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JOO PESOA-PB
2010
JOO PESSOA PB
2010
Aprovada em_____/_____/_____
BANCA EXAMINADORA
______________________________________________________________
Profa. Dra. Edeltrudes de Oliveira Lima/ DCF/CCS/UFPB (ORIENTADOR)
______________________________________________________________
Prof. Dr. Diego Nunes Guedes/DFP/CCS/UFPB (CO-ORIENTADOR)
______________________________________________________________
Profa. Dra. Lindomar de Farias Belm/DF/CCBS/UEPB
______________________________________________________________
Profa. Dra. Margareth de Ftima F. M. Diniz/DCF/CCS/UFPB
______________________________________________________________
Prof. Dr. Thompson Lopes de Oliveira/DCF/CCS/UFPB
______________________________________________________________
Prof. Dr. Jos Pinto de Siqueira Jnior/DBM/CCEN/UFPB
____________________________________________________________
Profa. Dra. Maria Carmli C. Sampaio/DCF/CCS/UFPB suplente
AGRADECIMENTOS
LISTA DE ABREVIATURAS
AB- Anfotericina B
ATCC Coleo de cepas de padro americano
CCS Centro de Cincias da Sade
CIM Concentrao Inibitria Mnima
CFM Concentrao Fungicida Mnima
mL Unidade de medida. Definido como um milsimo do litro (1 103 L)
L Unidade de medida de volume. Definido como a milionsima parte de
um litro (1 x 10-6L).
m Unidade de medida de distncia. Definido como a milionsima parte
do metro (1 x 10-6m)
g - Unidade de medida de peso. Definido como a milionsima parte do
grama(1 x 10-6g)
CPZ- Clorpromazina
FLU- Fluconazol
FT-Fitoconstituintes
GC-MS- Cromatografia gasosa acoplado ao espectrofotmetro de massa
GC-FID- Gas chromatography flame ionization detector. Cromatografia
gasosa acoplada ao detector de ionizao de chama. sensvel aos
analitos medindo correntes eltricas geradas por eltrons.
KET- Cetoconazol
NCCLS - National Committee for Clinical Laboratory Standards.
NY-Nistatina
SPAM Combinao da proteo osmtica promovida pelo sorbitol e
caractersticas morfolgicas das clulas fngicas
OE leo essencial
5-FLU 5-fluorocitosina
UDP-glu- Uridina Difosfato Glucose
5-flor-UMP- 5-flor Monofosfato de Uridina
5-flor-UTP- 5-flor Trifosfato de Uridina
GlcNAc- N-acetil glicosamina
LISTA DE GRFICOS
LISTA DE TABELAS
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POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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RESUMO
Aps triagem microbiolgica por meio de difuso, avaliou-se a
susceptibilidade fngica de dez leos essenciais e trs fitoconstituintes.
Os leos de C. zeylanicum, O. majorana, O. vulgare foram escolhidos por
apresentarem elevada atividade antifngica sobre vinte e uma cepas
testadas. Os ensaios para determinao da CIM e a CFM mostraram que
os leos essenciais de canela e organo foram letais sobre as cepas
leveduriformes e filamentosas, o que confirmou a boa atividade
antifngica destes leos. A avaliao do potencial de inibio do
crescimento micelial, pela cintica de morte microbiana, mostra que os
leos essenciais de canela e organo, exibiram atividade antifngica
relevante em relao ao leo essencial de manjerona. Os leos foram
capazes de interferir acentuadamente na fase logartmica da levedura,
num perodo de 24 horas, com pronunciado efeito fungicida e
fungisttico, aps 4 horas de exposio. Esta atividade antifngica foi
comparada ao efeito fungisttico e fungicida do cetoconazol. No houve
diferena significativa (p> 0,05), encontrada entre as contagens das
leveduras
frente
aos
leos
essenciais
antifngico
padro,
CHAVES:
leos
essenciais,
parede
celular,
atividade
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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ABSTRACT
A microbiological screening tested ten essential oils and three
phytochemicals in solid discs with a sterile medium to evaluate the
susceptibility of diferent fungal strains. Oils from C. zeylanicum, O.
majorana, O. vulgare were chosen due to their efficient antifungical
activity against twenty-one strains analyzed. The tests that determine CIM
and CFM have proven through essential oils from C. zeylanicum and O.
