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Los macrfagos que nos protegen de las infecciones mediante la fagocitosis responden ante
un gradiente qumico liberado por las bacterias, el cual los gua hasta el lugar de la infeccin.
Ante esta situacin, la estructura del macrfago sufre constantes reorganizaciones.
Las clulas presentan polaridad celular. La habilidad de crear regiones o dominios
especiales y la habilidad de dividirse (primero deben elegir un eje axis para dividirse y
luego organizar la maquinaria celular para segregar las clulas a lo largo de este eje).
Morfologa celular, organizacin interna y polaridad celular es mantenida a travs de un
sistema de protenas filamentosas (citoesqueleto). Para visualizar el citoesqueleto es
necesario solubilizar la membrana plasmtica y organelas con detergentes. El citoesqueleto
se extiende por toda la clula y se encuentra unida a la membrana plasmtica y organelas.
Es dinmico no esttico. Est compuesto de 3 sistemas de filamentos.
Microfilamentos
Subunidad
Funcin
Microtbulos
Actina
Organizacin de la
(morfologa).
intermedios
Varios
Tubulina
membrana
plasmtica
Se extiende a travs
Cell cortex
Gua para el
nuclear.
Mitotic Spindle
protenas motoras
duplicados en
(hidrolisis de ATP,
mitosis).
Funcin de barrera en
piel , cabellos y uas
(separar cromosomas
contrctil o cargo)
membrana
Soporte estructural
flagelos.
Soporte estructural a
la
desplazamiento de
miosina-> funcin
de la clula.
para cilios y
Filamentos
No
hay
motores
moleculares
Motores
moleculares :
Kinesina y dineina
transportan cargos
en microtbulos
Las clulas reciben seales de: Factores solubles que baan la clulas, clulas adyacentes o
matrix extracelular. Estas seales son detectadas por receptores celulares en la superficie
celular que activan las vas de transduccin de seal
citoesqueleto.
Microfilamentos y actina
Pueden formar estructuras diversas con diferentes funciones, con distintos grados de
organizacin:
Actina
Proteinas abundantes. Conservadas intra e inter especies. Gen de actina en Ameba y
animales con similaridad de 80 %. Los mutiples genes de actina encontrados en
eucariotas modernos se origin de un unico gen bacteriano que evoluciono para tener un
papel en la sintesis de la pared celular bacteriana. Eucariotas unicelulares como levadura y
ameba poseen uno o dos genes de actina ancestrales. Humanos tienen 6 genes de actina,
plantas mas de 60 ( aunque muchos de ellos son pseudogenes no codificantes de proteinas).
Cada gen de actina funcional codifica diferentes isoformas de proteinas. Isoformas puden
ser clasificadas en 3 grupos: actina ( estructuras contractiles) , actina (cell cortex,
leading edge) , actina (stress fibers). En vertebrados 4 isoformas en celulas musculares y
2 en no musculares. Estas isoformas difieren en 25 de los 375 AA (93 % de identidad).
En clulas musculares constituye 10 % de peso total de protena celular.
musculares 1 5 %.
En clulas no
Concentracin citosolica de actina en clula no muscular: 0.1 0.4 mM. Estructuras como
microvilli (5 mM)
Monmeros de G actina
Monmero globular denominado G-actina y polmero filamentoso F- actina que forma una
estructura helical dextrogira ( 2 hebras helicales). En una misma hebra la subunidad contacta
con una subunidad hacia la derecha e izquierda , por otro lado, contacta con dos subunidades
de la otra hebra. Una unidad repetitiva consiste en 28 subunidades de actina ( una distancia
de 72 nm ), como son dos hebras: 14 sub. en cada hebra. La hendidura de unin al ATP est
orientado al (-) end. Imgenes tomadas mediante microscopio electrnico con acetato de
uranilo muestran dimetros de 7 9 nm. Cada molcula de actina posee ion Mg2+ en
conjunto con ATP o ADP.
Anlisis de cristalografa de rayos - X revela que el monmero es separado en dos lbulos
por una hendidura (Deep cleft) y 4 dominios (I IV). La regin N y C terminal se
encuentran en el dominio I.
. En la base de esa hendidura se encuentra el ATPase fold. Lugar donde ATP y Mg2+ se unen.
El piso de esta hendidura acta como bisagra que permite la flexibilidad de los lbulos
Cuando ATP o ADP esta unido a G actina, los nucletidos afectan su conformacin, sin los
nucletidos G actina denatura muy rpido.
Los cationes Mg2+ , K+ , Na+ inducen la polimerizacin de los monmeros de G- actina.
Proceso reversible. Se depolimeriza cuando la fuerza ionica disminuye en solucin.
