UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL
DE MEDICINA HUMANA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DINMICAS SECCION BIOQUIMICA Y BIOLOGIA

MOLECULAR

BIOQUMICA APLICADA A LA MEDICINA

DOCENTE ENCARGADO DEL CURSO: Mg. Miguel H. Sandoval Vegas
DOCENTE ENCARGADO DE PRCTICA: Mg. Paulo Santayana Rengifo

INFORME DE PRCTICA
PRCTICA N: 1

DOCENTE A CARGO:

Rudy Lpez Gabriel

TTULO DE LA PRCTICA: FOTOCOLORIMETRA

MESA N: 7

INTEGRANTES

Conchoy Lino, Clendy Zaribel

MC Lean Balboa, Nancy
Rashuaman Conche, Benny Harold

INFORME LABORATORIO BIOQUIMICA

1. INTRODUCCIN
La fotocolorimetra es el conjunto de mtodos de anlisis cuantitativos del fenmeno de
transmitancia y absorbancia de parte de determinadas longitudes de onda de luz sobre
soluciones coloreadas con el fin ltimo de calcular la concentracin de dichas
soluciones coloreadas. La fotocolorimetra resulta til aprenderla desde los primeros
aos de estudio de Medicina ya que facilita el conocimiento y clculo de
concentraciones de determinadas soluciones que servirn para los experimentos de
laboratorio. Adems de que la fotocolorimetra se usa tambin en los laboratorios
mdicos como herramienta para determinar las concentraciones de glucosa,
hemoglobina y ms compuestos de importancia biolgica en sangre.
2. MARCO TERICO
2.1 LEY DE LAMBERT
Existe relacin directa entre la absorbancia (nivel de absorcin de la luz) de una
solucin coloreada y la distancia que tiene que recorrer la luz monocromtica a
travs del recipiente de la solucin, sin variar en ningn momento la
concentracin de la solucin.
2.2 LEY DE BEER
Existe relacin directa entre la absorbancia de una solucin coloreada y la
concentracin de sta en un haz de luz monocromtica, sin variar en ningn
momento la longitud que tiene que recorrer el haz de luz.
2.3 LEY DE BEER-LAMBERT
DO = E = A = l. c. e
Donde:
DO es la densidad ptica, trmino intercambiable
con absorbancia
E es la extincin.
A es absorbancia.
l es la longitud que atraviesa el haz de luz.
c es la concentracin de la solucin coloreada.
e es el coeficiente de extincin molar.

2.4 RELACIN ENTRE ABSORBANCIA Y TRANSMITANCIA

A = log l0 /l1
Donde:
A es abosorbancia.
l0 es la luz incidente.
l1 es la luz transmitida.
Pudiendo reducirlo a la ecuacin:
A = 2 log T %
Donde:
T % es la transmitancia (porcentaje)

2.5 MTODOS DE CLCULO DE LA CONCENTRACIN

2.5.1 MTODO GRFICO
Se usan soluciones estndares, de concentraciones conocidas, las cuales se
procede a determinar su absorbancia por fotocolorimetra y se grafica en un
sistema de coordenadas la curva de calibracin con los valores de concentracin
en el eje de abscisas y la absorbancia en el eje de ordenadas. Luego se intercepta
la absorbancia de la solucin, cuya concentracin queremos saber, con la grfica
y as encontramos en las abscisas la concentracin.
NOTA: La curva de calibracin debe incluir al origen de coordenadas (0; 0).
Adems si algunos valores se alejan de la grfica que se va formando con la
mayora de valores, los ms alejados no los tomas en cuenta para la grfica.
Ejemplo:

2.5.2 MTODO ANALTICO

Primero se calcula el factor de calibracin segn:
Fc[ ] = [St] / DOSt
Donde:
Fc[ ] es factor de calibracin.
[St] es la concentracin de la solucin estndar.
DOSt es la densidad ptica, absorbancia, de St.
Nota: si hay ms de un estndar, entonces se obtendr un promedio de los Fc.
Luego, se reconoce el caso de la solucin:
CASO 1
Si la solucin problema y la muestra estndar se procesaron de igual forma
(dilucin, tratamiento trmico, centrifugacin, etc.), usamos la frmula:
[MP] = AMP. Fc[ ]
CASO 2
Si la muestra problema ha sido diluida, para los clculos se necesitar calcular
otra variable, el factor de dilucin, que es la inversa de la dilucin.
4

Dil = Vol MP / Vol T

Fd = Vol T / Vol MP
Donde:
Vol Mp es el volumen de la muestra problema original, osea antes de la dilucin
Vol T es el volumen total (Vol Mp + volumen del diluyente).
Fd: Factor de dilucin.
Para finalizar, se usa la frmula:
[MP] = AMP. Fc[ ]. Fd

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Materiales y reactivos:
1.
2.
3.
4.
5.