vulgare were able of causing death on yeast and filamentous strains. The
analyze about of the inhibition mycelial growth potential by kinetics of
microbial death indicates which essential oils from cinnamon and
oregano obtained a important antifungal activity compared with essential
oil of marjoram. The oils were able to interfere accentually in the
logarithmic phase of yeast during twenty-four hours exposure. This
antifungal activity was compared with fungistatic and fungicidal effect of
ketoconazole. In regard to count of yeasts, there was not a significant
difference (p> 0.05) between to essential oils and the standard antifungal,
ketoconazol. The fumigant effect of the essential oils examined in an
optical microscope indicates that the possible mechanism of action is an
interference with cell wall formation. In agreement with what research
suggests, this study tested the effect of sorbitol, an osmotic protector
which is a complement, this way, microscopic changes, such as:
decreased percentage of cytoplasm, loss of pigmentation, deficient
development of hyphae and empty hyphae were observed. This present
study also analyzed the essential oils tested against resistant strains
caused in part by the presence of efflux proteins on the membrane of
some them.
SUMRIO
AGRADECIMENTOS..........................................................................................v
LISTA DE ABREVIATURAS.............................................................................vii
LISTA DE FIGURAS........................................................................................viii
LISTA DE GRFICOS........................................................................................x
LISTA DE TABELAS.........................................................................................xii
RESUMO..........................................................................................................xiv
ABSTRACT.......................................................................................................xv
1. INTRODUO...............................................................................................20
2. FUNDAMENTAO TERICA....................................................................22
2.1. Fungos..............................................................................................22
2.2. Antifngicos sintticos e seus mecanismos de ao..................26
2.3. Deteco de compostos com atividade antifngica in vitro Clula inteira sem alvo especfico.........................................................36
2.4. Deteco de compostos com atividade antifngica in vitro
clula inteira com alvo especfico ou sistema enzimtico.................41
2.4.1. Esterides da membrana.....................................................41
2.4.2. Inibidores da sntese de DNA/RNA.....................................41
2.4.3. Topoisomerases fngicas....................................................42
2.4.4. Parede celular fngica.........................................................42
2.4.4.1. Inibidores da Parede Celular Fngica Bioensaio
com Clulas ...........................................................................43
A) Alteraes morfolgicas da hifas...........................43
B) Bioensaio com Neurospora crassa.........................43
C) Bioensaio do sorbitol...............................................44
7. PERSPECTIVAS.........................................................................................128
8 . REFERNCIAS..........................................................................................129
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1. INTRODUO
um
consenso
geral
de
que
so
necessrios
novos
21
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filamentosos,
assim
como
estudar
seus
possveis
com
mecanismo
de
ao
seletivo
agregar
alternativas
22
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2. FUNDAMENTAO TERICA
2.1 Fungos
leveduras,
que
so
unicelulares
bolores
ou
fungos
severas
infeces
sistmicas
numa
populao
de
indivduos
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relevo
da
colnia
fngica
crescida
em
cultura
24
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As
infeces
aspergiloses
causadas
mostram
as
por
fungos
seguintes
filamentosos,
espcies
exemplo,
envolvidas:
as
Aspergillus
colnias.
Na
observao
das
caractersticas
culturais
destes
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denominado
fluocitosina,
que
muito
ampliou
arsenal
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(clotrimazol,
miconazol,
isoconazol,
tioconazol,
cetoconazol,
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hialinizao
dos
glomrulos
com
nefrocalcinose.
ssea,
sobretudo
produo
de
clulas
vermelhas
(baixa
ANTIBITICOS ANTIFNGICOS
Anfotericina B
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Nistatina
sua
permeabilidade.
