MANUAL DE PRCTICAS

DE LABORATORIO

Cromatografa
de Capa Fina
para compuestos
extrados a
IBT
FICHA TECNICA

Bioprospeccin

FICHA TCNICA
Ingeniera en biotecnologa
Fecha:
Nombre del
catedrtico:
Nombre de la
prctica:

Nadia Romero Martnez

Cromatografa de Capa Fina para compuestos

orgnicos a partir de tejido vegetal

Clave:
Nmero de prctica:
Justificacin:
Objetivos/Resultados
de aprendizaje:

Duracin en
horas:

Utilizar tcnicas de separacin para la

identificacin parcial de una muestra
-

Conocer las tcnicas de cromatografa en

capa fina, sus caractersticas y los
factores que en ella intervienen.
Aplicar la tcnica de cromatografa en
capa fina como criterio parcial de
identificacin de sustancias
Evaluar los mtodos de extraccin
utilizados durante el curso.

Laboratorio donde se desarrollo de la prctica:

Laboratorio IBT-LT2
Actividades a desarrollar:
Calcular valores de RF de las sustancias extradas de metabolitos
vegetales, deducir a travs del RF la relacin que existe entre la polaridad
de las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
Evidencia a generar en el desarrollo de la prctica:
Entrega del reporte de la prctica con los resultados y las discusiones
correspondientes

COMPETENCIAS
Capacidad de trabajo individual y
en equipo
Aplicar integralmente de los
conocimientos previos en la
prctica
Aplicar tcnicas para la

HABILIDADES
Disea metodologas en donde
puedan hacerse mejoras a los
protocolos establecidos.

caracterizacin qumica,
estructural y funcional de
compuestos de inters
biotecnolgico.

Habilidad en la manipulacin de
instrumentos y equipo de
laboratorio.

Actualiz:

Revis:

INTRODUCCIN

Para su introduccin, desarrolle de una manera coherente y continua (no

debe poner las preguntas y sus respuestas, todo debe quedar distribuido
en uno o ms prrafos), las respuestas a las siguientes preguntas:
Qu es la cromatografa en capa fina?
Cules son los componentes de la cromatografa en capa fina?
Mencione las aplicaciones de la cromatografa en capa fina
Qu indica el factor de retardo, RF?
Cmo se calcula el factor de retardo, RF?

OBJETIVO
Conocer la tcnica de cromatografa de capa fina, sus caractersticas y el tipo
de metabolitos que se pueden identificar.

MATERIAL
ESPECIFICACIONES
MATERIALES REQUERIDOS
POR
EQUIPO
2
1
2
1

CANTIDAD
Placas de Cromatografa
1 probeta de 25 mL
Tubos Capilares
Frasco cmara (o vaso de precipitado
con vidrio de reloj para tapar)
Papel Filtro

1
1

Pizeta
Pinzas de diseccin
ESPECIFICACIONES
EQUIPO REQUERIDOS
NOMBRE
Campana de Extraccin
Lmpara Luz UV

MATERIAL

ESPECIFICACIONES

OTROS MATERIALES REQUERIDOS

(No suministrados por el Laboratorio)
CANTIDAD
Papel Aluminio
Lpiz
Regla
Guantes de Ltex
Sanitas
Tijeras

REACTIVOS REQUERIDOS
NOMBRE

CANTIDAD

Hexano

50 mL

Cloroformo o acetato de etilo

50 mL

Metanol

50 mL

S: Riesgo a la Salud I: Riesgo de Incendio

O:especificaciones

R: Riesgo de reactividad

Manejo y disposicin de los reactivos requeridos:

Los disolventes utilizados sern evaporados a condiciones ambientales
Los desechos biolgicos utilizados sern esterilizados fuera de la
institucin

