ESTUD lO

DE LAS MICOSIS
SUPERFICIALES EN CONEJOS

ESTE TRABAJO HA SIDO REALIZADO EN

LA CATEDRA DE MICROBIOLOGIA DE LA
FACULTAD DE F A R w l A DE BARCELONA
BAJO LA DlRECClON DE LA DRA. Ma. A.
CALVO TORRAS.

INTRODUCCION

Las micosis son enfermedades causadas por hongos que se desarrollan en hombres y animales.
Los factores que favorecen la implantacin de una micosis pueden
dividirse en dos grandes puntos: intrinsecos y extrnsecos, segn dependan directa
o indirectamente del husped. Entre los primeros citaremos la edad y las alteraciones del metabolismo, entre los segundos la humedad, la administracin de antibiricos, las intervenciones quirrgicas, etc.
.\unque fiinJamentalmentc \c. di\.iden en ruperficiale$ !. profundas.
aleuno5 autores c o n d e r a n las su~erficialt%
suldiviJiJas en cutincds wljcutdncds.
afendiendo a la zona sobre la que'se instauran.
Las micosis superficiales son infecciones de los tejidos epidrmicos
humanos y animales causados por un grupo de hongos miceliares especializados
denominados dermatofitos. Estos microorganismos parasitan todos los tejidos
queratinizados del cuerpo (piel, cabello y uas) y habitualmente pueden digerir esta
proteina.
Algunos de estos hongos pueden crecer dentro de los tejidos superficiales causando escozor o prurito y enrojecimiento de la piel.
Los dermatofitos son incapaces en general de invadir los tejidos
subcutneos o ms profundos, probablemente debido a !os factores inhibidores
del suero y dems fluidos del cuerpo.
Estos hongos estn ampliamente distribuidos, pero algunas especies estn limitadas geogrficamente. Todos tienen huspedes de preferencia.
Algunos son parsitos animales (zooflicos), otros casi exclusivamente humanos
(antropoflicos). mientras que otros se encuentran principalmente en el suelo y
raramente infcctan a animalcs y hombres (geoflicos).
Las infecciones superficiales comunes de la piel. pelo y uias se
conocen como rias o dermatofitosis.
Los hongos se localizan en las capas superficiales de la piel, sobre
todo en los folculos pilosos.
Algunas especies invaden el pelo ya en el foliculo, por lo cual son
llamadas endotrix, mientras que otros forman masas de esporas en la superficie
del pelo que se introducen hasta el folculo y constituyen una especie de cubierta,
recibiendo el nombre de ectotix.
Las esporas pueden ser pequeas o grandes segn la especie a la que
pertenezca el hongo, pero en todos los casos se produce la muerte del pelo.
El hongo se desarrolla tambin en las capas superiores de la piel
y se extiende por debajo del epitelio.
En las partes con escaso revestimiento cutneo, la tia se manifiesta
por una inflamacin superficial con poco exudado, aunque la proliferacin epitelial
es intensa, originando una serie de escamas que pueden formar costras.
En las zonas cutneas cubiertas de pelo, la lesin se caracteriza
inicialmente porque stos se aglutinan, hacindose despus quebradizos, hasta
que se rompen, dejando un rea tonsurada.
La tia se transmite por las esporas del hongo parsito, siendo el
contagio directo lo ms corriente, bien de conejo a conejo. bien de ratas, ratones
y otros animales. Tambin el hombre es sensible a esta enfermedad, pudiendo

133

infectarse de aqul o viceversa.

Los gneros descritos como principales productores de la tia
son: Trichophyton, Epidennophyton, y Microsporum. y a ellos nos referiremos
a continuacin.
CARACTERUACION DE LOS DERMATOFITOS.
Los dermatofitos son hongos miceliares que hasta hace muy poco
tiempo estaban clasificados como Deuteromicetos (Hongos imperfectos).
De algunas especies se sabe ahora que se reproducen sexualmente.
produciendo ascosp&as. ~ n - e s t ecaso se clasifica en la iamilia GYMNOASCA:
CEAE de la Clase ASCOMICETOS.
La mayora de los dermatofitos producen dos tipos de conidias
(aleurisporas) cuando crecen en un cultivo artificial: microconidias (cronidias
pequeas y unicelulares), y macroconidias (grandes y septadas).
El estado perfecto de las especies Microsporum que poseen reproduccin sexual pertenecen al gnero Nannizzia. y las especies de Trichophyton
al gnero Arthrodenna.
Debido a que los dermatofitos presentan generalmente la misma
apariencia en los exmenes microscpicos, la identificacin final puede hacerse
solamente mediante el cultivo en un medio adecuado.
Por este motivo, describiremos ahora los tres gneros, as como
tambin aquellas especies que se consideran ms importantes.
GENERO EPIDERMOPHYTON.
Este gnero presenta macroconidias grandes, de paredes lisas,
fusiformes u ovaladas. Son multiseptadas y nacen en gmpos de dos o tres. Su
tamao es de 20 - 40p x 6 - 8 p y estn constituidas de 2 a 4 clulas.
No produce microconidias. Las hifas espiriladas son escasas y
generalmente desarrollan numerosas clamidosporas.
Cuando se cultiva en Agar-Saboureaud crece muy lentamente.
Al principio es de un color blanco amarillento y tiene aspecto aterciopelado,
observndose unos radios centrales de color verde amarillento caracterstico. El
reverso de la colonia es de color amarillo.
Al cabo de algunas semanas las colonias desarrollan un micelio
areo de color blanco que cubre completamente la superficie de la colonia, por
lo que podemos considerar que se trata de un hongo pleomrfico.
Este gnero es monotpico, y su importancia clnica radica nicamente en la especie Epidennopbyton floccosum. Este hongo ataca la piel, pero
nunca el pelo ni las uas.
GENERO MICROSPORUM.
Este gnero se caracteriza por presentar macroconidias equinuladas, multiseptadas y de tamao variable. Son fusiformes y ovaladas y nacen indi-