perda
de
pequenas
molculas,
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O O
O
O
Cl
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ANTIFNGICOS SINTTICOS
em
estreito
espectro
de
infeces
fngicas,
NH2
F
N
O
N
H
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Cl
CH2 CH O CH2
Cl
Cl
Cl
N
H2 C
O
MICONAZOL
CETOCONOZAL
Cl
Cl
O
O
CH2
N C CH3
CETOCONAZOL
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N
N
OHCH3 F
FLUCONAZOL
OH
CH2 C CH2 N
N
F
N
N
VORICONAZOL
Cl
CH2
O
Cl
ITRACONAZOL
O
CH2 O
CH3
N CH CH2 CH3
N
ao
antifngica
(fungicida
ou
fungisttica)
excelente
contra
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CH3
N
H3 C
CH3
CH3
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1233 A
HMGCoA sintase
HMGCoA
Compactina
HMGCoA reductase
c. mevalnico
Esqualeno
Alilaminas: Naftifina e anlogos
Esqualeno epoxidase
Epxido de esqualeno
Lanosterol
Azoles: Ketoconazol e anlogos
14 - demetilase
14 demetil lanosterol
Zimosterol
24-metilen zimosterol
7-dehidro zimosterol
5, 7-dehidrozimosterol
ERGOSTEROL
(Fungos)
COLESTEROL
(Humanos)
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e humanas apresentam
muitas
da
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crescimento
(fungistticos)
ou
inibem
irreversivelmente
Difuso
Diluio
Autobiografia
Difuso
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CIM
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Entretanto,
este
composto
desenvolve
rpida
resistncia
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tipo
II)
logo,
despolimerizando-as,
permitem
as
PROTENAS
FIBRILARES
MANOPROTENAS
GLICANOS
QUITINA
MEMBRANA
CITOPLASMTICA
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muitas
vezes
mostram
malformaes
que
se
pode
ver
Fukushima
et
al.,
1993
trs
compostos
do
fungo
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Os halos
C) Bioensaio do sorbitol
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2n UDP-glu
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Os ensaios medem a incorporao de UDP-[14C]-glicose em [14C]-1,3- glicano, de acordo com o seguinte esquema:
1,3- -glicano sintase
2n UDP-[14C]-glicose
[GlcNAc 1
4GlcNAc]n + 2n UDP
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como
tambm
tem
elevado
os
custos
de
sade.
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aos
antimicrobianos
uma
ameaa
esses
avanos
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da
substncia
necessria
para
inibir
crescimento
do
de
microrganismos
patognicos,
uma
variedade
de
plantas
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sesquiterpenos,
fenil-propanides,
steres
outras
trs
unidades
isoprnicas
respectivamente,
so
encontrados
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A composio
atividades
farmacolgicas
de
C.
zeylanicum
B.
esto
antiinflamatria,
antipirtica,
carminativa,
antibacteriana,
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Citrus limonum L.
famlia
Rutaceae
bastante
conhecida
por
sua
atividade
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et
al.,
2004),
suas
atividades
antimicrobianas
tm
sido
Caryophyllus aromaticus L.
Caryophyllus
aromaticus
L.
(Eugenia
caryophyllata)
conhecido
popularmente como cravo da ndia e originrio das ilhas Moluscas (figura 21).
uma arvore verde em forma de coluna, que pode chegar a 15 metros de
altura. Desenvolve-se melhor em lugares claros. A flor possui brotos de
tonalidade marrom-avermelhadas. As folhas so pequenas e acinzentadas
(CORREA, 1984; MAZZAFERA, 2003). Planta da famlia Myrtaceae que utiliza os
botes florais secos, com fins teraputicos.
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conhecida por suas propriedades medicinais afrodisacas, antisptica, aperientes, bactericida, digestiva, excitante, repelente (inseto),
sudorfico, tnico estimulante (ALONSO, 1998; SELLAN 2002).
A utilizao de compostos naturais biologicamente ativos, ou princpios
ativos oriundos do Caryophyllus aromaticus L. tem sido merecedor de
destaque. O cineol, canfora, cariofileno, carvacrol, eugenol, citral, entre outros,
so constituintes desta planta, comprovadamente fungitxicos, conforme
relatos em diversos artigos (OKIGBO e OGBONNAYA, 2006; SILVA et al., 2004;
SCHWAN-STRADA, 2002).
dos
antifngicos
sintticos
disponveis
no
mercado
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antilgico,
antibacteriano,
anticonvulsionante,
antidiarrico,
aperiente,
aromatizante,
estomacal,
bactericida,
bquico,
aldedos
neral e
geraniol),
saponinas
lcoois
(cimeropogonol e
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Eucalyptus globulus L.
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Melissa officinalis L
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sobrevivncia
crescimento
de
alguns
microrganismos
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Laurus nobilis L.
acalmam
problemas
estomacais
suas
atividades
narcticas,
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Origanum majorana L.
tocante s
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Dentre os vrios leos essenciais que podem ser usados como agentes
antimicrobianos, o leo de manjerana (O. majorana L.) pode ter o maior
potencial para uso na aplicao industrial (BARATTA et al., 1998; DEANS &
SVOBODA, 1990; DAFERERA et al., 2000; EZZEDDINE et al., 2001).
Segundo Oliveira et al., (2009), foi demonstrada a atividade antibacteriana
dos leos essenciais de de O. vulgare L. e O. majorana L. contra
Staphylococcus aureus, S. coagulase negativa, Enterobacter spp., Proteus
spp., Acinetobacter spp., Klebsiella spp. isoladas de pacientes com
conjuntivite. Os resultados mostraram um efeito inibitrio proeminente de
ambos os leos essenciais em todas as cepas bacterianas. Observaram-se
grandes zonas de inibio do crescimento bacteriano (15-32mm).
concentrao inibitria mnima (MIC) entre 5-20 m
L / mL e 2,5-10 m
/ mL
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Origanum vulgare L.