Gradillas y tubos de ensayo

Pipetas de vidrio
Espectrofotmetro
Solucin patrn de cromato de potasio 16 mg/dl
Agua destilada

Procedimiento
A. Preparacin de la curva de calibracin
1. Rotular los 4 tubos de ensayo con 1, 2, 3 y 4. Estos son los estndares.
2. Colocar en los tubos 1 y 2 un volumen de 3ml de la solucin de cromato de
potasio en cada uno
3. Coloque en los tubos 2, 3 y 4 un volumen de 3ml de agua destilada a cada uno.
Mezclar bien el tubo 2 que ya contiene cromato.
4. Del tubo 2 saque 3ml y virtalo al tubo 3. Mezclar bien.
5. A partir del tubo 3 saque 3ml y colquelo en el tubo 4. Mezclar bien.
6. Llevar a leer las absorbancias a las siguientes longitudes de onda: 410nm,
450nm, 490nm

2
3ml
Cromato
de potasio

4
3ml
Agua
Destilada

3ml
1

3ml
3

B. Analisis de resultados
1. Encuentre la concentracin de cada uno de los tubos estndares en mg/dl y
mol/L.
Concentracion final = Concentracin final x dilucin
Tubo
1
2
3
4

Concentracin
mg/dl
mmol/L
16
0.82
8
0.41
4
0.21
2
0.10

2. Elabore el grafico de la curva de calibracin. Elija la longitud de onda mxima

en la curva de mayor pendiente.
Absorbancia
Long. onda

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

490nm

0.015

0.014

0.090

0.16

450nm

0.144

0.079

0.042

0.037

410nm

0.747

0.369

0.177

0.103

En el grafico anterior se observa que la mayor pendiente la constituyen los puntos de la

curva de color verde, correspondiente a la longitud de onda 410nm (longitud de onda
mxima)
3. Obtenga el factor de calibracin de cada tubo y el factor de calibracin promedio
usando los datos de la longitud de onda mxima.
Factor de calibracin = [ St ] / DOSt
Tubo

Factor de calibracin
mg /nm .dl

mmol /nm . L

21.42

1.097

21.68

1.111

22.59

1.186

19.42

1.000

Fc prom.

21.27

1.0985

4. Encuentre el coeficiente de extincin molar, sabiendo que el paso de luz fue 1

cm y el reactivo usado es qumicamente puro
A = l . c. e
7

l: long. que atraviesa el haz; c: concentracin; A: absorbancia; e: coef. Extincin molar

Coefic. Extincin molar

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Empleando [ ] en mg/dl

0.047

0.046

0.044

0.051

Empleando [ ] en mmol/L

0.910

0.900

0.842

1.03

C. Clculo de la concentracin de las muestras problemas

1.
2.
3.
4.

Muestras de concentracin desconocida A y B

Una de las muestras requiere dilucin (anotar los volmenes)
Lleve a leer al espectrofotmetro
Encuentre la concentracin por mtodo grfico y mtodo analtico

MTODO ANALTICO

Fc prom.
Muestra A

Usando [ ] en mg/dl

Usando [ ] en mmol/L

21.27

1.0985
Muestra B

[ ] = A . Fc prom

[ ] = A . Fc prom . Fd

Absorbancia: 0.298

Absorbancia: 0.501
Fdilucin: 10

[ ] en mg/dl

[ ] en mmol/L

Muestra A

6.34

0.327

Muestra B

106.60

5.503

MTODO GRFICO

[ A ] = 6.45 mg/dl

[ B ] = 104 mg/dl

D. Discusin
Resultados de los grupos

Podemos apreciar que los grupos obtuvieron distintos resultados, sin embargo, se
mantienen dentro de un rango. Estas diferencias pueden darse debido a algn error en
la medicin de volmenes, dado que para la dilucin se realizaron varios transvases.
No obstante podemos estimar que si hacemos un promedio de los 7 valores para cada
variable, el resultado se acercar verdaderamente hacia el valor real. Consultando con la
tabla de resultados de los grupos, notamos que tuvimos un error en el procedimiento
para hallar el DO del tubo 4; ya que nuestro valor se aleja mucho del rango de los
dems.
Debido a que no somos muy exactos utilizamos el mtodo de mnimos cuadrados para
poder ajustar la recta de la absorbancia

Con respecto al clculo de la concentracin de muestras problema se pudo observar que

al trabajar con una concentracin ms pequea y sobre todo un cantidad entera el
trabajo se facilita, como el de nosotros que trabajamos con 1 mol/L; a diferencia de la
mesa nmero 1 que la dilucin les sali 2/17; esto cobra importancia sobre todo en el
punto de que lo que se requiere de estos anlisis en la prctica clnica para que sean
exactas y rpidas.