Nombre del
reactivo
Hexano

Cloroformo

Acetato de
etilo

Datos importantes de la ficha tcnica

Incendio- Altamente inflamable Evitar las llamas, no
producir chispas y no fumar.
Explosin- La mezclas vapor/aire son explosivas- utilizar un
sistema de ventilacin (extractores).
Inhalacin- produce vrtigo, somnolencia, dolor de cabeza,
nuseas, debilidad.
Piel enrojecimiento y dolor (utilizar guantes).
Ojos- enrojecimiento y dolor (utilizar lentes).
Ingestin dolor abdominal (no comer ni beber).
Almacenamientoseparado
de
oxidantes
fuertes.
Mantener bien cerrado.
Envasado desechos no halogendos
Propiedades fsicas:
Punto de ebullicin: 69C
Punto de fusin: -95C
Densidad relativa (agua = 1): 0.7
Solubilidad en agua, g/100 ml a 20 C: 0.0013
Presin de vapor, kPa a 20C: 17
Densidad relativa de vapor (aire = 1): 3.0
Incendio- Altamente inflamable Evitar las llamas, no
producir chispas y no fumar.
Explosin- La mezclas vapor/aire son explosivas- utilizar un
sistema de ventilacin (extractores).
Inhalacin- produce vrtigo, somnolencia, dolor de cabeza,
nuseas, debilidad, tos y dolor de garganta.
Piel rpida absorcin, enrojecimiento y dolor (utilizar
guantes).
Ojos- enrojecimiento y dolor (utilizar lentes).
Ingestin dolor abdominal (no comer ni beber).
Almacenamientoseparado
de
oxidantes
fuertes.
Mantener bien cerrado.
Envasado desechos halogendos
Propiedades fsicas:
Punto de ebullicin: 62C
Punto de fusin: -64C
Densidad relativa (agua = 1): 1,48
Solubilidad en agua, g/100 ml a 20C: 0,8
Presin de vapor, kPa a 20C: 21,2
Densidad relativa de vapor (aire = 1): 4,12
Incendio- Altamente inflamable Evitar las llamas, no
producir chispas y no fumar.
Explosin- La mezclas vapor/aire son explosivas- utilizar un

Metanol

sistema de ventilacin (extractores).

Inhalacin- produce vrtigo, somnolencia, dolor de cabeza,
nuseas, debilidad, tos y dolor de garganta.
Piel enrojecimiento y dolor (utilizar guantes).
Ojos- enrojecimiento y dolor (utilizar lentes).
Ingestin dolor abdominal (no comer ni beber).
Almacenamientoseparado
de
oxidantes
fuertes.
Mantener bien cerrado.
Envasado desechos no halogendos
Propiedades fsicas:
Punto de ebullicin: 77C
Punto de fusin: -84C
Densidad relativa (agua = 1): 0.9
Solubilidad en agua: Muy buena
Presin de vapor, kPa a 20C: 10
Incendio- Altamente inflamable Evitar las llamas, no
producir chispas y no fumar.
Explosin- La mezclas vapor/aire son explosivas- utilizar un
sistema de ventilacin (extractores).
Inhalacin- produce vrtigo, somnolencia, dolor de cabeza,
nuseas, debilidad, tos y dolor de garganta.
Piel rpida absorcin, enrojecimiento y dolor (utilizar
guantes).
Ojos- alteraciones en la vista al contacto, enrojecimiento y
dolor (utilizar lentes).
Ingestin dolor abdominal (no comer ni beber).
Almacenamientoseparado
de
oxidantes
fuertes.
Mantener bien cerrado.
Envasado desechos no halogendos
Propiedades fsicas:
Punto de ebullicin: 65C
Punto de fusin: -98C
Densidad relativa (agua = 1): 0.79
Solubilidad en agua: miscible
Presin de vapor, kPa a 20C: 12.3
Densidad relativa de vapor (aire = 1): 1.1

PROCEDIMIENTO O METODOLOGA
PARTE I (CONTINUACION DE LA PARTE I DE LA PRACTICA 1)
5. Despus del tiempo de reposo, filtre el contenido del matraz
utilizando papel filtro para evitar el paso de slidos.
7. Se guarda una alcuota para realizar la cromatografa.

8.- Se guardan las extracciones para evaluar actividad antimictica en

los hongos aislados de la materia Biotecnologa de recursos naturales.

