UNIVERSIDAD VIZCAYA DE LAS AMERICAS

RESUMEN:
Llevamos a cabo la prctica de absorcin-elucin mediante el sistema ABO; en
donde recortamos trozos de tela con mancha hemtica aproximadamente de
3ml X 3ml, despus preparamos los tubos de ensaye marcndolos como
problema, testigo y control; cada tubo con los tipos de sangre A, AB, B Y O, los
primeros trozos de tela con mancha hemtica se colocan en los tubos de
ensaye marcados como problema, en los tubos marcados como testigo se
colocaron trozos de tela con mancha hemtica conocida con cada tipo de
sangre, en los terceros tubos se coloc la misma tela del indicio pero esta vez
sin mancha hemtica con el nombre de control.
Todos los tubos marcados se colocaron en una gradilla de tal manera que
quedaron alineados segn el tipo de sangre al que corresponden; a cada tubo
se le puso metanol quedando la tela hmeda con esta sustancia, se dej
reposar por quince minutos, para despus quitar todo el exceso de metanol de
los tubos, luego a cada hilera marcada segn su tipo de sangre (A, AB, B, O.)
se le coloco el antisuero correspondiente y se dej reposar toda la noche en la
heladera a 4 C.
Al da siguiente cada tubo fue lavado con solucin salina fra seis veces o
hasta obtener una solucin salina incolora, seguido de esto se agregaron dos
gotas de solucin salina a temperatura ambiente; se pusieron los tubos a
calentar a bao mara por 10 minutos, pasando este tiempo se sac cada trozo
de tela de los tubos con un aplicador de madera diferente para cada tubo, se
les agrego una gota de glbulos lavados al 2% segn su grupo sanguneo (A,
AB, B y O); se centrifugaron durante treinta segundos a 3400 rpm.

INTRODUCCION:

TECNICA DE ABSORCION-ELUSION PARA LA DETERMINACION DEL

GRUPO DEL SISTEMA ABO EN MNACHAS DE SANGRE SECA.

Uno de los problemas que con ms frecuencia se presenta en los laboratorios

de criminalstica, es el de determinar el grupo sanguneo en sangre seca que
se encuentra impregnando prendas de vestir o sobre la superficie de objetos
relacionados con algn hecho de sangre.

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Revisadas las tcnicas que para este efecto existen hasta la fecha, se pens
que la ms fcil de realizar y la ms conveniente desde el punto de vista
inmunolgico es el de la absorcin-elusin.
Tcnica de absorcin-elucin para la determinacin del grupo sanguneo en el
sistema ABO La determinacin de grupo sanguneo en una muestra de sangre
seca impregnada en ropas u otras superficies similares es un caso que se
presenta frecuentemente en los laboratorios periciales. Para llevar a cabo tal
estudio, la tcnica ms conveniente es la de absorcin-elucin.
Material empleado:

Sueros hemoclasificadores para el sistema ABO

Metanol

Na2HPO4

KH2PO4

NaCl

Tubos de ensayo de 13 X 10

Pipetas pasteur

Bulbos de goma

Tijeras

Aplicadores de madera

Guantes desechables

Tela estril y sin apresto, de algodn

Gradillas para tubos de ensayo de 13 X 100

Refrigerador

Centrfuga

Bao mara a temperatura constante

Horno

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Reactivos:
Bfer salino (solucin estndar)
Solucin 1/15 M de Na2HPO4 (9.47 gr/) (Solucin 1)
Solucin 1/15 M de KH2HPO4 (9.08 gr/) (Solucin 2)

Bfer final.
72 ml de solucin 1 + 50 ml de solucin 2 + 8.5 g de NaCl.
Aforar a 1000 ml en matraz volumtrico (pH= 7.2)

Preparacin de los antisueros

Los sueros anti A y anti B se combinan por separado con 10 ml de buffer
final por cada 1 ml de antisuero.
Los sueros anti AB y anti D se utilizan sin diluir

Metodologa:

Cortar cuatro pedazos de tela impregnada con sangre problema4 de 3

mm2 y colocar cada fragmento en un tubo de ensayo

Los tubos se acomodan en la misma columna de una gradilla (columna

problema)

De igual forma se coloca otra serie de tubos a los cuales se les introduce
fragmentos de telas impregnados con sangre de grupo conocido
(columna testigo)