vidualmente de las hifas. Miden de 5-100 p x 3-8 p y estn constituidas por i 2

a 15 clulas.
Las macroconidias pueden ser escasas o numerosas segn los cultivos.
Las microconidias son piriformes y ovaladas y miden de 3-7 p.
Nacen de las hifas y pueden ser ssiles o emerger de cortos asterigmu.
Culrivados en Agar-Saboureaud pueden crecer rpida o lentamente.
Producen un micelio areo abundante, aunque pueden ser aterciopelados o algodonosos segn la especie. El color es variable. Pueden ser blanquecinas. amarillentas o marronceas, presentan tonalidades muy diversas en el reverso de la
colonia.
Se han descrito catorce especies del gnero Microspomm, siendo
la especie tipo el M. audouinii.
Dado tambin el inters clnico de M. canis y M. gypseum, describiremos a continuacin las caractersticas morfolgicas diferenciales de todos
ellos.
Microspomm audouinii (M. langeronii, M. rivalierii)
Estado perfecto: desconocido.
Es un hongo anrropofilico que crece lentamente en Agar Saboureaud, produciendo una colonia de aspecto plano y de color gris. crema o tostado.
El reverso es rosa salmn. o bien marrn rojizo.
Presenta hifas areas cortas de superficie radial. Las hifas son
normalmente estriles y las clamidosporas son ocasionales.
Las microconidias son escasas a menos que se utilicen medios
enriquecidos. Son pequeas y fusiformes, y nacen lateralmente o terminalmente
en conos pedicelos. o bien son ssiles.
Las macroconidias normalmente estn ausentes, pero algunas
cepas pueden producirlas en pequeo nmero. En el caso de que aparezcan, son
grandes e irregularmente espiriladas. La pared es gruesa y la superficie puede ser
lisa o equinulada. Muchas veces se observan formaciones iniciales o macroconidias.
Microsporum canis (M. lanosum, M. equinum, M. felineum).
Estado perfecto: desconocido.
Es un hongo principalmente zoofilico, y es la causa ms comn

de tia en perros y gatos en los Estados Unidos. Los nios y los adultos adquieren la enfermedad a travs del contacto con los animales infectados.
En Agar Saboureaud. M. canis crece rpidamente. La colonia es
blanca, esponjosa, tornndose sedosa y con un pigmento amarillo brillante en
la periferia.
Al cabo de dos o cuatro semanas el mecelio areo es denso, algodonoso y tostado, y muchas veces se agrupa o forma anillos concntricos.
El reverso es al principio amarillo brillante, volvindose ms tarde
anaranjado - marrn. Algunas cepas no muestran pigmentacin en el reverso.
Las microconidias son fusiformes, pequeas y normalmente son
menos numerosas que las macroconidias.

Las macroconidias son grandes, fusiformes de 35-1 10 y x 12-25 Y,

con ms de 14 septas. La pared es gruesa, de ms de 4 y y la superficie es verrugosa.
No precisa requerimientos especiales para su desarrollo.

Microsponim gypseum.
Es un complejo de especies. Estado perfecto. Nannizzia gypsea
y Nannizzia incuruata.
Se caracteriza por ser un hongo saprfito del suelo (geoflico),
que en raras ocasiones afecta a hombres y animales. Es ms frecuente en perros
y caballos.
En Agar Saboureaud crece rpidamente, apareciendo primero una
colonia lisa y despus granulosa de borde irregular y de color ante o rosado. El
reverso vara entre rosado y color canela.
Las macroconidias son numerosas, elipsoides o fusiformes, de
25-60 p x 8'5-15 y, con ms de cinco septas y pared de ms de 1'2 )i de grosor.
Las microconidias son escasas, fusiformes, ssiles o naciendo de
cortos pedicelos de 1'7-3'3~1x 3'3-8'4~.
No precisa requerimientos especiales para su desarrollo.
GENERO TRICHOPHYTON.

Los Trichophyton son los ms importantes productores de tina.

La mayora de las especies cosmopolitas son antropofilicas, aunque hay tambin un gran nmero de zoofilicas.
Las macroconidias son de paredes lisas y fusiformes. Nacen aisladas o en grupos.
Se han descrito aproximadamente unas veinte especies de las
que presentan mayor inters las siguientes. Trichophyton concentricum, T. tonsurans, T. vemcosum, T. equinum. T. fluviomuniense, T. megninii, T. erinacei,
T. nrbmm, T. schoenleinii. T. simii, T. soudanense. T. aiolaceum, T. yaoundei,
T. mentagropbytes, T. plicatilis, T. terrestre.
Algunas de estas especies presentan variedades, tal es el caso de
T. mantagrophytes, que tiene la variedad Trichophyton mentagropbytes var.
quickeanum y T d o p h y t o n mentagropbytes var. interdigitales.
Dada la importancia clnica de este gnero. en los cuadros siguientes, se detallan las caractersticas fundamentales de identificacin de las especies
ms comunes.

NOMBRE

ESTADO
PERFECTC

AFECCION

LOCALIZAClON

1)esconoeido

Tia tonsunnte
e inflnmatoria

En euem cabdudo. Nunen en piel

(Antmpofilico)

Desconocido

Tia imbrieatr

Eacamla en Ir piel
Fabrica galeri- debajo de la epidcr.
mis en @le,
y piel Inmpis. No
ataea cuero cabelludo

T. rulinim
(Endotrix)

T i h . herpra circi-do. Ataca el pelo de IP barba

Eucm cabelludo.
epidemis, unas y
pelos de la barba
(Antropofilieo)

Tia superficial en
la piel y en la una.
pmdueicndo a veces exudado

En piel y t:n uilax.