10

CUESTIONARIO
1. Encuentre las DO en cada caso:
A= 2 logT%
A) 40%T
A= 2 - log40%
A= 2 - (-0.3979 )
A= 2.3979
B) 75%T
A= 2 log75%
A= 2 (-0.1249)
A= 2.1249
C) 29%T
A= 2 log29%
A= 2 (-0.5376)
A= 2.5376
D) 82%T
A= 2 log82%
A= 2 (-0.0861)
A= 2.0861
E) 54%T
A= 2 log54%
A= 2 (-0.2676)
A= 2.2676
2. Transforme la absorbancia de la prctica a porcentaje de transmitancia y
realice la grfica de la curva de calibracin. (Concentracin VS transmitancia)

A = 2 log T %

Como

T % = antilog (2 A)

Long.
onda
490nm
450nm
410nm

Absorbancia
Tubo
Tubo 1
2
0.015
0.014
0.144
0.079
0.747
0.369

Tubo
3
0.09
0.042
0.177

Tubo
4
0.16
0.037
0.103

11

Transmitancia (%)
Long.
onda

Tubo
2

Tubo 1

490nm

96.605

450nm

71.779

410nm

17.906

Tubo
4

96.828 81.283 69.183

83.368 90.782 91.833
42.756 66.527 78.886

Curva de calibracin

120

Transmitrancia (%)

Tubo
3

100
80
60
40
20
0
0

10

15

20

Concentracin (mg/ dL)

3. Si una solucin, tiene una DO de 0,525 en una cubeta de 1 cm, cul ser su
concentracin (use los datos de su mesa):
Segn nuestra mesa, los coeficientes de extincin fueron: 0.047, 0.046, 0.044 y
0.051 para concentraciones en mg/ dL. Por lo tanto el promedio es 0.047.

DO = l. c. e
0,525 = 1. c. 0.047
c = 11.170 mg/ dL

4.

Una sustancia X tiene un coeficiente de extincin molar de 780 cm-1.mol-1.L,

cul ser su concentracin sabiendo que una muestra de la misma sustancia
tubo una DO de 0,720 en una cubeta de 2 cm de paso de luz.

DATOS
un coeficiente de extincin molar de 780 cm-1.mol-1.L
longitud que atraviesa el haz de luz =2cm
Densidad ptica=0.720
FORMULA

12

A=E.l.c
0.720=780 cm-1.mol-1.L (2cm)(c)
c=0.0004615mol/L

5. Una sustancia fue diluida de manera semejante al de la prctica y el ltimo tubo

midi 0,628 DO, calcular la concentracin inicial de la sustancia.
DATOS
DO=0.628
Fc(segn la practica realizada)=21.278
Dilucin (segn la practica realizada)=1/8
FORMULA
[MP]=DOmpFc[]

[concentracin final]=0.628(21.278)
[concentracin final]=13.36254
Por lo tanto
[concentracin final]=[concentracin inicial]x[dilucin]
=13.36548(1/8)
=1.670685mg/dl
CONERSION A MOL/L
=1.670685x10/194
=0.08611

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CONCLUSIONES

La fotocolorimetra es una tcnica que se basa en medir la cantidad de luz absorbida o

transmitida por un compuesto en una solucin

La fotocolorimetra permite medir la absorcin de radiacin electromagntica,

ultravioleta y visible de numerosas especies qumicas inorgnicas y orgnicas, para su
anlisis cualitativo y cuantitativo

En el grfico de absorbancia v s concentracin se puede observar que la absorbancia

que presentan los estndares es proporcional a su concentracin

Como se pudo contrastar los resultados no fueron al 100% exactas con los resultados
tericos debido tanto a errores sistemticos como la sensibilidad y calibracin del
equipo y al error del alumno al momento de los trasavases, por lo cual se concluye que
debemos ser lo ms precisos posibles sin descuidar la velocidad con la que se trabajara
debido a que en la prctica clnica de nada sirve ser muy exactos cuando el tiempo del
diagnstico o tratamiento se ha agotado.

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BILIOGRAFIA
http://es.slideshare.net/juandavidlopeznorena/fotocolorimetria
https://books.google.com.pe/books?id=cKGyh_81voC&pg=PA194&dq=LEY+DE+LAMBERT+Y+BEER&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiH7npxtXOAhXFpB4KHaIIAngQ6AEIJzAC#v=onepage&q=LEY%20DE%20LAMBERT%20Y
%20BEER&f=false
https://cienciaparateacdesegundo.wikispaces.com/file/detail/colorimetria+y+fotocolorimetria.pd
f/202515924
https://sisoyyomismo.files.wordpress.com/2012/02/practica-2-instrumental-qb.pdf

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