(limoneno,
terpineno,
cariofileno,
etc)
lcoois
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causadores
de
infeces
oportunistas
OH
O
O
Eugenol
Citral
-pineno
frente
aos
69
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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70
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3. OBJETIVOS
71
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4. MATERIAIS E MTODOS
4.1. MATERIAIS
72
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Alfa- pineno;
Citral;
Eugenol
73
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pelo
Prof.
Siqueira
Jnior,
do
Departamento
de
Biologia
Molecular/UFPB.
4.2. METODOLOGIA
74
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A confirmao da
75
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1mL
21mL
Suspenso
Fngica
Meio
20 L OE
ou FT
Ltda.
Os
mesmos,
foram
utilizados
para
realizao
do
discos
contendo
antifngicos
padres
foram
colocados
77
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smbolo
5-Fluorocitocina 5- FC1
Nistatina
NY
Conc./
Halos de
Discos
Inibio
1 g
>20
Sensvel
20-10
Intermedirio
<10
Resistente
>10
Sensvel
100 U.I.
10
Fluconazol
FLU
25 g
KET
50 g
Resistente
>19
Sensvel
19-14
Intermedirio
14
Cetoconazol
Interpretao
Resistente
>20
Sensvel
20-10
Intermedirio
10
Resistente
5- FC1
1 g
>10
Sensvel
--
Intermedirio ou
10
Resistente
78
SOUZA, N.A.B.
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1mL
Suspenso
Fngica
21mL
Meio
Diluies seriadas do leo essencial
para serem inseridas no meio
50 L OE
24 a 48 horas para fungos
leveduriformes
Cavidades de
6x8mm no maio
meio
80
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uma emulso com a concentrao inicial do produto (320L mL) para os leos
essenciais mais promissores testados no tubo de no 1. A partir desta
concentrao, foram feitas diluies seriadas razo de 2, de 320 L mL at
0,5 L mL, dependendo do produto testado. Em seguida, foram adicionados o
inculo da suspenso de cada fungo estudado. Os ltimos dois tubos
contendo o meio lquido foram utilizados para os controles, um para controle
do crescimento de cada microrganismo e outro somente com um antifngico
padro (NCCLS, 2005).
320
160
LmL
LmL
CIM
CIM
80
40
20
LmL
LmL
LmL
Controle
do antifngico
Controle
no meio
81
SOUZA, N.A.B.
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dos
antimicrobianos
de
uso
clnico
serem
ativos
contra
concentrao
fungicida
mnima
foi
definida
como
menor
82
SOUZA, N.A.B.
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comparada com o
valor
encontrado
na
suspenso controle
83
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Meio + OE
2mm inculo
84
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Paralelamente, o mesmo
processo foi feito para as cepas fnicas cultivadas em ASD sem adio do
leo essencial, as quais serviram como procedimento controle. As amostras
miceliais coletadas foram fixadas em azul lactofenol algodo, e em seguida
examinadas sob microscopia luminosa utilizando aumento de 400 vezes (figura
36), a fim de observao das caractersticas micromorfologicas das cepas
fnicas tratadas ou no (DE BILLERBECK et al., 2001; SHARMA e TRIPATHI,
2006).
AT: 400 x
85
SOUZA, N.A.B.
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86
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5. RESULTADOS E DISCUSSES
88
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PITANGA
CANELA
CANELA
LIMO
2
ORGANO
CRAVO
LIMO
MANGERONA
PITANGA
CRAVO
5
ORGANO
MANGERONA
-pineno e
eugenol, sendo este ltimo, segundo Sellan (2002), Amaral & Bara (2005) e
Gayoso (2005) o fitoconstituinte majoritrio em ambos os leos de C.
zeylanicum e C. aromaticus. Este ensaio, mostrou-se de extrema importncia
para a escolha dos leos essenciais e fitoconstituintes com atividade
antifngica mais promissora. Atravs dos resultados obtidos na tabela 02
foram excludos dos prximos ensaios, os leos Eugenia uniflora e Citrus
limonum, devido ao baixo desempenho de suas atividades antifngicas. Assim
89
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Candida albicans
(ATCC 7645)
27
9
25
25
0
25
25
25
30
25
25
25
Aspergillus flavus
(LM-02)
25
8
10
18
0
5
26
28
26
28
26
26
mm=milmetros de dimetro
5.2.
