Informe de Laboratorio: Accin

Enzimtica

Nombre: Nicols Ortega Garca

Curso: 4 medio A
Fecha: 03 de mayo del 2016
Profesoras: Gisela Corday y Pamela Tobar

Introduccin
Las protenas, biomolculas formadas por cadenas largas de aminocidos, son
indispensables para el correcto funcionamiento del cuerpo humano y
prcticamente del de todo ser vivo. Esto es gracias a que son el elemento bsico
de construccin de los tejidos y, adems, cumplen un sinfn de funciones como
formar anticuerpos, regular el pH, entre otras cosas. Como su denominacin de
Biomolcula lo indica, las protenas son compuestos orgnicos hechos a partir de
aminocidos ordenados de forma lineal y unidos entre s por lo que se denomina
enlace peptdico, que es la unin entre un cido carboxlico y una amida. Tal
como otras molculas orgnicas las protenas son elementos cruciales de los
seres vivos ya que toman parte en todos los procesos que ocurren dentro de las
clulas, especialmente en el obtener energa y productos sencillos a partir de
compuestos ms complejos, proceso que cientficamente se denomina
metabolismo.
Los catalizadores son sustancias que modulan o influyen en la velocidad de las
reacciones sin alterar su punto de equilibrio (Sornoza, 2015). Cada clula y tejido
realizan una actividad propia de ellos, lo que les provoca continuos cambios
bioqumicos, procesos que son apoyados por la presencia de enzimas, las cuales
a su vez son protenas con la capacidad de catalizar reacciones qumicas. Las
molculas de enzimas son catalizadores extraordinarios, muy eficientes para
acelerar la transformacin de sustratos en productos finales. Una sola molcula de
enzima puede efectuar el cambio de 10 000 a 1 milln de molculas de sustrato
por minuto (Rivera, 2015). Los propios genes son reguladores de
la produccin de estas enzimas, ya que las protenas son sintetizadas a partir de
la transcripcin del ADN en ARN y su futura traduccin y formacin en los
ribosomas de las clulas; por lo tanto, genes y enzimas pueden ser considerados
como componentes fundamentales para la vida. Estas enzimas tienen
caractersticas entre las cuales se encuentran su especificidad, es decir, que cada
enzima cataliza un solo tipo de reaccin y acta sobre un sustrato especfico, que
no sufren modificaciones estructurales al reaccionar con su sustrato, y que gracias
a esto pueden cumplir su funcionalidad normal en pequesimas cantidades por
mucho tiempo. La cintica enzimtica es tambin una importante propiedad, la
cual consiste en el anlisis cuantitativo del efecto de cada uno de los factores que
intervienen en la actividad enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin.
Si bien todas las enzimas reaccionan con sustancias especfico y tienen
caractersticas similares, como poseer un sitio activo donde el sustrato se une a la
enzima para acelerar la formacin del producto, pero no todas ellas funcionan de
la misma forma ni tienen el mismo modelo de accin. Existe, por ejemplo, el

modelo llave-cerradura, en el que la forma del sitio activo de la enzima y del

sustrato son complementarias, y el modelo de ajuste inducido, en el que la enzima
y su sitio activo adoptan la forma necesaria para la reaccin solo en presencia del
sustrato, siendo la enzima en realidad complementaria al estado de transicin
sustrato-producto.
Imagen 1: Modelo de
accin enzimtica llave
cerradura (arriba) y de
ajuste inducido (abajo).

El funcionamiento normal de las enzimas no es inalterable, ya que puede ser

modificado por el cambio de ciertas variables o la presencia de algunas sustancias
como inhibidores. Respecto a la temperatura, es sabido que las enzimas
funcionan bien a temperaturas especficas, teniendo una temperatura especfica
donde alcanzan su mayor efectividad, pero a su vez, si la temperatura del medio
en el que se encuentran es demasiado alta, la cintica de la enzima aumenta y
hace que esta se desnaturalice, perdiendo su funcin. Habitualmente la
desnaturalizacin a alta temperatura es irreversible, debido a que se rompen las
fuerzas dbiles de enlace al aumentar la vibracin trmica de los tomos
componentes, fenmeno que daa la estructura tridimensional (Sornoza, 2015). A
su vez, si la temperatura de una enzima disminuye de manera drstica, esta
tambin dejar de funcionar, pero en vez de desnaturalizarse simplemente dejar
de funcionar hasta encontrar condiciones ptimas nuevamente, es decir, se
inactiva.

