitos
S, cujas molculas de imunoglobulinas da membrana so capazes de reconhecer,
com maior afinidade, o antgeno exposto so selecionados positivamente. Se
mutaes somticas gerarem receptores que no reconhecem mais o antgeno,
essas clulas morrem por apoptose. Esta seleo faz parte do processo chamado
maturao da afinidade (ASSAS, 1994).
Alm disso, a apoptose tem um papel importante no processo de seleo
dos linfcitos T no timo. Os linfcitos T que apresentam receptores de afinidade
muito alta ou muito baixa pelos antgenos MHC prprios sofrem apoptose-e
morrem (ROITT et ai, 1997). A ligao de TCR de afinidade muito baixa leva
seleo positiva e a ligao de alta afinidade seleo negativa. A seleo
positiva no timo responsvel pelo desenvolvimento de clulas T restritas ao
MHC prprio, ou seja, clulas T que expressam s TCRs restritos ao MHC
prprio. Timcitos cujos TCRs no tm afinidade por MHC prprio morrem por
apoptose. J o processo de seleo negativa no timo importante para o
desenvolvimento da auto-tolerncia. Os indivduos so tolerantes a antgenos
prprios pela carncia de linfcitos Selou T especficos para esses antgenos ou

17

porque tais linfcitos esto presentes, mas no podem responder a antgenos

prprios. A tolerncia da clula T a principal causa da tolerncia a protenas
prprias e o principal mecanismo para induzir tolerncia da clula T a deleo
de clulas auto-reativas durante sua maturao no timo (ASSAS, 1994).
Assim, a falha na induo da apoptose pode levar persistncia de
linfcitos autoreativos de muitas especificidades, estmulo de numerosos clones
de clulas S autoreativas, produo de mltiplos anticorpos, levando ao
desenvolvimento de doena autoimune sistmica, como o lpus eritematoso
sistmico (ASSAS el aI, 1994).
Em alguns casos, autoanticorpos podem penetrar em clulas vivas do
organismo, alterando sua funo e causando apoptose. Isto pode ter alguma
funo no s na regulao imune e preveno de doenas autoimunes, como
tambm na patognese destas doenas autoimunes (ALARCN-SEGOVIA el aI,
1996)

18

2.5 - Apoptose na patognese de doenas

A alterao da homeostase na morte celular um evento essencial na
patognese de vrias doenas (PIACENTINI, 1999). A falha na morte celular
apopttica est envolvida na patognese de vrias doenas humanas, incluindo
cncer, doenas autoimunes, e infeces virais. Em contrapartida, um grande
nmero

de

doenas

associadas

com

perd~

celular,

como

doenas

neurodegenerativas, AIDS, e osteoporose, podem ser conseqncia de altas

taxas de morte celular (Tabela 1)(THOMPSON, 1995).

Tabela 1 - Doenas associadas com induo ou inibio da apoptose

(THOMPSON, 1995).
Doenas associadas com inibio da

Doenas associadas com aumento da

apoptose

apoptose

1. Cncer

1. Doenas neurodegenerativas

Linfomas foliculares

Alzheimer

Carcinomas com mutaes no p53

Parkinson

Tumores dependentes de hormnios

Esclerose lateral amiotrfica

Cncer de mama

Retinite pigmentosa

Cncer de prstata

Degenerao cerebelar

Cncer de ovrio

2. Doenas autoimunes
Lpus eritematoso sistmico

2. S ndromes mielodisplsicas
Anemia aplsica

Glomerulonefrite imune-mediada
3. Infeces virais

3. Leses isquemicas

Herpesvrus

Infarto do miocrdio

Poxvrus

Ataque cardaco

Adenovrus

Leso por reperfuso

4. AIDS
5. Hepatopatias induzida por toxina
lcool

19

2.5.1 - Doencas associadas com aumento da sobrevivncia

celular
2.5.1.1 - Apoptose e cncer

Existem duas grandes razes para o crescente interesse no papel da

apoptose no cncer: 1) a relao entre a proliferao e a morte celular
determinam a velocidade do crescimento de um tumor; 2) a apoptose um
mecanismo eficiente na preveno de uma transformao maligna pois remove as
clulas com danos genticos. Assim, falhas da apoptose podem levar formao
de um tumor por permitir o acmulo de clulas em diviso e por no remover
variantes genticas com elevado potencial maligno (ORRENIUS, 1995).
O cncer uma doena vista normalmente como proliferao celular
excessiva. Mas,

falhas no processo de apoptose parecem contribuir para a

patognese desta doena (WYLLlE, 1994; THOMPSON, 1995; SOLARY et aI,

1996). Por exemplo, as clulas metastticas tumorais apresentam um certo grau
de independncia dos fatores de sobrevivncia do meio, podendo evitar a
apoptose e sobreviver em