Se colocar en la gradilla una ltima columna de tubos conteniendo

pedazos de tela limpios de sangre, dicha columna se conocer como
control

Fijaremos las manchas de sangre empapndolas con metanol durante al

menos 15 minutos. Transcurrido tal lapso eliminarlo totalmente

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Agregar a la hilera anti A dos gotas de suero anti A, y as sucesivamente

con todos los antisueros y filas

Refrigerar a 4 C durante toda la noche

Lavar 6 veces con solucin salina o hasta que se obtenga una solucin
clara e incolora

Aadir a cada tubo dos gotas de solucin salina a temperatura ambiente

Colocar la gradilla a 56 C en el bao mara de 10 a 15 minutos

Sacar cada trozo de tela auxilindose de un aplicador de madera distinto

para cada tubo

Agregar una gota de glbulos lavados al 2% (del grupo A a los tubos de

la hilera anti A, y as sucesivamente)

Centrifugar durante 30 segundos a 3400 rpm

Observar la presencia o ausencia de aglutinacin

Interpretacin de los resultados:

Si se observa aglutinacin en el tubo de anti A y anti AB, la sangre
corresponder al grupo A. De aglutinar en el tubo de anti B, y anti AB, la sangre
corresponder al grupo B. De aglutinar en el tubo de anti A, anti B, y anti AB, la
sangre corresponder al grupo AB. La presencia de aglutinacin en el tubo anti
D indicar que el factor Rh es positivo, y de lo contrario (no hay aglutinacin)
ser Rh negativo. Cuando no aglutina ni el tubo anti A, anti B ni el anti AB, el
tipo de sangre es O.

DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO EN MANCHAS DE SANGRE

SECA.
En este contenido literario hablaremos sobre las muestras de sangre seca
encontradas en un lugar donde se presume se desarroll una conducta
criminal. Cuando se encuentra con la presencia de manchas o rastros de
sangre seca, las personas encargadas de la investigacin deben de seguir un
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proceso lgico, exhaustivo y metodolgico para poder determinar las

caractersticas de dicho elemento encontrado como lo es determinar la especie
a la cual pertenece la muestra problema, conocer el grupo sanguneo entre
otros elementos de inters, en este apartado se explicara la forma en cmo se
debe de llevar a cabo la tcnica de absorcin-elucin del italiano Vittorio
Siracusa, la cual tiene la capacidad de determinar el grupo sanguneo en
manchas de sangre seca.

Debido a la desnaturalizacin de la celular sanguneas en las manchas de

sangre seca el proceso de reconocimiento(sistema ABO) se ve mermado, ya
que a diferencia de la identificacin en manchas de sangre fresca en donde
solo se le agregan el suero con los anticuerpos correspondientes (anti-A, anti-B
o anti-H) la muestra problema reacciona mediante la aglutinacin (es el
proceso mediante el cual un grupo de clulas distribuidas en un lquido se
juntan y forman una capa grumosa) la cual es percibido a simple vista y de esta
forma podemos determinar el grupo sanguneo.

Los antgenos de los eritrocitos no se desnaturalizan tan fcilmente y perduran

por un lapso prolongado dndonos la facilidad de generar el aglutinamiento
deseado; para llegar a dicho fin es necesario principalmente tener nuestra
muestra problema en un soporte por ejemplo una fibra, entonces la muestra
con la incgnita la cortaremos en tres partes las cuales depositaremos en tres
tubos de ensayo de los cuales uno contiene suero anti-A, otro anti-B y por
ultimo suero anti-h mismos que estn debidamente rotulados para evitar
confusiones.

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El proceso nos dar como resultado una reaccin antgeno anticuerpo, esto
es que los antgenos de los glbulos rojos de nuestra muestra problema
formaran una conexin con alguno de los sueros utilizados mientras que los
anticuerpos que no se adhirieron a los antgenos quedaran dispersos, lo que
nos lleva al siguiente paso que es desechar el producto que no reacciono el
cual se har haciendo un lavado con una solucin salina fra esto para evitar la
separacin Ag Ac, teniendo como resultado al lavado una combinacin Ag
Ac en un tubo, y solo Ac en los dos tubos alternos.
Lo prximo es crear una disociacin, esto es la separacin del Ag Ac lo cual
se lleva a cabo calentando a bao mara cada uno de los tubo a una
temperatura de 56 C, los cuales se centrifugan dndonos un sobrenadante
con los elementos disociados. Finalmente depositaremos en tres nuevos tubos
glbulos rojos conocidos (del tipo A, B y O) previamente lavados con solucin
fisiolgica (sustancia que debe de contar con las mismas condiciones que tiene
el cuerpo humano como su temperatura, pH etc.) a los cuales les
depositaremos una cantidad del sobrenadante con anticuerpos lavados
resultados de la disociacin, finalmente la aglutinacin indica la presencia de
un antgeno de la misma especificidad que el de las clulas usadas como
testigo conocido.