PARTE II PREPARACIN DEL FRASCO CAMARA

Las placas de cromatografa estn compuestas de una pelcula delgada
de adsorbente polar unida a un soporte slido, en la mayora de los
casos un polvo fluorescente es aadido a la mezcla para ayudar a la
visualizacin.
1. Para armar el frasco cmara coloque un crculo de papel filtro
pegado a la pared del frasco.
2. Aada de 5 a 10 mL de solvente, o hasta que alcance 8 mm
aproximadamente.
3. Humedezca el papel filtro con el solvente. Deber quedar a una
altura de 5 a 8 mm (este papel asegura que el aire este
saturado con vapor de solvente, previene la evaporacin de
solvente de la placa).

4. Recorte un crculo de papel aluminio y colquelo sobre el vaso

de precipitados.
PARTE II PREPARACIN DE LA PLACA
Nota: Siempre utilice lpiz para marcar las placas, la tinta de las plumas
es soluble en solventes orgnicos y corrern junto a su muestra. Marque
las placas del lado opaco (este lado est cubierto con el adsorbente).
Utilice guantes y maneje las placas por las orillas nicamente.
5. Marque con el lpiz una lnea a 1 cm de la base de la placa, en
esta lnea indique cual los puntos de aplicacin de la muestra.
(Los puntos de aplicacin no debern estar cerca de las orillas
de la placa, ni muy cerca uno del otro).
6. Para colocar su muestra humedezca un tubo capilar en el frasco
con su muestra, y toque ligera y rpidamente la muestra en la

placa. Espere a que el solvente se disuelva antes de volver a

tocar la placa con el capilar. Con uno o dos toques ser
suficiente.
PARTE III REVELADO DE LA PLACA
El sistema deber quedar ensamblado como se observa en la figura.
7. Utilice las pinzas para colocar la placa en el frasco (asegrese
que el solvente este por debajo de los puntos de aplicacin de
muestra).
8. Tape el frasco hermticamente. (Si utiliza vaso de precipitado,
tape con papel aluminio).
9. Vigile el frente de corrida del solvente, que no se acerque ms
de 5 a 10 mm del borde de la placa.
10. Cuando el solvente ha llegado a una altura apropiada,
remueva la placa y dibuje una lnea donde haya sido el frente
de la corrida
PARTE IV VISUALIZACIN DE LOS PUNTOS
11.
12.
13.

Coloque la placa debajo de la lmpara de luz UV

Encienda la lmpara y marque el o los puntos con un lpiz
Calcule el valor FR

Para el reporte de resultados, comparta y compare los resultados de

visualizacin de cada equipo. Relacione valores de F R con los solventes
utilizados durante la extraccin. Analice diferencias, determine que
solvente ser ms conveniente utilizar para la cromatografa. Busque la
informacin etnobotnica completa relativa a su planta de estudio,
particularmente si algn compuesto de la planta ya ha sido estudiado,

en cuanto a su funcin biolgica y posible utilizacin, adems de su

caracterizacin qumica y estructural. Referencie cada dato.

EVIDENCIAS DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

DURANTE LA PRCTICA
ntrega del reporte de la prctica de laboratorio

Entrega del diagrama de flujo del procedimiento en la bitcora antes

de la prctica

DISCUSIN
CONCLUSIN

CUESTIONARIO
1. Cul es la polaridad de las sustancias y polaridad de los eluyentes?
2. Cul es el Rf reportado para el principal metabolito de tu extracto?
3. Menciona al menos tres tipos de fase estacionaria y que metabolitos
extraen principalmente.

BIBLIOGRAFA
Tiwari P. et al, Phytochemical screening and extraction: A review, (2011)
INTERNATIONALE PHARMACEUTICA SCIENCIA, Vol. 1 Issue 1
Poole C.F., Chromatography, (2000) ENCYCLOPEDIA OF SEPARATION SCIENCE,
Academic Press, ISBN: 9780122267703
http://ocw.mit.edu/resources/res-5-0001-digital-lab-techniques-manual-spring2007/videos/tlc-the-basics/