locais diferentes de seu tecido de origem

(THOMPSON, 1995).
Vrios oncogenes e anti-oncogenes regulam a apoptose. Oncogenes que
promovem proliferao celular e aqueles que inibem a morte celular poderiam
cooperar para induzir uma leso neoplsica (SOLARY et aI, 1996). O bcl-2,
inicialmente visto como oncogene, no tem relao com a proliferao celular. Um
aumento na expresso deste gene impede as clulas de iniciarem apoptose em
resposta a vrios estmulos e, inclusive, confere resistncia morte celular em
resposta a agentes quimioterpicos (THOMPSON, 1995). Muitos tumores contam
com uma alta taxa de expresso do bcl-2 ou produtos gnicos relacionados para
impedir

morte

celular,

como

por

exemplo,

linfomas,

leucemias,

adenocarcinomas, neuroblastomas, cncer de pulmes e rins e melanomas

(SOLARY et aI, 1996).
Um regulador do bcl-2 que se torna alterado no cncer o supressor de
tumor p53, que inibe a expresso do bcl-2. A protena p53 se liga ao DNA e

20
funciona, pelo menos em parte, como um regulador da transcrio, ativando ou
reprimindo a expresso de vrios genes envolvidos na replicao e reparo do
DNA, sendo capaz de interromper o ciclo celular na fase G1/S em resposta a
danos ao DNA para facilitar o seu reparo. (SOLARY et ai, 1996). Alm disso, o
produto do p53 necessrio para a clula iniciar a apoptose em resposta a danos
genotxicos,

contribuindo

para

supresso

do

crescimento

tumoral

(THOMPSON, 1995; SOLARY et aI, 1996). O p53 se torna inativado em mais da

metade dos tumores humanos (SOLARY et ai, 1996). A incapacidade das clulas
em sofrer apoptose em resposta ao dano ao DNA pode estar relacionada a uma
maior resistncia aos agentes quimioterpicos e radiao, conforme observado
em tumores deficientes em p53 (THOMPSON, 1995).
O p53 tambm ativa a expresso do bax, cuja protena funciona como um
promotor da morte celular. O bax e o bcl-2 fazem parte de uma famlia de
protenas que podem promover ou reprimir a apoptose e incluem Bel-x, mcl-1, A1,
BAK, Bad, BAG-1, dentre outros. (SOLARY, 1996).
A apoptose pode ser um mecanismo que protege o organismo de clulas
geneticamente alteradas e mais suscetveis proliferao celular. Assim, a
inibio da apoptose tem uma grande importncia no desenvolvimento de
malignidades (THOMPSON, 1995).

2.5.1.2 - Apoptose e autoimunidade

Para ser capaz de reconhecer e destruir uma grande variedade de
antgenos, os vertebrados so equipados com um poderoso mecanismo gentiCO
(rearranjo do DNA) para diversificar seu repertrio de receptores para antgenos.
Em razo da natureza aleatria da diversificao dos receptores, esse
mecanismo inevitavelmente gera clulas que respondem aos antgenos prprios
do organismo, levando potencialmente doena autoimune (ORRENIUS, 1995).
Estes linfcitos auto-reativos normalmente sofrem apoptose no incio do seu
desenvolvimento (seleo negativa) (THOMPSON, 1995; ORRENIUS, 1995;
SOLARY, 1996; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997). Normalmente 95% dos
linfcitos T que migram para o timo para "amadurecer" e se diferenciar morrem

21

por seleo negativa por reagirem com autoantgenos (HEGENBERGER &

GHIRLANDA, 1997). Contudo, um defeito na sua deleo (apoptose) poderia
levar autoimunidade (THOMPSON, 1995; ORRENIUS, 1995; SOLARY, 1996;
HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997; PIACENTINI, 1999). A apoptose
tambm essencial para remoo do excesso de clulas aps a concluso da
resposta imune. (THOMPSON, 1995).
Alteraes na suscetibilidade dos linfcitos de sofrer apoptose in vitro tm
sido reportadas em vrias doenas autoimunes, como lpus eritematoso
sistmico, artrite reumatide, diabetes autoimune e doena inflamatria da bexiga
(THOMPSON, 1995; EMLEN apud SOLARY, 1996).
As observaes mais informativas at agora foram realizadas em ratos da
linhagem MRL. Mutaes recessivas espontneas no seu cromossomo 19, loco