Ensaios
de
atividades
com
antifngicos
sintticos
padres
(Antifungigrama)
and
Laboratory
Standards
Institute
(CLSI),
importante
rgo
(DIDOMENICO,
1999).
medicamento
mais
prximo
da
90
SOUZA, N.A.B.
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Nistatina
(100UI)
Cetoconazol
(50 g/mL)
5-Fluorcitosina
(10g/mL)
Fluconazol
(25g/mL)
C. albicans LM-142
C. tropicalis LM-14
C. krusei LM-09
C. krusei LM-08
C. neoformans LM-10
C. neoformans FGF-5
T. rubrum 64T
T. rubrum LM-78T
T. rubrum LM-800
T. mentagrophytes LM-640
M. canis LM-36
A. flavus LM-02
A. fumigates IPP-21
Espcies
Fngicas
92
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160
80
40
20
10
27
22
13
12
10
20
13
C. albicans
LM-142
20
18
15
14
13
11
25
25
C. albicans
ATCC 7645
23
21
16
15
12
26
30
C. tropicalis
LM-14
28
24
17
24
30
C. krusei
6252
21
19
17
14
13
20
C. krusei
6258
20
18
15
14
20
24
C. krusei
LM-09
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
20
10
20
30
25
20
18
16
13
24
35
27
24
20
14
10
25
26
C. neoform.
FGF-5
26
22
17
15
12
27
30
T. rubrum
64T
21
18
15
13
10
22
28
T. rubrum
ATCC 28184
17
15
14
12
12
23
T. rubrum
LM-78T
23
20
15
12
24
27
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
LM-640
35
30
20
18
16
12
10
26
28
17
15
12
11
23
M. gypseum
ATCC 184
26
24
22
12
18
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
24
20
18
16
13
12
11
20
30
25
20
18
A. flavus
LM-02
23
20
19
18
21
20
A. fumigatus
IPP-21
36
30
25
20
10
15
12
A. fumigatus
ATCC 40640
18
10
Controle
320
Cetoconazol
(50g/mL)
Espcies
Nistatina 100UI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
94
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160
80
40
20
10
30
25
14
20
13
C. albicans
LM-142
22
17
14
10
25
25
C. albicans
ATCC 7645
24
18
14
12
26
30
C. tropicalis
LM-14
24
30
C. krusei
6252
20
13
10
13
20
C. krusei
6258
14
12
10
20
24
C. krusei
LM-09
20
30
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
C. neoform.
FGF-5
24
35
25
26
28
20
16
10
27
30
T. rubrum
64T
25
21
17
13
10
22
28
T. rubrum
ATCC 28184
14
12
23
T. rubrum
LM-78T
24
27
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
LM-640
19
16
13
10
26
28
26
24
22
14
12
11
23
M. gypseum
ATCC 184
28
25
19
16
14
18
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
A. flavus
LM-02
28
25
20
17
10
20
30
25
20
18
10
18
15
21
20
A. fumigatus
IPP-21
36
26
20
16
14
10
15
12
A. fumigatus
ATCC 40640
30
26
22
18
14
10
18
10
Controle
320
Cetoconazol
(50g/mL)
Espcies
Fngicas
Nistatina 100UI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
96
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160
80
40
20
10
12
20
13
C. albicans
LM-142
25
25
C. albicans
ATCC 7645
15
12
10
26
30
C. tropicalis
LM-14
C. krusei
ATCC 6252
14
12
10
24
30
10
13
20
C. krusei
ATCC 6258
20
24
C. krusei
LM-09
20
30
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
24
35
18
14
12
10
25
26
C. neoform.
FGF-5
14
12
10
27
30
T. rubrum
64T
10
22
28
T. rubrum
ATCC 28184
14
12
23
T. rubrum
A grande
LM-78T
Controle
320
Cetoconazol
(50g/mL)
Espcies
Fngicas
Nistatina 100UI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
0
0 de 0cepas0 leveduriformes
0
0
24
27resistentes,
quantidade
e0 filamentosas
+
e T.arubrum
atividade antifngica
evidenciada
concentraes,
0
0
0
0
0 somente,
0
0em altas
26
28
LM-800
mostrou
que este22 leo17no 14 uma10boa alternativa
para
T. mentagrophytes
7
0
0
LM-640
dentre os leos essenciais testados.