Sin resolucin atmica (rayos X) la polaridad no es detectable, sin embargo puede ser
demostrada mediante microscopia electrnica basado en la propiedad de la miosina de
unirse a los filamentos de actina. Para este experimento se emplea un exceso de miosina
S1, el cual es mezclado con los filamentos de actina y se permite la unin en un tiempo
determinado. La miosina se une con una inclinacin, con una orientacin particular,
aparentando una flecha que apunta hacia end (pointed end) , en cuanto , + end es
denominado barbed end.
*Miosina solo se une a filamentos de actina y no a microtubulos y/o filamentos
intermediarios.
- In Vitro Motility Myosin Assay
Miosina se dirige hacia el termino positivo (+ end ) del filamento de actina. Y desde que la
miosina se une a la lmina , el filamento de actina parece deslizarse hacia el terminal
negativo ( - end) (Microscopio de fluorescencia)
Si se aade monomeros de G- Actina y ATP a filamentos de actina con miosina , los dos
terminos (end) de los filamentos se elongan a tasas diferentes. G-actina y ATP se unen con
mayor velocidad( 10 veces) en el terminal positivo (+ end) (12 M -1s-1) que en el (- end) (1.3
M-1s-1). Esta tasa de adicion es determinda en realidad por la concentracion de GActina y ATP libre.
Siempre voy a tener valores de actina mayores a la concentracion critica, por eso se
favorece la adicion de monomeros de G-actina en el extremo positivo.
Porque existen protenas que secuestran los monmeros, siendo uno de ellos
timosina 4 ( Se une a monmeros de G actina + ATP, inhibiendo su adicin al
filamento. Timosina 4 puede ser muy til en las plaquetas que poseen mucha
actina. Es un buffer para monmeros de actina no polimerizada.
terminaciones
CapZ: gran afinidad (+ end) Bloquea este terminal. Inhibe el ensamblaje. 2 mecanismos
regulan la actividad de CapZ. La actividad de CapZ es inhibido por PI (4,5)P 2 localizado en
la membrana plasmtica.
Otras protenas que bloquean el termino +, son las protenas de la familia gelsolin
(regulados por un incremento en los niveles de ion Ca 2+. Cuando el Ca2+ se une, gelsolin
sufre un cambio conformacional que le permite unirse al filamento de actina e insertarse
entre las subunidades de la hebra, rompiendo el filamento. Permanece unido en el
terminal positivo ( + end) , generando un nuevo extremo positivo que se despolimeriza.
Algunas protenas se unen a los filamentos de actina que convierten la solucin de Factina en gel. Si gelsolin es adicionado a tal gel y el nivel de Ca2+ es elevado , convierte
el estado de gel en liquidoGelsolin = Habilidad de convertir gel en lquido.
El dominio FH1 adjacente al dominio FH2, tambien contribuye con el crecimiento del
filamento de actina. Este dominio es rico en prolina , que son sitios de union para
muchas moleculas de profilina. El dominio FH1 incrementa la concentracion local de
profilina ATP- G- actina, recurso que sirve para adicionar monomeros al filamento en
crecimiento , formando filamentos largos con formina en el extremo +. Formina inhibe
proteinas como CapZ.
Algunas forminas existen en una conformacion de plegamiento inactivo como resultado
de la union de la mitad de la proteina con la region C- terminal. Las forminas son
activadas por la proteina de unida a la menbrana Rho-GTP (Ras related small GTPase,
que fluctua entre su forma inactiva Rho-GDP y activa Rho GTP)
Arp 2 /3: descubierto en Listeria. ramificadora. 7 subunidades , dos de las cuales son
ARP ( actin related proteins). Encontrado en eucariotas (plantas, animales, levadura ,
clulas animales). Nucleador pobre por si solo, para comenzar el ensamblaje de actina
ramificada Arp 2/3 necesita ser activado por nucleation promoting factor (NPFs). Hay
diferentes tipos de NPFs , la principal familia es caracterizada por la presencia de una
regin denominada WCA (WH2, connector, acidic)
Listeria tiene en su superficie una proteina denominada ActA que mimetiza a NPF. ActA
se une a una proteina conocida como VASP, que posee tres propiedades importantes. A)
VASP tiene una region rica en prolina que se puede unir a profilina, incrementando ATP-G
actin para ser ensamblados por ARP 2/3. B) Se mantiene en el termino del nuevo filamento.
C) Protege el extremo positivo del capping por CapZ.
Los filamentos se encuentran enbebidos en un citoesqueleto estacionario. Listeria empujada
hacia adelante. Para su movimentacion necesita 4 proteinas.