Ipr (de doena linfoproliferativa) e no cromossomo 1, loco gld (de doena

linfoproliferativa generalizada) induzem doenas autoimunes cOm caractersticas
semelhantes - artrite, nefrite, linfadenopatia e esplenomegalia por proliferao de
linfcitos (SOLARY, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997) - que se
parecem com lpus eritematoso sistmico (ORRENIUS, 1995; THOMPSON,
1995). Estes ratos morrem aos 5 meses por processos autoimunes (SOLARY,
1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997). A mutao Ipr afeta uma protena
de superfcie celular chamada Fas (ou AP01 ou CD95); enquanto gld afeta um
ligante endgeno para o receptor Fas, o ligante Fas (THOMPSON, 1995;
ORRENIUS, 1995; SOLARY, 1996; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997;
PIACENTINI, 1999). Assim, estes ratos no eliminam eficientemente os linfcitos
T autoreativos (ORRENIUS, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997),
levando a um acmulo de clulas T e linfadenopatia (ORRENIUS, 1995).
Outros genes, alm do Fas e ligante Fas esto provavelmente envolvidos
na patologia relacionada ao Fas, pois a mutao Ipr induz nefrite ou artrite em
ratos MRL mas no em ratos C3M (SOLARY, 1996).
Em humanos, dois estudos recentes identificaram mutaes no gene Fas
em crianas que desenvolveram uma doena autoimune linfoproliferativa rara,
caracterizada por linfadenopatia no maligna, fenmenos autoimunes e expanso
da populao de linfcitos imaturos (SOLARY, 1996).

22
Pacientes com lpus eritematoso sistmico tm altos nveis de Fas solvel,
que poderia inibir competitivamente o ligante Fas - interaes Fas. O decrscimo
na apoptose mediada por Fas pode contribuir para o acmulo de clulas
autoimunes nestas doenas (THOMPSON, 1995; SOLARV, 1996).
Ratos com uma doena autoimune semelhante ao lpus eritematoso
sistmico apresentam um aumento da expresso do bcl-2 em clulas B
(THOMPSON, 1995; SOLARV, 1996), o que parece ocorrer tambm em pacientes
com esta doena (ORRENIUS, 1995). O bcl-2 est associado tambm com
diabetes autoimune em ratos (THOMPSON, 1995; SOLARV, 1996).
Em relao as diabetes mellitus do tipo 1, uma doena autoimune
associada com a destruio das clulas beta pancreticas, o soro dos pacientes
contm um fator que promove apoptose mediada por Ca++ em clulas produtoras
de insulina (ORRENIUS, 1995; SOLARV, 1996).

2.5.1.3 - Apoptose e infeces virais

As clulas infectadas por vrus podem sofrer apoptose como um
mecanismo de defesa para evitar a propagao viral. As clulas T citotxicas
tambm atuam no sentido de evitar a propagao viral, reconhecendo e matando
as clulas que apresentam peptdios virais em associao com MHC de classe I.
As clulas T citotxicas induzem a apoptose tanto por ativao do receptor Fas na
superfcie da clula-alvo ou usando a perforina para introduzir proteases na
clula-alvo

(THOMPSON,

1995;

SOLARV,

1996;

HEGENBERGER

&

GHIRLANDA, 1997).
Para burlar estas defesas, alguns vrus desenvolveram mecanismos que
rompem a regulao normal da apoptose na clula infectada. Para isto, os genes
virais codificam protenas inibitrias que interferem com as vias que levam a
apoptose (THOMPSON, 1995; SOLARV, 1996; HEGENBERGER & GHIRLANDA,
1997).
O gene crm A do vrus da varola bovina codifica um inibidor de proteases
que evita a apoptose atravs da inibio da ICE. Outros genes virais, como por
exemplo, o gene BHRF 1 do vrus Epstein-Barr, gene LMW5-HL do vrus da peste
suna africana, e o gene E1 B do adenovrus, codificam protenas estrutural e

23

funcionalmente similares ao Bcl-2 (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996). O

produto de alguns genes virais, como LMP-1 do vrus Epstein-Barr, pode elevar a
expresso do Bcl-2 para permitir o estabelecimento da latncia viral (SOLARY,
1996).
Os genes p35 e IAP (protena inibidora da apoptose), encontrados em
baculovrus, podem inibir a apoptose em resposta a vrios estmulos. A habilidade
do p35 em inibir a apoptose independe da expresso de qualquer outra protena
viral (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).

