DEMOSTRACION DE LA ACTIVIDAD DE UNA

OXIDORREDUCTASA
I.

INTRODUCCIN :

Una oxidorreductasa es una enzima que cataliza la transferencia de electrones desde

una molcula donante (el agente reductor) a otra aceptora (el agente oxidante). Por
ejemplo, una enzima que catalizara esta reaccin sera una oxidorreductasa, Las enzimas
son protenas complejas que producen un cambio qumico especfico en todas las partes
del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos
para que el cuerpo los pueda usar.
A + B A + B
En el ejemplo, A es el reductor o donante de electrones y B es el oxidante o aceptor.
No obstante, en el metabolismo celular las reacciones de xido-reduccin pueden ser
menos patentes; consisten en la reduccin u oxidacin de grupos funcionales, y suelen
implicar a coenzimas que tambin cambian su estado redox, como pueden ser los
pares NADH/NAD+, NADPH/NADP+, FAD/FADH2 o FMN/FMNH2. Por ejemplo:
Pi + gliceraldehdo-3-fosfato + NAD+ NADH + H+ + 1,3-bisfosfoglicerato
En esta reaccin, NAD+ es el oxidante o aceptor de electrones y el gliceraldehdo-3-fosfato,
el reductor o donante de electrones y la Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa la
oxidoreductasa.

II. OBJETIVOS:

Verificar la actividad de una enzima de xido reduccin.

Estimar el nmero de microorganismos presentes en un alimento
mediante la prueba de reductasa.

III.

EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS:

Equipos:

Balanza analtica
Bao maria

Materiales y reactivos:

50 ml de

leche fresca

Solucin

diluida de azul de metileno

Termmetro

Agua

destilada

Pipetas

de 1 10 ml

Tubos de

ensayo 15 x 150

IV.
PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTAL:

 Mesclar cuidadosamente la muestra por inversin y agitacin y

colocar 10 ml en un tubo de ensayo, cuidando que los lados
internos no se mojen de leche.

Aade 1 ml de la solucin de azul de metileno evitando que la

pipeta haga contacto con la muestra, ni con las paredes del tubo.

Tapar aspticamente el tubo con tapn de goma, invirtiendo 2 veces

de tal manera que toda la columna de aire se eleve por encima de la
leche.

 Despus de 5 minutos colocar el tubo de ensayo en el bao de

agua de 37.5 0.5c, cuida que el agua se mantenga por encima
del nivel de la leche en el tubo y que el interior del bao sea oscura.

Preparar 2 tubos control, uno que contenga 1 ml de agua corriente y

10 ml de leche similar a la que se est probando, y otro que
contenga 1 ml del indicador y 10 ml de leche. Ambos tubos control
tienen que reducirse en agua hirviendo por lo menos durante 3
minutos.

Se considera que la leche esta e buen estado cuando no se

decolora despus de haberla incubado 30 minutos. Una leche
decolorada es aquella que ha perdido el color en toda la columna o
hasta 5 mm de la superficie. Registra tus resultados.

V.

RESULTADOS :
COLOCAR A CADA TUBO DE ENSAYO 10 ML DE LECHE,
CUIDADOSAMENTE QUE LOS LADOS INTERIORES NO SE
MOJEN DE LECHE

PRIMER TUBO:

AADIR 1 ML DE LA
SOLUCION AZUL DE
METILENO
DEJRA A
TEMPERATURA
AMBIENTE DURANTE
5 MINUTOS.

LUEGO COLOCAR EL TUBO DE NESAYO EN

EL BAO DE AGUA A 37 DE TEMPERATURA,
DURANTE 30 MINUTOS.

SEGUNDO TUBO (CONTROL)

DESPUES DE HABER
AADIDO 10 ML DE
LECHE
HERVIR DURANTE 3
MINUTOS
LUEGO AADIR 1 ML
DE AGUA
DESTILADA

 INTRODICIRSE EN AGUA HIRVIENDO

( BAO MARIA ) DURANTE 30 MINUTOS

TERCER TUBO
(CONTROL)

DESPUES DE HABER
AADIDO 10 ML DE
LECHE
HERVIR DURANTE 3
MINUTOS
LUEGO AADIR 1 ML
DE AZUL DE
METILENO

 INTRODICIRSE EN AGUA HIRVIENDO

( BAO MARIA ) DURANTE 30 MINUTOS

VI.

DISCUSIONES

VII.

CONCLUSIONES

VIII.

CUESTIONARIO

1) Qu es el potencial redox?
Se piensa que el potencial redox es un importante factor selectivo en
todos los ambientes, incluidos los alimentos, que probablemente influye
en los tipos de microorganismos presentes y en su metabolismo. El
potencial redox indica las relaciones de oxgeno de los
microorganismos vivos y puede ser utilizado para especificar el
ambiente en que un microorganismo es capaz de generar energa y
sintetizar nuevas clulas sin recurrir aloxgeno molecular: los

microorganismos aerobios requieren valores redox positivos y los

anaerobios negativos. Cada tipo de microorganismo slo puede vivir en
un estrecho rango de valores redox
2) Que correlacin existe entre el nmero de microorganismos en
una muestra alimenticia y el tiempo de reduccin de azul de

metileno?
El principio de la prueba de reduccin con azul de metileno se basa en
que el potencial de xido reduccin (Eh) de la leche fresca aireada es
de +0.35 a +0.40 voltios, el cual se debe principalmente al contenido
de O2 disuelto en el producto. Si por cualquier causa ese O 2 es
separado, el Eh disminuye. Esto ocurre cuando los microorganismos
crecen en la leche y consumen el O2. Si el nmero de
microorganismos es muy elevado, el consumo de O2 ser mayor y por
consiguiente el Eh caer rpidamente; si por el contrario, el nmero de
microorganismos es pequeo, el Eh disminuir lentamente.

3) Una muestra de carne tendr los mismos valores de Eh en toda

su masa?
Una muestra de carne no tiene igual Eh en toda su masa ya que
esta puede tener particularidades donde se centre mayor cantidad
de microorganismos, es decir que existen partes de la masa
crnica que puedes estar ms afectadas que las otras.
4) Seale dos muestras alimenticias en las que se pueda aplicar la
prueba dereductasa:

Puede ser usado para otros alimentos como por ejemplo jugos de
frutas y variedades, enlos que se encuentran los jugos de soya,

pia y otros, sobre todo alimentos lquidos en losque tambin se

podra observar el viraje de color del azul de metileno u otro
colorante ausar.
5) Que razones hacen difcil la determinacin de Eh en alimentos?

Debe tenerse en cuenta que existen factores que pueden afectar el

tiempo de reduccin, entre ellos el tipo de microorganismo, el nmero
de leucocitos, el periodo de exposicin a la luz, la cantidad de O 2
disuelto y la tendencia de la leche a elevar los microorganismos hacia
la superficie a medida que se va separando la crema en el tubo de
prueba. Es as como ciertos microorganismos (Lactococcus lactis)
son ms activos en su capacidad reductora que otros, mientras que
existen algunas especies que son muy poco activas en este sentido
(Streptococcus agalactiae,Bacillus subtilis, microorganismos
termodricos).Por otra parte, a medida que aumenta el nmero de
leucocitos en la leche y su exposicin a la luz natural o artificial, el
tiempo de reduccin tiende a reducirse, mientras que la agitacin y la
tendencia de la crema a ascender (arrastrando los microorganismos)
son factores que tienden a retardar el tiempo de reduccin.