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FACULDADE INDEPENDENTE DO NORDESTE FAINOR

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Vitria da Conquista - BA
2015

FACULDADE INDEPENDENTE DO NORDESTE FAINOR

Relatrio apresentado como parte da


avaliao da II unidade da disciplina
farmacognosia, do curso de Farmcia,
V semestre vespertino, no perodo
acadmico 2015.2, lecionado pela
Docente:

Vitria da Conquista - BA
2015

1. INTRODUO
A cromatografia em coluna foi descrita pela primeira vez pelo botnico
russo M. S. Tswett, que a utilizou para o isolamento dos pigmentos existentes
nas folhas verdes dos vegetais. conhecida como uma tcnica de partio
entre duas fases (slida e lquida), que se baseia na capacidade de adsoro e
solubilidade. O material slido normalmente utilizado a slica gel, geralmente
na forma de p; a slica um material insolvel na fase lquida associada.
Existe uma interao entre duas fases imiscveis, fase mvel e estacionria. A
grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias torna a
tcnica extremamente verstil e de grande aplicao.
A amostra a ser separada colocada na coluna com um eluente menos
polar. Os compostos da amostra so separados em tempos distintos; zonas
mveis comeam a ser formadas; cada zona conter somente um composto.
Os compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior
do que os compostos polares, tal caracterstica se da porque os primeiros tm
menor afinidade com a fase estacionria. Se o adsorvente escolhido interagir
fortemente com todos os compostos da amostra, ela no se mover. Por outro
lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os solutos podem ser
eludos sem serem separados.
Extratos vegetais so muitas vezes, misturas complexas constitudas de
diversos compostos com grupos funcionais diferentes. O espinafre um
vegetal de cores fortes constitudos por uma mistura de pigmentos, em
particular as clorofilas, o betacaroteno e as xantofilas, compostos que
absorvem luz.

2. OBJETIVO
Conhecer a tcnica de seprao de compostos da cromatografia em coluna
e analisar a separao dos pigmentos do espinafre.

3. MATERIAL
Vidrarias e acessrios
5 Bckeres de 100mL
1 Bcker de 250mL
1 Bcker de 50mL
5 Provetas de 100 mL
10 Tubos de ensaio grandes
5 Erlenmeyers de 50 mL
3 Pipetas de Pasteur
2 Esptulas
1 coluna para cromatografia ou bureta
1 Pina de metal
1 suporte universal
2 garras de metal
1 Estante de tubos
Algodo

Solues e Reagentes
Slica para cromatografia em coluna
gua destilada
ter de petrleo
Acetona
Hexano

4. METODOLOGIA

Preparou-se a fase mvel: Hexano: ter de petrleo: Acetona (50:25:25)


Foram medidos 10 mL do extrato bruto fludo de espinafre.
Colocou-se o extrato em contato com a fase estacionria na

extremidade superior da coluna.


Realizou-se a eluio do sistema adicionando aos poucos a fase mvel

preparada.
Observou-se a separao.

5. RESULTADOS E DISCUSSES
A coluna j estava preparada com slica gel e uma fase mvel
correndo para estabilizar at adicionar o extrato de espinafre que foi
triturado em contato com acetona. Em um bquer fez-se uma mistura
para fase mvel de Hexano; ter de petrleo; acetona (50; 25; 25) e
reservou. Depois que houve o empacotamento, comeou-se o
experimento. Colocou-se 5 mL do extrato do espinafre, deixou correr por
toda coluna at obter a separao das afinidades polares e apolares.
Assim como a fase estacionria apolar (slica gel para CC), observouse a separao de quem eram mais polares e teve afinidade com
polares e vice-versa. A leitura assim que estacionou a separao foi a
seguinte:
Na ponta da coluna, logo na sada encontrava-se uma cor
amarela onde nela havia betacaroteno. Na parte um pouco acima com
uma cor verde, havia clorofila A, mais acima tambm na cor verde havia
clorifila B, e logo acima onde o metablito secundrio teve mais
afinidade com a fase estacionria, sendo assim apolar, obteve-se a
xantofila. As substncias com uma elevada afinidade (clorofila) para a
fase estacionria ficam mais tempo retidas nesta, enquanto as
substncias

com

pouca

afinidade

(carotenos)

para

esta

fase

permanecero mais tempo em contacto com a fase mvel e percorre de


uma forma mais rpida a coluna.
No final da pratica foi coletada em tubos, a cor amarela que
continha betacaroteno, depois o intermedirio, logo aps, coletou-se em
outro tubo o que contem clorofila A, depois outro intermedirio, assim,
outro tubo com clorofila B, ficando retido na coluna o que seria xantofila.

6. CONCLUSO
. A pratica foi concluda com xito, sendo possvel visualizar a separao
dos componentes do extrato vegetal por cromatografia em coluna.

REFERNCIAS

Paulino, Antnio A. S.; QUMICA ANALTICA EXPERIMENTAL; ANLISE DE


EXTRATOS VEGETAIS. Universidade Federal de Pernambuco
Departamento de Qumica Fundamental Recife PE Brasil. Disponvel em:
<
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAeuusAG/relatorio-analise-extratosvegetais > Acesso em: setembro/2015.
CROMATOGRAFIA
EM
COLUNA.
Disponvel
em:
<
http://www.pucrs.br/quimica/professores/arigony/cromatografia_FINAL/COLUN
A.htm > Acesso em: setembro/2015.