24

2.5.2 - Doenas associadas com excesso de apoptose

2.5.2.1 - Apoptose e AIDS

sinal distintivo da AIDS (Sndrome da Imunodeficincia Humana

Adquirida) o declnio no nmero das clulas T CD4 do paciente. As clulas T

CD4 so responsveis, direta ou indiretamente, por todas as respostas imunes.
Quando a contagem de linfcitos T cai abaixo de um determinado limite, o
paciente no mais capaz de dispor de respostas imunes e comea a sofrer
uma srie de perigosas infeces.
O vrus HIV (vrus da imunodeficincia humana) pode causar a depleo de
clulas T CD4 + por estimular sinais que induzem a apoptose. Tem sido postulado
tambm que a apoptose induzida por HIV causa a perda de clulas T em
desenvolvimento no timo (ABBAS et ai, 1994).
A maioria das clulas T que morre durante a infeco por HIV parece no
estar infectada pelo HIV. Algumas evidncias sugerem que o produto viral solvel
- gp120 - promove apoptose das clulas T no infectadas atravs de sua ligao
com o receptor CD4 (THOMPSON, 1995; ORRENIUS, 1995; SOLARY et ai, 1996;
HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997).
A ligao de receptores CD4 pela protena gp120 do HIV ou por
imunocomplexos gp120/anti-gp120 prepara a clula T CD4 para a apoptose em
resposta ao estmulo subsequente do receptor da clula T, como a ligao de um
complexo antgeno-MHC de classe 11. Se uma clula preparada pelo primeiro sinal
for ativada por um antgeno, pode ocorrer a apoptose da clula sem infeco por
HIV (ORRENIUS, 1995).
Parece estranho que um vrus desenvolva um mecanismo para exaurir
suas clulas hospedeiras; mas, isso pode estar ligado ao fato que a clula T CD4
proporciona proteo contra infeco viral. Assim, o estabelecimento de uma
infeco HIV crnica pode depender da depleo das clulas T CD4+ mediada
por vrus e concomitante perda da resposta imune celular (THOMPSON, 1995).
Recentemente, foi demonstrado que a protena Tat do HIV-1 induz a
apoptose em uma linhagem de clulas T e em clulas mononucleares perifricas

25
do sangue de doadores no infectados. Esta protena induz a ativao prematura
de cinases ciclina-dependentes, um evento associado com a induo da apoptose
em outros sistemas celulares. As clulas T ativadas por Tat seriam deletadas
quando o receptor da clula T fosse ativado por um antgeno ou a protena gp120
se ligasse ao receptor CD4 (SOLARY et ai, 1996).
O Fas pode estar envolvido na morte celular das clulas T CD4 durante a
infeco por HIV, pois as clulas infectadas apresentam

um aumento na

expresso do Fas (SOLARY et a', 1996; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997).

A hiptese atual que a Tat e a gp120 aceleram a apoptose induzida por
ativao e mediada por Fas na clula T (SOLARY et ai, 1996).
Embora a gp120 tenha um importante papel em preparar as clulas T CD4
para a apoptose, outros mecanismos, como aumento da produo de citocinas,
dentre eles o fator de necrose tumoral a (TNFa) e alteraes metablicas
associadas, podem contribuir para a induo da morte celular na infeco por HIV
(ORRENIUS, 1995).
A replicao viral no fica prejudicada por esta forma de morte celular pois
a protena viral Nef regula negativamente o receptor CD4 em clulas infectadas, o
que pode impedir a reinfeco viral e apoptose mediada por CD4 (THOMPSON,
1995; SOLARY et ai, 1996).
Alguns resultados experimentais sugerem que os linfcitos T de indivduos
infectados por HIV produzem menor quantidade das interleucinas de tipo I ( IL-1 e
2) e maior quantidade das citocinas de tipo 11 (incluindo a IL 10). As citocinas de
tipo I reduzem a morte celular apopttica de linfcitos infectados por HIV in vitro.

J as citocinas de tipo 2 no tem efeito ou aumentam a apoptose (CLERICI &

SHEARER, 1997).
Um dos problemas associados infeco por HIV em indivduos com idade
mais avanada, e que torna seu tratamento mais complicado, o controle dos
eventos apoptticos. Em pacientes infectados pelo HIV, com idade superior a 50
anos, o processo de reposio das clulas T destrudas pela infeco menos
eficiente, contribuindo para uma evoluo mais acelerada da doena (ADLER e
NAGEL, 1999).