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Resultado: si se aglutina en A nuestra mancha pertenece al tipo A, si es B es

del tipo B y si no aglutina en ninguna de las muestras nuestra incgnita se
resuelve y el tipo de sangre es O teniendo nuestro sistema ABO, pero tenemos
un ltimo caso si es que hay presencia de aglutinacin en A y en B tendremos
un grupo sanguneo del tipo AB. Para la apreciacin de cada una de las
muestras en caso contrario a las muestras de sangre fresca aqu es necesario
un microscopio en cual puede verse con un aumento de 10X.
Este test en la actualidad es muy utilizado en los laboratorios forenses ya que
facilita la identificacin de las manchas de sangre seca, siendo un examen
confirmatorio para determinar el grupo sanguneo.

DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO EN SANGRE SECA TCNICA

DE ABSORCIN ELUCIN

MATERIAL EMPLEADO:

1. Sueros hemoclasificadores Anti-A y Anti-B.

2. Metanol
3. Na2HPO4.
4. KH2PO4
5. NaCl
6. Tubos de ensayo
7. Pipetas Pasteur
8. Bulbos de goma
9. Tijeras
10. Aplicadores de madera
11. Guantes desechables
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12. Tela estril y sin apresto, de algodn

13. Gradillas para tubos de ensayo
14. Refrigerador
15. Centrfuga
16. Bao Mara a temperatura constante
17. Horno

REACTIVOS:

1. Buffer salino
a) Solucin de Na2HPO4 (9.47 gr/lt)
b) Solucin de KH2PO4 (9.08 gr/lt)

1. Buffer final A 72 ml de la solucin

a), aadir 50 ml de la solucin
b) y 8.5 gr de cloruro de sodio, aforar a 1,000 ml en matraz volumtrico (pH de
7.2).

1. Preparacin de los antisueros

Los antisueros anti-A y Anti-B, se diluyen de la siguiente manera: a 1 ml de
antisuero, se aaden 10 ml de solucin Buffer final.

PROCEDIMIENTO:
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1. Cortar cuatro fragmentos de tela impregnada con sangre problema, que

medirn 3 x 3 mm (cuando la mancha problema no se encuentre sobre tela,
absorberla con solucin salina en pequeos trozos de tela de algodn color
blanco, sin apresto y esterilizada, que en caso necesario puede secarse en la
estufa) y colocar cada recorte en los tubos necesarios.
2. Los tubos se colocan en una misma columna de una gradilla, columna que
se marcar como problema.
3. En la forma antes descrita se prepara otra serie de tubos en cuyo interior se
colocarn fragmentos de tela manchados con sangre de grupo conocido: A, B,
AB y O, marcndose tal columna como testigo.
4. Se coloca otra serie de tubos que contengan fragmentos de una parte de tela
en estudio, que no se encuentre maculada con sangre y se pondrn en una
tercera columna sealada como control.
5. Fijar las manchas de sangre impregnadas en la tela, cubrindolas con
metanol cuando menos durante 15 minutos. Despus de ese tiempo eliminarlo
totalmente.
6. Agregar a cada tubo de la hilera Anti-A, dos gotas de suero anti-A; a los de
la hilera Anti-B, suero Anti-B.
7. Dejar en refrigeracin durante toda la noche a 4C.
8. Despus de ese tiempo, lavar con solucin salina fra 6 veces o hasta
obtener una solucin clara e incolora.
9. Aadir a cada tubo dos gotas de solucin salina a temperatura ambiente.
10. Colocar la gradilla en el bao mara a 56 C durante 10 o 15 minutos.
11. Sacar cuidadosamente los trozos de tela con un aplicador de madera,
diferente para cada tubo.
12. Agregar una gota de glbulos lavados a 2%:
Del grupo A a los tubos de la hilera A
Del grupo B a los tubos de la hilera B (problemas, control y testigos)
1. Centrifugar durante 30 segundos a 3,400 rpm.
2. Observar si existe o no aglutinacin.

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INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

1. Si hay aglutinacin en el tubo problema de la hilera marcada como Anti-A, el

grupo corresponder a A.
2. Si hay aglutinacin en el tubo problema de la hilera marcada como Anti-B, el
grupo corresponder a B.
3. Si hay aglutinacin en ambos el grupo ser AB. 4. Si no se observa
aglutinacin en ningn tubo, el grupo ser O.