Raraniente rn eabeUo
(Antropofflieo)

T i a y btionea en
piel y u n a

mn esetulai

En euem eabellu-

fi-

vicaa y en epideimis y uilar

(Antmpofiko)

T. y*uu,tdei
(Endotrix)

REPARTICIOP
GEOGRAFICP
Cosmomlita

Afriea, erpeeialmente Congo. Asia, Ami

rica del Sur y O c e m

Cosmopolita
(Raros casos en Afr
c a d d Norte)

Tuia y leaiones
en epidermis

Cuero cabeUudu y
epidemia
(Z0ofilim)

Tia y herpes
cicioado

Cucru cabelludo
y epidemia

Europa y Ruanda
Burundi

Tia y lesionas
en piel

Curro d i r u u d o
y epidermis

Cosmopolita

Tina y lesiones
en pid

Curro clhelludo

No palogeno para

No patiigeno

y epidermk

Cosmopolita

el hambre
T. mEntag0
phy tea

Arthmderma
benhnmise

Desconocido

H e r p cidnado
querion y tia

Cosmopolita

NOMBRE

FORMAS DE
ESTADO
PARASITARIO

INOCULACION
EXPERIMENTAL

MEDIC
DE
CULTIVO

Abundantes M a s tsbicsdas eon aitmsporas cuadradas y en cadenas paralelas d eje del pela.

s e inocula al cobayo y ps.

dcce I i enfermedad como
cl hombre

Agar mal
tosldo di
Sabouwaud coi
Cloromiceti~.

X hoeula al conejo m.,

bre la piel depida y a
los 10 das aparece una
placa que ae extiende en
linias paralelas.

Los pelas contienen sbun.

dmtes esporra en udmns
redondeada8 y muy rehingentis. Las eseamu
tienen Mas.

Produce trieofitosis al eo.

bayo. CONEJO, puro y
gato.

Fermenta la glucosa,
malasi. gnlactosl y
mmitol.

Maomeonidine co racimos
s lo kgo de la has y a rcECS en forma de moslieo,
con pequea8 artoaporas.

Al e o h y o le produec ledone8 en k piel. Losdcm& inimnlcs de laboratoti0 m padenn la enfer-

N.E.

medad.
En las es-u
y pelos
se ven cade- de micelios a lo l i g o del pelo,
con oonidias rretaegulares
dentro del mimno.

T. pliutilis.

Se h a c u l a d ratn. frieciohndole k cola en la

que reproduce h enfermadad. Por r i s digestiva pmduce esctula. en la cabeu.

Se ven hifss tsbicrdas.

Artrosporas cuadradas y
rn rrdenaa, y en el pelo
se ven burbujas de &e.

Al cobnyo le prduee lesin efitematosl. Al p u m

y al ratn blann>.lcsiones
fvieae.

En e1 pelo. el micelio englobn las espora en =denui paralela al eje del

M m o . Cooidim cuadradas. En Isa escunas mireLio ramificado eon m<r
poras en eidelus.

SEh ~ m i t fcilmente
e
a L.svca.cobayo, CONEJO y ratn comn. pmduriendo lesiones firiias.

Abundantes micracanidi.&

Pmdu~
tina al eobnyo
y CONEJO aimn.

No fermenta los medios szuearados.

No fermenta los azUIa

N.E.

NOMBRE

FORMAS DE
ESTADO
PARASITARIO

EXPERiMENTAL
TlVO
Produce 13 enf~rmeilnilal
m b s y o y CONEJO conin

N.E.

.4uar rivaltosado ,Ir

Salioureaud con

cloromicoma.

i. menta~rophyles

No la padeer el hombre

Pitbgeno para animalea

dr pdo.

Cunidiss pcqunias y

La imculacibn al perro.
gato y C O N E J 0 , l ~ p r n duce lesiones can dope-

artroliporns.

eis.
Esporas 5 8 y fomamlo
una v a h . o en eidonaa
aisladasen Ir superficie
del p d o .

'N.E.: No ensayado.

Agentc causal de La tia

en caballos. Ocasional.

te puede infectar al hom.

bre y otros animdes.

N.E.

Fermenta la glucosa
y g?laelosa y NO la
lartusa, rrahinosa y
rafinusa.
K.6;.

iOMIRE

COLOR
CULTNO

MEDIAS

T
Bhnw o emma
Dcapua pasa a
csneh y a veces
violeta chro.
Reroso mari.
llrnto o rojizo.

Maemronidias
irrwlsrre en
fonnr y t m s b
de 28 r 10 u.
Micmeonidias piiiiomcr de 3'6 x
1'2 p.

CULTNO
A Ta.
AMBIENTE
Loa mimo ca-

CULTNO A 370.C.

Cultivo lenta. La mlonh ac

hace gigsntc al principio, dca.
pua pulvenilenta. pudiendo o
o no presentarse criter central.
Mscromnidhs eseasas, eilindricaa. pkiiomes y
mente eurvadss. w n 2.3 ciu.
im y a reces 5.7. Micioconidiis es racimos o rn cadenas.
Alrrgadas cuardo 8on jvenes
E irresilares en forma y lamaRo cuando ain viejas. Supi.
cic de i n p s t o coebrifomc.
Circe pobremente eo mdios
carente8 de vitamim. Crsimiento eatimuhdo por Tmi-

m.
De gris n m m 6 n
y el reverso de
mas s mamn.

% ~ u l t i vd
r y
: d a mucho en
:"dcasnouuse.

Colonhe de tipo cmebiifome

Apaieeen r los 20-30 diaa.
Son parecidas i las dc T. schacnlein. E u a macriwnWa
y abundantes miemmnidius
de tipo pirifome. Las wlons
tienen rcrue y ton glabras.

Bhnw que pasa

vbYcm.
Rcrdel mismo mlor.

Los mimos uieteres que a

Crece bien pero m n lentitud.

EB &ante r loa 15-25 dias.
redondeda y atereiopumda.
D i o i d e y con aircos radiados. Cuando san viejos pueden
dcasrmllu u- incoloras w n
hifas a u e de mlor gikcm.
Algulu~cepa careoen de pkmento m su primer sisiamiento. O m i a d m e n t e hay damidosporas. Mimwnidiis esc.m, Maoomnidiis ausentes
en la mayora de loa medios.
Crecimiento pobre en m&s
cnientea de vitmiius. La thmina estimula d crecimiento.

i rojo

17O.C.