26
2.5.2.2 - Apoptose e doenas neurodegenerativas

As doenas neurodegenerativas como Parkinson, Alzheimer, esclerose

lateral amiotrfica (ELA), retinite pigmentosa e degeneraes cerebelares, se
caracterizam por perda gradual de conjuntos especficos de neurnios. A perda
celular nestas doenas no est associada resposta inflamatria, sendo
provvel que a apoptose seja o principal mecanismo de morte celular, tendo como
indutores principalmente o stress oxidativo, aumento de clcio intracelular,
defeitos mitocondriais, toxicidade por aminocidos excitatrios ou deficincias de
fatores de crescimento (THOMPSON, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA,
1997). O limiar apopttico de uma clula dinamicamente regulado, ou seja,
determinado por efeitos combinados de fatores de sobrevivncia externos e
internos. Vrios fatores de crescimento especficos e menos especficos, a matriz
extracelular e a elevada expresso do gene bcl-2 impedem a apoptose das
clulas neurais (THOMPSON, 1995; ORRENIUS, 1995; SOLARY, 1996). Por
exemplo, o aumento na expresso

do Bcl-2 diminui a neurotoxicidade dos

indutores potenciais da morte celular. Fatores de crescimento neurotrficos e a

matriz extracelular tambm alteram o limiar apopttico das clulas neuronais
(THOMPSON, 1995).
Vrias mutaes gnicas que levam a um aumento da morte apopttica da
clula foram identificados em doenas neurodegenerativas (SOLARY, 1996). Uma
forma hereditria de esclerose lateral amiotrfica resulta de mutaes no gene
que codifica a enzima superxido dismutase. Essas mutaes diminuem a
habilidade dos neurnios motores de detoxificar radicais livres, levando induo
da apoptose em decorrncia de injrias sofridas por estas clulas (THOMPSON,
1995; SOLARY, 1996; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997). Esta morte pode
ser especificamente inibida por tratamento com fatores de crescimento,
sobrevivncia ou antioxidantes (THOMPSON, 1995). O aumento da concentrao
de glutamato no meio extracelular tambm pode provocar a apoptose neuronal
(ORRENIUS, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997), participando da
patognese da ELA (HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997).

27

A degenerao da retina na retinite pigmentosa ocorre como resultado de

mutao em qualquer dos trs genes fotor~eceptores especficos. Todas as
mutaes levam apoptose do fotorreceptor, que pode ser iniciada em resposta
ao acmulo de protenas mutantes ou como resultado de propriedades funcionais
alteradas de protenas mutantes (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996). O
tratamento destas doenas pode ser possvel com fatores neurotrficos
especficos, isolados ou em associao (THOMPSON, 1995).
No mal de Alzheimer, o acmulo progressivo do peptdio f3 amilide causa
a perda neuronal por apoptose ao interferir no metabolismo normal da clula ou
por impedir a ao de fatores de crescimento liberados pelas sinapses das clulas
gliais adjacentes (THOMPSON, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997).
Este efeito pode ser revertido por antioxidantes (THOMPSON, 1995).
Nas atrofias musculares espinhais foram identificadas mutaes no gene
da protena inibitria da apoptose neuronal (NAIP) - um gene homlogo ao IAP
(do baculovrus). Mutaes neste gene podem resultar em neurnios. mais
suscetveis apoptose (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).
Variantes anormais de uma protena prion, normalmente sintetizadas nos
neurnios, so responsveis por vrias enfermidades. Sua neurotoxicidade
mediada por apoptose (ORRENIUS, 1995; HEGENBERGER & GHIRLANDA,
1997).

5.2.2.3 - Apoptose e doencas hematolgicas

A hematopoese regulada por fatores de crescimento hematopoticos

como fator da clula tronco, fatores estimulantes de colnia, eritropoetina e
trombopoetina. Estes fatores agem, em parte, promovendo a sobrevivncia das
clulas progenitoras por reprimir a apoptose durante a sua diferenciao. Um
grande nmero de doenas hematolgicas como sndromes mielodisplsicas,
anemia aplsica, neutropenia crnica ou f3 talassemia severa esto associadas
com aumento da apoptose na medula ssea, que poderia resultar de ativao de
genes que promovem apoptose, de deficincias adquiridas nas clulas do
estroma ou nos fatores de sobrevivncia hematopoticos ou, ainda, dos efeitos

28

diretos de toxinas e mediadores da resposta imune (THOMPSON, 1995;

SOLARY, 1996).

2.5.2.4 - Apoptose e o sistema cardiovascular

o infarto do miocrdio e o ataque cardaco

resultam da perda aguda do

fluxo sangneo (isquemia). As clulas na rea isqumica parecem morrer

rapidamente por necrose. Mas, fora da rea central de isquemia, as clulas
parecem morrer por apoptose. A rpida reperfuso de vasos sangneos
agudamente ocludos induz um aumento na produo de radicais livres e na
concentrao de clcio intracelular, com consequente apoptose dos micitos
cardacos (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).
A apoptose est envolvida tambm na patognese de arritmias, displasia
muscular

de

pequenos

vasos

coronrios,

miocardiopatias

displasia

arritmognica do ventrculo direito (HEGENBENGER & GHIRLANDA, 1997).

