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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS


LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA
INSTRUMENTAL II

Grupo N:

Da: Viernes 16-18h


Fecha: 29/01/2016

Integrantes:

Prctica N: 13

Edison Benavides
Adriana Morales
Beln Moya
Diego Olmedo
Vernica Rueda

13. TTULO DE LA PRCTICA: CROMATOGRAFA LQUIDA HPLC


13.1 OBJETIVOS

Conocer el mtodo de cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC)


Estudiar las aplicaciones cuantitativas de los mtodos de HPLC
Analizar una mezcla de vitaminas hidrosolubles y cido flico
Determinar la concentracin de cido ascrbico en una forma farmacutica

13.2 TEORA
13.2.1 Fundamento
Se basa en los principios conocidos y estudiados en el mtodo clsico de la
cromatografa lquida en columna, para acelerar el procedimiento se requiere de
instrumentos complejos que mejoran tambin su eficacia. Por esta razn se utiliza a
veces el nombre de cromatografa lquida de alto rendimiento (highperformance
liquidchromatography). (Skoog, 2001)
13.2.2 Consulta
Diseo y funcionamiento de un Cromatgrafo HPLC
DISEO: Con objeto de alcanzar un caudal de eluyente razonable con rellenos de
tamao de partcula entre 3 y 10 m, que, por otra parte, son comunes en la moderna
cromatografia de lquidos, se requieren presiones de algunos cientos de kilos por
centmetro cuadrado. Como consecuencia de estas elevadas presiones, el equipo
necesario para la HPLC tiende a ser ms sofisticado y caro que el que se utiliza en otros
tipos de cromatografa.
Los componentes bsicos de un cromatgrafo de lquidos de alta eficacia son:

Dispositivo de suministro de eluyentes (bomba y dispositivo de mezclado de


eluyentes).
Dispositivo de inyeccin
Conducciones y conexiones
Detector y registrador
Columna

(Andonaegui, 2006)
FUNCIONAMIENTO:
La cromatografa liquida de alta eficacia se encuadra dentro de la cromatografa de
elucin. En esta, el lquido (fase mvil) circula en intimo contacto con un slido u otro
liquido inmiscible (fase estacionaria); al introducir una mezcla de sustancias (analtos)
en la corriente de fase mvil, cada analto avanzar a lo largo del sistema con una
velocidad diferente que depender de su afinidad por cada una de las fases. Esto supone
que despus de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las
sustancias introducidas en el sistema eluir con un tiempo diferente, es decir, estarn
separadas. (Parra, 2010)

13.3

Tabla de datos
Tabla N1 Datos experimentales
Sustancias
rea (mAU*min)
Estndar 1
437,9140
Muestra 4
180,3660
Para muestra
mm=0,1014 g
m(12 pastillas) =17,9336 g
Para el estndar
mm=0,1 g
m pt=1,79 g
md =0,5 g
Elaborado por Rueda y otros

Ret. Time, min


1,100
1,087

13.4

Clculos y Resultados

Preparacin del estndar


Calculo de la masa de estndar

mst =

md mm
mpt

mst: masa de estndar


md: masa declarada de principio activo
mm: masa de muestra
mpt: peso promedio de las tabletas

mst =

0,50,1 g
1,79 g

mst 1=0,2234 g

Para la concentracin de cido ascrbico en la muestra:


Clculo de la concentracin del estndar
1.7900 g de pastilla 500 mg de cido ascrbico.
0.1014 g de pastilla X mg de cido ascrbico.

X= 28,3240 mg de cido ascrbico.


Aforando a 100 ml:
C st =

28,3240 mg
=0.2832mg/ml
100 ml

Clculo de la concentracin de vitamina C

C M=

C ST x A M
AS

CM = concentracin de la muestra
CST = concentracin del estndar
AM = rea del pico de la muestra
AST = rea del estndar
C M=

( 0,2832 mg/ ml ) ( 180,3660 )


437,9140

C M =0.1166 mg/ml
Clculo de la concentracin de cido ascrbico
C x=

0.1166 mg 100 ml

1 ml
1 ml

C x =11,66 mg
Para la concentracin de cido ascrbico en la muestra:

0,1014 g de pastilla 11,66 mg de cido ascrbico.


1.7900 g de pastilla X mg de cido ascrbico.

X= 205,83 mg de cido ascrbico.

Clculo del porcentaje de error


Error=

500 mg205,83 mg
100
500 mg

Error=58,83 59

13.5

Grficos

Grfico N1.- Cromatograma del estndar

Grfico N2.- Cromatograma de la muestra

13.6

Discusiones
* La cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR), garantizan lmites de
deteccin y cuantificacin ms bajos, que facilita adems la eliminacin de los
efectos causados por la matriz (interferencias en otras mtodos de anlisis); esta
tcnica se utilizan como herramienta esencial en los estudios cinticos.
* La metodologa de trabajo con formas farmacuticas slidas, implica tomar una
muestra representativa de la forma terminada, que por trituracin y
homogenizacin en un mortero se convierte en polvo fino. A partir del clculo
del peso promedio y conociendo la dosis de las tabletas, se puede conocer con
exactitud la cantidad de polvo de tabletas que equivale a la concentracin de
analito que tericamente se debe analizar.

13.7

Conclusiones
* Se obtuvo como resultado de la concentracin igual a 205,83 mg/mL de cido
ascrbico en la muestra de la tableta.

* El mtodo utilizado no present efectos de matriz dadas las condiciones de


acidez que favorecen la estabilidad del cido ascrbico.
* El cido ascrbico es soluble en agua, mientras que los restantes componentes
de la matriz son sustancias auxiliares totalmente insolubles. Teniendo en cuenta
la polaridad de la fase mvil empleada, se impone introducir pasos previos que
permitan separar estas sustancias insolubles del analito
* Las tabletas no presentaron seales analticas adicionales, lo cual se evidenci
en los cromatogramas, donde solo se obtuvo el pico correspondiente al analito.
estos resultados se confirmaron desde el punto de vista cuantitativo. Las tabletas
analizadas presentaron adecuada estabilidad en el envase.
13.8

Bibliografa

Andonaegui, M. T. (2006). CALIFICACIN DE EQUIPOS HPLC Y


VALIDACIN DE METODOLOGIAS ANALITICAS . Obtenido de
http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8248/4/T4cromatliquid.pdf

Parra, G. (2010). Cromatografia de liquidos de alta eficiencia. Obtenido de


http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/
cromatografia_liquida_de_alta_eficacia.pdf

Skoog, D. (2001). Principios de anlisis instrumental. Madrid: Edigrafos


S.A.

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