Imagen 2: Actividad de una enzima de acuerdo a la temperatura en la

que se encuentra. Se puede apreciar que al bordear los 50C esta
comienza su desnaturalizacin.

Imagen 1: Actividad de una enzima de acuerdo a la temperatura en la que se

encuentra. Se puede apreciar que al bordear los 50C esta comienza su
desnaturalizacin.
En lo que concierne al pH, este tambin es crucial para el correcto funcionamiento
de la enzima pues si este aumenta o disminuye de manera drstica puede
modificar las interacciones inicas que intervienen en la estabilidad de la enzima,
desnaturalizndola igual que las temperaturas altas (sin embargo hay enzimas,
como la papana, que funcionan a cualquier pH).

Imagen 3: Relacin entre la actividad de ciertas

enzimas y el pH en el que se encuentran.

Finalmente, un aspecto que a su vez hay que tener en cuenta al hablar de la

cintica enzimtica o velocidad de reaccin de una enzima es la concentracin de
sustrato con la que esta va a reaccionar. Como se puede ver en el grfico, al
aumentar la cantidad de sustrato con el que va a reaccionar la enzima la velocidad
de la reaccin a su vez aumentar, pero el aumento de velocidad llegar a un
punto al que parar y la velocidad permanecer constante, porque la enzima no
podr dar abasto a tanto sustrato, es decir, terminar sobresaturada, pero seguir
cumpliendo su funcin.

Imagen 4: Grfico que muestra la relacin entre la velocidad de reaccin

Imagen 3: Grfico que muestra la relacin entre la velocidad de reaccin de una
de una enzima y el sustrato con el que reacciona.
enzima y el sustrato con el que reacciona.

Un inhibidor enzimtico es algn compuesto que impide que alguna o algunas

enzimas catalicen (Juan Jos Martnez Guerra, 2016). Estos compuestos son
especficos, lo que quiere decir que pueden inhibir a un grupo de enzimas pero no
tendrn relacin alguna con otras enzimas. Sus efectos sobre la enzima pueden
ser tanto reversibles como irreversibles, dependiendo si modifica su estructura o
no, pero lo que todos los inhibidores tienen en comn es el evitar que la enzima
funcione de manera correcta. Un ejemplo de inhibidor son los antioxidantes que
evitan que ciertas enzimas oxiden el tejido en el que se encuentran (por ejemplo la
vitamina C acta como antioxidante, evitando que, por ejemplo, las frutas se
pongan negras, o siendo ms especfico, evita que ocurra pardeamiento al
contacto con el oxgeno).

Objetivos

Observar la accin de la polifenol oxidasa

Observar cmo acta la enzima catalasa
Determinar cules son los factores que modifican la funcin de la enzima

Materiales
Perxido de hidrogeno (H2O2)
Gradilla con tubos de ensayo
Vitamina C
Hgado de pollo trozado
Vaso de precipitado
Trozos de pera
Hiptesis
Si se modifican factores al aumentar mucho la temperatura, cambiar el pH del
medio y hacer reaccionar la enzima con vitamina C esta dejar de funcionar
correctamente.

Procedimiento

Presencia de polifenol oxidasa en la pera:

Primero se moli la vitamina c con el mortero, hasta que quedo un polvo fino,
luego se cort la pera por dos, y se dejo tal como estaba mientras a la otra se le
esparci el polvo de vitamina C por toda su superficie. La dejaron reposar 60
minutos.
Pera Normal

Pera con
vitamina c

Mortero con
vitamina C

Presencia de catalasa en el hgado:

Se puso en la gradilla 3 tubos de ensayos con una pequea cantidad de macerado
de hgado de pollo.
Primer tubo de ensayo: Se le agrego 5 ml de perxido de Hidrogeno al hgado.