ATP G actina
Complejo ARP 2 /3
Microfilamentos y endocitosis
Toxinas
Organizacin de actina
Para organizar la actina, las protenas entrecruzadoras ( cross linking) deben tener dos
lugares de unin a la F actina. Fimbrin : protena localizada en el microvilli ( construye
bundles de filamentos todos con la misma polaridad)
Espectrina: tetrmero con dos lugares de unin a F actina, expande el espacio entre los
filamentos de actina y forma una red debajo de la membrana plasmtica.
Filamina: regin flexible entre los dos lugares de unin de actina , funciona como una hoja
que estabiliza el cruzamiento entre filamentos como una red. ( leading edge de clulas
mviles)
Otras deben de tener un lugar de unin a la F - actina , con dos cadenas asociadas para
formar dimeros que traen consigo dos lugares de unin de actina. Estas protenas de
cruzamiento dimerico se pueden ensamblar para organizar un rigid rod , conectando los dos
lugares de unin como ocurre con la actinina. Como fimbrina, actinina organiza los
filamentos de actina en paralelo, pero lejos de fimbrina.
El complejo Arp2/3 tambuen es una importante protena entrecruzadora , se une al termino
negativo de un filamento.
PROTEINAS MOTORAS
La cadena pesada y los dos tipos de cadena ligera son codificadas por 3 genes
diferentes.
La longitud del dominio del cuello y nmero y tipo de cadenas ligeras dan lugar a
diferentes clases de miosinas.
Miosina Movimientos
Miosina II: short duty cycle. Contraccion .(celulas lisas smooth, stress fibers, anillo
contractil durante citocinesis)
Contraccin rapida y repetitiva. Musculo celular esqueletico: cilindrico , largo (1 -40 um) ,
ancho (10-50 um), multinucleado (100 nucleos) . Dentro de cada celula muscular hay
miofibrillas, que se encuentan constituidas por sarcomeros. Un sarcomero , 2 um de
longitud en descanso, con reduccion de 70% durante contraccion.
Micoscopia electronica y amalisis bioquimicos muestran que cada sarcomero contiene 2 tipos
de filamentos : thick filaments (miosina II) y thin filaments ( actina y proteinas asociadas)
Thick filaments : compuesto por filamentos de miosina II bipolar, en el cual cabezas de
cada mitad del filamento tiene orientaciones opuestas.
Los filamentos de actina delgados (thin) se encuentran organizados con sus extremos
positivos embebidos en una estructura densa conocida como disco Z. Los dos comjuntos
de filamentos de actina en un sarcomero tienen orientaciones opuestas. Como un musculo
se contrae? Interaccion entre una cabeza de miosina y un filamento delgao de actina.
Interacciones ciclicas denominadas Cross Bridge cycle. La hidrolisis de ATP esta acoplada con
el movimiento de una cabeza de miosina hacia el disco Z, que corresponde al termino
positivo del filamento de actina. Ya que este filamento es bipolar, las cabezas de miosina en
las terminaciones opuestas atrae los filamentos delgados hacia el cento de un filamento
(thick) y al centro del sarcomero. Contraccion de un musculo intacto resulta de la actividad
Celula muscular del corazon son celulas mono o binucleadas. En cada celula, las
terminaciones de los sarcomeros se insertan en estructuras de la membrana
plasmtica denominadas discos intercalares. Celulas musculares no son
reemplazados en respuesta al dao. Cardiomiopatia hipertrofica
(engrosamiento de la pared muscular del corazon)
subsecuente ( molecula elastica que mantiene los filamentos gruesos en la mitad del
sarcomero y evita el sobre estiramiento para asegurar que el filamento grueso permanezca
entre filamentos delgados.
Contraccin del musculo esqueletico es regulada por Calcio y proteinas de union a
la actina
La contraccin del musculo esqueletico es iniciado por un incremento de Ca citosolico. La
concentracion de calcio en el citosol se mantiene debajo de 0,1 uM. En el musculo
esqueletico, una baja concetracion en el nivel de calcio es mantenido por una unica Ca 2+
ATPase que continuamente bombea iones de Ca 2+ desde el citosol. Miofibrillas en el reticulo
sarcoplasmico (SR) un reticulo especilizado de celulas musculares. Reservorio de Ca 2+ en el
SR. La llegada de un impulso nervioso (potencial de accion) en la union neuromuscular
desencadena un potencial de accion en membrana plasmtica del musculo ( sarcolema). El
potencial de accion viaja hasta la invaginaciones de la membrana plasmtica conocida como
tubulos transversos. La llegada del potencial de accion a los tubulos transversos estimulan
la apertura de canales de voltaje de Ca 2+ en la membrana del RS, resultando en la liberacion
del calcio de RS , incrementando la concentracion de Ca 2+ citosolico en la miofibrila. La
elevada concentracion de Ca2+ induce un cambio en dos proteinas accesorias , tropomiosina
y troponina, que son asociados a los filamentos delgados de actina y bloquean la union a
miosina. Un cambio en la posicion de estas proteinas en los filamentos delgados de actina
permite la contraccion. Este tipo de regulacion es conocida como thin filament regulation
Un tercer tipo de contractile bundles , se conoce como anillo contractil, una estructura
temporal que divide la celula. Cuando el anillo se contrae empuja la membrana plasmtica
dentro del citoplasma , dando lugar a un proceso conocido como citocinesis. Miosina II se
encuentra localizada en el anillo contractil, mientras que miosina I en regiones distantes ,
donde une la actina cortical a la membrana plasmatica.
