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1 DE 1997
RESUMEN
ABSTRACT
In the present work is validated of
the HPLC (High performance Liquid
Chromatography) for determination of
vitamin A in special flour (Bienestarina) produced by Instituto Colombiano
de Bienestar Familiar (ICBF) as food
for Children.
In first place was used a commercial standard of vitamin A (palmitate)
of known concentration for valdation
of method: linearity, the sensiblity, the
precisin and exactness.
31
In second place was studied the improve conditions of vitamin A extraction; ofthe sample: the best weight of
sample, the best percentage of antoxidant. units of activity of a-amilase, as
well as the temperature and best time
of enzymatic activity,
Finally, two methods of extraction
were compared: the extraction lquidliquid with ethyl ether (method used of
routine in the laboratory of ICBF) and
the method of extraction sold-lquid
used the Lichrolut columns. In both
methods were evaluated the precisin,
exactness and the percentage of recuperaton.
All the variables were statistically
evaluated with a variance analysis in
one way and with Duncan test.
It was determined that HPLC method
for the cuantifcation of vitamin A, was
linear between 1.75 UI and 8.5 UL sensitive (detection limit of 2.73 X 10"'Ul.
cuantifcation limit of 1.68 UI), precise and exact. It shouid to use lOg of
sample, 5-10% of hidroquinone in relatonship to the weight of sample, as
for the parameters of enzymatic activity: 2.0 UA (units of enzymatic activity)/g of sample, 45 C and 60 minutes.
The extraction with Lichrolut is more
exact, rapid. fewer toxic and has more
vitamin A recuperation that method of
liquid-liquid extracton.
INTRODUCCIN
En 1975 el Instituto de Bienestar
Familiar (ICBF) present una formulacin la cual dio a conocer con el nombre de Bienestarina. sta es catalogada como una de las mejores mezclas
alimenticias, definindose como un aliment de alto valor nutricional. con
una formulacin tcnicamente planeada que aporta protena con un balance
adecuado de aminocidos esenciales,
contribuyendo tambin con los requcrimientos de caloras, minerales y vi-
32
METODOLOGA
Determinacin de la precisin y
exactitud del mtodo.
33
34
los niveles de recuperacin de la vitamina A en Bienestarina cruda se realizan por triplicado, en una muestra de
Bienestarina de la Planta de Paipa los
dos mtodos de extraccin estudiados;
se analiza la vitamina A por CLAE y se
realiza un anlisis de varianza de los
resultados obtenidos.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Determinacin de la precisin v la
exacttud del mtodo.
Las tablas I y 2 muestran, respectivamente, los resultados obtenidos para
determinar la precisin y la exactitud
del mtodo analtico aplicado.
Como se muestra en la tabla I el
RSD o coeficiente de variacin es un
nmero menor al determinado por el
criterio de aceptacin confirmando la
precisin del mtodo. En la tabla 2 se
muestra que el porcentaje de recupera-
19
5.21
1.21x10"'
2.33
2.77 (4)
5.00x10"' / 5.42x10"'
19
104.22
9.06
8.69
2.11
2.10
35
peso de
muestra
(g)
P. Duncan,
p=0,05
5
5
15
10
15
Hay dms
No hay dms
Hay dms
10
Peso de muestra.
La figura 1 muestra los resultados
obtenidos al analizar la vitamina A obtenida a partir de los tres niveles
diferentes de peso de Bienestarina.
La mayor recuperacin de vitamina
A se obtiene cuando se utilizan 5 o 10
g de muestra; cuando se emplean 15 g
la recuperacin es baja debido a que
esta cantdad de muestra dificulta su
manejo, presentndose prdidas durante la extraccin. Para el desarrollo de
la tcnica se decide emplear 10 g por
que la cantdad de muestra es de fcil
manejo y es adems representativa en
el anlisis de alimentos. No obstante,
en algunos casos cuando haya poca
cantidad de muestra, se pueden utilizar 5 g.
Porcentaje de antioxidante.
Se utiliza hidroquinona como antoxdante. con el fin de disminuir las
perdidas de vitamina A por oxidacin
durante el proceso de extraccin por
contacto con aire o luz o cuando se
realiza la evaporacin del solvente.