M. gypseum
12
10
7
0
0
0
0
ATCCDentre
184
os antifngicos padres, utilizados como
a 11terapia23antifngica,
+
18
controle: anfotericina
M. canis
18
14
12
20
30
C. herbarium
22
18
15
12
18
B(100L/mL),
LM-36
nistatina(100UI) e cetoconazol (50 L/mL) , a anfotericina B +foi o
que
encontrou
maior resistncia frente aos microrganismos, enquanto que+ o
ATCC
26362
A. flavus
excetuando-se
LM-02
0
as
0
0
espcies
0
0
de 0 Aspergillus,
A. fumigatus
0 da nistatina.
0
0
susceptveis
ao
IPP-21
A. fumigatus
ATCC 40640
0
que
20
se21 mostraram
15
12
18
10
+mais
+
+
98
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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320
160
80
40
20
10
C. albicans
ATCC 90028
C. albicans
LM-142
C. albicans
ATCC 7645
C. tropicalis
LM-14
C. krusei
ATCC 6252
C. krusei
ATCC 6258
C. krusei
LM-09
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
C. neoform.
FGF-5
T. rubrum
64T
T. rubrum
ATCC 28184
T. rubrum
LM-78T
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
LM-640
M. gypseum
ATCC 184
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
A. flavus
LM-02
A. fumigatus
IPP-21
A. fumigatus
ATCC 40640
40
25
20
10
20
13
17
25
25
17
12
26
30
18
12
24
30
16
11
13
20
17
11
20
24
20
30
15
24
35
26
22
15
25
26
20
12
27
30
30
25
22
28
12
23
22
18
14
12
10
24
27
20
16
12
26
28
20
15
11
23
22
16
18
20
30
18
20
11
21
20
15
12
12
10
18
10
Origanum vulgare L.
Controle
Espcies
Fngicas
Cetoconazol
(50g/mL)
Nistatina 100UI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
100
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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80L/mL foi capaz de inibir o crescimento de 80% dos fungos, com halos de
inibio variando de entre 9 27 mm de dimetro.
Algumas curiosidades foram observadas na tabela 8, como a capacidade
do leo essencial de inibir o crescimento das cepas fngicas, mesmo sendo
estas resistentes aos antifngicos padres, como: nistatina e cetoconazol.
Exemplos do bom desempenho deste leo essencial, podem ser
observados em todas as cepas de Candida albicans, tropicalis e krusei, exceto
para a cepa C. krusei LM-09, assim como, apresentaram boa atividade contra
fungos filamentosos, exceto para a cepa T. mentagrophytes LM-640 e M.
Gypseum 184. Fungos estes, que apresentaram grande resistncia aos leos
essenciais j testados, mas grande sensibilidade ao leo essencial de O.
vulgare L.
Dentre os antifngicos padres utilizados como controle, o cetoconazol
foi a droga mais promissora frente as cepas testadas, exceto para as espcies
de Aspergillus flavus LM-02 e Aspergillus fumigatus IPP-21 e ATCC40640, que
se mostraram mais susceptveis ao da nistatina, assim como ao do
leo essencial de O. vulgare L.
Muitos estudos j foram realizados sobre o O. vulgare L. devido ao seu
grande poder antioxidante, fungisttico e fungicida (BOZIN et al., 2006), ao seu
poder
antimicrobiano
frente
as
cepas
de
Staphylococcus
aureus
101
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
30
23
22
13
20
13
30
29
15
11
25
25
24
20
11
26
30
32
30
18
24
30
26
17
12
10
13
20
15
13
12
20
24
20
30
20
17
13
10
24
35
20
18
16
14
11
25
26
18
16
12
27
30
30
28
27
25
22
28
18
16
12
23
13
11
24
27
18
16
10
26
28
11
23
18
30
24
17
20
30
27
20
16
18
25
20
13
21
20
36
28
26
15
12
28
20
18
13
18
10
320
160
80
40
20
10
C. albicans
ATCC 90028
C. albicans
LM-142
C. albicans
ATCC 7645
C. tropicalis
LM-14
C. krusei
ATCC 6252
C. krusei
ATCC 6258
C. krusei
LM-09
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
C. neoform.
FGF-5
T. rubrum
64T
T. rubrum
ATCC 28184
T. rubrum
LM-78T
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
ontrole
Cetoconazol
(50g/mL)