MTODO INDIRECTO DE ABSORCION ELUCION PARA DETERMINAR

GRUPO SANGUINEO EN MANCHAS DE SANGRE. FUNDAMENTO:

La Absorcin de aglutininas se refiere a la extraccin de un anticuerpo d e un

suero inmune por medio del tratamiento con el antigeno especfico, homlogo
de ese anticuerpo, seguido por la centrifugacin y separacin del complejo
antigenoanticuerpo y la Elusin que consiste en separar por lavado una
sustancia de otra que la ha absorbido bajo el mismo principio de fijacin de las
aglutininas especificas sobre sus aglutinogenos.
Es decir los antgenos en la membrana de los glbulos rojos se encuentra
adheridos a la fibra o fragmento de tela en estudio y los anticuerpos A y B
son procedentes de los antisueros (Reactivos AntiA y AntiB) y estos al unirse
reaccionan y mediante el lavado con suero fisiolgico los residuos ajenos de
esta reaccin son eliminados. Al incubar en bao Maria a 56C , el calor
permite la separacin del antgeno-anticuerpo y al retirar la tela o fibra y
eliminarlas solo quedaran anticuerpos libres. Luego al agregar la suspensin de
glbulos rojos lavados y tipificados, estos reaccionan con los anticuerpos
especficos y al reaccionar se observa la aglutinacin, si no presenta reaccin
no habr aglutinacin.

TECNICA:

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1. La muestra en estudio se puede recortar en pequeos fragmentos o tambin

se puede utilizar fibras de gasa impregnada de suero fisiolgico y este pasar
por las manchas obteniendo as la muestra en estudio.
2. Se trabaja en una lmina excavada rotuladas y con sus Respectivos
estndares (Grupos sanguneos conocidos) A y B. Se coloca un pequeo
fragmento ya sea de tela o de gasa la misma que contiene la muestra en
estudio con una gota de los reactivos Anti A y Anti B respectivamente por 24
horas a temperatura ambiente o 1 hora a 56C en cmara hmeda.
3. Pasar a cada uno de los tubos y lavarlos con suero fisiolgico
aproximadamente por tres veces.
4. Ya lavados con suero fisiolgico realiza una suspensin con 1 2 gotas de
suero fisiolgico.
5. Luego incubar en bao Maria por 10 minutos a 56C, pasado los 10 minutos
sacarlos al medio ambiente y dejarlos enfriar. Seguidamente retirar los retazos
de tela y/o fibra (tratando de exprimir todo el l quido que contiene) y
desecharlos.
6. Se debe agregar los glbulos rojos A y B previamente lavados y
tipificados.
7. Se centrifuga por 3 minutos a 2500 r.p.m.
8. Observar aglutinacin en el fondo del tubo, comparando con los respectivos
estndares.
9. La Presencia de aglutinacin nos indica que es positivo de lo contrario
negativo.

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FACTORES QUE PUEDEN AFECTAR LOS RESULTADOS

Entre los factores que pueden influir en obtener un resultado incorrecto,
tenemos: la antigedad de la m ancha, la naturaleza del sustrato sobre el cual
se encuentra, las condiciones a la que estuvo expuesta, cantidad de muestra,
etc. La antigedad de la mancha es de fundamental importancia en lo que
respecta a la investigacin de anticuerpos. Estos son muy poco estables, por lo
que su estudio en el laboratorio debe ser lo ms rpido posible.
Los antgenos en manchas de sangre secas y bien conservadas son, en
cambio, mucho ms duraderos. No se deben manipular las muestras con las
manos sin guantes, ya que los antgenos del Sistema ABO se encuentra,
adems, en las secreciones: sudor, semen, saliva, lgrimas, etc. en la mayora
de los individuos.
Estos son los llamados "secretores". Solo un 20% aproximadamente no
manifiestan esta propiedad, que son los individ uos "no secretores". Otro factor
importante es la contaminacin bacteriana de la muestra. Desafortunadamente
no todos los sistema conocidos de agrupamiento de sangre son tiles en su
aplicacin forense. Algunos son inestables o se deterioran luego de varios das
o semanas. Adems, factores tales como el calor, luz solar directa, humedad y

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embalado inadecuado de la evidencia, disminuyen de una u otra forma la

posibilidad de llegar a un resultado efectivo.

https://alvarezunahvs.files.wordpress.com/2011/02/manchas-de-sangre.pdf
http://criminalistica.mx/descargas/documentos/pdf/TecnicasHematologiaForens
e.pdf
file:///C:/Users/sam/Documents/SEROLOGIA%20FORENSE/Manual-BiologiaForense-1.pdf

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