Celulas deletadas en el gen que codifica la cadena pesada de miosina II no es capaz de
realizar citocinecis. En vez de eso , las celulas forman un sincitio multinucleado porque la
citocinesis pero no la division nuclear es inhibida.
Quizas el uso mas dramatico de miosina V se encuentra en las algas verdes gigantes , Nitella
y Chara. En estas celulas que pueden alcanzar 2 cm de lardo, y el citosol fluye rapidamente a
4.5 mm/min. Este streaming citoplasmatico es el principal mecanismo para la distribucion
de metabolitos. La velocidad del streaming incrementa desde el centro ( velocidad 0) a la
periferia. En micrografia electronica , bundles de filamentos de actin pueden ser vistos
visualizados alineados a lo largo de la longitud de la celula. Miosina V es conocidad como
miosina XI en plantas , y se encuentran asociadoas a partes del RE adjacente a los filamentos
de actina.
siendo expuestas al colagno en la matriz extracelular. Plaquetas secretan PDGF para atraer
fibroblastos y celulas epiteliales.
Membrana ruffles son similares a los lamellopodias de celulas migratorias, ellas resultan de
la activacion de la maquinaria que controla la exocitosis de endosomas acoplado al
ensamblaje de actina.
Rac: GTPasa. Perteneciente a la superfamilia Ras. Rac es un miembro de la familia de
proteinas que regula la organizacin de microfilamentos, otras son Cdc42 y Rho.
Rac, Rho, Cdc42 actuan como switches moleculares , inactivos cuando se encuentran unidos
a GDP y activos cuando se encuentran unidos a GTP. Unidos a GDP se encuentran libres en
el citoplasma , unidos a una proteina conocida como guanine nucleotide dissociation
innhibitor (GDI). Factores de crecimieno se pueden unir y activar sus receptores para activar
proteinas regulatorias unidas a la membrana : Guanine nucleotide exchange factor
(GEFs) , que activan proteinas Rho en la membrana, liberandolos de GDI y catalizando el
intercambio de GDP por GTP. Las GTPasas permanecen activas hasta que el GTP es
hidrolisado , estimulado por GTPasa activating proteins (GAPs).
Celulas crecen con factores de crecimiento , formando una monocapa. La capa es rota,
generando una herida, despues del cual migran celulas, Usando este sistema, introduciendo
Rac dominantes negativas se puede observar como afecta la habilidad de las celulas para
migrar. Desde que Rac es necesario para la activacion del complejo ARP2/3 para formar el
lamellopodium , no es sorprendente que las celulas no formen esta estructura y no migren,
la herida no se cierra.
Cuando una Cdcd42 dominante negativa es introducida, ellas forman el leading edge pero la
orientacion no es correcta, tratando de midran en direcciones aleatorias. Cdc42 critica para
la polaridad celular. En animales, Cdc42 se une a su efector Par6 ( una proteina de
nematodos)
Seales del ambiente son transmitidas a Cdc42 , que orienta la celula. La celula orientada
tiene alta actividad de Rac en el frente para inducir la formacion del leading edge.
Actividad de Rho es alta en la parte trasera ( rear) para activar miosina II. Rho estimula vias
que permiten la inactivacion de Rac. Asegurando que estructuras de leading edge no sean
formandas en la parte posterior de la celula.
Chemotaxis: gradiente de concentracion. Por ejemplo, leucocitos son guiados por una
infeccion por un tripeptido secretado por muchas celulas bacteriales.
Durante el desarrollo del musculo esqueletico , una proteina denominada scatter factor
guia la migracion de mioblastos .
Migracion de la ameba Dictyostelum durante o proceso de starvation. Cuando las amebas del
suelo se encuentran stressadas, ellas comienzan a secretar cAMP , que es un agente
quimiotactico extracelular en este organismo. Las amebas se agregan y se diferencian en
fruiting body donde esporas de resistencia son formadas.