Espcies
Fngicas
Nistatina
100UI
LM-640
M. gypseum
ATC 184
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
A. flavus
LM-02
A. fumigatus
IPP-21
A. fumigatus
ATCC 40640
102
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
320
160
80
40
20
10
15
12
10
20
13
C. albicans
LM-142
25
25
C. albicans
ATCC 7645
26
30
C. tropicalis
LM-14
17
14
24
30
C. krusei
ATCC 6252
C. krusei
ATCC 6258
15
13
12
13
20
20
14
13
20
24
C. krusei
LM-09
18
20
30
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
15
24
35
14
10
25
26
C. neoform.
FGF-5
27
30
T. rubrum
64T
35
24
16
10
22
28
T. rubrum
ATCC 28184
12
10
12
23
T. rubrum
LM-78T
22
18
14
10
24
27
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
LM-640
30
20
10
26
28
30
24
20
12
11
23
M. gypseum
ATCC 184
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
14
12
10
18
22
16
10
20
30
18
A. flavus
LM-02
21
20
A. fumigatus
IPP-21
15
12
A. fumigatus
ATCC 40640
18
10
Controle
Espcies
Fngicas
Cetoconazol
(50g/mL)
Nistatina 100UI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
104
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
cetoconazol
foi
droga
mais
promissora
frente
aos
105
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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
Cetoconazol
(50g/mL)
20
19
17
14
12
20
13
C. albicans
LM-142
25
25
C. albicans
ATCC 7645
28
26
24
17
12
10
26
30
C. tropicalis
LM-14
19
17
15
12
10
24
30
C. krusei
ATCC 6252
24
22
20
15
12
13
20
C. krusei
ATCC 6258
20
24
C. krusei
LM-09
16
20
30
C. krusei
LM-08
C. neoform.
LM-10
23
11
10
24
35
19
17
15
12
10
25
26
C. neoform.
FGF-5
T. rubrum
64T
20
19
18
14
10
27
30
19
17
15
12
10
22
28
T. rubrum
ATCC 28184
19
17
14
10
12
23
T. rubrum
LM-78T
20
18
14
10
24
27
T. rubrum
LM-800
T. mentagrophytes
LM-640
23
21
17
15
10
28
11
23
M. gypseum
ATCC 184
18
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
23
21
17
14
12
20
30
18
A. flavus
LM-02
21
20
A. fumigatus
IPP-21
15
12
A. fumigatus
ATCC 40640
18
10
Espcies
Fngica
320
160
80
40
20
10
12
20
Controle
Nistatina
100UI
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SOUZA, N.A.B.
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foi
elucidado
por
Lee
colaboradores
(2007).
Apesar
de
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320
160
80
40
20
10
Controle
Espcies
Fngicas
Cetoconazol
(50g/mL)
Nistatina 100UI
32
30
22
18
16
14
20
13
35
30
20
18
14
11
25
25
35
32
24
18
12
26
30
30
20
18
16
12
24
30
19
18
16
11
13
20
21
19
20
24
25
23
21
20
10
20
30
30
25
20
14
24
35
32
30
28
26
16
25
26
32
30
28
24
18
14
12
27
30
37
35
32
30
28
18
16
22
28
18
16
12
10
12
23
23
21
18
14
10
24
27
38
30
20
18
14
26
28
T. mentagrophytes.
LM-640
18
15
14
11
23
M. gypseum
ATCC184
M. canis
LM-36
C. herbarium
ATCC 26362
A. flavus
LM-02
A. fumigatus
IPP-21
A. fumigatus
ATCC 40640
30
24
16
14
18
17
16
20
30
30
28
26
24
20
12
18
30
26
22
20
12
21
20
32
30
28
26
20
12
15
12
24
20
18
12
18
10
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SOUZA, N.A.B.
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agente
antifngico.
Porm
mecanismo
de
ao
deste
como
Candida
albicans
ATCC
7645
Cryptococcus
109
SOUZA, N.A.B.
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da
levedura,
ao
longo
dos
intervalos
avaliados
sendo
110
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dias de interao
estudos
comparativos
115
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resultados
obtidos,
mostraram
baixos
valores
de
CIMs
atividade fungicida.
CFMs 2 L/mL, porm mesmo a CIM 2 L/mL que a maior CIM de O. majerona,
ainda igual aos nveis sricos alcanados pela anfotericina B no organismo
humano, conhecido por sua excelente atividade fungicida (DANESHMAND et
al., 1983; HOEPRICH, 1992). Nosso estudo, semelhana do que pudemos
constatar na literatura consultada, mostrou que os leos essenciais testados
apresentaram excelente ao fungicida e fungisttica in vitro.
Bozin e
116
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padronizados,
reprodutveis
exaustivamente
avaliados
em
Origanum
vulgare L.