NOMBRE

COLOR
CULTIVO

MEDIAS

Comienza do m.
lo, blanco y dcspus rojo. rever.

CULTIVO
A Ta.
AMBIENTE

CULTIVO A 370.C.

Loa mimas ca.

rieteiesquea
37%.

Crecimiento lento. Algodono.

sa y atereiopelada con aireos
radiales. Poca miorooonidiat
quc meen lateralmintc a la
h q o de l a hifm no diferenciadan. Mucha maerownidias dr
paredes l b s . aiqadoa y reetanguiares, con 3.8 tabiques,
Micelios c hifas en raquetas, y
elmidosporao.

Los mismos earicteres que a

37O.C.

Cultivo lento. Colonla eom.

pacta. lisa y plegada. No hay
macromnidias y las micmio.
nidkamn eamr Sr
ven muchas dunidosporss E
hifw en forma dc candchhm.
Cultivo auperlieisl y pmfundo.
I A ~wlonio viejas pueden do.
-Uu
hifas blnnoa. pulvenilentas en a @ ~ s zonas dc
1. aiperficic. La Tiamini eati.
mula el crecimiento.

m. rojo.vino. AlgUM8 Cepa1 pTCsrntan en el reve

m pigmento difu
lanoide.

Color cirm. Des,

puis p l a s viole.
ta. Rcv.rm de m
lor violeta claro.

Septoa de 2 0 5 0 :
5.8 u Micmconidksda 1'5 x 4 u .

Los mismos =aricterca que a

37C.

Las colonias aparecen a las 2-3

semanas. Las M a son areo.
Numerosas clamidnapora~-0cadenadas. Las rnicmconidias
son escu<sa. Naceo hteralmen.
te dc las hiui y no racimos.
MnemmNdias muy esusas de
3 5 dlulra, de tnmpo variable
Y paredes lieas. En medios
emiqueoidos m n Timini, el
mirelio es ms regular y Ls.
mirrownidias pueden ser numerass. No neecn en medios urente8 de vitmuo.
Algunas cepas requieren tiamina. Y otras Tiamini c Inositol.

Primero blanco y
de~puu. rosado.
Rcverm rosl. No
difunde el color
11 agar.

Miemconidias de
35 x 3-6 u.

Los manos arieteiesque n

37%

Cultivo fcil. Colonia aterciopeladas y algodonosas mn mme radiados. Hifsa tibieadss

con abundantea elunidoapor~s
Miemconidias fuafomcs. p.
queBra y en racimos. No hay
macmeonidias. Pua que se
deRamiien hay que cultivar cn
Aw t l j p t o ~ .glueomdo. Son
daviformes. de puedes del@.
d a y con 2 8 cluhs.

IOMIRE

COLOR
CULTIVO

MEDIDAS

CULTIVO
A Ta.
AMBIENTE

CULTIVO A 370C.

Blanco

Coloniaa gigantes de rvperficie

pulvedenla y arrugada. Pa=e clnmidoaporas y mieromnidias.

le blanco i ma.en. Reverm

e igual color.

Colonias cerebrifoimes con

eacasas macroconidias y miaoconidias.
.as mismos ea.
ieteros que a

17OC.

.os misnos E.-

ietercs que a
17%

olor nema en
ia eobnins vie-

u. Reverso smiulcnto a l princi,lo,volviendaac

m d o o rojo,am".

Colonia pulvcrulenta en el centro. Macromdias dindricls

y mierownidias piriformes
muy numerosas.
Crece ripidamentc. preaentsndo rvpeficie pulvenilenta o
p n u l r r (var. meotlgwphytea), con mpcrficie slgodoooaa
(vnr. interdigitale).~eanls superficie irregular w n sureos y
aapecto ntereiopelado (var.
quiekennum). Microeonidiaa
numeiosle. paqueas, edrias
o p~iformrs,que nacen nisln.
d m c n t e o s lo largo de h
hdi. &lee o cn corto8 pedioelos, o bien forma neimos. Macraianidias e s m pero &undantea en +ueepss. de
2 5 eilulss piriformcs con predes mesas y h s . Tipica.
mente forma hifss espiriLdss
y posee cuerpo8 mduluea
en slguma aislamientos.
Creeirnienlo ripido. P w e r o
yignieiito amuiUo brillrote
en la uim paifrica. Micrownide numerosa& d e b das y pirifonnes. O~nebnalmmtc globosls. sdes o en
mrtoa pedioelos, niciendo n lo
lnrgo de In hih. Mncroconidia~
C-B.

Microconidias e hifas de T. mentagropbytes (~1000)

Tpicas hifas espidadas de T. mentagropbytes y microconidias (~1000)

Pelo de conejo parasitado por T. mentagropbytes (x100)

Microconidiasde T.mentagropbytes situadossobre el pelo (

148

rix)(x1000)

Microconidias y macroeonidias de T. mentrigropbytes (~4000)

Hifas tpicas de T.mentagropkytes (X4000)

DESCRIPCION DE LAS DERMATOMICOSIS EN EL CONEJO.