Segundo tubo de ensayo: Al tubo de ensayo que contena macerado de hgado de

pollo se le agreg 4 ml de agua todo esto se realizo mientras el tubo de ensayo se
herva en bao mara, luego que hirvi por 10 minutos se saco y dejo el tubo de
ensayo en la gravilla hasta que se enfri, pasados 5 minutos se le agrego perxido
de hidrogeno.

Tercer tubo de ensayo: Al tubo de ensayo que contena macerado de hgado de

pollo se le agregaron 2 ml de acido clorhdrico y luego de un periodo se
introdujeron 10 ml de perxido de hidrogeno.

2 ml de acido
clorhdrico
10 ml de
perxido de
hidrogeno

Resultados
Presencia de polifenol oxidasa en la pera:
Transcurridos los 60 minutos, se observ que la mitad de la pera que no contena
polvillo de vitamina c se encontraba oxidada, ya que, el polifenol oxidasa actu sin
ningn impedimento. Luego de que se lav la otra mitad se pudo observar todo lo
contrario; la pera que tena vitamina C encima no presentaba xido en ninguna
parte, ya que la vitamina C impidi de que el polifenol oxidasa actuase sobre la
pera.
Presencia de catalasa en hgado:
En el primer tubo de ensayo al agregar los 5ml de perxido de hidrogeno,
transcurridos unos pocos segundos, se observ que sala una espuma del tubo de
ensayo; la mezcla estaba emanando burbujas, lo cual demostr que haba
catalasa en el hgado pues el perxido de hidrgeno se transform en agua y
oxgeno gaseoso (est ultimo explicara la presencia de las burbujas).
En el segundo tubo de ensayo luego de que se hirvi por 10 minutos, se dejo
enfriar y se le agreg perxido de hidrogeno, sin embargo no se observo nada, ni
siquiera el tubo expulso espuma, con lo cual se mostro que no hubo reaccin por
lo que la enzima de tuvo que haberse desnaturalizado.
En el tercer tubo de ensayo al agregar HCl y perxido de hidrogeno. Se observ
que la enzima no actu, ya que no mostro ningn tipo de reaccin. Esto se debe a
que la enzima fue expuesta a un medio muy cido en el cual no poda actuar de
manera correcta, por lo que tambin se desnaturaliz.

Discusin
Presencia de polifenol oxidasa en la pera:
El oscurecimiento de la pera debe a que la polifenol-oxidasa cataliza la oxidacin
de diferentes molculas en presencia de oxgeno. El proceso se conoce como
pardeamiento enzimtico.
Al cortar la pera se daan sus clulas, haciendo posible que las enzimas polifenol
oxidasas, que estaban encerradas los cloroplastos de las clulas, se pongan en
contacto con el sustrato sobre el cual actan; fenoles que estaban encerrados en
las vacuolas celulares.
La ruptura celular desencadena el comienzo del proceso: las polifenol oxidasas
provocan la oxidacin de unos compuestos incoloros llamados polifenoles (el
sustrato), para transformarlos en otros llamados quinonas (el producto). Las
quinonas, que son incoloras, pueden reaccionar con ciertas sustancias para dar
lugar a otros compuestos coloreados. Finalmente las quinonas se reagrupan, se
oxidan nuevamente y se transforman en un compuesto de color pardo
llamado melanina, que es el que ocasiona el color oscuro al trozo de pera.
Al agregar vitamina c, esta previene el pardeamiento y otras reacciones oxidativas
en frutas y vegetales; por lo tanto acta como inhibidor, y al ser un inhibidor
especifico de esta enzima, suministra informacin acerca de su especificad (la
estructura fsica y qumica del sitio activo y el mecanismo cintico de la reaccin)
adems, es considerado como un buen atrapador de oxgeno que permite la
remocin del oxgeno molecular en las reacciones de la Polifenol oxidasa.
Presencia de catalasa en el hgado:
La catalasa tiene como funcin convertir el perxido de hidrgeno en agua y
oxgeno diatmico. El hgado, por su parte, contiene bastantes peroxisomas que
contienen catalasas. Por lo que al agregarle unos mililitros de perxido de
hidrogeno al trozo completo de hgado crudo se mostr una efervescencia en l, lo
que es prueba de la ocurrencia de la reaccin qumica.
Todas las enzimas sufren desnaturalizacin frente al calor pues al ser protenas
van a actuar tal como cualquier otra cadena de polipptidos. Esto quiere decir que
cuando la temperatura est muy elevada, la enzima perder su estructura original
y por lo tanto su sitio activo tambin se desnaturalizar, y ya no podr. Esto se
observ cuando se le aplicaron altas temperaturas al hgado de pollo, ya que
cuando se aadi agua oxigenada no se vieron indicios de la ocurrencia de la
reaccin, a diferencia del caso anterior.