2.5.2.5 - Outras doencas

Doenas degenerativas do sistema muscular e esqueltico, incluindo artrite

e osteoporose, tambm podem ser conseqncia do aumento da apoptose de
condrcitos e ostecitos, respectivamente (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).
A apoptose

uma caracterstica patolgica no rim policstico e hepatopatias

induzidas por toxinas (incluindo lcool) (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).

No estmago, estudos sugerem que a apoptose intervm na renovao da
mucosa gstrica. Em pacientes com lcera duodenal, infectados com Helicobacter
pylori, foram encontradas numerosas clulas apoptticas. A bactria pode atuar

induzindo apoptose, favorecendo o aparecimento da doena. A erradicao da

Helicobacter pylor levaria a uma desinflamao da mucosa e diminuio da

apoptose a nveis normais. Outros estudos revelam que o lcool e os antiinflamatrios no esteroidais (AINEs) se comportam como indutores da apoptose
neste rgo. As clulas displsicas e cancerosas gstricas tambm mostram um
aumento da expresso de bcl-2 (HEGENBERGER & GHIRLANDA, 1997).

29

2.6 - Apoptose e senescncia

controle

da

homeostase

nos

tecidos

alterado

durante

envelhecimento, ocorrendo um aumento da taxa de morte celular. A natureza

desta perda celular relacionada idade pode ser apopttica (SOLARY, 1996;
PHELOUZAT et ai, 1999), como conseqncia de diminuio da sntese de vrios
fatores de crescimento,

inabilidade de enfrentar o stress oxidativo,

ou

anormalidades na regulao do ciclo celular (SOLARY, 1996). A quantificao de

fragmentos de DNA associados a histonas mostra que o processo de apoptose
grandemente amplificado em linfcitos ativados derivados de organismos
senescentes. Defeitos na sinalizao transmembrana esto envolvidos neste
processo (PHELOUZAT et ai, 1999). Mas, a senescncia tambm pode estar
relacionada com a falha da apoptose: a apoptose mediada por fas reduzida em
clulas T de ratos adultos quando comparada com ratos jovens (SOLARY, 1996)
Estudos de vrios parmetros imunolgicos e endocrinolgicos em
pessoas

centenrias

saudveis

indicam

que

seu

sistema

imune

tem

caractersticas peculiares que podem ajudar a explicar sua bem sucedida

longevidade. Suas clulas mononucleares sangneas perifricas parecem ser
menos suscetveis apoptose induzida por vrios agentes (ORRENIUS, 1995).

30

2.7 - Mtodos de avaliao da apoptose

As clulas apoptticas sofrem modificaes do volume celular, da
densidade citoplasmtica e da organizao nuclear. A reduo volumtrica pode
ser simultnea condensao citoplasmtica e clivagem cromatnica induzidas
pelas enzimas nucleolticas (CAFFORIO,1996).
Nos ltimos anos foram testados inmeros mtodos com o propsito de
permitir a avaliao quantitativa e qualitativa da apoptose. As modificaes
celulares mais facilmente analisveis no curso do fenmeno so as alteraes
citomorfolgicas e as variaes do contedo de DNA. As metodologias mais
comumente utilizadas para o estudo em detalhe dos eventos associados
apoptose so microscopia eletrnica, tcnicas eletroforticas e citofluorimetria,
capazes de evidenciar a caracterstica degradao do contedo nuclear
(CAFFORIO, 1996).
As alteraes morfolgicas da clula podem ser evidenciadas atravs da
microscopia eletrnica, enquanto a anlise planimtrica da imagem permite,
atravs das diferenas cromticas, revelar mudanas estruturais mnimas em
relao a densidade nuclear. Assim, a microscopia eletrnica permite reconhecer
as fases do fenmeno, com a vantagem de apresentar com alta resoluo as
modificaes morfolgicas da clula apopttica. Mas tal metodologia tem fins
analticos e requer a disponibilidade de um equipamento de alto custo. Avaliaes
analticas detalhadas podem ser obtidas com a microscopia a laser confocal, onde
a condensao da cromatina e a fragmentao do ncleo so observadas no
exame de sees ticas em srie das clulas ou ncleos corados (CAFFORIO,
1996).
Outro mtodo de investigao quantitativa e qualitativa da apoptose a
citofluorimetria a fluxo, onde so ressaltados a variao das dimenses celulares
e o aumento da densidade citoplasmtica atravs de padres de disperso da luz,
permitindo reconhecer eletivamente as clulas apoptticas. Esta tcnica pode ser
usada tambm para o estudo do DNA apopttico podendo-se utilizar diferentes
f1uorocromos que se ligam especificamente dupla hlice do DNA, como a
mitramicina, o laranja de acridina e os derivados fenantridnicos, como o propdio