CIM
CFM
0,015
0,03
C. neoformans FGF 5
0,015
0,03
0,5
0,015
0,03
T. rubrum LM 800
0,015
0,03
0,12
0,25
0,003
0,007
M. canis LM 36
0,003
0,007
0,12
0,25
0,003
0,007
A. flavus LM 02
0,03
0,06
0,03
0,06
Espcies Fngicas
Origanum
majorana L.
CIM
CFM
0,5
1
Cinamonum
zeylanicum L.
CIM
CFM
0,015
0,03
5.6. Efeito dos leos essenciais sobre a alteraes morfolgicas das hifas
presente
trabalho,
observaram-se
grandes
alteraes
117
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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leo
essencial,
apresentou
algumas
alteraes
morfolgicas
com
118
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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perda
de
pigmentao;
perda
visvel,
do
contedo
120
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POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
contedo
citoplasmtico
so
modificaes
observadas
pelo
121
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PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
frequentemente
tm
caractersticas
morfolgicas
distintas.
As
122
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POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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Aspergillus flavus LM 02
Espcies (Famlia)
Nome popular
CIM
(L/mL)
CIM + sorbitol
(L/mL)
Canela
0,015
0,15
Organo
0,015
0,12
Manjerona
0,5
123
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
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SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM PRODUTOS NATURAIS E SINTTICOS BIOATIVOS/UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARABA
FLU
2,56 g/mL
5,12 g/mL
CPZ
0,08 g/mL
0,08 g/mL
FLU + CPZ
1,28 g/mL
2,56 g/mL
>1,28 g/mL
>5,12 g/mL
FLU + Canela
1,28 g/mL
2,56 g/mL
FLU + Manjerona
1,28 g/mL
2,56 g/mL
FLU + Organo
AB
0,04 g/mL
0,02 g/mL
CPZ
0,08 g/mL
0,08 g/mL
AB + CPZ
>0,04 g/mL
0,02 g/mL
AB + Organo
>0,04 g/mL
0,02 g/mL
0,02 g/mL
0,02 g/mL
>0,02 g/mL
>0,02 g/mL
AB + Canela
AB + Manjerona
125
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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6. CONSIDERAES FINAIS
Na triagem inicial em meio slido, os leos essenciais de C. limonum, C.
aromaticus, E. uniflora e M. officinalis, no apresentam halos de inibio,
quando comparado aos demais leos;
Os leos essenciais e fitoconstituintes promissores foram testados
contra vinte e uma cepas fngicas. Foram definidas as CIMs capazes de
inibir de 50% 90% das cepas fngicas;
Os leos essenciais de O. vulgare, O. majorana e C. zeylanicum,
justificam sua utilizao como compostos antifngicos alternativos,
devido a sua alta capacidade fungisttica;
O tempo de exposio, das cepas fngicas aos leos essenciais, foi
importante na anlise da cintica de morte fngica, ao avaliar as
leveduras e os fungos filamentosos, com pronunciado efeito fungicida
aps 4 horas de exposio;
No houve diferena significativa (p> 0,05), encontrada entre as
contagens das leveduras e fungos filamentosos frente aos leos
essenciais e o antifngico padro, cetoconazol, confirmando poder
fumigante dos leos;
A anlise destas atividades fungicida e/ou fungisttica dos leos
essenciais mostraram baixos valores de CIMs e CFMs ( 0,06 L/mL), para
os leos essenciais de O. vulgare e C. zeylanicum
frente aos
126
SOUZA, N.A.B.
POSSVEIS MECANISMOS DE ATIVIDADE ANTIFNGICA DE LEOS ESSENCIAIS CONTRA FUNGOS PATOGNICOS
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7 . PERSPECTIVAS
129
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8. REFERNCIAS
130
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Estrutura
Qumica
da
nisttina.
Disponivel
http://pt.wikipedia.org/wiki/Nistatina. Acesso dia 02 de junho de 2010
em
Estrutura
Qumica
da
nisttina.
Disponivel
http://pt.wikipedia.org/wiki/griseofulvina Acesso dia 02 de junho de 2010
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Estrutura
Qumica
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nisttina.
Disponivel
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http://pt.wikipedia.org/wiki/miconazol Acesso dia 02 de junho de 2010
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Estrutura
Qumica
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nisttina.
Disponivel
http://pt.wikipedia.org/wiki/cetoconazol Acesso dia 02 de junho de 2010
em
Estrutura
Qumica
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FICHA CATALOGRFICA
S725p
CDU: 665.5(043)
CDU: 65:316.46(043.2)