Las dermatomicosis o dermatofitosis atacan principalmente la

piel de la cabeza y las extremidades, con lesiones pmrticas que suelen abarcar
otras areas del cuerpo.
Las infecciones fngicas cuasan prdida de1 pelo lalopecia), con
depilaciones ms o menos circulares, engrosamiento de la piel y formacin de
costras secas amarillentas.
Empiezan generalmente en el hocico y alrededor de los ojos, aunque
es frecuente tambin que se manifieste alrededor de las orejas y en las patas,
pasando en casos graves a infectar todo el cuerpo.
L a tia aparece en la capa queratinosa superficial de la piel y en
d pelo. En el animal que padece la enfermedad desde tiempo atrs, se encuentran zonas alopcicas redondas u ovales de 2 cm. de dimetro y de color blanco
prisceo. Puede producirse un proceso inflamatorio secundario. En tal caso se
forman costras escarnosas bajo las cuales se advierten los folculos pilosos muy
congestionados, del tamaiio de un grano de mijo. En ocasiones las lesiones pueden
ser de tipo papuloso.
La uifeccin es muy severa en los gazapos, incluso antes del destete,
y despus de ste es cuando el contagio y las lesiones son mayores.
La infeccin se produce ya en recin nacidos, debido al contacto
directo con madres portadoras o con material de nido infectado
Cuando los gazapos, tras el destete, manifiestan la enfermedad,
retrasan su aecimiento y contagian cuanto les rodea, pudiendo quedar inutilizados como futuros reproductores.
Los adultos, aun no teniendo muchas veces lesiones visibks y
soportando mejor la enfermedad. se convierten en resemonos y portadores de
la misma, lo que les inutiliza como reproductores, debiendo ser sacrificados en
muchas ocasiones.
Unos y otros pueden contagiar al hombre, que adems de sufrir
La enfermedad, se convierte tambin en portador.
La tia debe considerarse gravisima desde el punto de vista sanitario y zoonsido. Es evidente el gran perjuicio social y econmico que acarrea
esta enfermedad y la necesidad de su erradicacin.
ESTUDIO CLINICO
MATERIAL NECESARIO.

-Desinfectante para la limpieza de la piel.

- Escalpelo estril.
- Pinzas depiladoras.
- Sobres de papel limpio.
-Placas de Petri.
- Peines y cepillos para la recoleccin de muestras del cuero cabelludo o del cuerpo de un animal.

TOMA DE MUESTRAS.

En el caso de sospecha de tia (por prdida de pelo, presencia de

pelos rotos. o lesiones en la piel), se examina primero al paciente bajo iluminacin normal. Posteriormente se observa en una habitacin oscura, con un lmpara
de Wood, iluminando directamente la piel del animal o tambin, el material recogido de antemano.
Las mejores muestras las constituyen los pelos recogidos y arrancados con pinzas, siendo muy prctico humedecer previamente la zona afectada con
un poco de algodn empapado en cloroformo, que el evaporarse. deja los pelos
enfermos con un aspecto blanquecino, como cubiertos de escarcha.
En el caso de que sean largos, se cortan con una tijera previamente
flameada con alcohol, con objeto de que quede la raiz. Se colocan en una placa
de Petri que contenga en su interior papel blanco, todo esterilizado, y se conservan dentro de sta hasta el momento de su anlisis y de la siembra en el medio
de cultivo adecuado.
Tambin puede colocarse en paquetes de papel .o sobres, pero
nunca en tubos cerrados porque las muestras se humedecen, y las bacterias y
hongos saprfitos pueden influir en el crecimiento de cualquier hongo patgeno
presente.
Las muestras se obtienen sin realizar previamente una limpieza
del cuero cabelludo, a menos que ya haya sido aplicado un fungicida. De todas
maneras, con una ligera aplicacin de alcohol al 70 por ciento obtendremos menor
contaminacin.
En algunos tipos de tia, los pelos infectados tienen una fluorescencia amarillo verdosa al ser observados bajo la lmpara de Wood. Incluso en el
caso de que slo algunos pelos han sido infectados, puede detectarse la enfermedad
mediante este procedimiento.
La fluorescencia puede no ser observada en infecciones tempranas,
y en algunos casos en los que se est siguiendo ya un tratamiento.
La falsa fluorescencia puede ser debida a la presencia de ciertos
aceites o medicamentos, pero al observar las raices del pelo, ya no puede existir
ningn tipo de duda.
Este procedimiento es prctico para la investigacin de los Trichopbyton y Microsponrm. Los pelos parasitados por Microspomm, presentan
una peculiar fluorescencia verde amarillenta, que deber apreciarse precisamen, que las capas epiteliales normales de la piel pueden producir
te en el ~ e l o ya
tambin fluorescencia de color amarillento.
Como es lgico suponer, este mtodo slo sirve para descubrir
pelos anormales. El diagnstico deber ser confirmado por el examen microscpico.

EXAMEN DIRECTO.
Cuando se trata de realizar el examen directo del pelo. las muestras se colocan en un porraobjetos y encima se deposita el cubreobjetos. Con
ayuda de una pipeta con la punta muy fina, se vierte el aclarante en el filo del
cubreobjetos, para que penetre por capilaridad. Se calienta ligeramente unos

segundos a la llama del mechero para favorecer la transparencia y se observa al microscopio.