La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su actividad es

mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad disminuye bruscamente
en efecto se debe a que, al ser los enzimas de naturaleza proteica, al igual que
otras protenas, se desnaturalizan y pierden su actividad si el pH vara ms all de
unos lmites estrechos. La catalasa tiene un pH optimo 7,6 por lo tanto al agregar
HCl esta se acidific y perdi sus propiedades pues tambin se desnaturaliz.
Debido a esto la sustancia no reaccion al aplicarle perxido de hidrgeno.
Conclusin
Las funciones de las enzimas se entrelazan y a estas se pliegan una o ms
cadenas polipeptdicas, que aportan un pequeo grupo de aminocidos para
formar el sitio activo y donde se realiza la reaccin. Cada enzima cataliza un solo
tipo de reaccin, y casi siempre acta sobre un nico sustrato o sobre un grupo
muy reducido de ellos. Esta especificidad se debe a la complementariedad que
debe existir entre el sustrato y el centro activo del enzima.
El correcto funcionamiento de las enzimas est dado por distintas variables, como
la temperatura, el pH en el que se encuentra y la presencia de inhibidores. Es
importante saber cul es la temperatura de las enzimas ya que esta elevacin
incrementa la velocidad de una reaccin catalizada por enzimas. Al principio la
velocidad de reaccin aumenta cuando la temperatura se eleva debido al
incremento de la energa cintica de la energa de las molculas reactantes, pero
el exceso de calor puede ser mortal para ella, en parte porque el mayor
movimiento de tomos a altas temperaturas rompe enlaces y distorsiona la
estructura tridimensional, con lo cual ocurre la desnaturalizacin, y con esto la
prdida de la actividad cataltica. Por tanto las enzimas muestran una temperatura
ptima de accin.
A su vez es necesario conocer el pH en el que se encuentra la enzima ya que es
la intensidad mxima de la actividad enzimtica ocurre en un pH ptimo (El pH
ptimo de una enzima puede guardar relacin con las condiciones ptimas para la
fijacin de la enzima a su sustrato), con rpida disminucin de la actividad ya sea
al aumentar o al disminuir pH. Basndonos en esto, se puede concluir que al
exponer una enzima a un pH para el cual esta no est diseada esta se va a
desintegrar y por ende no funcionar como debe.

Bibliografa
Audesirk,Teresa; Audesirk, Gerald; Byers, bruce.
Biologa: La vida en la tierra.
Pearson educacin de Mxico, 2008.
Ogg, Luis;Constante, Susana; torres, Alejo;magnet, Alberto; Fernande, Alejandro.
Preguntas y respuestas: el porqu de las cosas.
Everest 2003
Linkografa
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https://temasdebioquimica.wordpress.com/2008/07/12/especificidad-enzimatica/
http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/AlimentaMETABOLISMOyENZIMAS.htm
http://www.ejemplode.com/36-biologia/3599-caracteristicas_de_las_enzimas.html
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002353.htm
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http://www.academia.edu/9180412/Informe_de_actividad_enzimatica
http://www.buenastareas.com/materias/desnaturalizacion-de-la-enzima-catalasacon-hcl/0
http://es.scribd.com/doc/80995770/Reaccion-de-higado-de-res-en-presencia-deagua-oxigenada#scribd
http://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-6-enzimas/inhibidores-enzimaticos.html
https://www.academia.edu/9816273/ENZIMAS_-_BIOQU%C3%8DMICA