31

de iodo e o brometo de etdio, que so pouco fluorescentes na forma livre ao

passo que a ligao com a dupla hlice exalta sua capacidade de emisso de
fluorescncia (CAFFORIO, 1996).
Outra metodologia citofluorimtica indicada para anlises quantitativas e
qualitativas das clulas apoptticas prev o uso da anexinaV conjugada com o
FITC (isotiocianato de fluorescena), um complexo que se liga membrana
celular, favorecendo a exposio da fosfatidilserina, associada s fases iniciais do
processo apopttico (CAFFORIO, 1996).
As metodologias citofluorimtricas associam relativa simplicidade e
versatilidade no estudo qualitativo e quantitativo da apoptose. Em particular, o
propdio de iodo permite examinar as clulas diretamente na soluo corante e
discriminar as clulas apoptticas e no apoptticas. O nico limite desta tcnica
o fato de os citofluorometros poderem ser utilizados unicamente para o estudo
de suspenses celulares em fase lquida (CAFFORIO, 1996).
A colorao do DNA com fluorocromos ligantes dupla hlice a
metodologia mais difundida para evidenciar os diferentes estados do ciclo celular
e para anlises diferenciadas com clulas vivas, embora seja necessria uma
notvel experincia para discriminar clulas necrticas e apoptticas (CAFFORIO,
1996).
A eletroforese do DNA em gel de agarose usada rotineiramente para
visualizao do cido nuclico fragmentado. A cromatina degradada em
oligossomos

das

clulas

apoptticas

apresenta

um

padro

de

banda

caracterstico, que pode ser confirmado pela colorao com o fluorocromo

brometo de etdio. Mas, a eletroforese apresenta como desvantagens a
necessidade de um grande nmero de clulas para a extrao do DNA e o
emprego de material txico (o brometo de etdio mutagnico) ou radioativo,
alm de no possibilitar anlises quantitativas (CAFFORIO, 1996).
Uma variante da eletroforese o Southern Blott, no qual se verifica a
fragmentao atravs de sondas de DNA radiomarcadas. Embora esta tcnica
permita uma maior resoluo dos oligonucleossomos, a colorao com brometo
de etdio tem a vantagem de maior simplicidade e rapidez do resultado evitando o
uso de substncias radioativas (CAFFORIO, 1996).

32
H outra tcnica denominada TUNEL que evidencia a fragmentao do
DNA

utilizando

as

extreminades

3'-OH

recm

formadas

pela

ao

endonuclesica, onde se ligam os nucleotdeos (dUTP) associados a reveladores

enzimticos ou fluorocromos. Este sistema de revelao particularmente
utilizado para anlises do DNA em preparaes histolgicas (CAFFORIO, 1996).
Uma comparao das principais tcnicas de avaliao da apoptose se
encontra na Tabela 2.

Tabela 2 - Vantagens e desvantagens dos mtodos mais comuns de avaliao da

apoptose (CAFFORIO, 1996)