El aclarante que siempre se ha usado ha sido una solucin de Hidrxido sdico o potdsico al 10 por ciento, sin embargo algunos autores sealan el
empleo de hidrxido potsico al 40 por ciento. Este reactivo tiene la desventaja
de que si la temperatura que recibe la preparacin es ms de la necesaria, el pelo
se deshace y no puede observarse si las conidias se encuentran fuera o dentro del
pelo.
Para evitar que sta ocurra se emplea el aclarante llamado Lacrofenol de Ammans, constituido por 20 C.C. de cido fnico licuado, 40 C.C. de
glicerina neutra, 20 C.C. de cido lctico y 20 C.C. de agua destilada. Este ieactivo tiene la ventaja de que al aumentar la temperatura al calentar el ponaobjetos,
no se disgregan los pelos.
Greguen propone disolver en el cido lctico 0'1 g. de Sud& 111,
con el objeto de colorar la grasa, y otros autores disuelven en el agua 0'1 gr. de
azul cresil brillante, para dar tono a la preparacin.
El reactivo se prepara de la siguiente forma:
Se disuelven 0'15 g. de Sudn 111 en 30 C.C. de cido lctico en
un mortero, y una v a saturado. se deja en reposo hasta el da siguiente. Se filtra
por papel, y se toman solo 20 C.C.,que contienen 0'1 g. de Sud& 111, se le agregan 40 C.C. de glicerina, 20 c.c. de cido fknico licuado y 20 C.C. de agua destilada
que tiene disuelto 0'1 gr. de azul cresil brillante.
Con este a h a n t e se observan unas preparaciones muy claras. El
fondo queda de color azu1,las grasas coloreadas en rojo, los pelos viejos sin colorear,
los nuevos en azul pdlido y las conidias con su color.
Otros investigadores usan azul algodn Lactofenol.
De una u otra forma, el ponaobjetos se estudia al microscopio a
pequeos y grandes aumentos. La cantidad de luz debe ser mnima, cenando
bien el diafragma o bajando el condensador, para observar la presencia de las
hifas jvenes, o las septas de las hifas viejas y la forma de las amosporas. Las
micelas no se ven bien porque no son suficientemente opacas si no se tien.
Generalmente la tincin es innecesaria para el diagnstico clnico
ordinario.
Los elementos fngicos se deben diferenciar de fibras de algodn,
lana, mosaicos de cristales de colesterol y otros artefactos.
La determinacin microscopica de los hongos endotrix y ectrotrix,
puede ser til en la identificacin del hongo.
Aunque el diagnstico de tia haya sido confirmado, el agente
causal no puede determinarse de este modo. Solo puede hacerse mediante aislamiento y el esnidio de los cultivos.

LLAVE PARA EL EXAMEN DIRECTO DEL PELO.

1.- Lmpara de Wood.
( Microspo~maudouinii

- Brillante fluorescencia amarilloverde del pelo

M. f m g i n e u m
T. scboenleinii
-No fluorescencia: todas las dems especies dermatofticas.
U.- Montajes con KOH.

M. audouinii

a):

Esporas 2-3 u en mosaico formando

una vaina alrededor del pelo.

M. distortum.

l
l
l

h . Esporas 3-5 u formando una vaina

o en cadenas aisladas en la superficie Tricbopbyton
del pelo.
mentagropbytes.
PELOS
ECTOT

c . Esporas 5-8 u formando una vaina

o en cadenas aisladas en la supnficie del pelo.

Ik).-

d . Esporas 5-8 u en cadenas o en masas irregulares en la superficie.

Esporas 8-10 u formando una vaina
o en cadenas aisladas en la superfid e del pelo.

T. equinum:
NbNm (raramente)
T. fulvum.
T. gypseum.

M. nanum.

T. soudanense.
ENDOTRlX

Pelos rotos y conos, p e s o s y enrollados Uenos de cadenas de esporas

T. yaoundei.

PELOS
FAVICOS

Pelos invadidos por hifas en toda su

longitud. Areas vacfas (tneles) en
los que las hifas han degenerado y
se ven grandes gotas en el interior
del pelo.

EXAMEN DEL CULTIVO.

El agar Saboureaud, pH 5'6, es el medio de cultivo de nitina en
el laboratorio para el aislamiento e identificacin de dermatofitos.
La muestra debe introducirse parcialmente en el agar inclinado.

Es aconsejable realizar la inoculacin por duplicado. Una en el

medio de cultivo normal (Saboureaud dextrosa). y otra en el mismo medio adicionado de cicloximida y cloramfenicol, agentes capaces de inhibir el crecimiento
de las bacterias comunes y hongos contaminantes,
En caso de aiadir antihiticos, se recomienda hacer una modificacin con menos dextrosa (2 por ciento) y ajustar el pH entre 6'8 y 7'0.
En el cam de muestras fuertemente contaminadas con bacterias, se
recomienda el uso de gentamicina como inhibidor bacteriano.
Los pelos animales contaminados con bacterias y hongos saprfitos deben ser empapados con una solucin acuosa de antibiticos (cicloximida
y cloramfenicol), antes de ser inoculados en el agar selectivo. Estos agentes no
alteran las caractersticas de los dermatofitos, sino que favorecen su mejor aislamiento.
Los cultivos se incuban a 25 - 300C. y se examinan cada 4-6das.
La esponilacin de los dermatofitos tiene lugar generalmente a los 5-10 das
de la inoculacin. Los cultivos deben examinarse con frecuencia a partir de este
momento ya que las caractersticas macroscpicas de las colonias y la morfologa microscpica son ms tpicas que en el caso de tratarse de cultivos viejos.
Los cultivos deben mantenerse en estudio durante cuatro semanas antes de ser considerados como negativos.
Se consiguen mejores resultados en el aislamiento del hongo patgeno si se inoculan 4 o 6 tubos de agar con la muestra.
PRUEBA DE PERFORACION DEL CABELLO IN VITRO.
Este ensayo es til en la diferenciacin de T. mbmm y T. menta-

gropkytes. Se realiza de la siguiente manera:

1.- Colocar fragmentos de 1 cm. de longitud de cabellos humanos
sanos en tubos o placas de Petri. Esterilizar en autoclave a
1210C. durante 15 minutos.
2.-

En una placa de Petri estril, poner 8-10 fragmentos estriles

de cabellos y aadir 20-25 ml. de agua destilada estril y 0'1
m]. de extracto de levadura al 10 por ciento, filtrado y esterilizado.

3.-

Poner en la placa de Petri varios fagmentos de cultivos de

hongos.

4.-

Incubar a temperatura ambiente durante 4 semanas o hasta

que aparezca crecimiento (aproximadamente 10 das). Examinar semanalmente tomando uno o dos fragmentos de cabello y observando al microscopio entre porta y cubre con una
gota de azul de Lactofenol.
Observar si las hifas penetran en el cabello perpendicularmente, formando perforaciones cuneiformes.
El T. mentappbytes perfora el cabello.

El T. mbnrm no perfora el cabello.