La figura 2 y la tabla 4 muestran los
resultados obtenidos al utilizar tres niveles de antioxdanle.
El anlisis de varianza muestra que
el F calculado es mayor que F tabulado
(2I4>4.46), lo que significa que existe
diferencia entre los diferentes porcentajes de antioxidante utilizados. Los
resultados obtenidos muestran que en-
15
O)
o
o
ro innn
3^ <u
z
< E
J
>
3
nn
0
m
lO
<u
o
O)
o ro
o^ m
^ 0)
3
*-< F
>
lO
36
La figura 5 muestra que con 60 minutos de actividad enzimtica se recupera la mayor cantidad de vitamina A
UA
Enzimlica
P.
Duncan
Temperatura
Temperatura
P.
Duncan
0.1
1.0
Hay dms
20
37
No hay dms
0.1
2,0
Hay dms
20
45
Hay dms
0.1
5.0
Hay dms
20
60
Hay dms
1.0
2,0
Hay dms
37
45
Hay dms
1.0
5.0
Hay dms
37
60
Hay dms
2.0
5,0
Hay dms
45
60
No hay dms
Tiempo Tiempo
(min)
(min)
P.
Duncan
10
30
Hay dms
10
60
Hay dms
30
60
Hay dms
37
2000
1500
c i:
o re
- 5
=
500H
O)
UA enzimtica
Figura 3. Vitamina A recuperada de acuerdo a las UA de
a-amilasa adicionadas a la Bienestarina.
2000
a
.-I^
rae 1500
o t
r 1000
> i
500
20
Hld
37
45
60
Temperatura grados C
O)
ro
5 -g I
>
5
.1
m
2000
1500
IOOOIH
500|
Tiempo (min)
38
y no saponifieable. La extraccin se
debe hacer despus de la saponficacin y en este caso se realiza con cinco
lavados sucesivos con ter; los resultados obtenidos del proceso se reportan
en la tabla 5 donde se muestra la precisin del sistema y en la tabla 6 la
exactitud del mismo,
Comparando los resultados obtenidos en el RSD o coeficiente de variacin con cl criterio de aceptacin dado
por las tablas estadsticas (4). este valor es mayor, lo que hace el mtodo de
extraccin con ter no preciso; los valores obtenidos en UI de vitamina A se
acercan entre s, pero se alejan del valor medio. Con respecto a la exactitud,
el tratamiento estadstico de los resultados muestra que al comparar el tcalculado con el t-tabulado el sistema
de extraccin con ter es no exacto y
slo se recupera un 51,96% a partr
del placebo de 2000 UI.
T a b l a 5. P r e c i s i n de la e x t r a c c i n
de la de v i t a m i n a A de B i e n e s t a r i n a
con t e r .
T a b l a 6. E x a c t i t u d de la e x t r a c c i n
de v i t a m i n a A de B i e n e s t a r i n a con
ter.
Precisin
N
Media
Desviacin
estndar
10
I 1 1 1.34 UI
178.24
RSD
16.0
Criterio de
aceptacin
1.9
Intervalo de
confianza.
p = 0.05
983.85-1238.83UI
Exactitud
N
10
Porcentaje (%)
de recuperacin
medio
51.96
Desviacin
estndar
18.20
RSD
35.03
t-calculado
4.33
t-tabulado
2.26
39
CONCLUSIONES
Precisin
N
Media
Desviacin
estnda
10
1628.5 UI
163.5
Exactitud
N
10
Porcentaje (%)
de recuperacin
medio
80
10
Desviacin
estndar
21.64
RSD
Criterio de
aceptacin
1.9
RSD
27.0
t-calculado
1.28
Intervalo de
confianza.
p = 0.05
1223.06-2003.32
t-tabulado
4.303
40
AGRADECIMIENTOS
Las autoras desean agradecer a la
Universidad Nacional de Colombia, al
Instituto Colombiano de Bienestar Familiar y a MERCK Colombia.
BIBLIOGRAFA
1. ICBF, Subdireccin de Nutricin.
Divisin de Investigaciones Nutricionales Informe sobre Desarrollo, Valor
Nutricional Especificaciones Tcnicas
y Produccin de Bienestarina. 1975. 23.
2. I n t e r n a t i o n a l V i t a m i n A C o n s u l t a t i v e
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