Vantagens

Desvantagens

Microscopia eletrnica e a

Alta resoluo das

Equipamento caro

laser confocal

modificaes morfolgicas

No pode ser utilizada

para fins quantitativos

Eletroforese do DNA em

Simplicidade da

Utilizao de substncias

gel de agarose

metodologia

txicas ou radioativas

Elevada sensibilidade

Necessidade de um
elevado nmero de
clulas

Citofluorimetria

Possibilidade de anlises

aplicvel a suspenses

qualitativas e quantitativas

celulares em fase fluida

Permite o uso de
diferentes fluorocromos
Tunel

Capta a apoptose em
tecido fixado

Metodologia complexa

lJBUOJEC! DI tIlNCIU B!OlGIC~S / Ufra

33

2.8 - Perspectivas para o futuro

No h dvida de que a apoptose tem um importante papel na patognese
e tratamento de doenas. Apesar de no poder explicar todos os fenmenos de
morte celular nas vrias doenas, a compreenso do papel da apoptose como um
mecanismo ativo e geneticamente programado e de que muitas doenas esto
relacionadas com a desregulao da morte celular trouxe otimismo para um
controle da apoptose atravs do desenvolvimento de drogas que agem contra os
componentes moleculares da "maquinaria" de morte, criando assim novas
estratgias teraputicas (STELLER, 1995, SOLARY, 1996)
As drogas quimioteraputicas e a radiao tm sido usadas h algum
tempo para o tratamento de tumores, mas s recentemente se descobriu que seu
efeito induzir a apoptose das clulas tumorais (THOMPSON , 1995; SOLARY,
1996). Alm disso, normalmente as clulas tumorais sofrem o mesmo tipo de
controle fisiolgico para a morte celular que as clulas das quais elas se originam.
Por exemplo, tumores provenientes de rgos reprodutores so sensveis
manipulao hormonal que resulta em apoptose (THOMPSON, 1995).
A estrutura da cromatina tem um importante papel na fragmentao do
DNA que ocorre durante a apoptose. Esta fragmentao s ocorre quando h
uma descondensao ou reduo na interao histona-DNA. Substncias que
reduzem a acessibilidade da cromatina podem evitar a fragmentao do DNA,
como o caso da espermina. J o zinco, alm de estabilizar a associao
protena-DNA agindo na estrutura da cromatina, pode evitar a fragmentao do
DNA associada com apoptose presumivelmente por inibir as endonucleases, mas
podendo ter outros efeitos celulares j que cofator de vrias enzimas. Porm,
as estratgias teraputicas que evitam as mudanas nucleares no inibem todo o
processo e a fragmentao do DNA provavelmente ocorre muito tarde para ser
um bom alvo da terapia (SOLARY, 1996).
Um melhor alvo para a interveno teraputica so os produtos dos genes
da famlia bcl-2 e cistena proteases relacionadas a ICE, que esto envolvidos no
controle central da apoptose e provavelmente se

localizam no citosol

(THOMPSON,1995; SOLARY, 1996). Esta via regulada por um equilbrio entre

34

atividades opostas de protenas que promovem e as que inibem a morte celular

(SOLARY, 1996). Mas, por exemplo, no caso de uma doena neurodegenerativa,
no seria uma vantagem aumentar a sobrevivncia de todas as clulas neurais s
custas de um aumento das doenas autoimunes ou cncr (THOMPSON, 1995).
De qualquer maneira, a super-expresso do bcl-2 relacionada resistncia
s drogas citotxicas anticncer sugere que a inibio de sua expresso poderia
aumentar a sensibilidade dos tumores quimioterapia. Oligonucleotdeos
antisense tem sido testados com sucesso para diminuir a expresso do bcl-2 in

vitro, aumentando a sensibilidade de clulas neoplsicas a agentes citotxicos.

Alm disso, as propriedades inibitrias do bcl-2 poderiam ser usadas para
proteger as clulas normais da apoptose induzida pela quimioterapia. Contudo, o
uso de oligonucleotdeos

problemtico por vrias razes. Uma melhor

estratgia seria interferir nos mecanismos bioqumicos, mas estes ainda no

foram totalmente elucidados (SOLARY, 1996). Alm disso, a funo do bcl-2 no
absolutamente necessria em todos os tipos celulares, mostrando que a
inibio do bcl-2 pode no ser to txica como se esperava (THOMPSON, 1995;
SOLARY, 1996). Fatores de crescimento modulam a expresso e a atividade do
bcl-2. Assim, agentes farmacolgicos que imitam ou evitam interaes especficas
entre protenas e famlia bcl-2 podem ser necessrios para a modulao da
atividade do bcl-2 (SOLARY, 1996).
Em relao famlia ICE, existem inibidores especficos na natureza,
como, por exemplo, o produto do gene crmA do vrus da varola bovina. Alm
disso, vrios vrus produzem protenas que imitam o bcl-2

ou estimulam a

expresso de bcl-2. Assim, vrus atenuados poderiam ser usados para vacinao.
Ainda, h a possibilidade de se desenvolver inibidores de cistena proteases
especficos para membros individuais da famlia ICE (THOMPSON, 1995;
SOLARY, 1996).
Alm destas, podem ser desenvolvidas estratgias teraputicas que
tenham como alvo vias mais especficas do programa apopttico, como o sistema
Fas, p53, interao de citocinas e fatores de crescimento com seus receptores de
membrana, dentre outros. Por exemplo, tratamentos com antioxidantes, como a n-

35

acetilcistena evitam a apoptose especificamente relacionada infeco por HIV

nas clulas T CD4+ (THOMPSON, 1995; SOLARY, 1996).

36

3-CONCLUSO

Finalmente,

no h dvida sobre a importncia da apoptose no

desenvolvimento e manuteno da homeostase dos organismos multicelulares.

Assim, sua desregulao um importante fator na patognese de doenas, como
as citadas neste trabalho. Em virtude destas recentes descobertas, abre-se um
grande campo para futuras pesquisas que esclaream melhor o papel da
apoptose no controle das funes vitais e na patognese de muitas doenas,
possibilitando o surgimento de novas estratgias teraputicas para patologias
importantes como as doenas autoimunes, o cncer, a AIDS.

37

4 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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