Otro de los ensayos que puede realizarse son los llamados Ensayos
Nutricionales.
ENSAYOS NUTRICIONALES.
En muchas ocasiones las esporas no se producen o son poco frecuentes. En estos casos los ensayos nutricionales son de gran utilidad.
El medio basa1 est constituido por agar Casena al que se aiiaden
varias soluciones de vitaminas, y agar Nitrato Amnico adicionado de aminocidos.
El medio basal sin aditivos es el que sirve de control. El iriculo puede tomarse de
los cultivos que se han desarrollado en el medio usual de aislamiento. De todas
formas es de gran importancia tomar solo una pequea porcin del cultivo (como
la cabeza de un alfder), para evitar un exceso de cultivo.
El medio nurricional para dermatofitos puede obtenerse comercialmente en forma deshidratada.

Mediante el sistema API 20 C AUXONOGRAMA se han estudiado los requerimientosnutricionaks de levaduras de inters en clnica, principalmente cepas del gnero Clrndida, Cryptococcus. Torulopsis, Tricbospomn, Rbodotonrla y Saccbaromyces, pero no ha sido ensayado hasta el presente en hongos miceliares. Con la cepa de Tricbopbyton mentappytes, objeto de nuestro estudio e investigacin, hemos puesto a punto la nueva tcnica que facilita la determinacin
de los auxonogramas en hongos productores de micelio.
El sistema API 20 C consiste en una galera con 20 cpulas y un
medio de cultivo para la identificacin de las levaduras y hongos ms frecuentes
en clnica.
Composicin del medio AP120 C

- Sulfato amnico . . . . . . . . . . . . . . . .
- Fosfato monopotsico. . . . . . . . . . . .
- Cloniro sdico. . . . . . . . . . . . . . . . . .

5 grs.
1 grs.
0'1 p.
-Cloruro clcico ................. 0'1 grs.
- Sulfato magnsico . . . . . . . . . . . . . . . 0'5 grs.
.Agar7 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 grs.
-Solucin vitamnica. . . . . . . . . . . . . . 1 ml.
-Solucin de oligoelementos. . . . . . . . 10 ml.
-Agua destilada para. . . . . . . . . . . ..1.000 mi.
- pH.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..6'5 a 6'7
En el momento de su utilizacin. se mantiene en un bao de agua
caliente con el fin de licuar el medio, y despus se estabiba a 420. 440C.

METODOLOGIA APLICADA

Examen directo
Producto Patolgico
Medio d e aislamiento.
(Saboureaud-Gentamicha).

>

L
7 das a 25-300. C.
Tomar una fraccin
d e la colonia desarrollada en el medio de
aislamiento.

Si es necesario, volver
a aislar en agar Saboureaud.
(cultivo puro)

IC '

Prcparar una suspension en la

ampolla J c API 2 0 <:a 42O.C

Inocular

4.
24-48 horas a 300.C

Lechlra del auxonograma

INSTRUCCIONES PARA EL USO.

-Tomar una bandeja de incubacin

-Distribuir unos 5 ml. aproximadamente en los pequeos pozos del fondo
de la bandeja.
-Licuar una ampolla de medio API 20 C en un bao de agua hirviendo.
Colocar la ampolla en un bao de agua a 42%.

- 4 4 0 ~y. dejarla 10 minutos

-Romper la punta de la ampolla de medio AP120C

aplicando una presin con el pulgar en la parte
liana del tapn de plstico.

-Preparar una suspensin en la ampolla de medio

API 20 C.
-Homogeneizar el medio API 20 C usando una
pipeta.
-Inocular la galera con la pipeta. Deben evitarse los meniscos cncavos u convexos.

...
Bien

Mal

Mal

Colocar la bandeja cerrada en estufa a 300C.

-La cpula
acta de control negativo para las reacciones de aislamiento.
Las cpulas que muestren una turbidez superior a la del control se considerarn positivas.
-Leer las reacciones despus de 24, 48 e incluso 72 h. de incubacin si el
ensayo (en particular la glucosa) no es suficientemente claro tras las 48 horas.
Cuando la lectura no se realiza a las 72 horas es posible hacerlo despus de
cuatro das sin que se alteren los resultados.

COMPOSICION POR
TUBO

4
Ninguno

.. .
.....
....
..
..
...
....
.. .
. . .. .

Glucoa.. . .
. .2'4 mg.
. . 2'4 mg.
GLicuol.
2Ceto-D-Gbconsto 2'4 mg.
L-Anbioosa .
2'4 mg.
Xilalu.
. . . . 2'4 mg.
Adonitol . . . .
2'4 mg.
Xitoi . . . .
2'4 mg.
GzLctoas. . .
.2'4 mg.
Inodol. . . . . .. . 4 7 mg.
Sorbitol . .
2'4 mg.
Metil-D&Limsido. . 2'4 mg.
N-Accol-D-Ghimmmba. .
2'4 m&

C ~ ~ O B. I. .. . . .2'4 mg.
..
. . 2'4 mg.
. . . . . Y 4 mg.

.. .
..
S a c u o a . . . . . . . 2'0 mg.
Trehsloss. . . . . . . 2'4 mg.
Mcleiitoa. . . . . . . Y4 mg.
Rafims . . . . . . .38ny.
Laetos.
Mdt0a..

RESULTADOS OBTENIWS CON TRICHOPHYTON MENTAGROPHYTES

O GLU GLY 2KG ARA XYL ADO XLT GAL INO SOR MDG NAG

CEL

LAC

MAL

SAC

TRE

MLZ

RAF

ACTIVIDADES ENZIMATICAS.

Para mejor caracterizacin del T. mentagrophytes se ha realizado

la investigacin de sus actividades enzimaticas.
La tcnica utilizada es un micromtodo semicuantitativo que permite determinar diecinueve enzimas. Se basa en facilitar el desarrollo de la especie
investigada sobre los sustratos adecuados a los que se ha enlazado un radical naftol (4 - naftol,@ - naftol y naftilamina).
Si el enzima estudiado ha sido elaborado por el microorganismo,
se liberan los radicales naftol. Este fenmeno es observable, ya que al aadir
los reactivos adecuados se produce una reaccin colorimtrica.
Composicin de los reactivos:

'Reactivo A:

-Tris (hidroximetil) aminometano. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . , 2 5 0 gr.

-Acido clorhdrico al 37 por ciento. . . . . . . . . . . . . . . . . . .,110 ml.
-Laurilsulfato. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .100 gr.
-Agua destilada c.s.p.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.000 ml.
pH= 7'6 - 7'8

'Reactivo B:

-Fast Blue BB . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3'5 gr.

-2-metoxietanol c.s.p. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ,1000 ml.

+ Reactivo A

+Reactivo B

Color marrn

+ Reactivo A

+Reactivo B

Color violeta

R
+Reactivo A
Naftilamina

+Reactivo B

Color naranja

4 -naftol
R
-naftol

Este mtodo es semicuantitativo ya que permite establecer una

escala colorimtrica que corresponde a unas concentraciones expresadas en nanomoles de los enzimas presentes.
El mtodo empleado consiste en preparar una suspensin densa
de un cultivo reciente
la especie en estudio que se adiciona a 20 microtubos
de la galera API ZYM' conteniendo cada uno de ellos un sustrato distinto que
permitir determinar la capacidad enzimtica y manteniendo un tubo control
como referencia colorimtrica.
Preparada la galera, se incuba durante 4-5 horas a 370C. y transcurrido este tiempo se procede a la lectura de las reacciones. Para ello se aaden
2 gotas del reactivo A y 2 del reactivo B. Transcurridos 5 minutos se procede
a la lectura del color desarrollado, comparndolo con una escala colorimtrica
que permite conocer semicuantitativamente los enzimas presentes.
160

ENZIMA
ENSAYADO

.TAW
NEGATIVO

SUSTRATO

Control

No color

Foalstasi alcalina

Violeta

Meraas

Violeta

el wntml si se

Eaternsi Lipa*

Violeta

ia

Lipsas

Violeta

"tensa luz dea-

Naranja

iue de nRsdii los

Nnvanjs

enctivos.

Lcurina unmidam
V&

arilamidnsi

C i a t i r&idpss

Vo color o color

sometido a una

Naranja

Tnpins

Naranja
Namja

Fadatas. rida

Violcta

Foalsmidisi

Awl

d gslartoidrs.

Violeta
Violeta
Azul
Violcts
Violeta
Msrrn

Violeta
Violeta

A la luz de los resultados obtenidos, podemos decir que Tricbopbyton mentagrophytes contiene los siguientes enzimas:

ENZUlAS

- Fosfatasa alcalina

- Esterasa Lipasa
- Fosfatasa cida
- Fosfamidasa
- 4 glucosidasa
- S glucosidasa
- Nacetil-C) lucosaminidasa
- 4 manosiLiasa

LNTENSLDAD
5
2
2
1
1
5
5
1

NANOMOLES
40

ARX, J.A.Van 1974 "Tbe genera of Fngi Sponrlating in pure culture" Ed. J.
Cramer, 3 15 pp.

-BALEY W. ROBERT, SCOTT E L W N G 1970 "Dulgnostic microbiology"

Ed. The C.V.Mosby Company. Saint Louis 385 pp.
- BROOK, THOMAS D. 1976

Barcelona

"Biologa de los microorg~nismos" Ed. Omega

741 pp.

-CALVO TORRAS, Ma. A. 1978, "ConmBucin al estudio de las micosis del

conejo" 3O. Symposium de cunicultura. Valencia 9-10 de Noviembre
1978 135-141.
-CAMPS J., E. CALVO y G. FROYD. 1977 "Dmnatomicosis (Tiapor TnchophytonJ en el conejo y tratmniento con griseofuluina" ZO. Symposium
Nacional de cunicultura. Pamplona 3-4 de Noviembre, 155-185.

- ESTRADE

CAMUNEZ, J. 1970 '%as micosis o fvngosis en medicina y veterinaM3'Ed.Jims Barcelona la.Edicin 395 pp.

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fingi and relates mycotic diseases". Falia parasitologica (PRAHA) 21:
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- LARONE, DAVISE HONING, 1976,

-LENNETE EDWIN, H., SPAULDING, EARLEH, TRUANT, 1974 "Manual

of clinical microbiology" American society for microbiology. Washington
D.C. Second Edition, 970 pp.

- SUPTON

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3 (4): 227 - 235.

APENDICE
MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS
Agar maltosado de Saboureaud.

Peptona
Agar-Agar
Maltosa
Cloromicetina
Agua destilada c.s.p.

10 gr.
30 gr.
40 gr.
0'5 gr.
1,000 C.C.

Se disuelven en 900 C.C. de agua destilada 10 gr. de peptona y

despus 30 gr. de Agar-Agar, se calienta suavemente agitando de vez en cuando
hasta que quede disuelto. A continuacin se agregan 40 gr. de maltosa y 0'5 gr.
de cloromicetina y se afora 1.000 C.C.Se esteriliza en autoclave a 118-121C. durante 10 minutos y se reparte en tubos estriles.

Agar glucosado de Saboureaud

Peptona
Agar-Agar
Glucosa
Cloromicetina
Agua destilada c.s.p.

10 gr.
30 gr.
40 gr.
0'5 gr.
1.o00 C.C.

Se prepara de la misma manera que el anterior. empleando glucosa

en lugar de maltosa.

2 naphtvl phorphate
2 nophtvl buryrate

L IBUCYI2 naphtylamide

L eyrtvl 2 naphtylamide

2 naphtyl phorphate
Nsphtol AS 81 phorphodiarnkde

2 mphtvl i(D galactopylano~ide

Nsphtol AS B1 $0 glucuronic acid

2 naphtyl a0 glueopyr.
wride

6 Br 2 naphtyl PD gluco
pvranolide

1 mphtyl N acefvlPD glumwminide

6 Br 2 naphtyl M mannopv
ranoride